油条食品中苯并芘的测定
食用油中苯并（a）芘测定能力验证结果分析
分析检测食用油中苯并（a）芘测定能力验证结果分析杨 跃，李丽丽，付锦华（营口市食品药品检验检测中心，辽宁营口 115003）摘 要：依据《食品安全国家标准食品中苯并（a）芘的测定》（GB 5009.27—2016），采用液相色谱法测定食用油中苯并（a）芘的含量，对本实验室苯并（a）芘检测能力进行验证，并对实验结果进行分析讨论。
两份能力验证样品检测结果均为满意，说明本实验室苯并（a）芘检测能力良好。
关键词：能力验证；苯并（a）芘；液相色谱Analysis of Proficiency Test Results for the Determination ofBenzo(a)prene in Edible OilsYANG Yue, LI Lili, FU Jinhua(Yingkou Food and Drug Inspection Center, Yingkou 115003, China)Abstract: According to GB 5009.27—2016, the content of benzo (a) pyrene in edible oil was detected by liquid chromatography. The detection ability of benzo (a) pyrene in our laboratory was verified, and the experimental results were analyzed and discussed. The results of the two proficiency verification samples were satisfactory, indicating that the laboratory’s benzo (a) pyrene detection ability was good.Keywords: proficiency test; benzo(a)pyrene; liquid chromatography苯并（a）芘是一种多环芳烃类化合物，是公认的致癌物，可引起消化道、肺部、皮肤等部位发生癌症[1-2]。
食用油中苯并(a)芘的快速检测 胶体金免疫层析法(KJ201910)
附件10食用油中苯并（a）芘的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201910)1 范围本方法规定了食用油中苯并（a）芘的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于食用油中苯并（a）芘的快速测定。
2 原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中的苯并（a）芘经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中苯并（a）芘进行定性判定。
3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1 试剂3.1.1正己烷：色谱纯。
3.1.2乙腈：色谱纯。
3.1.3二甲基亚砜（DMSO）。
3.1.4NaH2PO4•2H2O。
3.1.5Na2HPO4•12H2O。
3.1.6氯化钠。
3.1.7吐温-20。
3.1.8氢氧化钠溶液（2 mol/L）：称取80g氢氧化钠用水溶解，并定容至1L。
3.1.9PBST溶液：称取0.2965 g NaH2PO4•2H2O、2.9 g Na2HPO4•12H2O、8.76 g氯化钠与0.55 g 吐温-20用水溶解并定容至1 L。
3.2 参考物质苯并（a）芘参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥95%。
表1 苯并（a）芘参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量注：或等同可溯源物质。
3.3 标准溶液的配制苯并（a）芘标准储备液（0.1mg/mL）：精密称取适量苯并（a）芘标准品（3.2），置于10 mL 容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1mg/mL的苯并（a）芘标准储备液；或可直接购买苯并（a）芘标准储备液。
0 ℃~5 ℃避光保存备用，有效期1年。
3.4 材料苯并（a）芘胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为食用油。
3.4.1金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。
苯并芘检测实验报告
苯并芘检测实验报告一、实验目的苯并芘是一种强致癌物质，广泛存在于环境和食品中。
本次实验的目的是建立一种准确、灵敏的方法来检测样品中的苯并芘含量，评估其潜在的健康风险，并为相关领域的质量控制和环境保护提供科学依据。
二、实验原理本实验采用高效液相色谱法（HPLC）结合荧光检测器进行苯并芘的检测。
