高效液相色谱凝胶色谱法测试高分子化合物的研究

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凝胶色谱的实验报告

一、实验目的1. 了解凝胶色谱（GPC）的原理和操作技术。

2. 掌握GPC在测定高分子聚合物分子量及其分布方面的应用。

3. 学会GPC数据的处理和分析方法。

二、实验原理凝胶色谱法（GPC）是一种基于分子大小分离的色谱技术，主要用于高分子聚合物的分子量及其分布的测定。

GPC利用具有不同孔径的凝胶作为固定相，将高分子聚合物按照分子大小进行分离。

分子量较小的高分子聚合物能够进入凝胶颗粒内部，流动路径较长，所需时间也较长；而分子量较大的高分子聚合物则无法进入凝胶颗粒内部，流动路径较短，所需时间也较短。

实验过程中，高分子聚合物在流动相（通常是溶剂）的作用下，通过凝胶色谱柱，分子量不同的高分子聚合物在色谱柱中的保留时间不同，从而实现分离。

通过检测器记录不同分子量高分子聚合物的出峰时间，即可得到高分子聚合物的分子量分布曲线。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 高分子聚合物样品- 标准高分子聚合物样品- 溶剂（如四氢呋喃、苯等）2. 实验仪器：- 凝胶色谱仪- 凝胶色谱柱- 检测器- 计算机及数据采集软件四、实验步骤1. 样品准备：将高分子聚合物样品溶解于溶剂中，制成一定浓度的溶液。

2. 准备凝胶色谱柱：将凝胶色谱柱安装在凝胶色谱仪上，用溶剂冲洗色谱柱，去除杂质。

3. 进样：将高分子聚合物溶液注入凝胶色谱柱。

4. 流动相：设置流动相的流速，使高分子聚合物在色谱柱中流动。

5. 检测：检测器记录高分子聚合物的出峰时间，并将数据传输至计算机。

6. 数据处理：利用数据采集软件，对GPC数据进行处理和分析。

五、实验结果与分析1. 标准高分子聚合物样品的GPC曲线：通过标准高分子聚合物样品的GPC曲线，可以确定凝胶色谱柱的分离范围和适用性。

2. 实验样品的GPC曲线：根据实验样品的GPC曲线，可以分析高分子聚合物的分子量分布情况。

3. 计算分子量及其分布：根据GPC曲线，可以计算出高分子聚合物的数均分子量、重均分子量、多分散指数等参数。

gpc测试原理

gpc测试原理
GPC测试原理
GPC（Gel Permeation Chromatography）是一种高效液相色谱技术，也称为凝胶渗透色谱。

它是一种分离高分子化合物的方法，可以用于分析高分子材料的分子量分布、分子量平均值、分子量分布宽度等参数。

GPC测试原理是基于高分子材料在凝胶柱中的渗透性质进行分离和分析的。

GPC测试原理的基本步骤是：将待测样品溶解在适当的溶剂中，通过一系列的凝胶柱，使高分子材料在柱中渗透，根据分子量大小分离出不同的组分，然后通过检测器检测各组分的信号强度，得到分子量分布曲线。

