HPLC法测定黄芪叶中黄芪甲苷的含量
HPLC测定贵州产黄芪中黄芪甲苷的含量
在 ４４ ０ ４０ ０ｔ／ Ｌ之间的线 性关系 良好 ．３内 和 １ 间精密 度 的 Ｒ Ｄ均 小 于 １５ 重复 性试 验 的 ．０ ４ ． ｃ ｍ ， １ ３ Ｓ ． ％， Ｓ Ｒ Ｄ为 ０ ７ ．％（ｎ：５）最低检测 限为 ０４０ｔ／ Ｌ 加样 回收率 为 ９ ．％ 、 ． ％、９ ８ Ｒ Ｄ ， ．４ ￣ ｍ ， ８ ９ ９ ７ ９ ． ％， Ｓ （ｎ：５） ６ 分 别为 ２８ ３ ５ ２ ５ ． ．％、 ．％、 ．％ 黄芪样品 中黄芪 甲苷 的含量 均符 合《 中华人 民共 和国药典》２ ｏ 版 ） （０ ５ 标准 ． 该方 法缩减 了黄芪药材 的前处 理步骤 ， 节约 了实验 时间 ， 适用于黄芪药材 中黄芪 甲苷含量测定 ； 同时也证 明黄
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ＨＬ Ｐ Ｃ测 定 贵 州产 黄芪 中黄 芪 甲苷 的 含 量
彭全材 ， 胡继伟 杨 占南２ 黄 先飞 ， 连 国奇 一 ， ，
收 稿 日期 ：０ ７０．６ ２ Ｏ．３１
作者简介 ： 彭全材（９ ３）男 。 １８ 一 ， 江西人 ， 理学硕士研究生 ， 主要从事药用植物 的研究
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第３ 期
彭全材 ， ： Ｐ Ｃ测 定贵州产黄芪 中黄芪 甲苷的含量 等 ＩＬ － Ｌ
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图 １ 分 子 结构
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黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展
黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展摘要：黄芪是一种常见的中草药材，具有滋补养生、增强免疫力、抗疲劳等多种功效。
黄芪甲苷作为黄芪中的一种主要有效成分，对其含量的测定一直是研究的热点。
本文将对黄芪中黄芪甲苷含量测定的研究进展进行综述，以期为黄芪的质量控制和药用价值的评价提供参考。
一、引言黄芪，又名黄芪、土黄芪，为豆科植物黄芪的根。
黄芪在我国的使用历史非常悠久，被誉为“草中之皇”，在中医药中具有益气健脾、祛痰利水、固表止血等功效。
现代研究表明，黄芪还具有增强免疫力、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤等多种生物活性，因此在食品、保健品、药品等领域有广泛的应用价值。
1. HPLC法HPLC（High Performance Liquid Chromatography）是目前测定黄芪甲苷含量常用的方法之一，其操作简便、分离效果好、重现性高。
常用的色谱柱有C18、C8、C4等，流动相常用乙腈-水、甲醇-水等。
检测波长一般为203nm。
HPLC法在分离和测定黄芪甲苷方面取得了一定的成果，但也存在一定的局限性，例如在样品的制备和前处理过程中易引起黄芪甲苷的流失，影响测定结果的准确性。
2. LC-MS法LC-MS（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry）是一种高灵敏度、高分辨率的分析方法，可对复杂样品进行快速、准确的分析。
LC-MS法结合了液相色谱和质谱分析的特点，可以直接测定样品中的黄芪甲苷含量，并能对其结构进行进一步的鉴定。
由于其分析灵敏度高、选择性好，因此在黄芪甲苷含量测定中得到了广泛的应用。
LC-MS法的仪器设备和操作技术要求较高，且成本较高，限制了其在一般实验室的应用。
3. UV法UV（Ultraviolet）法是通过样品对紫外光的吸收程度来测定样品中目标成分的含量。
黄芪甲苷在紫外光下有特定的吸收峰，可以通过检测其吸光度来测定其含量。
UV法操作简便、成本低，但其检测灵敏度不高，对样品的前处理要求较高，且容易受杂质的干扰。
HPLC_ELSD测定黄芪药材及其炮制品中黄芪甲苷的含量
HPL C-EL SD测定黄芪药材及其炮制品中黄芪甲苷的含量毛文彬 相 莉 冯 伟【摘要】 目的 建立HPL C-EL SD方法测定黄芪药材及其炮制品中黄芪甲苷的含量,论证黄芪炮制方法对炮制品中黄芪甲苷含量的影响。