苯并芘在特定的色谱条件下能够与固定相和流动相发生相互作用，从而实现分离。
通过荧光检测器检测其荧光信号强度，并与标准曲线对比，计算出样品中苯并芘的含量。
三、实验材料与仪器（一）材料1、苯并芘标准品2、甲醇（色谱纯）3、乙腈（色谱纯）4、超纯水5、待测样品（如食用油、烟熏食品等）（二）仪器1、高效液相色谱仪（配备荧光检测器）2、色谱柱（C18 柱，250mm×46mm，5μm）3、超声波清洗器4、离心机5、移液器6、容量瓶7、过滤膜（045μm）四、实验步骤（一）标准溶液的配制1、准确称取一定量的苯并芘标准品，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为100μg/mL 的储备液。
2、将储备液逐步稀释，得到浓度分别为01μg/mL、05μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL 的标准工作溶液。
（二）样品前处理1、食用油样品：取适量样品于离心管中，加入一定量的乙腈，超声提取 30 分钟，然后离心分离，取上清液过045μm 滤膜，待进样分析。
2、烟熏食品样品：将样品粉碎均匀，称取一定量置于具塞锥形瓶中，加入乙腈，振荡提取 1 小时，然后离心分离，取上清液过045μm 滤膜，待进样分析。
（三）色谱条件设置1、流动相：甲醇水（85:15，v/v）2、流速：10mL/min3、柱温：30℃4、进样量：20μL5、荧光检测波长：激发波长 365nm，发射波长 410nm（四）样品测定分别将标准工作溶液和处理后的样品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图和荧光强度。
五、实验结果与数据分析（一）标准曲线绘制以苯并芘的浓度为横坐标，对应的荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线。
食品中苯并[a]芘的测定
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环已烷重复提取
环已烷层洗涤（水，125mL×2）
浓缩至25mL
（2）净化 装柱 加样吸附 洗脱（苯30mL） 减压浓缩至0.1~0.5mL
（3）分离 点样 展开（95%乙醇：二氯甲烷=2：
1） 观察（紫外灯照射） 剪下斑点，加苯浸泡溶解。
（4）测定
食品中苯并[a]芘的测定
一、苯并[a]芘的结构与性质
简称为BaP
针状结晶，沸点310~320℃
溶解特性：水中溶解度为0.004~0.012mg/L
烷、苯、甲苯、
易溶于石油醚、环已烷、已
二甲苯、丙酮
稍溶于乙醇、甲醇
化学性质：稳定，常温下不与硫酸作用，能与硝酸、
高氯酸 反应
碱性条件下稳定
荧光特性：紫外线（360nm）下产生典型紫色荧光
欧共体
0.03ug/kg
调料
德国
1.0ug/kg
肉及肉制品
意大利
食品及饮料
荷兰
1.0ug/kg
肉制品
北欧国家 肉制品
1.0ug/kg
3、一些国家的每日允许摄入量(ug)
0.03ug/kg
五、防治措施 ➢ 加强环境治理 ➢ 改变生产方式 ➢ 改进烹调和加工方法 ➢ 改变饮食习惯 ➢ 去毒处理
六、测定方法
苯并[a]芘标准液
苯并[a]芘标准贮备液：100ug/mL
3、仪器
脂肪抽提器
层析柱（10cm×350cm）
层析缸
K-D浓缩器
紫外灯
荧光分光光度计
4、操作方法 （1）样品提取 粮食及低水分含量食品 回流抽提，碱皂化6~8h（90下） 皂化液趁热转移至分液滤斗 洗涤接收瓶（50mL95%乙醇） 加水（100mL）振摇提取 静置分层 下层二次提取（70mL环已烷） 合并环已烷 洗涤环已烷层（水，100mL×3） 洗涤水环已烷提取（30mL×2） 浓缩至40mL（60 ℃水浴中）
动植物油脂中苯并(a)芘含量测定
1
使石油醚流至无水 硫酸钠的顶部 。 向层析柱中移入样 品溶液 , 清洗层 析柱后加入80ml石 油醚洗脱 ,流速为 1ml/min,弃去前 20ml石油醚 ,收集 其余洗脱液。
检 测2ຫໍສະໝຸດ 3 8实验结
果
处
理
定性定量方法 采用标准物质的保留时间对样品峰进行准确定性 , 采用外标法以峰面积计算定量。 色谱柱的选择 PAH专 用 柱：专用于 PAH的测定 ,可很好分离苯并 (a)芘在内的PAH成分; Dikma C18柱：正常动植物油脂中苯并(a)芘的测定。
10
T
h
a
n
k
s
危 害
• 苯并芘又称苯并（а）芘，英文缩写BaP。 • 是强致癌物之一，食用受其污染的食品。 • 具有公认的致畸、致癌的慢性毒性。 • 长期生活在含BaP的空气环境中，会造成慢性中毒 。
5
测定动植物油脂中苯并(a)芘的 含量
反相高效液相色谱法
检 测
本方法的优点
准确度较高 前处理操作简单 适用范围广的方法
大 事 件
3
物 质 的 理 化 常 数
中文名称：苯并(a)芘（3,4-Benzypyrene）
分子式：C20H12 熔 点：179℃ 分子量：252.32 沸点：475℃
外观与性状：无色至淡黄色、针状、晶体(纯品)
溶解性：不溶于水，微溶于乙醇、甲醇，溶于苯、甲苯、 二甲苯、氯仿、乙醚、丙酮等