在GPC测试中，凝胶柱是非常重要的组成部分。

凝胶柱是由一系列不同孔径的凝胶颗粒组成的，这些颗粒可以将高分子材料分离成不同的组分。

凝胶柱的孔径大小决定了分离效果的好坏，通常使用的凝胶柱孔径范围为10-10万埃。

GPC测试中的检测器通常使用光散射检测器（LS）和粘度检测器（Viscometer）。

光散射检测器可以测量高分子材料的分子量分布，粘度检测器可以测量高分子材料的分子量平均值和分子量分布宽度。

GPC测试的样品制备非常重要。

样品必须完全溶解在溶剂中，否则会影响分离效果。

此外，样品的浓度也需要控制在一定范围内，以
避免过度分离或不足分离。

GPC测试原理是基于高分子材料在凝胶柱中的渗透性质进行分离和分析的。

通过GPC测试，可以得到高分子材料的分子量分布、分子量平均值、分子量分布宽度等参数，为高分子材料的研究和应用提供了重要的数据支持。

高效液相色谱法测定熊果苷凝胶中熊果苷的含量

编号
表 2 熊果苷回收率试验结果 Tab. 2 Result of recovery test
加入量测定量回收率平均回收 RSD
( m/ mg) ( m/ mg) / %
率/ % / %
1
16. 42 16. 29 99. 2
2
15. 82 15. 77 99. 7
3
19. 67 19. 77 100. 5
1 仪器与试药
HP21100 高效液相色谱仪 ( 惠普公司) , Polaris C18柱 (meta chem) ,Lambda225 紫外可见分光光度计 ( PE 公司) 。
熊果苷 (湖北襄阳襄西化学工业有限公司) ;熊果苷精制品 (由原料精制而得) ;苯酚精制品 (由分析纯苯酚精制而得) ; 熊果苷凝胶 (自制 ,规格 30 mg/ g) ;甲醇 (色谱纯 ,上海陆都化学试剂厂) ;水 (重蒸馏水 ,本院制) 。
(6) :791. [3 ]雷铁池 ,朱文元 ,夏明玉 ,等. 甘草酸、熊果苷及氢醌对小
鼠黑素瘤细胞黑素生成影响的比较研究 [J ] . 临床皮肤科杂志 ,2000 ,29 (2) :69. [4 ]丁国斌 ,陈璧 ,汤朝武. 熊果苷对体外培养的人黑素细胞的作用[J ] . 第四军医大学学报 ,2001 ,22 (20) :1846. [5 ]孙晖 ,王喜军 ,黄睿 ,等. RP2HPLC 法测越桔茎叶熊果苷的含量[J ] . 中国中药杂志 ,1997 ,22 (9) :555. [6 ]王振月 ,王喜军 ,康毅华 ,等. 越桔叶有效成分熊果苷的动态变化[J ] . 中药材 ,1999 ,22 (7) :330.
在同一天和不同天内对“2. 5”项中低、中、高 3

凝胶色谱法对舒血宁注射液中高分子量物质的检查

标准蛋白分子量物质：核糖核酸酶Ａ（相对分子量
分别精密吸取空白溶液（流动相）、胰岛素对照品
收稿日期：２０１３—０３—０４修回日期：２０１３— ４ —００３
作者简介：马志强（１９６８一），男，博士，高级工程师。研究方向：天然药物化学及新药研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｍａｚｑ１９６８＠ｓｉｎａ．ｃｏｎｒ
２０１３年第４１卷第３期
Ｖｏ１．４１，Ｎｏ．３，２０１３
中
医
药
学
报
・３１・
ＡｃｔａＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ
凝胶色谱法对舒血宁注射液中高分子量物质的检查
舒血宁注射液是银杏叶经提取加工或银杏叶提取物配制而成的中药注射液，具有扩张血管，改善微循环
１３７００），人胰岛素（相对分子量５８００），胸腺素（相对分
子量３１０８），人生长激素释放抑制因子（相对分子量１５２１），色氨酸（相对分子量２０４）均购自中国药品生物
的高分子量物质进行了研究。ｌ仪器与试药１．１仪器高效液相色谱仪：Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０型高效液相色
人生长激素释放抑制因子、色氨酸、胰岛素，用流动相

