黄芪制剂中黄芪甲苷测定方法概述
高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量分析
高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量分析摘要】目的：建立高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量测定体系。
方法：应用高效液相色谱法测定蒙古黄芪和甘肃红芪的黄芪甲苷含量，色谱柱：Agilent Eclipse XBD-C18柱(150×4.6 mm，5μm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(44∶56)；柱温：26℃；流速：0.5 mL/min；检测波长：335 nm。
结果：黄芪甲苷测定的回归方程为Y=13.614X-1.4897，r=0.9999，线性范围为10.2-102μg/mL-1。
测定蒙古黄芪和甘肃红芪中的黄芪甲苷回收率分别为95.9%与94.5%，在3 d内基本能保持稳定，含量分别为0.289mg/g和0.284mg/g。
结论：高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量方法简便、灵敏度高、重现性好，可作为首选方法之一。
【关键词】高效液相色谱法黄芪黄芪甲苷【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）34-0192-02黄芪是中医临床最常用的大宗药材之一，具有营养和抗氧化等药理活性和药用价值，主要生长在西北干旱地区。
当前由于市场需求量不断增加，其野生资源受到极大威胁[1]。
其含有多糖、甲苷等主要生物活性成分，有抗心肌缺血、缺氧、病毒性心肌炎的作用[2]。
当前黄芪甲苷的测定方法有薄层色谱法与毛细管电泳法等[3]。
本文建立了高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量体系，希望为从天然植物中寻找低毒或无毒的抗氧化活性成分提供参考。
现报告如下。
1 实验仪器与方法1.1 实验仪器日本岛津公司LC-20AT高效液相色谱仪与色谱工作站，十万分之一电子天平XS205DU型，SQ21198B多功能食品加工机，UV-2450型紫外-可见分光光度计，DELTA320型pH计。
黄芪甲苷对照品购自中国药品生物制品鉴定所，石油醚、氯仿、正丁醇为色谱纯，甲醇、甲酸、无水乙醇、冰醋酸为分析纯，水为超纯水。
黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展
黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展摘要：黄芪是一种常见的中草药材，具有滋补养生、增强免疫力、抗疲劳等多种功效。
黄芪甲苷作为黄芪中的一种主要有效成分，对其含量的测定一直是研究的热点。
本文将对黄芪中黄芪甲苷含量测定的研究进展进行综述，以期为黄芪的质量控制和药用价值的评价提供参考。
一、引言黄芪，又名黄芪、土黄芪，为豆科植物黄芪的根。
黄芪在我国的使用历史非常悠久，被誉为“草中之皇”，在中医药中具有益气健脾、祛痰利水、固表止血等功效。
现代研究表明，黄芪还具有增强免疫力、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤等多种生物活性，因此在食品、保健品、药品等领域有广泛的应用价值。
1. HPLC法HPLC（High Performance Liquid Chromatography）是目前测定黄芪甲苷含量常用的方法之一，其操作简便、分离效果好、重现性高。
常用的色谱柱有C18、C8、C4等，流动相常用乙腈-水、甲醇-水等。
检测波长一般为203nm。
HPLC法在分离和测定黄芪甲苷方面取得了一定的成果，但也存在一定的局限性，例如在样品的制备和前处理过程中易引起黄芪甲苷的流失，影响测定结果的准确性。
2. LC-MS法LC-MS（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry）是一种高灵敏度、高分辨率的分析方法，可对复杂样品进行快速、准确的分析。
LC-MS法结合了液相色谱和质谱分析的特点，可以直接测定样品中的黄芪甲苷含量，并能对其结构进行进一步的鉴定。
