牛膝薄层色谱以及显微鉴别
广东土牛膝与土牛膝的鉴别方法
图1 广东土牛膝粉末显微图木纤维; 2.厚壁细胞; 3.石细胞; 4.具缘纹孔导管; 5.棕色块; 6.分泌道碎片图2 土牛膝粉末显微图1.木纤维;2.导管;3.草酸钙簇晶;4.方晶土牛膝石细胞众多,成群或散在无厚壁细胞单个散在或数个成群偶见导管多为具缘纹孔导管具缘纹孔、梯纹及螺纹导管结晶簇晶、方晶棕色块无分泌道碎片无表1 广东土牛膝与土牛膝粉末特征主要区别图3 广东土牛膝横切面简图①作者简介:张德培:副总经理、主管中药师、执业药师。
通讯作者:黄海波:Tel:186********,Email:bobhwang@。
中国卫生产业型电热恒温干燥箱(沪南实验仪器厂);GSK-11型恒温水浴锅;RE-52AA 旋转式蒸发器(金坛市晶玻实验仪器厂);DWF100型粉碎机。
实验所用试剂均为分析纯。
2 实验方法2.1 粉末分别取广东土牛膝和土牛膝,粉碎,过筛,分别做水装片、水合氯醛装片和水合氯醛加热透化片观察,绘图。
2.2 横切面分别取广东土牛膝和土牛膝的根鲜品适量,用蒸馏水浸润,采用徒手切片法,水合氯醛透化后观察,绘图。
2.3 薄层鉴别2.3.1 供试品液制备 分别取广东土牛膝和土牛膝干品粉末各2g,加75％乙醇20mL,超声提取30min,滤过,滤液加稀盐酸2mL,超声20min,放冷,加氢氧化钠试液调节pH至7,用三氯甲烷20mL提取,提取液蒸干,残渣加三氯甲烷1mL使溶解,作为供试品溶液。
2.3.2 色谱条件 照薄层色谱法[4](中国药典一部附录ⅥB)试验。
吸取上述2种溶液各10、20ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙醚—正己烷(2:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以磷钼酸试液,在105℃加热至斑点显色清晰,置紫外灯(365nm)下检视[5]。
3 结果3.1 粉末3.1.1 广东土牛膝 (1)粉末颜色为棕黄色。
(2)厚壁细胞多,淡黄绿色。
(3)石细胞多见,多呈长条形、类方形、类圆形,壁厚木化,层纹、孔沟及纹孔明显。
三七木瓜液中三七 木瓜 牛膝的薄层色谱鉴别
三七木瓜液中三七木瓜牛膝的薄层色谱鉴别
陆连英;邓雪华
【期刊名称】《辽宁中医药大学学报》
【年(卷),期】2007(9)1
【摘要】三七木瓜液是本院研制开发的中药制剂，由三七、木瓜、牛膝等12味中药加工制成具有祛风除湿，活络止痛的功效，主治风湿痹痛，肢体麻木，跌打损伤，在临床上取得满意效果。
为了控制其质量，笔者对制剂中的三七、木瓜、牛膝的鉴别方法加以探索，建立了可行的质量控制方法。
【总页数】1页(P140-140)
【关键词】三七木瓜液;三七;禾瓜;牛膝;薄层色谱法
【作者】陆连英;邓雪华
【作者单位】郧阳医学院附属东风医院;郧阳医学院药学系
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
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1.定坤丹中的人参与三七的薄层色谱鉴别 [J], 刘秀梅;黄青
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GC-YL-10230牛膝检验操作规程
A样×C对×f
含量% =×100%
m×（1－水分）×A对
式中：
A样-------------------------样品的面积。
A对------------------------ -对照品的面积。
C对-------------------------对照品的浓度(mg/ml)。
m-------------------------样品的重量（g）。
f-------------------------稀释体积。
【鉴别】
（1）显微鉴别
仪器与试剂：生物显微镜、酒精灯，水合氯醛等。
方法：取本品，用水合氯醛装片，置显微镜下观察：本品横切面：木栓层为数列扁平细胞，切向延伸。栓内层较窄。异型维管束外韧型，断续排列成2～4轮，最外轮的维管束较小，有的仅1至数个导管，束间形成层几连接成环，向内维管束较大；木质部主要由导管及小的木纤维组成，根中心木质部集成2～3群。薄壁细胞含有草酸钙砂晶。
【检查】
水分不得过15.0%（通则0832第二法）。
仪器：电热鼓风干燥箱、分析天平、粉碎机、药筛等。
方法：取供试品2～5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，开启瓶盖在100～105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（％）。
仪器：粉碎机、药筛、分析天平、坩埚、箱式电阻炉等。
方法：取供试品2～3g，过二号筛混合均匀后，置炽灼至恒重的坩埚中称定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。
川牛膝质量标准提高研究