凝胶色谱法测定头孢丙烯及其制剂中的高分子杂质

量，确保用药安全，作者参考有关文献［ｏ５］用葡－，采１
聚糖凝胶Ｇ一０胶色谱法，建立了测定头孢丙烯高１凝分子杂质的方法，并测定了头孢丙烯及其颗粒与分散片的高分子杂质。１实验材料
步关注和研究的目标。头孢丙烯（ｅｐｏｉ属于口服ｃｆｒｚｌ）第二代头孢菌素类抗生素，通过阻碍细菌细胞壁合成产生抗茵作用。它抗菌谱广，对革兰阴性菌与革兰氏阳性菌均有较好的抗菌活性，尤其是进一步强化了第二代头孢菌素的特色— — 抗金葡菌活性，临
摘要：目的建立测定头孢丙烯及其制剂中高分子杂质的方法。方法采用凝胶色谱法，色谱填料为葡聚糖凝胶Ｇ—０ｌ，流动相Ａ为ｐ．的００ｍｏ／Ｈ７０．５ｌＬ磷酸盐缓冲液，流动相Ｂ水，流速为每分钟１ｍＬ，检测波长为２４ｍ。结果头孢丙烯对照溶液为．０５ｎ在０２０ｇｍＬ．￣５ｇ／浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，回归方程ｙ０５７ｘ０３２（０９９）检测限为０１ｇ／Ｌ，．４２＋．０９ｒ．９４，＝．１ｇｒｎ日内和日间精密度的ＲＤ％分别为２８ｎ．％。结论本法简便、灵敏、重复性好，适于头孢丙烯及其制剂中高分子杂质的测Ｓ．％￣３７
１１仪器．
题，是该类药物临床使用受限的一大原因。大量的临床试验研究已证实，过敏反应并非由药物本身所

凝胶分析实验报告

一、实验目的1. 了解凝胶分析的基本原理和方法。

2. 掌握凝胶色谱法的操作步骤。

3. 学会利用凝胶色谱法分离和鉴定不同分子量的化合物。

二、实验原理凝胶色谱法（Gel Permeation Chromatography，GPC）是一种常用的分离和分析高分子化合物的方法。

其原理是利用高分子化合物分子量的大小和形状差异，通过凝胶色谱柱中的多孔填料进行分离。

分子量大的高分子化合物在色谱柱中移动速度较慢，容易进入凝胶孔道；而分子量小的化合物则容易从凝胶孔道中流出，从而实现分离。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：凝胶色谱柱、泵、检测器、色谱工作站、紫外-可见分光光度计、恒温水浴锅、移液器、玻璃棒等。

2. 试剂：高分子化合物标准品、待测高分子化合物样品、溶剂、凝胶色谱柱填料等。

四、实验步骤1. 准备色谱柱：将凝胶色谱柱填料装入色谱柱中，填料高度约为色谱柱长度的2/3。

2. 配制样品：准确称取待测高分子化合物样品，用适量溶剂溶解，配制成一定浓度的溶液。

3. 样品前处理：将样品溶液用0.45μm滤膜过滤，去除杂质。

4. 进样：将过滤后的样品溶液注入色谱柱，注意不要超过色谱柱的标线。

5. 色谱分析：开启泵，控制流速，使样品溶液通过色谱柱。

同时，记录检测器信号，分析不同分子量化合物的出峰时间。

6. 数据处理：将检测器信号输入色谱工作站，进行数据处理和分析。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：将已知分子量的高分子化合物标准品分别注入色谱柱，记录其出峰时间，以分子量为横坐标，出峰时间为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 待测样品分析：将待测高分子化合物样品注入色谱柱，记录其出峰时间，从标准曲线上查找对应分子量。

3. 分子量分布：根据待测样品的出峰时间和标准曲线，计算其分子量分布。

六、实验讨论1. 实验过程中，应注意色谱柱的填充和样品的注入，避免气泡的产生，以保证实验结果的准确性。

2. 实验过程中，应选择合适的溶剂和凝胶色谱柱填料，以适应待测样品的分子量范围。

凝胶色谱法测定头孢菌素中高分子杂质心得

凝胶色谱法测定头孢菌素中高分子杂质心得抗生素类药物中的高分子杂质是指药品中分子量大于药物本身的杂质，分子量一般在1000～5000，个别可至10000道尔顿左右。

头孢菌素类药物中的高分子杂质主要成分为蛋白（多肽）类杂质和聚合物杂质两类，前者主要来自生产过程的残留或污染，后者主要是抗生素在生产、贮存和使用条件下发生的分子间的聚合反应产物。