方法 采用Kromasil-C(18)柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-水(25∶75);体积流量:1.0ml/min;漂移管温度105℃、空气流量2.5L/min。
结果 黄芪甲苷在2.39～14.34μg范围内具有良好的线性关系,r=0.9993,样品平均回收率为105.8%, RSD为2.34%。
结论 本方法简便、准确、专属性强,可用于黄芪药材及其制剂的质量控制,炮制品中黄芪甲苷含量明显低于黄芪药材,以黄芪甲苷为主要治疗成分时,使用生品为宜。
【关键词】 HPL C-EL SD 黄芪 黄芪甲苷 黄芪为豆科植物蒙古黃芪[Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao]或夹膜黃芪[Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.]的干燥根。
炙黄芪为黄芪的炮制加工品。
我们在采用《中国药典》2005年版黄芪含量测定方法[1]测定时,发现回收率较低,不符合分析方法验证要求,出峰时间较晚,影响实验进度及成本。
故本文对《中国药典》2005年版黄芪含量测定方法进行了改进,提高了回收率,缩短了分析时间,并对其炮制品进行含量测定,评价其质量,为黄芪药材炮制品规范化加工提供重要参考。
1 仪器与试药1.1 药品与试剂 Waters Alliance H T型高效液相色谱仪, Alltech EL SD2000型蒸发光散射检测器;黄芪对照药材、黄芪甲苷对照品均购自中国药品生物制品检定所;硅胶G为青岛海洋化工厂生产;所用试剂均为分析纯。
1.2 药材 黄芪生品和蜜炙黄芪均购自陕西省药材公司,西安市万寿路药材市场。
HPLC测定贵州产黄芪中黄芪甲苷的含量
HPLC测定贵州产黄芪中黄芪甲苷的含量彭全材;胡继伟;杨占南;黄先飞;连国奇【期刊名称】《江西师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2007(031)003【摘要】对贵州黄芪药材黄芪甲苷的含量进行了测定,采用甲醇超声提取样品,HPLC梯度洗脱.黄芪甲苷的理论塔板数为5 588,分离度为1.42,拖尾因子为1.01.回归方程y=1.4048 X+16.682,R=0.999 0,在4.400～440.0 μg/mL之间的线性关系良好.日内和日间精密度的RSD均小于1.5%,重复性试验的RSD为0.7%(n=5),最低检测限为0.440 μg/mL,加样回收率为98.9%、96.7%、99.8%,RSD(n=5)分别为2.8%、3.5%、2.5%.黄芪样品中黄芪甲苷的含量均符合《中华人民共和国药典》(2005版)标准.该方法缩减了黄芪药材的前处理步骤,节约了实验时间,适用于黄芪药材中黄芪甲苷含量测定;同时也证明黄芪的质量较好.【总页数】4页(P278-281)【作者】彭全材;胡继伟;杨占南;黄先飞;连国奇【作者单位】贵州师范大学,贵州省山地环境重点实验室,贵州,贵阳,550001;贵州师范大学,生物技术与工程学院,贵州,贵阳,550001;贵州师范大学,贵州省山地环境重点实验室,贵州,贵阳,550001;贵州师范大学,分析测试中心,贵州,贵阳,550001;贵州师范大学,贵州省山地环境重点实验室,贵州,贵阳,550001;贵州师范大学,生物技术与工程学院,贵州,贵阳,550001;贵州师范大学,贵州省山地环境重点实验室,贵州,贵阳,550001【正文语种】中文【中图分类】O657【相关文献】1.UHPLC-MS-MS法同时测定舒筋活血颗粒中葛根素和黄芪甲苷的含量 [J], 陈昭;陈伟韬;胥爱丽;李养学;毕晓黎2.HPLC与比色法测定复方黄芪注射液中总皂苷与黄芪甲苷含量 [J], 李永吉;管庆霞;关延彬;李秋红3.HPLC-ELSD法同时测定益肺清化颗粒中的黄芪甲苷、桔梗皂苷D和麦冬皂苷D 的含量 [J], 王银;邱连建4.UHPLC-MS-MS法同时测定舒筋活血颗粒中葛根素和黄芪甲苷的含量 [J], 陈昭;陈伟韬;胥爱丽;李养学;毕晓黎;;;;;;;;;;5.HPLC法测定黄芪中的黄芪甲苷含量 [J], 田丰;邓英杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC法测定黄芪中黄芪甲苷的含量
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关键 词 ：ＨＰ Ｃ；黄 芪 甲苷 ；黄芪 Ｌ ｄ ｉ １． ６ ￣ｉ ｎ１７ ７ ９ ０９０ ． ０ ｏ ： ０３ ９ ．ｓ． ２２ ７． ０ ． ０ ９ ｓ ６ ２ ３３ 文 章编 号 ： １７．７ ９ （０９ ０ １７０ ６ ２２７ ２０ ）．３０ １—２