4
苯并（a）芘
9
１、油料种子被污染。 本品在工业上无生产和 ２、采用浸出法制油时，也易造 防止苯并（ａ）芘对食品的污 使用价值，一般只作为 成对油脂的污染； 染及其对人的危害，要避免高 生产过程中形成的副产 ３、油脂在使用的过程中也可形 温烘烤食品，尤其不要用煤火 物随废气排放。 成多环芳烃类物质。 （或炭火）直接烘烤食品；不 吃或少吃烟熏食品。 油脂中的苯并（ａ）芘可用碱炼 法或高温脱除以活性碳吸附去除。
苯并[a]芘的测定
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二、食品中苯并[a]芘的来源
BaP是含碳燃料及有机化合物热解过程中的产物，是
煤、石油、天然气、木材等不完全燃烧的产物。
空气中BaP含量为0.01~100μg/m3; 地表水中BaP含量为0.03~0.1μg/L;
土壤中BaP含量为0~400μg/kg
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加工环节的污染 设备管道 包装材料 酱油、醋、酒、饮料 糖果、面包、冷饮包装用蜡纸
润滑油等
工业废水、废气的污染 三废的排放 沥青的利用（沥青中苯并芘含量为2.5~3.5%） 细菌、原生生物、淡水藻类及某些高等植物的组织内 合成 藻类、水生植物BaP含量为0.005 μg/kg 植物BaP含量0.01~0.02μg/kg
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在熏烤、烘烤过程中形成 燃烧产物与食品的直接接触、烟尘与食品的直接接触
粮食烘干
高温下脂肪、胆固醇等成分的热解或热聚（10~70倍）
高温下食品的焦化或炭化
淀粉390℃时产生 0.7μg/kg 650 ℃时产生17μg/kg 650 ℃下葡萄糖产生7mg/kg、脂肪酸产生88mg/kg
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0.02~0.14
英国
荷兰
0.48
0.12~0.42
意大利
0.1~0.3
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奥地利
0.36
五、防治措施
加强环境治理
改变生产方式
改进烹调和加工方法 改变饮食习惯 去毒处理
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六、测定方法
（一）分配柱层析净化荧光测定法 1.原理 样品先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提 取液经液－液分配或色谱柱净化，然后在乙酰化滤纸上 分离苯并(a)芘，因苯并(a)芘在紫外光照射下呈蓝紫色 荧光斑点，将分离后有苯并(a)芘的滤纸部分剪下，用 溶剂浸出后，用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较 定量。
食用油中苯并(a)芘检测试剂盒说明书-20230723
食用油中苯并（a）芘（BaP）ELISA检测试剂盒使用说明书检测限：1.5μg/kg 定量区间：2-20μg/kg本产品可以采用单点定标，即点1个标准品实现定量分析，最大可实现47个样本的检测。
采用单点定标时，数据分析请来电索取专门的Excel数据分析软件1.样本前处理（动植物性食用油脂，如菜籽油、大豆油、花生油、玉米油、调和油等）需要但未提供的试剂和器皿如下：Array(1)二氯甲烷，分析纯(2)正己烷，分析纯(3)甲醇，分析纯(4)去离子水(5)5mL圆底或锥底玻璃离心管(6)2ml玻璃进样瓶或者5ml圆底玻璃试管（一次性）(7)5mL有机玻璃离心管架（24孔），1个(8)17*17*10cm瓷盘，1个试剂配制预处理试剂：取1管试剂A，加入到1瓶试剂B中，剧烈震荡使其完全溶解，备用【配制好的预处理试剂呈白色半透明状，于2-8℃保存有效期10天】1.1预处理1）称取0.4±0.005g油样于5mL玻璃离心管中，加入0.4mL预处理试剂混匀；2）室温静置5min（离心管斜躺在桌面上）3）加入0.4mL去离子水、1mL正己烷剧烈振荡2min1.2过SPE柱1）活化：依次采用1mL二氯甲烷、1mL正己烷过柱2）上样：取1mL上层待净化液加入柱中（见1.1预处理-33）淋洗：依次用1mL正己烷、1mL试剂C4）解吸：加入1mL二氯甲烷解吸（流速1mL/min），收集全部解吸液于2mL玻璃进样瓶中5）浓缩及复溶：40℃水浴氮吹干；加入1mL甲醇涡旋15s；取0.1mL甲醇复溶液，再加入0.1mL样本稀释液涡旋15s2.操作步骤实验前，请将检测试剂盒从2-8℃冰箱中取出，于室内温度20-28℃下平衡1小时！1）取出平衡后的适量板条，其余放回铝膜袋中；2）依次：加50μL标准品/样本于相应微孔中；加50μL酶结合物和50μL抗体至所有微孔；3）盖上板贴，于20-28℃下，孵育20分钟；倒出微孔中液体；4）将洗涤液注满微孔浸泡15s倒出，重复2次；5）加100μL底物至微孔中，于20-28℃下，孵育10分钟；6）加100μL终止液至微孔中，于450/630nm波长下，读数3.结果分析1）结合率计算公式%100A A 0i×=B 其中，B ：为i 样本或浓度点的结合率； A i ：为i 样本或浓度点的吸光度； A 0：为零标准孔的吸光度；2）建立标准曲线：以标准品浓度的对数为x 轴，以其对应的结合率B 的logit 值为y 轴，进行线性拟合 建立标准曲线。