由于其分析灵敏度高、选择性好，因此在黄芪甲苷含量测定中得到了广泛的应用。
LC-MS法的仪器设备和操作技术要求较高，且成本较高，限制了其在一般实验室的应用。
3. UV法UV（Ultraviolet）法是通过样品对紫外光的吸收程度来测定样品中目标成分的含量。
黄芪甲苷在紫外光下有特定的吸收峰，可以通过检测其吸光度来测定其含量。
UV法操作简便、成本低，但其检测灵敏度不高，对样品的前处理要求较高，且容易受杂质的干扰。
黄芪甲苷的含量测定研究进展
黄芪甲苷的含量测定研究进展摘要黄芪甲苷是中药黄芪的主要有效成分，含量测定方法较多，其测定方法主要有高效液相色谱法、薄层扫描法、荧光法等。
关键词黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪为常用中药,性温,味甘,具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功能,用于气虚乏力、食少便溏、中气下陷、久泄脱肛、便血崩漏、表虚自汗、气虚水肿、久溃不敛、慢性肾炎、蛋白尿、糖尿病等症[1]。
现代药理研究表明,黄芪具有器官保护、免疫调节、强心、降糖、抗衰老、抗炎抗病毒等作用[2]。
近年来，对黄芪甲苷的含量测定方法的研究很多，本文就几种常用方法进行介绍。
1.高效液相色谱法(HPLC法)HPLC法因其分离度好、灵敏性高，适用范围广等优点，已广泛用于黄芪甲苷所产生的的含量测定、稳定性、药理和临床研究中。
1.1HPLC-UV法：黄芪甲苷属于四环三萜类皂苷，紫外末端吸收λmax=200.08nm,紫外检测灵敏度低，干扰因素多[3]，目前HPLC法是最常用的检测器是紫外检测器,闵庆璐等[4]采用HPLC-UV法测定丹黄祛瘀片中黄芪甲苷的含量，色谱柱为Kromasil C18 柱（250mm×4.6mm）,流动相乙腈-水(32:68)，流速1.0ml/min,检测波长203nm。
结果线性范围0.066~0.330mg/ml(r=0.9993)回收率为95.0%~105.0%,平均回收率100.1%（RSD=2.0%，n=9）。
1.2HPLC-示差折光检测法：由于黄芪甲苷在紫外区仅有微弱的末端吸收，溶剂噪音对结果有较大的影响，且其前处理繁杂。
池玉梅等[5]应用HPLC-示差折光检测法测定黄芪精口服液中黄芪甲苷的含量，色谱柱为Hypersil ODS 2（4.6mm×200mm,5μm）,流动相为甲醇-水（67:33），结果线性范围1~5μg/ml,回收率为98.1%，RSD为2.02%。
该方法简单方便，重现性好，灵敏度高，结果准确可靠。
三种方法测定黄芪粉针剂中黄芪甲苷的含量
三种方法测定黄芪粉针剂中黄芪甲苷的含量
庄书蓓;杨帅才;李敏
【期刊名称】《黑龙江医药》
【年(卷),期】2004(017)003
【摘要】目的:测定黄芪甲苷的含量.方法:本实验采用了三种方法--比色法、薄层扫描法和高效液相法.结果:比色法用香草醛-硫酸试剂为显色剂,该显色剂本身具有空白吸收,对分析样品有干扰,且A值随加热温度、时间及旋转时间均有变化;薄层扫描法操作较繁,且显色后不宜长时间放置.结论:HPLC法操作简单,干扰小,重现性好.【总页数】3页(P168-170)
【作者】庄书蓓;杨帅才;李敏
【作者单位】哈尔滨医药药材公司,150006;哈尔滨医药药材公司,150006;哈尔滨医药药材公司,150006
【正文语种】中文
【中图分类】R2
【相关文献】
1.近红外光谱法测定不同产地黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和黄芪甲苷含量 [J], 战皓;方婧;付梅红;吴宏伟;张东;柳梦婷;唐力英;李化;王祝举;杨滨;杨岚
2.黄芪养生饮中总黄酮与黄芪甲苷含量测定 [J], 刘利萍;高健;李宝园;解谦
3.高效液相色谱法测定黄芪注射液中的黄芪甲苷含量 [J], 金昕;姚令
4.高效液相色谱法测定黄芪注射液中的黄芪甲苷含量 [J], 金昕; 姚令
5.薄层色谱-分光光度法测定黄芪粉针剂中黄芪甲苷的含量 [J], 杨春欣;孙丽霞;许根英
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黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展
黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪是我国传统中药材之一，被广泛应用于治疗贫血、疲乏乏力、食欲不振等症状。