黄 芪 甲苷 的进 样量 在 ２２ １ ． 范 围 内 ．～ ３２
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黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展
黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪（Astragalus membranaceus）是一种重要的中草药材，被广泛应用于中医药领域。
黄芪甲苷（astragaloside IV）是黄芪的主要活性成分之一。
黄芪甲苷具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗心肌缺血、抗心肌纤维化等多种药理活性，因此成为黄芪药效的重要指标之一。
1. 简介黄芪甲苷的理化性质：黄芪甲苷是一种三萜甾醇类化合物，化学结构中含有多个糖苷键。
黄芪甲苷的糖基部分可以通过酶解反应裂解得到黄芪甲硷（astragaloside I）和黄芪甲醇（astragaloside II），因此研究黄芪甲苷的含量也间接反映了黄芪甲硷和黄芪甲醇的含量。
2. 提取和纯化方法黄芪甲苷的提取和纯化方法主要有溶剂提取、超声波辅助提取、微波辅助提取、正相和反相SPE（固相萃取法）等。
溶剂提取是最常用的方法，可以使用水、乙醇、乙醚等溶剂进行提取。
超声波和微波辅助提取可以提高黄芪甲苷的提取效率。
SPE法则是通过固相吸附剂对样品进行富集和洗脱，进而得到纯化的黄芪甲苷。
3. 分析方法黄芪甲苷的含量测定方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、毛细管电泳法、液质联用法（LC-MS/MS）、红外光谱法等。
HPLC法是最常用的方法，可以使用紫外检测器、荧光检测器等进行检测。
GC法则适用于含量较低的黄芪甲苷的测定。
液质联用法结合了LC和MS的优势，可以提高黄芪甲苷的分析敏感性和准确性。
4. 含量测定影响因素黄芪甲苷的含量测定受到多种因素的影响，包括黄芪的生长环境、不同采收时间、存储条件等。
黄芪生长环境中土壤的pH值、养分含量和水分等对黄芪甲苷的生物合成和积累有一定影响。
采收时间对黄芪甲苷的含量也有重要影响，一般来说，黄芪的地上部分含量高于根部。
黄芪的存储条件也会导致黄芪甲苷的降低，因此在储存过程中需要注意保鲜处理。
5. 品种和产地差异黄芪的品种和产地对黄芪甲苷的含量也有一定影响。
黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展
黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪，又称黄芪补中益气汤，为豆科植物黄芪的干燥根。
黄芪性味甘苦微温，归脾肺经，具有益气固表、益血统阴、利水除湿、化瘀散结的功效。
黄芪中含有一种特殊的活性成分——黄芪甲苷，具有抗氧化、免疫调节、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
黄芪甲苷的含量测定对于黄芪的质量评价和药理研究具有非常重要的意义。
目前，黄芪甲苷含量的测定方法有很多种，主要包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外分光光度法（UV）、液相色谱串联质谱法（LC-MS）、超高效液相色谱法（UPLC）等。
下面，将对这些方法的研究进展进行介绍。
一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是测定黄芪甲苷含量的常用方法之一。
该方法主要利用色谱柱对样品进行分离，然后利用紫外检测器进行检测。
HPLC法在测定黄芪甲苷含量上具有灵敏度高、分离效果好、重现性好的优点。
目前已经有多种不同的HPLC法用于测定黄芪甲苷含量，比如采用保留时间法、峰面积法、标准曲线法等。
这些方法对样品的前处理要求不同，但都有较好的准确性和重现性。
二、紫外分光光度法（UV）紫外分光光度法是一种简便、快速的测定方法，主要利用样品中黄芪甲苷特有的吸收峰进行定量分析。
该方法操作简单，仪器设备不复杂，因此在一些实验室中得到了广泛应用。
紫外分光光度法对样品的前处理要求较高，同时在测定复杂样品时准确性和灵敏度可能会受到一定的限制。
液相色谱串联质谱法是一种更加高级的分析技术，它结合了液相色谱和质谱的优点，能够对样品进行更加准确和灵敏的分析。