高效液相色谱—荧光法测定食用油中苯并芘含量
高效液相色谱—荧光法测定食用油中苯并芘含量作者：何旭东李红梅来源：《安徽农学通报》2018年第09期摘要：该文建立了高效液相色谱-荧光法测定食用油中苯并芘含量实验方法。
色谱柱采用安捷伦C18柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈和水为流动相，用荧光检测器测定食用油中苯并芘的含量。
苯并芘的线性范围分别为1～10ng/mL，最低检出限为0.2ng/mL，平均加标回收率为94.0%，相对标准偏差2.9%。
该方法适用于食用油中苯并芘含量定量分析。
关键词：苯并芘；高效液相色谱；荧光检测器中图分类号 TS201.6 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2018）09-0135-02Quantitative Determination of Benzopyrene in Edible oil by High Performance Liquid Chromatography—Fluorescence DetectorHe Xudong1 et al.（1Yangzhou Product Quality Supervision and Inspection Institute，Yangzhou 225000，China）Abstract：To study a method for quantitative determination of Benzopyrene in edible oil by High Performance Liquid Chromatography—Fluorescence Detector.The analytical chromatographic column was Agilent C18（250 mm×4.6mm，5μm），the mobile phase was acetonitrile-water （88∶12，V/V）.The samples were determined by an Fluorescence detector.The calibration curves had good linearity in the range of 1～10ng/mL for Benzopyrene，the detection limit for Benzopyrene was 0.2ng/mL，the average recoveries of Benzopyrene were 94.0%（n=6，RSD =2.9%）.The method is reproducible for qualitative analysis of Benzopyrene in edible oil.Key words：Benzopyrene；HPLC；Fluorescence detector苯并芘又稱苯并（α）芘[1-8]，英文缩写BaP，是一种常见的高活性间接致癌物和突变原，主要存在于煤焦油、各类碳黑和煤、石油等燃烧产生的烟气、香烟烟雾、汽车尾气中，以及焦化、炼油、沥青、塑料等工业污水中。
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油条食品中苯并芘的测定
摘要:建立高效液相色谱法测定油条食品中苯并[α]芘的测定方法。
本法色谱条件易于掌握,测得数据重复性好,线性关系好,精密度和准确度均能满足分析要求。
同时本实验对县城城区某油炸食品供应点的油条食品中苯并[α]芘含量进行了测定。
关键词:苯并[α]芘油条测定
油条是我国主要的早餐食品之一。
油条中含有的苯并[α]芘是一种公认的强致癌物质,可诱发皮肤、肺和消化道癌症。
其随食物被摄入人体内后,很快被肠道吸收入血液并分布于全身,危害很大。
由于苯并[α]芘在人体中具有累积作用,长期食入直接危害到人们的健康,特别有些商贩,为了追求利益,使用多次高温加热的食用油,这对人的健康危害更为严重。
而不良的饮食习惯,到目前为止还没有引起人们的高度重视。
苯并[α]芘的测定方法很多,如:有气相色谱法,液相色谱法和薄层法等。
本实验建立了液相色谱荧光法测定油炸食品中B[α]P含量的分析方法,并对宝丰县城区油条食品中的苯并[α]的含量进行了测定,评价油炸食品安全性,对提高人们的食品安全意识和保障健康具有重要意义。
1 材料与方法
1.1材料
油炸食品采于宝丰县城区几个油炸食品供应点。
样品采集后置于冰箱冷冻保存。
1.2试剂
KOH(分析纯);95%乙醇(分析纯);超纯水;苯(分析纯,重蒸馏);无水硫酸钠(优级纯);苯并[α]芘对照品;高效液相色谱流动相组成为色谱纯乙腈及超纯净水。
1.3仪器与设备