其中，黄芪甲苷是黄芪的主要有效成分之一，具有抗菌、抗氧化、免疫调节等多种药理作用。
因此，明确黄芪中黄芪甲苷的含量对于黄芪的质量控制和临床应用具有重要意义。
本文将综述黄芪中黄芪甲苷含量测定的研究进展。
一、黄芪甲苷的生物学活性黄芪甲苷是黄芪中的一种单体化合物，其化学结构为3,6-二葡萄糖基芪苷-7-葡萄糖基芪苷，分子量为782。
研究表明，黄芪甲苷具有多种生物学活性，如抗菌、抗氧化、免疫调节、保护神经细胞等作用。
其中，黄芪甲苷的抗菌作用主要表现在对多种细菌、真菌和病毒的抑制作用。
抗氧化作用表现在黄芪甲苷能够清除自由基，降低氧化损伤。
免疫调节作用表现在黄芪甲苷能够激活巨噬细胞和自然杀伤细胞，增强免疫功能。
保护神经细胞的作用表现在黄芪甲苷能够减轻中枢神经系统的氧化损伤和炎症反应，防止神经细胞的死亡。
二、黄芪甲苷的含量测定方法黄芪甲苷的含量测定是对黄芪质量的评价和控制的重要手段，常用的测定方法包括高效液相色谱法、超高效液相色谱法、荧光法、紫外分光光度法、质谱法等。
1. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是目前最为常用的黄芪甲苷含量测定方法之一，该方法具有快速、灵敏、准确的优点。
其中，一般采用C18反相柱为分析柱，流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液（25:75，体积比），检测波长为254nm。
该方法能够实现对黄芪甲苷的同时定量，其检测限低至0.82ug/mL。
3. 荧光法荧光法是一种基于黄芪甲苷的分子结构与物理性质的检测方法，该方法具有高灵敏度、高选择性、快速等特点。
该方法采用黄芪甲苷在荧光素（FL）存在下，通过化学反应生成荧光产物，再利用荧光光谱仪检测荧光强度进行测定。
该方法的灵敏度高，能够检测到0.128ug/mL的黄芪甲苷。
4. 紫外分光光度法紫外分光光度法是一种简单、快速、准确的检测方法，该方法基于黄芪甲苷在紫外光下吸收特定波长的原理进行测定。
黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展
黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪（Radix Astragali）是中国传统草药中的一种，也被称为“北茵蒿”、“黄金钱草”、“黄金银草”等。
黄芪具有滋补强壮、提高免疫力、抗疲劳等多种药理活性，因此在中医药学中被广泛应用。
黄芪甲苷（Astragaloside IV，简称AS-IV）是黄芪中的一种主要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生理活性。
测定黄芪中黄芪甲苷的含量对黄芪的质量评价和合理应用具有重要意义。
随着现代化仪器设备和分析技术的发展，对黄芪中黄芪甲苷含量测定方法的研究也日益深入。
下面将介绍几种常用的黄芪甲苷含量测定方法及其研究进展：1. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是一种常用的分离和检测技术，广泛应用于药物分析领域。
对于黄芪中黄芪甲苷的测定，可以使用反相HPLC或离子对交换柱进行分离。
可以通过选择适当的检测波长和优化方法条件，如流动相组成、流速等，确保测定结果的准确性和灵敏度。
近年来，还有研究对HPLC方法进行改进，如引入内标物法和紫外二维检测法，提高测定精确度和分析效率。
2. 气相色谱法（GC）：GC是一种将挥发性物质分离和检测的技术，在黄芪中黄芪甲苷含量测定中也得到了应用。
由于黄芪甲苷在常规条件下不易挥发，因此需要将其进行酸水解或酶解，将产生的挥发性产物用GC进行分离和检测。
这种方法要求样品预处理和操作条件较为复杂，但可实现对黄芪甲苷的准确测定和定量分析。
3. 毛细管电泳法（CE）：CE是一种基于电泳原理的微柱层析技术，具有分离速度快、灵敏度高、耗样量少等特点，因此在黄芪甲苷的含量测定中也得到了广泛应用。
研究表明，利用CE进行黄芪甲苷的分离和检测可获得满意的结果，并且还可以在测定中引入很多改进的因素，如在线固相萃取、二维电泳和运用特殊电泳介质等。
目前已有多种方法可用于测定黄芪中黄芪甲苷的含量。
各种方法都有其适应的优势和应用条件，具体选择哪种方法需根据实际需要和研究目的进行判断。
含黄芪中药复方制剂中黄芪甲苷含量测定的研究进展