中药与临床Phamacy and Clinics o f C hinese Materia Medica 2Q2Q;\\(4)•品种品质' •川牛膝质量标准提高研究覃辞辞\齐景梁2,苟琰2,耿昭2,周娟2，高必兴2[摘要]目的：产地及市场了解川牛膝品种情况，建立川牛膝与其混淆品的鉴别方法，为川牛膝标准提高工作奠定基础。
方法：对川牛膝进行调研，并收集基原准确川牛膝及其混淆品的样品；依照2015年版《中国药典》一部川牛膝项下的方法对所收集的样品进行检测；依据基原、性状、显微鉴别、薄层色谱，泡沫试验及分子生物学（ITS)建立川牛膝及其混淆品的鉴别方法。
结果：调研发现产地及市场存在川牛膝、麻牛膝及杂牛膝混种混用情况；现有标准无法鉴别此三种牛膝，杯莧甾鲷的含量川牛膝>杂牛膝>麻牛膝。
新建立的鉴别方法可从基原、TLC鉴别、泡沫实验及分子生物学方法进行明显的区分。
结论：川牛膝及其混淆品混种混用现象严重，现有标准无法对其进行区分，新建立的鉴别方法可区分川牛膝及其混淆品，为其标准提高工作打下基础。
[关键词]川牛膝及其混淆品；产地调研；标准检验；鉴别[中图分类号]R 282 [文献标识码]A [文章编号]l674-926X(2〇2〇)〇4-001-07Study on the improvement of quality standard of Chuanniuxi/g/JVG Ting-ting1, QI Ji-liang2, GOU Yarf, GENG Zhao2, ZHOU Juan2, GAO Bi-xing2//(l. Chengdu Pidu District Hospital o f TCM,Chengdu 611370, Sichuan; 2.Sichuan Institute for Food and DmgControl/Key Labomtoryof Q uality E valuation o f Chinese Patent Medicines NMPA, Chengdu 611731，Sichuan) [Abstract] Objective: To understand the origin and market conditions of Chuanniuxi, and to establish the identification method of Chuanniuxi and the adulterants, so as to lay a foundation for improving the standard of Chuanniuxi. Method: The origin and market of Chuanniuxi was investigated, and samples of Chuanniuxi and adulterant products were collected. The collected samples were tested in accordance with the method of Chuanniuxi recorded in Chinese Pharmacopoeia (Part 1, 2015 edition). The identification method was established according to origin, characteristic, microscopic identification, thin layer chromatography, foam test and molecular biology (ITS) test. Result: The survey found that there was a confusion use of Chuanniuxi, Maniuxi and Zhaniuxi in the place of production and the market.The existing standards cannot distinguish the three kinds of Niuxi, and the content of cyasterone in Chuanniuxi was higher than Zhaniuxi which was higher than Maniuxi. The newly established identification method can be used for the identification of orgin, TLC, foam test and molecular biology methods to clearly distinguish Chuanniuxi and its adulterants. Conclusion: The confusion use of Chuanniuxi and its adulterants is serious, and the existing standards cannot distinguish them. The newly established identification method can distinguish Chuanniuxi and its adulterants, laying the foundationfor the improvement of its standards.[Key words] Chuanniuxi and the adulterants; investigation of producing areas; standard inspection; identification川牛膝，为苋科杯苋属川牛膝Kuan的干燥根。