该方法在测定黄芪甲苷含量时能够获得更加详细的信息，对样品中其他杂质的干扰较小。
LC-MS法在黄芪甲苷含量的测定和结构鉴定方面具有较大优势，但是仪器的成本和维护成本也相对较高。
超高效液相色谱法是近年来发展起来的一种新型色谱技术，其分离效果和分析速度均更加出色。
UPLC法在测定黄芪甲苷含量时能够获得更高的分辨率和灵敏度，同时也节约了试剂和溶剂的用量。
反相高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量
反相高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量
蔡进章;王增寿;章晓东
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2003(012)012
【摘要】目的:用反相高效液相色谱法(RP-HPLC法)测定黄芪中黄芪甲苷的含量.方法:采用RP-HPLC法,流动相为乙腈-水-磷酸(1:2:0.1),检测波长为203 nm.结果:黄芪甲苷浓度在1.28～12.8ug 范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率为
96.8%,RSD为1. 17%(n=6).结论:RP-HPLC法操作简便,测定结果可靠,适用于黄芪中黄芪甲苷的含量测定.
【总页数】2页(P36-37)
【作者】蔡进章;王增寿;章晓东
【作者单位】温州医学院附属第二医院,浙江,温州,325027;温州医学院附属第二医院,浙江,温州,325027;浙江省兰溪市药品检验所,浙江,兰溪,321100
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.反相高效液相色谱法测定消渴平片中黄芪甲苷的含量Δ [J], 周颖仪;刘潇潇
2.反相高效液相色谱法测定贞芪扶正颗粒中黄芪甲苷的含量 [J], 龙进;涂文升;黄其春;黎远冬
3.反相高效液相色谱法测定复方黄芪口服液中黄芪甲苷的含量 [J], 吴清华;
4.反相高效液相色谱法测定复方黄芪口服液黄芪甲苷的含量 [J], 吴清华
5.反相高效液相色谱法测定益气生血胶囊中黄芪甲苷含量的方法学研究 [J], 孙宾娟
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HPLC法测定黄芪叶中黄芪甲苷的含量
【摘要】目的建立一种准确、简便测定黄芪甲苷含量的分析方法。
方法色谱柱为Nucleosil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-水＝1∶2；流速为0.8ml/min；检测波长为205 nm；速度为0.4mm/min。
灵敏度为0.1 AUFS,测定了黄芪甲苷的含量，平均回收率为96.1%，RSD为2.15%。
结果样品浓度在0.01～0.2mg/ml之间与峰面积成良好的线性关系。
结论本方法的重复性好、精密度高、稳定性强。
【关键词】 HPLC 黄芪叶黄芪叶中黄芪甲苷
【Abstract】 0bjective: Establishes one kind accurately, easily to determine Astragaloside the content the analysis method. Method: The chromatographic column is Nucleosil the C18 column (4.6mm×250mm,5μm); Flowing for methyl cyanide - water =1∶2; The speed of flow is 0.8ml/min; The examination wave length is 205 nm; The speed is 0.4mm/min. The sensitivity is 0.1 AUFS, has determined the Astragaloside content. The average returns-ratio is 96.1%, RSD is 2.15%. Result:Sample density in 0.01～0.2mg/ml becomes the good linear relationship with the peak area.Conclusion: This method's duplication is good, accuracy high, stable.