含黄芪中药复方制剂中黄芪甲苷含量测定的研究进展*王嵩**黄思捷郤庆***（上海中医药大学附属上海市中西医结合医院上海 200082）摘要查阅国内外相关文献进行分析发现，目前含黄芪的中药复方制剂中黄芪甲苷的含量测定方法较多，其中以高效液相色谱法为主，为中药复方复杂成分中定量定性分析提供了有效地帮助。
本文对含黄芪的中药复方制剂中黄芪甲苷含量的各种测定方法进行综述。
关键词黄芪中药复方制剂黄芪甲苷含量测定中图分类号：R286; R927.2 文献标志码：A 文章编号：1006-1533(2021)05-0064-05Advances in the determination of astragaloside Ⅳin compound prescriptions containing astragalus*WANG Song**, HUNAG Sijie, XI Qing***(Shanghai TCM-Integrated Hospital, Shanghai University of TCM, Shanghai 200082, China) ABSTRACT There are various methods for the determination of astragaloside Ⅳ in TCM compound preparations containing astragalus in domestic and foreign literatures. These methods are mainly involved in high performance liquid chromatography, which can provide effective results for qualitative and quantitative determination of the TCM compound prescriptions. In this article, the various methods for the determination of astragaloside Ⅳ in TCM compound preparations containing astragalus are reviewed.KEY WORDS astragalus; traditional Chinese medicine compound prescriptions; astragaloside Ⅳ; content determination黄芪是常用的补益类中药，临床主要用于气虚自汗、久咳虚喘、肺气虚证、脾气虚弱之中气下陷及浮肿、疮疡溃难敛等症的治疗。
黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的两种方法的比较研究
一、 引言
在中药材中，黄芪较为常用，其广泛分布于我国，且作为
君药制成的中成药较多，因各地采收加工技术、栽培管理、生
态环境存在一定差异，所以其药材质量参差不齐，这就对用
药疗效造成了直接影响。 在黄芪药材中，黄芪甲苷为有效成
分，其可对药材质量进行评价，而在测定该成分含量时，可采
ｍＬ） 。
（ 五） 考察线性关系
在高效液相色谱仪中注入 ２０μＬ 黄芪甲苷对照品溶液系
列，对色谱图进行记录，以对照品溶液浓度与对应峰面积的
自然对数作图， 然后获得回归线性方程， ｒ ＝ ０． ９９７３，１．４０２１
ＬｎＣ＋７．８６８５ ＝ ＬｎＡ。 结果表明良好线性关系时进样浓度为
２０．５６－４１１．２ μｇ ／ ｍＬ 时间。
取的方法包括高效液相色谱法和薄层扫描法。 采用《 香港中
药材标准》 （ 港标） 和《 中国药典》 两种方法测定黄芪药材中
黄芪甲苷时，其采用的仪器为高效液相－蒸发光散射检测器
（ ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ） ，两种分析方法具有较多相似之处。 因此文
章即分析了黄芪药材中两种方法测定黄芪甲苷含量的效果。
二、 试药与仪器
ＵＰＬＣ－ＥＬＳＤ 含量测定方法的优化［ Ｊ］ ． 中国实验方剂学杂
志，２０１８，２１（５） ：９２－９４．
作者简介：
陈晓勇，汕头市粤东药业有限公司。
（ 四） 测定方法
在高效液相色谱仪中注入 ２０μＬ 黄芪药材供试品溶液，
对色谱图进行记录，并对对照品峰保留时间进行对比，对黄
芪甲苷供试品溶液在色谱图中的峰进行鉴定。 对峰面积进