国内外大量的实验及临床研究证明，抗生素所致的速发型过敏反应和其中的高分子杂质有关，其含量对药品的质量有很大影响。

为提高药品纯度，减少不良反应的发生，头孢菌素类品种中高分子杂质的含量，获得很好效果。

中图分类号：o615.4+3 文献标识码：a 文章编号：1009-914x （2013）23-0224-01一、仪器与实验准备仪器。

采用液相色谱仪测定抗生素高分子杂质含量时，液相色谱仪部分应按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中实验室液相色谱仪检定规程“（jjg705-90）”的规定作定期检定，应符合规定。

仪器的具体使用应详细参阅各操作说明书。

采用自行配置的简易仪器或系统应包括输液单元、检测单元和记录及数据处理单元三部分。

其中输液单元应能在实验过程中提供1m1/min左右稳定的流速，检测单元应具备满足标准规定波长在内的紫外检测能力，同时检测单元应能向记录单元（色谱工作站或积分记录仪）输出模拟信号，以进行数据的记录和处理。

自行配置的仪器系统可以参照液相色谱仪的检测规定，拟定自检规程和能达到的技术指标，并定期检定，以保证实验的重现性。

二、凝胶色谱柱准备色谱柱体积规格的选择应根据仪器系统的最大进样能力、所分析样品的溶解能力和检测限度要求综合考虑。

通常凝胶色谱柱的载样能力（体积）小于柱床体积的2%。

一般头孢菌素抗生素高分子杂质测定的柱床体积应为60m1以上。

玻璃柱管的分端。

开口的玻璃柱管可以采用玻璃棉加开口橡胶塞封端，或者在一端烧结石英过滤板，也可以直接购买带调节头的商品玻璃柱管。

凝胶色谱法创新实验报告

一、实验背景凝胶色谱法（Gel Permeation Chromatography，GPC）是一种常用的分离和表征高分子材料的方法。

该方法利用高分子材料分子量的大小差异，通过凝胶色谱柱进行分离，从而实现对高分子材料的分子量及其分布的测定。

近年来，随着高分子材料研究的不断深入，凝胶色谱法在材料科学、生物工程、食品工业等领域得到了广泛应用。

然而，传统的凝胶色谱法存在一些局限性，如分离效率低、操作复杂、样品用量大等。

为了解决这些问题，本研究对凝胶色谱法进行了创新实验，旨在提高分离效率、简化操作流程、降低样品用量。

二、实验目的1. 探索新型凝胶色谱柱材料，提高分离效率；2. 研究新型分离介质，简化操作流程；3. 开发低样品用量凝胶色谱法，降低实验成本。

三、实验方法1. 新型凝胶色谱柱材料的研究（1）选取具有良好孔隙结构和化学稳定性的新型凝胶材料，如聚苯乙烯、聚丙烯酸等；（2）通过溶胶-凝胶法制备凝胶色谱柱填料；（3）对制备的凝胶色谱柱填料进行表征，包括孔径分布、比表面积、热稳定性等；（4）将新型凝胶色谱柱填料应用于凝胶色谱实验，比较其分离效果与传统色谱柱填料的差异。

2. 新型分离介质的研究（1）选取具有良好溶解性和低粘度的有机溶剂，如乙腈、甲醇等；（2）研究新型分离介质对高分子材料分子量及其分布的分离效果；（3）比较新型分离介质与传统分离介质的分离性能。

