多聚赖氨酸包被玻片操作方法
多聚赖氨酸处理
配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
我曾用过多聚赖氨酸包被培养瓶,但浓度是0.1mg/ml,我都是放一夜,第二天吸掉晾干就用,当然要紫外消一下.我觉得时间长点没什么大碍。
我们这里的老师说，多聚赖氨酸不能用紫外线照射。
1.用赖氨酸包被培养板和培养瓶时，应该选用多聚左旋赖氨酸(分子量为15-30万) ；2.感觉你“浓度为50ng/1ml”有些低，我一般最后多聚赖氨酸使用浓度达到20－30ug/ml；3.包被时间一般为6－7h，或者过夜也可；4.使用时应该先用灭菌水洗三次＋PBS（起平衡盐作用）洗一次，洗液的量应该大于包被液的量；5.“多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长时间，太长了会有影响吗？”，我包被时间最长的经历有过48h,最后只是多聚赖氨酸随着时间延长蒸发一些而量变少了，但是对细胞生长并无大碍，这是我曾经有过的经历，所以我会负责地告诉你；6.“多聚赖氨酸能在4度冰箱里放多久？”，最好置于－20度保存，放置数月乃至半年都可以。
多聚赖氨酸包被培养皿步骤
多聚赖氨酸包被培养皿步骤在我们进行细胞培养时，培养皿就像是细胞的小家，提供了一个温暖的环境，让它们能安安心心地生长。
今天我们要聊的是怎么用多聚赖氨酸（PLL）来包被培养皿，这可是一项神奇的操作，能给细胞提供更好的附着环境。
接下来，就让我来带你走一趟这个步骤吧！1. 准备工作1.1 材料准备首先，我们得准备好所有的材料。
这可是个细致活，万一少了什么可就尴尬了。
你需要的主要材料有：多聚赖氨酸溶液、培养皿（当然要干净的咯）、无菌水和一些吸管，最好还有手套，别让细胞觉得你不讲卫生哦。
再说，搞科研可不能马虎，细节决定成败，像做菜时少了一味调料，味道就大打折扣嘛！1.2 清洁工作在开始之前，别忘了把你的工作台擦得干干净净。
想象一下，如果你的培养皿是在一个满是灰尘的地方包被，细胞一定会不高兴的，对吧？所以，使用酒精消毒一下工作台，让它焕然一新，再把所有材料都摆上来，准备就绪，感觉就像开饭前的备菜一样。
2. 包被步骤2.1 包被准备好啦，接下来进入包被的环节！首先，把多聚赖氨酸溶液取出，根据需要稀释一下，浓度一般在0.1%到0.5%之间。
稀释就像做饮料，太浓太稠的饮料喝了容易腻，细胞也一样，得有个适中的环境才能舒舒服服地长大。
之后，使用吸管将准备好的PLL溶液均匀地加到培养皿的底部，轻轻摇晃一下，让它铺满整个底面，感觉就像给培养皿做了个SPA，真是太贴心了！2.2 静置和冲洗把包好的培养皿放到37℃的温箱里静置30分钟到1小时，让多聚赖氨酸好好地附着在皿底。
这段时间你可以去喝杯咖啡，或者聊聊天，别让自己闲得发慌。
时间一到，把培养皿拿出来，轻轻倾斜，倒掉多余的溶液，接着用无菌水轻轻冲洗一下，去掉没附着好的部分。
冲洗完后，再次轻轻倾斜，倒掉水分，确保底部没有多余的水，想想就像洗完澡后的干爽感觉，真是舒服！3. 使用与储存3.1 培养细胞现在，包被好的培养皿可以用来培养细胞啦！把细胞悬液轻轻加入培养皿里，注意不要让细胞“摔跤”哦。
包被细胞培养板的相关问题---精品资料
培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。
不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。
(一)多聚赖氨酸包被：问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
问：PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？谢谢：）答：我们养神经细胞，用的是分子量3万到7万的pll 。
以PBS配成1mg/ml的母液，－20度保存。
一种简单的制作多聚赖氨酸黏附载玻片方法