实验五 牛膝、黄芩药材鉴定
新的形成层，形成单一型、
复合型外韧维管束。——何
首乌等。
直根类——牛膝
【来源】
苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl.的 干燥根。
直根类——牛膝
【显微鉴定】——组织构造（根 横切面） 1.异型维管束同心环状断续排 列成2～4轮，最外轮维管束较
பைடு நூலகம்
小，向内较大。
2.中央有正常维管束。初生木 质部二元型。
载培品较细长，多有分枝。 表面浅黄棕色，外皮紧贴，纵皱纹 较细腻。断面黄色或浅黄色，略呈 角质样。味微苦。
2.显微鉴别 根横切面：
①木栓层多除去或残留数列， 偶有石细胞散在。
②栓内层狭窄。
③韧皮部有多数石细胞与韧皮 纤维，单个或成群散在，石 细胞多分布于外侧，韧皮纤 维多分布于内侧。 ④形成层多成环。 ⑤木质部在老根中央有栓化细 胞环，栓化细胞有单环的， 有成数个同心环的。 ⑥薄壁细胞中含有淀粉粒。
粉末：黄色。 ①韧皮纤维单个散在或数个成束 ，梭形，壁厚，孔沟细。 ②石细胞类圆形、类方形或长方 形，壁较厚或甚厚。
③木栓细胞多角形、棕黄色。
④网纹导管多见。 ⑤木纤维多碎断，有稀疏的斜纹 孔。 ⑥淀粉粒甚多。
实验 牛膝的鉴定（粉末）
一、实验目的：
1.掌握根类药材粉末观察注意点。 2.掌握牛膝药材粉末特征。 3.进一步熟练粉末标本片制片方法的操作步骤。 二、实验材料：
三、实验内容：
1. 牛膝：草酸钙砂晶、木纤维、具缘纹孔导管。 四、实验步骤：——实验报告要求详细描述操作步骤！ 五、实验结果：绘制牛膝的粉末显微特征图。
牛膝
川牛膝
直根类——牛膝
【显微鉴定】—粉末：
土黄色
1.薄壁细胞含草酸钙砂晶。
牛膝的功效与作用
牛膝的功效与作用牛膝的简介：牛膝学名：Achyranthes bidentata为苋科牛膝属的植物。
分布于非洲、俄罗斯、越南、印度、马来西亚、菲律宾、朝鲜以及中国除东北外全国各地等地，生长于海拔200米至1,750米的地区，常生长在山坡林下，目前尚未由人工引种栽培。
牛膝商品呈细长圆柱形，有时稍弯曲，上端较粗，长30～60cm。
直径0.2～lcm。
表面灰黄色或淡棕色，有细纵皱纹及侧根痕。
质硬脆，受潮变柔韧，易折断，断面淡黄色，角质样，有黄白色小点异常维管束断续排列成数轮同心环。
气微，味微甜涩。
牛膝的主要成分是根含三萜皂甙, 水解后生成齐墩果酸Oleanolic acid.亦含蜕皮甾酮Ecdysterone、牛膝甾酮Inokosterone、紫茎牛膝甾酮Rubrosterone.尚含多糖类、氨基酸、生物碱类、香豆素类.根含大量钾盐及甜菜碱Betaine、蔗糖等野生牛膝亦有药用.但功效与栽培品略有不同，为“土牛膝”的一种.其性状特征为：根茎呈圆柱状，长1～3cm，直径5～10mm，灰棕色，上端有茎基残留，周围着生多数粗细不一的根，根呈长圆柱形，略弯曲，长多在15cm、以下，较细，直径最大可达4mm;表面淡灰棕色，有细密细纵纹。
质稍柔软，干后易折断，断面黄棕色，可见成圈状散列的维管束。
气微，昧微甜.在河南、山西，河北、山东、江苏等地及西南均有分布。
牛膝统货一般在9元上下，一等选货价格在20元，鲜货2元，价格浮动在1元左右。
是什么?1、补肾强筋牛膝，味苦、酸，性平;归肝、肾经。
补肝肾;强筋骨;活血通经;引敌国火下行;利尿通淋。
主腰膝酸痛;下肢痿软;血滞经闭;痛经;产后血瘀腹痛;征瘕;胞衣不下;热淋;血淋;跌打损伤;痈肿恶疮;咽喉肿痛。
2、怀牛膝功效功偏滋补肝肾，壮腰膝：用于肝肾不足引起的筋骨酸软、腰膝疼痛。
3、野生土牛膝功效为苋科植物牛膝的野生种及柳叶牛膝、粗毛牛膝钝叶上牛膝的根及根茎。
通常生用，擅长泻火解毒。
牛膝质量标准及检验操作规程
xxxxxxx有限企业原料质量标准与查验操作规程标题牛膝质量标准及查验操作规程文件号部门批阅日期批准日期颁发部门散发部门草拟人QA 批阅奏效日期草拟日期第 1 页日期共 4 页更改记录文件订正号更改版本更改时间更改原由1品名：1.1 中文名：牛膝1.2 汉语拼音： Niuxi2代码3取样文件编号：4查验方法文件编号：5依照：《中国药典》（2020 年版一部）。
6质量标准：项目法定标准内控标准本品为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl. 的干燥根。
冬天茎叶枯败时采挖，除掉须根及泥沙，捆成小把，晒至干皱后，将顶端切齐，晒干。
本品呈修长圆柱形，挺直或稍曲折，长15～ 70cm，直径0.4～ 1cm。
表面灰黄色或淡棕色，有微歪曲的细纵皱纹、摆列稀少的侧根痕和横长皮性状孔样的崛起。
质硬脆，易折断，受潮后变软，断面平展，淡棕色，略呈同法定标准角质样而油润，中心维管制木质部较大，黄白色，其外周散有多半黄白点状维管制，断续摆列成2～ 4 轮。