行测定计算，黄芪甲苷浓度的计算公式为 ａ ＬｎＣ＋ｂ ＝ ＬｎＡ，其
黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展
黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展黄芪是一种重要的中药材，被广泛用于中医药领域。
其中一种主要的活性成分是黄芪甲苷，它具有抗炎、抗疲劳、抗氧化等多种生物活性。
准确测定黄芪中黄芪甲苷的含量对于评价其药效和质量具有重要意义。
本文将综述近年来关于黄芪中黄芪甲苷含量测定研究的进展。
传统的黄芪甲苷含量测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱联用法（LC-MS）和紫外-可见分光光度法（UV-Vis）。
这些方法在黄芪甲苷的定性和定量上具有很好的精确性和准确性。
这些方法在操作步骤繁琐、时间耗时长、设备成本高等方面存在一定的不足。
近年来，一些新的测定方法被开发出来，以提高黄芪中黄芪甲苷含量的检测速度和准确性。
气相色谱-质谱联用法（GC-MS）可以通过蒸馏浓缩技术，直接从黄芪中提取黄芪甲苷，并通过质谱进行定性和定量分析。
这种方法具有操作简便、准确度高的优点，但对于样品准备的要求较高。
近年来还有一些基于免疫学原理的测定方法被提出。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）可以通过特异性抗体与黄芪甲苷结合，形成抗原-抗体复合物，再通过颜色反应测定黄芪甲苷的含量。
这种方法具有灵敏度高、操作简便的特点，但需要特异性抗体的制备，且可能存在交叉反应的问题。
近年来还有一些基于分子生物学技术的测定方法得到了发展。
实时荧光定量PCR（qPCR）可以通过黄芪甲苷特异性引物和探针进行扩增和检测，并通过标准曲线法计算黄芪甲苷的浓度。
这种方法具有高灵敏度、高特异性和高重复性的优势，但需要标准品的制备和PCR仪器的支持。
近年来关于黄芪中黄芪甲苷含量测定的研究主要集中在改进传统方法、开发新方法以及应用新技术。
这些研究不仅丰富了黄芪甲苷含量测定方法的选择，而且提高了检测的速度和准确性。
未来的研究还可以进一步探索其他的测定方法，并开展黄芪甲苷与其他成分之间的相互作用研究，以提高黄芪的药效和质量评价。
黄芪制剂中黄芪甲苷测定方法比较
黄芪制剂中黄芪甲苷测定方法比较
唐斌;杨扬;尚北城;高玮;徐贵丽
【期刊名称】《西南军医》
【年(卷),期】2004(6)2
【摘要】中药黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus mongholicus(Bge)或膜荚黄芪A．membranaceus(Fisch)的干燥根，主产于山西、黑龙江、内蒙古等地，以栽培的蒙古黄芪质量为佳。
主要成分有黄芪皂苷、多糖、黄酮、氨基酸、微量元素等。
黄芪甲苷为黄芪中十多种皂苷的主要成分，为黄芪制剂质量检验的指标成分，结构为三萜皂苷。
药理实验表明：黄芪甲苷具有补气固表，利尿，托毒排脓，生肌之功效。
黄芪甲苷的含量是评价黄芪及其制剂质量的重要指标，而且
【总页数】2页(P82-83)
【作者】唐斌;杨扬;尚北城;高玮;徐贵丽
【作者单位】成都军区昆明总医院药剂科,昆明,650032;昆明医学院,昆明,650032;成都军区昆明总医院药剂科,昆明,650032;成都军区昆明总医院药剂科,昆
明,650032;成都军区昆明总医院药剂科,昆明,650032
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.黄芪及其制剂中黄芪甲苷含量测定方法研究进展 [J], 颜晓航
2.黄芪甲苷提取物中黄芪甲苷含量测定方法比较研究 [J], 侯素云;王宗权;贾继明
3.黄芪制剂中黄芪甲苷测定方法概述 [J], 唐斌;杨扬;尚北城;高玮;徐贵丽
4.不同生长年限黄芪中总皂苷、黄芪甲苷、总黄酮及多糖含量比较 [J], 张善玉;朴惠顺;宋成岩
5.2种黄芪甲苷含量测定方法的比较 [J], 卢伟;孙晓敏;孙佳佳;常诗卓;雷钧涛