一种简单的制作多聚赖氨酸黏附载玻片方法
李梅;吴建农
【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》
【年(卷),期】2011(27)5
【摘要】近年来,由于分子生物学基础研究的飞速发展,免疫组化技术和原位杂交技术等检测方法不断普及,黏附载玻片的应用也日益广泛。
其中黏附剂多采用多聚赖氨酸,将其与双蒸水按1∶9稀释后浸泡载玻片,晾干后备用。
此方法虽可一次制作出大量黏附载玻片,但防脱片效果并不理想。
经过不断的探索和实践,我们通过使用棉签直接涂片和降低多聚赖氨酸稀释度的方法,取得了良好的效果,现介绍如下。
【总页数】1页(P555-555)
【作者】李梅;吴建农
【作者单位】江苏省镇江市江苏大学附属医院病理科,212001;江苏省镇江市江苏大学附属医院病理科,212001
【正文语种】中文
【中图分类】R361.2;R-33
【相关文献】
1.一种简单适用的大水箱制作方法 [J], 欧阳砚端
2.四种制作多聚赖氨酸免疫组化黏附载玻片方法的比较 [J], 付先利;支月莹;郑芳;曾超;肖栩;贾静;吴建农
3.制作多聚赖氨酸黏附载玻片四种方法比较分析 [J], 于义娟;朱薇;张萍;李晶梅;漆世华;谢红玲;温文生;吴玉石
4.介绍一种简单易行的组织芯片制作方法 [J], 武振汝;陈梦琳;李丽;石毓君;步宏
5.观察金鱼尾鳍血液流动方法的改进——特种载玻片的制作 [J], 周长信
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
包被细胞培养板的相关问题
包被细胞培养板的相关问题培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。
不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。
(一)多聚赖氨酸包被：问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
问：PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？谢谢：）答：我们养神经细胞，用的是分子量3万到7万的pll 。
包被
聚赖氨酸包被载玻片改良法时间:2011-09-01 17:34来源:生物吧作者:刘浩点击:324 次原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。
这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。
这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确处理。
经典的载玻片处理技术用加有洗涤剂的水清洗载玻片数分钟后,再于水中浸泡30 min。
配制足量的500μg/ ml 多聚-L-赖氨酸水溶液,逐一浸载玻片。
经空气干燥后,贮于4℃, 1 周内使用。
在实践中我们发现,该方法操作不当,易导致试验脱片现象。
为确保各项重大试验质量,我们对经典方法进行改良,并取得很好的效果。
1. 清洗载玻片:(1) 用加有玻璃清洁剂的水,浸泡新的载玻片24 h。
(2) 清水冲洗载玻片后,用清水浸泡载玻片24 h。
(3) 用蒸馏水浸洗5 次,再用蒸馏水浸泡载玻片过夜。
(4) 次日用蒸馏水冲洗载玻片,晾干,装盒备用。
2. 包被载玻片:(1) 根据切片组织大小,决定包被载玻片的位置及面积大小。
(2) 用移液器吸取0. 1 % 多聚-L-赖氨酸作者单位:200092 上海第二医科大学新华医院上海儿科研究所10μl 置于载玻片预定位置,用枪头涂匀预定面积。
对多张载玻片逐一进行涂片。
(3) 肉眼观察载玻片预定面积内多聚-L-赖氨酸分布是否均匀,有皱缩的玻片予以剔除。
(4) 将载玻片平放,自然干燥,逐一做好标记。
(5) 将包被载玻片置标本盒内,贮于4 ℃备用。