【Key words】 HPLC Leaf of the Astragalus Astragaloside 黄芪为常用中药，素有“补药之长”之称，具有益气固表，利尿
托毒等功效.黄芪药用价值很高，临床上常用来治疗非特异性免疫功能低下、乙肝和心血管系统疾病.黄芪甲苷作为黄芪成分之一，它具有降压、抗炎、稳定红细胞膜、提高血浆CAMP含量，促进小鼠再生肝DNA 合成和增强免疫功能等多种作用.因此在研究黄芪过程中，我们对其成分黄芪甲苷进行了含量测定方法研究，本文用HPLC法测定黄芪甲苷的含量，其样品浓度的范围在0.01～0.2mg/ml之间与峰面积呈线性，该法灵敏度高，重现性好，可准确地测定黄芪甲苷的含量。
1 仪器与试剂
Waters高效液相色谱仪：包括510型泵，991光电二极管阵列型检测器，U6K型进样器；NEC Power Mate型计算机，黄芪甲苷标准品购自辽宁省药品检验所。
甲醇、正丁醇为分析纯，乙腈为色谱纯、水为去离子水。
试验用黄芪叶6月份采自沈阳医学院草药园。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Nucleosil C18柱(4.6mm×250mm，5μm);流动相为乙腈-水＝1∶2；流速为0.8ml/min；检测波长为205nm；速度为0.4mm/min。
2.2 标准曲线制作精密称取黄芪甲苷标准品2.128mg，加流动相定容至2ml，配制成1.064 mg/ml的标准品溶液，分别以10、20、30、40、50μl进样测定，以峰面积对进样量作线性回归，得回归方程为Y＝－5.6×10-5＋6.9365×10-4X(Y为峰面积，X为黄芪甲苷量)，r＝0.9994，黄芪甲苷标准品在10.64～5
3.20μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.3 提取方法的选择用3种不同提取方法(索氏提取器提取1h；80℃温浸提取1h和超声波提取1h)提取样品，后2种提取方法测得黄氏甲苷含量略低，故选索氏提取器提取方法。
2.4 流动相的选择实验试用多种溶剂系统，最后确定以乙腈-水＝1∶2为流动相，黄芪甲苷分离效果最好，保留时间也较适宜。
色谱图见上图2(A B C)。
2.5 样品液制备将黄芪叶阴干后研成粉过40目筛，然后精密称取5.00g，放置索氏提取器中，用100ml 80%甲醇加热提取2h，提取液减压蒸去甲醇，用20ml正丁醇分别萃取3次，合并正丁醇萃取部分，减压蒸干，残渣用重蒸甲醇定容至2ml，用0.45μ微孔滤膜过滤，滤液用于HPLC分析，每次进样10μl。
2.6 加样回收率试验称取黄芪叶粉5.00g5份，分别精密加入黄芪甲苷标准品2.00mg，按样品制备方法提取样品并进行定量分析，将测定结果扣除样品中黄芪甲苷含量，与加入标准品的比为加样回收率。
结果为96.1%(n＝5), RSD%=2.15 (n=5)。
2.7 精密度试验取同一样品液，重复进样5次，根据测得的样品中黄芪甲苷的浓度(μg/ml)计算其相对标准偏差为2.40%。
又取同一样品5份，制备5份样品液，分别进样测出黄芪甲苷的浓度，计算其相对标准偏差为4.20%。
2.8稳定性试验取同一供试品溶液，每隔2h进样1次，分别测定其色谱峰面积。
RSD%=2.2(n=5)，结果表明，谱峰面积在8h内基本无变化，表明本实验条件下稳定性良好。
2.9 黄芪叶中黄芪甲苷的定量分析：依法测定黄芪叶中黄芪甲苷的含量
3 讨论
黄芪甲苷是黄芪的主要有效成分之一，根上部分几乎全部落入地面，成为肥料，为了有效的利用自然资源，我们为定量分析黄芪叶黄芪甲苷的含量，本实验建立了黄芪甲苷的HPLC测定法，测得黄芪叶中黄芪甲苷的含量为4.20%(干重)，与黄芪标准含量(1.50%)相差2.70%。
实验证明：黄芪叶中黄芪甲苷的含量非常高，人类应该广泛利用。
本实验建立的HPLC测定法加样回收率高，精密度试验相对标准偏差小，测试数据更可靠。
参考文献
[1] 张宇,沈德凤,杨波.黄芪叶中黄芪甲苷的含量测定[J]中国野生资源， 2002，（05） 020.
[2] 王辰,侯连兵, 刘婵.HPLC-ELSD法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量(2006)06-0618.
[3] 肖佳尚,朱涛.HPLC-ELSD法测定芪红胶囊中黄芪甲苷的含量[J]广东药学院学报, 2007, (02). 0138.。