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酌减。(2)对照组:聚肌胞2mg肌注,1次/2d,共10次。儿童酌减。2 结 果211 疗效标准 痊愈:皮损全部消退;显效:皮损消退7510%以上;有效:皮损消退2510～7510%;无效:皮损无变化或消退<2510%。212 疗效比较(见表1)。表1 两组疗效对照〔例(%)〕分组总例数痊愈显效有效无效总有效率中药组5223(4412)①9(1713)7(1315)13(2510)39(7510)②对照组326(1818)5(1516)3(914)18(5612)14(4318) 注:与对照组比较,①P<0101;②P<0105213 副反应 中药组未出现任何不良反应;对照组有1例出现轻微发热,但不影响治疗。两组均未出现面部发红、脱屑等副反应。214 随访观察 中药组中有28例痊愈患者接受随访1～3个月,有1例在1个月后复发,2例2个月后复发,1例3个月后复发。再次口服中药10剂后又获痊愈。对照组6例痊愈患者接受随访1～3个月,有1例1个月后复发,1例3个月后复发。再次口服中药10剂后又获痊愈。3 讨 论扁平疣中医谓之“扁瘊”,认为本病的发生多因气血失和、腠理不密、复感外邪、凝聚皮肤而致病〔1〕,与现代医学认为本病由于机体免疫力低下,
病毒感染的观点相吻合。近几年来供治疗用的多种抗病毒及免疫增强新药给患者带来了许多方便,但价格较贵,疗程长。中药治疗以清热解毒、散风平肝为主〔2〕,方中板兰根、紫苏、生苡仁、大青叶、
青藤香清热、凉血、解毒、利湿,川木香理气,赤芍活血化淤,诸药合用,共凑清热除湿、活血化瘀、平肝散结之功,而达到扶正祛邪、疣体消退的目的。此法疗效明显好于肌注聚肌胞,其疗效与患病年龄、病程,以及既往接受治疗与否无明显关系,
而且疗程短,未观察到明显副作用,病人乐意接受。
参考文献〔1] 刘辅仁.实用皮肤科学.北京:人民卫生出版社,
1997∶130〔2] 杨国亮,王侠生.现代皮肤病学.上海:上海医科大学出版社,1998∶305
收稿日期:2003-09-19
黄芪制剂中黄芪甲苷测定方法概述唐 斌1,杨 扬2,尚北城1,高 玮1,徐贵丽1(11成都军区昆明总医院药剂科,云南昆明 650032;21昆明医学院药学99级实习生)
摘要 目的:评价黄芪甲苷测定方法。方法:检索有关黄芪甲苷测定方法的文献并进行比较。结果:黄芪甲苷测定方法有定性鉴别和定量测定两种方法,定性鉴别包括理化鉴别和薄层层析法;定量测定包括分光光度法、薄层扫描法和高效液相色谱法。结论:高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD法)分离度好,重现性好,回收率高,是一种值得推广的测定方法。关键词 黄芪制剂;黄芪甲苷;测定方法中图分类号 R94 文献标识码 B 文章编号 1004-0188(2004)02-0175-03
中药黄芪为豆科植物蒙古黄芪(Astragalusmongholicus,Bge)或膜荚黄芪A.membranaceus(Fisch)的干燥根,主产于山西、黑龙江、内蒙古等地,以栽培的蒙古黄芪质量为佳。主要成分有黄芪皂苷、多糖、黄酮、氨基酸、微量元素等。黄芪甲苷为黄芪中的十多种皂苷的主要成分,为黄芪制剂质量检验的指标成分,结构为三萜皂苷。药理实验表明:黄芪甲苷具有补气固表、利尿、托毒排脓、生肌之功效。黄芪甲苷的含量是评价黄芪及其制剂质量的重要指标,而且许多中成药也以黄芪甲苷作为该品种的指示成分。但黄芪甲苷在黄芪中含量很低,提取分离比较困难。现将近年来有关黄芪甲苷测定方法概述如下:
1 定性鉴别111 理化鉴别 (1)取黄芪粉末3g,加水30ml,浸渍过夜,滤过,取滤液1ml,加012%茚三酮液2
滴,在沸水中加热5min,冷后呈紫红色。(2)取水溶液1ml,于60℃水浴中加热10min,加5%a-萘酚乙醇溶液5滴,摇匀,沿管壁缓缓加入浓硫酸
・571・西南国防医药2004年第14卷第2期015ml,在试液与硫酸交界处出现紫红色环。112 薄层层析法 供试品与对照品、阴性对照品滴于同一硅胶板上,定性观察。通过以上定性鉴别实验,可知理化鉴别快、简单,不需要对照品和阴性对照品。但不足之处是不能完全肯定供试品一定是黄芪,因为有些化学成分也能有此反应。因此薄层层析法比较适用于黄芪甲苷定性鉴别。2 定量测定方法211 分光光度法 该法主要利用黄芪甲苷与显色剂发生显色反应。常用显色剂:香草醛-硫酸、香草醛-冰醋酸等香草醛试剂(410～1010%)〔1〕。此方法在以往实验中应用较广泛,因为该法简便、快速,测定的灵敏度和选择性较高。但随着科学技术的发展,该法也暴露出许多弊端。如:样品的前处理复杂,要求较高,必须经提取分离纯化等处理(因为此方法不能自行分离)以排除对测定黄芪甲苷的干扰。但中药黄芪及其制剂中成分复杂,影响了分离提纯;同时,显色反应的影响因素较多,影响了该法的准确性和稳定性,限制了该法的应用。212 薄层扫描法 将不同浓度的供试品、对照品、阴性对照品,滴于同一硅胶G薄层板上,比较黄芪甲苷的斑点,进行扫描。此方法测定黄芪甲苷含量稳定,重现性好。但层析时室温不宜高于25℃,空气湿度也不宜过大,层析过程中常会出现拖尾现象,