气微，味微甜而稍苦涩。
（ 1）本品横切面：木栓层为数列扁平细胞，切向延长。
栓内层较窄。
外韧型维管制断续摆列成2～4轮，最外轮维管制较小，有时仅1鉴识同法定标准至数个导管，束间形成层几连结成环，向内维管制较大；木质部由导管及小的木纤维构成，根中心木质部集成2～3群。
薄壁细胞含草酸钙砂晶。
（2）取本品粉末 4g，加 80% 甲醇 50ml，加热回流 3 小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水 15ml ，微热使溶解，加在 Dl01 型大孔吸附树脂柱（内径为 1.5cm，柱高为 15cm）上，用水 l00ml 洗脱，弃去水液，再用20% 乙醇 100ml 洗脱，弃去洗脱液，继用80%乙醇 100ml 洗脱，采集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液。
另取牛膝比较药材4g，同法制成比较药材溶液。
再取伊蜕皮甾酮比较品、人参皂苷Ro 比较品，加甲醇分别制成每1ml 含1mg 的溶液，作为比较品溶液。
牛膝
商品种类
牛膝：播种当年的11月，茎叶枯萎时采收，除去细根、泥沙，捆成小把， 晒至干皱后，将顶端切齐，晒干。
牛膝段：取原药材，拣去杂质，大小分开，去芦，洗净，用清水浸泡六 七成透时，捞出，润透，切段，晒干或烘干。
酒牛膝：取净段喷淋黄酒拌匀，闷1-2h，微火加热翻炒至颜色变深，取 出，晾干。
贮藏
▪ 药材扎成捆，麻袋包裹；饮片白色硬质塑 料袋包装，置阴凉干燥处，防潮。
▪ 易受潮变软，高温易走油变黑，宜置于 30℃以下的阴凉干燥处，密封。
附注
▪ 麻牛膝
与川牛膝是同属植物，植物形态似川牛膝， 唯有花球团干后呈暗褐色，有时未及时清苗，在 采收时相混，因药材性味与川牛膝不同，不宜混 用，应注意区别。
对照品进行TLC。供试品在与对照品相应位置上，显相同的颜色的斑 点。 5、纯净度 水分不得过15.0％； 总灰分不得过9.0％；酸不溶性灰分不得过1.0％。
质量要求
1、性状评价 以根长、皮细、肉肥、色黄白者为佳。 2、浸出物 水饱和正丁醇浸出物(热)含量，药材不得少于6.5％；
饮片不得少于5.0％； 酒牛膝不得少于4.0％ 。 3、含量测定 HPLC测定，商品含-蜕皮甾酮不得少于0.030%。
盐牛膝 形同酒牛膝，多焦斑，味咸。
鉴别与检查
1、荧光检查 饮片于紫外光灯（365nm）下，显黄白色荧光； 滴加 1%氢氧化铵，显淡黄绿色荧光。 2、化学定性 粉末滴加冰醋酸及浓硫酸，显紫红色。
粉末加水10ml，激烈振摇，产生持续性泡沫（皂苷）。 4、薄层色谱 以-蜕皮甾酮、人参皂苷R0 对照品，牛膝对照药材为
川牛膝
▪ 【历史记载】
▪ 始载于《滇南本草》。
▪ 【性味功效】
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牛膝薄层色谱以及显微鉴别
（一）牛膝简介
牛膝为常用中药。
为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl．的干燥根。
始载于《神农本草经》。
具有补肝肾、强筋骨、散瘀通经、利尿通淋、引血下行的功能。
用于腰
膝酸痛、筋骨无力、经闭癓瘕、肝阳眩晕等病症。
牛膝中药饮片呈圆柱形的段。
外表皮灰黄色或淡棕色，有微细的纵皱纹及横长皮孔。
质硬脆，易折断，受潮变软。
切面平坦，淡棕色或棕色，略呈角质样而油润，中心维管束木部较大，黄白色，其外围散有多数黄白色点状维管束，断续排列成2〜4 轮。
气微,味微甜而稍苦涩。
见下图
（二）薄层色谱鉴别
分别取牛膝中药饮片（购自河南、安徽）约1g,剪碎，各加80%甲醇30ml,加热回流3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml，微热使溶解，加在D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm,柱高为10cm)上，用水100ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇100ml洗脱，弃去洗脱液，继用80%乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80% 甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取牛膝对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5µl分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氣甲烷-甲醇-水-甲酸（7 : 3 : 0.5 : 0.05)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色淸晰。
置紫外光365nm下供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
见下图
（三）牛膝显微鉴别
牛
膝
薄
壁
细
胞
中
含
有
草
酸
钙
砂
晶
牛膝纤维
牛膝导管。