(6) 根据切片数量多少,当天制备包被载玻片,当天使用。
改良后的载玻片处理技术,不仅可在包被前提供清洁好的载玻片,有利于一次包被成功,而且载玻片在包被前经过预定位置逐一精细涂片,并用肉眼观察和剔除皱缩玻片,从而确保了载玻片包被的质量。
细胞免疫荧光步骤
细胞免疫荧光步骤方法一：1. 首先需要把细胞养在玻璃片上（悬浮细胞需要用多聚赖氨酸包被过的玻璃片）2. 然后在 4％PFA 里面室温下固定 30 分钟， PBS 洗两次， 0.1% TX-100 室温下作用 1－2 分钟使细胞膜通透。
3. 接下来进行荧光标记，需要在一个大的容器（面积大，扁平状的，比如大的培养皿）里面，放一张用水打湿的滤纸，以保持湿度。
4. 剪一片合适大小的parafilm ，在上面滴上稀释在1％BSA/TBS 中的一抗（稀释倍数依具体抗体而定），每个玻璃片 30ul 足够，把玻璃片盖在上面（细胞面朝下），室温下孵育 30 分钟，然后在 PBS 里洗三次。
5. 接下来二抗孵育步骤同上。
6. 最后，在载玻片加上mounting medium （大约每个玻璃片加10ul）,把玻璃片放上去（细胞面朝下）， 37 度 30 分钟，然后就可以在荧光显微镜下观察了。
7. 抗体很重要，不能有非特异性结合。
你可以先做 WB 检测一下你的抗体，看看有没有杂带。
8. 双标的话，可以把两个一抗一起加或者分别标记两次（可以都试一下看看那种方法合适）。
如果一个抗体需要二抗，一个是直接荧光标记的，可以把荧光标记的那个和另外一个的二抗一起加。
方法二：1. 选取一抗时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于rabbit 和 rat 的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC （绿）和donkey anti-rat-Tex-Red （红）。
2. 我的做法是两种一抗同时孵育，然后两种二抗同时孵育。
抗体浓度、孵育时间要仔细摸索，我感觉一抗 4 度孵育过夜比较好，背景比较清晰。
3. 我的阳性对照用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG，荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。
4. 封闭血清与二抗来源动物一致，我用的是10%的正常donkey 血清。
5. 其余步骤同一般免疫荧光单标操作。
多聚赖氨酸处理载玻片流程
多聚赖氨酸处理载玻片流程
多聚赖氨酸（Poly-L-lysine，PLL）是一种常用的载玻片（Coverglass）表面修饰物，用于细胞培养和免疫组织化学等实验。
以下是一种常见的PLL处理载玻片的流程：
1. 准备载玻片：选择干净、无尘的载玻片，并用无水酒精或酒精灯烘烤消毒。
确保载玻片表面干燥且无油污。
2. 涂覆PLL：将PLL溶液加到载玻片表面。
可以选择将PLL溶液滴在载玻片中央，然后用微量移液器慢慢将溶液扩散到整个载玻片表面，或者使用旋涂法将PLL溶液均匀地涂覆在载玻片上。
3. 等待吸附：将涂覆好PLL的载玻片放置在无尘的环境中，让PLL溶液在载玻片表面吸附，并形成均匀的PLL层。
通常需要等待约20-30分钟，具体时间根据PLL浓度和温度而定。
4. 洗涤载玻片：将载玻片用去离子水或PBS缓冲溶液轻轻地洗涤数次，以去除未吸附的PLL和其他杂质。
避免用力刷洗或产生气泡，以防PLL层的破坏。
5. 干燥载玻片：用空气或干净的氮气吹干洗涤后的载玻片，确保载玻片表面完全干燥。
可以将载玻片放置在干燥箱中或在无尘环境中自然晾干。
6. 使用载玻片：处理好的PLL载玻片即可用于细胞培养、免疫组织化学等实验。
将培养物或样品滴在PLL处理的载玻片上，使其黏附并进行后续实验操作。
具体的操作流程可能因实验目的、PLL浓度和实验要求等而有所不同。
在进行实验前，建议参考相关文献或实验方法以获取更详细和专业的操作指导。