使分离效果不佳。并且层析条件对层析结果影响也很大(层析条件如:(1)展开温度。(2)展开系统的饱和性。(3)背景干扰因素等)。因此要优选层析条件,使结果有较好的重现性。表1中列出了几种比较黄芪甲苷的薄层色谱法(TLC)分析条件〔2～8〕。213 高效液相色谱法(HPLC法) 近年对黄芪药材及其制剂中黄芪甲苷含量的测定多采用此方法。因为该法兼具分离和分析功能,比TLC分离效果更好,测定结果更精确;并且该法的流动相选择范围宽,色谱柱可反复使用,逐渐成为一种首选的分离分析方法。此法还具有准确、快速、重现性好、灵敏度高、减少预处理步骤等优点(见表1),从而使结果更可靠。HPLC法现多用光二极管阵列法,近年逐渐有人采用蒸发光散射检测法〔9〕。表2中列出了几种黄芪甲苷的HPLC分析条件〔10～16〕。
表1 黄芪甲苷TLC条件吸附剂展开剂显色剂显色条件硅胶G015CMC
[2]氯仿-甲醇-水30∶10∶110%硫酸乙醇105℃烘烤5min
硅胶[3]氯仿-甲醇-水13∶6∶25%硫酸乙醇100℃烘烤5～7min
硅胶G015CMC
[4]氯仿-甲醇-水65∶30∶1010%硫酸乙醚浸30min105℃烘烤5～7min
硅胶G
[5]氯仿-甲醇-水13∶7∶210%硫酸乙醇105℃烘5～10min
硅胶G
[6]氯仿-甲醇-水65∶35∶1010%硫酸乙醇105℃烘5min
硅胶H1%CMC
[9]氯仿-甲醇-丙酮2∶1∶210%硫酸乙醇105℃烘5min
硅胶G011CMC
[8]氯仿-甲醇-水65∶35∶1010%硫酸乙醇105℃烘3～5min
表2 黄芪甲苷的HPLC条件色谱法流动相流速(min)检测波长(nm)灵敏度(AUF)线性范围(mg/ml)Shin-pack乙腈-0105mol/L磷酸二氢Vp-ODS[10]钾15∶85015ml210010801044～0144
YWGC18
[11]甲醇018ml2050110101～012
NOVA-PAKC18
[12]乙腈-011mol/L磷酸33∶67—205—010625～2100
SpherisorbODSC18
[13]甲醇:四氢呋喃:水90∶4∶6018ml230—01004～01080
Ultraspher-ODS[14]乙腈:011%磷酸33∶67110ml203—01025～01200
NOVA-PAKC18
[15]乙腈-水-磷酸1∶2∶011112ml——1126～1126(μg/ml
)
ODS[9]乙腈:水1∶2018ml——11002～10102(μg/ml
)
Elite-ODS[16]乙腈-水36∶64110ml——401016～901036(μg/ml
)
其中HPLC法又分为:(1)直接测定法:将供试品与对照品直接进行测定。(2)柱前衍生化测定法〔13〕:因为生药黄芪所含化学成分复杂,除黄芪甲苷外还有多种皂苷、氨基酸、多糖和黄酮类等成分,这些成分大多数在200nm有吸收,且特征成分黄芪甲苷在黄芪中含量较低,直接采用HPLC法在λ=
203nm处测定黄芪甲苷的含量干扰多,而且准确度较低。因此采用柱前衍生化HPLC法,对黄芪甲苷
・671・西南国防医药2004年第14卷第2期分子的羟基进行苯甲酯化,使最大吸收波长移至230nm处,从而提高了分离选择性和检测灵敏度,也是一种比较好的方法。(3)高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD法)〔9〕:蒸发光-散射
检测法的原理是使流动相溶剂喷雾气化,进入加热管后溶剂挥发,而被分析检测的物质颗粒受激光照射产生散射,散射光由光电倍增管收集得到响应,
由被分析物质颗粒的数量和大小决定光散射检测器的响应大小,而不受流动相溶剂的干扰。结论 采用HPLC-ELSD法对黄芪甲苷含量测定,分离度好,重现性好,不需要进行前处理直接进样,回收率高。但检测灵敏度和精确度不如光二极管陈列法。因此这是一种良好的测定方法,宜广泛采用。
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