高效液相色谱仪、色谱工作站;荧光检测器,20μl进样阀;药材粉碎机;旋转蒸发仪;Simplicity 185 personal超纯水器;色谱柱:Diamonsil C18(4.6mm×250mm,5μm);T660/H超声波清洗器(功率360W,频率35kHz)。
1.4方法
1.4.1对照品溶液的配制
准确称取苯并[α]芘对照品(HPLC级)10mg,置于100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,该贮备液浓度为100μg/ml,准确吸取储备液制成浓度分别为1.0、0.5、0.1、0.05、0.005μg/ml的标准工作液。
1.4.2色谱条件
流动相:A相为乙腈,B相为水,梯度洗脱。
B相随时间变化:30%(0～15min),30%～5%(15～17min),0%(17～21min),21min;流速1.3ml/min;柱温40℃,进样20μl;荧光检测器激发波长为385nm;检测波长为405nm;以色谱峰面积外标法定量。
在此条件下,测得苯并芘保留时间在11.27min左右,样品溶液中主峰和其它杂峰达到完全分离。
对照品、样品的色谱图见图3。
1.4.3样品测定
将油条食品低温干燥,置粉碎机中粉碎(过40目筛),精密称定样品约5 g,置于具塞锥形瓶中,精密加入苯20ml,过夜,超声处理15min,重复三次,合并苯溶液滤过蒸干,残渣加5g KOH并依次加水40ml乙醇12ml,回流1h使其充分皂化,将皂化液转移至分液漏斗中,用苯25ml萃取两次,合并苯溶液,再用超纯净水洗涤,取上层苯液,过滤、干燥和蒸干加甲苯定容到1ml,摇匀,0.20μm滤膜过滤,取续滤液上机备用。
2 结果与分析
2.1线性关系考察
在 1.4.2色谱条件下,将不同浓度的标准工作液依次从低浓度到高浓度进样,以对照品溶液浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线,并计算标准曲线的回归方程及相关系数。
实验测得苯并[α]芘标准溶液浓度在0.005～1.0μg/ml 范围内,其线性回归方程为
Y=2×107X+31012,相关系数R=0.9990,结果表明线性良好。
2.2检测限考察及方法精密度实验
以产生信号(峰高)为基线噪音标准差3倍的样品浓度作为该方法的检出限[9],即0.07μg/kg。
以同一加标的油条食品样品重复测定5次,测得其峰面积的RSD为2.67%,表明本法的精密度良好。
2.3回收率实验
为考察方法的准确度,以现场样品中加入低中、高三种含量的标准液,然后测定样品溶液和标准溶液计算加标回收率,设计0.005、0.015、0.050mg三个添加浓度,按项1.4.3和2.1操作,每个浓度作为5平行,测定结果见表1。
表1 回收率测定结果
添加量
(μg)平均本底量(μg)实测浓度(μg)回收率
(% ) RSD
(% )
0.0766 103.51
0.0755 102.03
0.05 0.024 0.0743 100.41 2.78
0.0749 101.22
0.0711 96.08
0.0412 105.64
0.0406 104.10
0.015 0.024 0.0405 103.85 1.11
0.0411 105.38
0.0401 102.82
0.0371 127.93
0.0352 121.38
0.005 0.024 0.0321 110.69 10.19
0.0293 101.03
0.0375 129.31
2.4样品测定结果
取试样溶液20μl,注入高效液相色谱仪,记录色谱图,获取峰面积,用外标法进行计算。
获得油条食品中的苯并[α]芘含量结果。
3 讨论与结论
3.1提取溶剂的选择
利用苯并[α]芘在苯中易溶的特性,且国内外广泛采用苯来提取多环芳烃类物质,所以实验采用了苯为提取剂,其回收率、线性关系考察都有较理想的效果,实验结果表明效果很好。
3.2提取方式的确定
本方法采用超声萃取并对提取的次数,时间以及溶剂的使用量等参数进行了优化,最终确定了本实验部分条件。
且超声振荡提取后再进行皂化,从而根本上解决了直接皂化提取的弊端。
3.3流动相的选择
流动相的比例及流速,色谱柱的柱温对分离效果有直接影响,流动相中乙腈体积的大小直接影响到苯并[α]芘的出峰时间,乙腈比例增大,对物质的洗脱能力增强,苯并[α]芘的保留时间缩短,但与样品中其他杂质分离不好,乙腈比例减小,样品溶液中各个色谱峰分离度改善,但苯并[α]芘的保留时间延后,增加分析操作时间,经反复试验,确定了A相乙腈B相为水,梯度洗脱,即可使保留时间缩短,又可以良好的分离。
3.4安全分析
从分析结果来看,宝丰县城该抽查点的油条食品中苯并[α]芘的含量为5.086μg/kg,超过我国食品的控制标准(5.0μg/kg),说明该抽查点的油条食品安全状况对人的健康存在一定的影响。
总之,利用超声振荡提取后皂化的方法,可以提高样品的回收率,提高方法的准确性。
色谱条件易于掌握,测得数据重复性好,线性关系好,精密度和准确度均能满足分析要求。
参考文献:
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