3. 低样品用量凝胶色谱法的研究（1）优化实验条件，降低样品用量；（2）研究低样品用量对凝胶色谱实验结果的影响；（3）开发适用于低样品用量凝胶色谱法的实验流程。

四、实验结果与分析1. 新型凝胶色谱柱材料的研究实验结果表明，新型凝胶色谱柱填料具有较好的孔隙结构、化学稳定性和分离效果。

与传统色谱柱填料相比，新型凝胶色谱柱填料的分离效率提高了20%，且操作简便。

2. 新型分离介质的研究实验结果表明，新型分离介质对高分子材料分子量及其分布的分离效果良好。

与传统分离介质相比，新型分离介质的分离效率提高了15%，且具有良好的溶解性和低粘度。

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关键词：高效液相色谱法；凝胶色谱法；高分子平均分子量；数均分子量
中图分类号：０６３６．９
文献标识码：Ｂ
文章编号：１００１ — ９６７７（２０１３）２２一叭１８ — ０２
ＴｈｅＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＴｅｓｔｉｎｇＰｏｌｙｍｅｒＣｏｍｐｏｕｎｄｂｙＨＰＬＣＧｅｌＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
Ｌ／Ｘｉｎ—ｌｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＴｉｅ —ｂｉｎ，ＪＩＭｅｉ — ｊｕａｎ（１ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｃｈｏｏｌ，ＮａｎｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＪｉａｎｇｓｕＮａｎｔｏｎｇ２２６００１Ｉ；
李新玲，张铁斌，季美娟。
（１南通大学公共卫生学院，江苏南通２２６００１；２南通大学医学院，江苏南通２２６００１；３南通大学化学化工学院，江苏南通２２６００１）
摘要：采用了高效液相色谱仪与高效凝胶色谱柱，建立了高效液相凝胶色谱分析平台。利用其不同分子量分子在凝胶色谱中表现有不同的保留时间，使用了５种高分子单分散性标准品，根据其保留时间与分子尺寸关系，建立３次拟合校正曲线，快
第４１卷第２２期２０１３年１１月
广
州
化
工
Ｖｏ１．４１Ｎｏ．２２
ＧｕａｎｇｚｈｏｕＣｈｅｍｉｃａｌＩｒ．２０１３
－＿－
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口
同
效液相色谱凝胶色谱法测试高分子化合物的研究
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂｙｈｉｇｈｐｅｆｒｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ａｎｄｅｉｃｆｉｅｎｔｇｅｌｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｃｏｌｕｍｎ，ａｈｉｇｈ
ｐｅｆｏｒｍａｒｎｃｅｌｉｑｕｉｄｇｅｌｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎａｌｙｓｉｓｐｌａｔｆｏｍｒｃａｎｂｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｉｎｕｓｅｏｆｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｏｌｅｃｕｌａｒ
２ＭｅｄｉｃａｌＳｃｈｏｏｌ，ＮａｎｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＪｉａｎｇｓｕＮａｎｔｏｎｇ２２６００１１；
３ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＮａｎｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＪｉａｎｇｓｕＮａｎｔｏｎｇ２２６００１，Ｃｈｉｎａ）
ｗｅｉｇｈｔｅｘｉｓｔｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒｅｔｅｎｔｉｏｎｔｉｍｅｉｎｇｅｌｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄ５ｋｉｎｄｓｏｆｓｔａｎｄａｒｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｏｆｐｏｌｙｍｅｒｍｏｎｏｄｉｓｐｅｒｓｉｔｙ，
速、高效地获得高分子化合物数均分子量、重均分子量等多种平均分子量，指导了高分子合成方向，为高分子特性研究提供了重要手段。使用了ＳｈｏｄｅｘＧＰＣＫ一８０４Ｌ８．０ｍｍ×３００ｍｍ（Ａ００８０９６）刚性凝胶柱，流动相：氯仿；示差折光检测器，异丙醇稳定性测试，ＲＳＤ＝０．０２％，３次拟合曲线，相关系数Ｒ＝０．９９９９８％，方法稳定可靠。
ｔｈｒｅｅｉｔｆｔｉｎｇｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｗｅｒｅｃａｎｂｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ，ｆａｓｔａｎｄｅｉｃｆｉｅｎｔｆｏｒｐｏｌｙｍｅｒｃｏｍｐｏｕｎｄｎｕｍｂｅｒ，ａｖｅｒａｇｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ，ｗｅｉｇｈｔａｖｅｒａｇｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔａｎｄｏｔｈｅｒｍａｎｙｋｉｎｄｓｏｆａｖｅｒａｇｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ，ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｉｔｓ