饲料掺假原料中非蛋白氮的快速检测方法探讨

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饲料中非蛋白氮的测定方法

饲料中非蛋白氮的测定方法

饲料中非蛋白氮的测定方法非蛋白氮(NPN)是指饲料中除蛋白质以外的氮物质,包括游离氨、尿素、硝酸盐、亚硝酸盐等。

在动物营养学中,非蛋白氮对动物生长发育具有一定的作用,但过多的非蛋白氮会对动物健康产生负面影响。

因此,准确测定饲料中的非蛋白氮含量是非常重要的。

常用的饲料中非蛋白氮测定方法主要有以下几种:1. 氨基酸分析法氨基酸分析法是一种常用的饲料中非蛋白氮测定方法。

该方法通过酸水解或酶解饲料中的蛋白质,将其分解成氨基酸,再利用氨基酸分析仪测定样品中氨基酸的含量,从而计算出非蛋白氮的含量。

该方法具有准确性高、精度好、操作简单等优点,但需要使用昂贵的氨基酸分析仪,且需要对样品进行酸水解或酶解处理,操作比较繁琐。

2. 尿素测定法尿素测定法是一种常用的饲料中非蛋白氮测定方法。

该方法通过将饲料样品与一定量的氢氧化钠和氯仿反应,将样品中的尿素转化为氨。

再通过滴定方法测定样品中的氨的含量,从而计算出样品中尿素的含量。

该方法具有操作简单、费用低廉等优点,但是不适用于含有硝酸盐或亚硝酸盐的样品。

3. 氨测定法氨测定法是一种常用的饲料中非蛋白氮测定方法。

该方法通过将饲料样品与一定量的氢氧化钠反应,将样品中的非蛋白氮转化为氨。

再通过滴定方法测定样品中的氨的含量,从而计算出非蛋白氮的含量。

该方法具有操作简单、费用低廉等优点,但是不适用于含有亚硝酸盐或硝酸盐的样品。

4. 高温燃烧法高温燃烧法是一种常用的饲料中非蛋白氮测定方法。

该方法通过将饲料样品在高温下燃烧,将样品中的非蛋白氮转化为氮气。

再通过气相色谱法或原子吸收光谱法测定氮气的含量,从而计算出样品中非蛋白氮的含量。

该方法具有准确性高、精度好等优点,但需要使用昂贵的仪器,操作比较繁琐。

不同的饲料中非蛋白氮测定方法各有优缺点,选择合适的测定方法需要根据具体的情况来确定。

在测定过程中,应注意操作规范,避免误差的产生,保证测定结果的准确性。

饲料掺假原料中非蛋白氮的快速检测方法探讨

饲料掺假原料中非蛋白氮的快速检测方法探讨

法 . 以后饲料 检测水 平 的改进提 供理论 依据 为
1 检 测 方 法 对 部 分 样 品 进 行 脱 脂 ,脱 脂 有 两 种 方 法 。 包
括慢 速脱脂 和快 速脱脂 慢速脱 脂 : 粗称取 样 品 1 g 把样 品用 滤纸 包 0, 好 , 滤 纸 包 放入 烧 杯 并 加 入石 油醚 . 泡脱 脂 把 浸 2 3 。然后 取 出滤 纸包 , 滤纸包 放人 通风橱 中 . ~h 将
1 尿 素、 盐、 酸盐一 . 1 铵 硝 亚硝 酸盐的快速 定性检 测 粗称 2 g上述脱 脂 样 品于试 管 中 , lmL蒸 加 O 馏水 . 涡旋 混合 器 混合 l 1s 静 置 lm n 取 用 O 5, O i, 用 上 清液测 非蛋 白氮 111 尿 素 的快速定 性检 测 .. 尿 素是一 种 白色 、 易潮解 的结 晶固体 , 尿素 纯 含 氮量为 4 .%( 合粗蛋 白质含量 2 1 %) 66 折 9 . 。这 3 是最 简单 的非蛋 白氮类化 合物 。是生产 中使用 范 围最 广 、 间最 长 、 时 用量最大 的一种非蛋 白氮。lg k
尿素 相当于 28 k . g粗蛋 白质 , 8 相当于 7 g大豆饼 。 k 快速检 测尿 素有 两种方法 。
酸盐 、 醛 聚 合 物 、 物 蛋 白精 、 聚 氰胺 的 快 速 定 性 检 尿 生 三 测 快速 定 性 检 测 方法 在 实 际 原 料掺 假 检 测 工作 中 与其 标
是 O2 %。 . 5
检验工 序 已是 饲料 生产 中的重要 程序 实验 以大 量 的生 产实 践为 基础 , 究 出更 为实 用 、 探 简便 、 快 速 、准 确 的测 定 饲料 原 料 中非 蛋 白氮 的检 测 方
第 2种 方 法 : 取试 样 5 g左 右 , 于一 张 干净 置

原料中非蛋白氮的检测

原料中非蛋白氮的检测

用45目筛筛得细粉部分和粗粉部分
取6-8滴0.5%变色酸于点滴板上
取少量筛得的细粉于0.5%变色酸的点滴板上
结果:5-10分钟内出现紫罗兰色
判定最低限 0.15%
4.2.2 方法2
范围:仅适用于动物类产品。 取3g样品于50ml具塞离心管里 加35ml煮沸的20%NaOH溶液 漩涡混匀后,放置5分钟
范围:适用于动物类产品和植物类产品 用45目筛筛得细粉部分和粗粉部分 取一些筛下细粉放到点滴板上 滴0.5%二苯胺覆盖在样品上 在显微镜下观察结果 结果:表面漂浮灰白色或浅蓝色小点
判定最低限0.1%
4.4 三聚氰胺检测
有两种方法判定三聚氰胺。 4.4.1 方法1 (0.5%二苯胺/奈斯勒方法) 用45目筛筛得细粉部分和粗粉部分 取一些筛下细粉放到点滴板上 滴0.5%二苯胺覆盖在样品上 在显微镜下观察三聚氰胺为明显的晶体
将上清液倒掉,留取下沉物
加35ml蒸馏水 混匀,放置5分钟 倒掉上清液 用蒸馏水洗涤下沉物3-4次,直至洗涤液透明 下沉物用蒸馏水转移到10ml试管中 加1ml0.5%变色酸,混合后观察颜色 如果颜色不明显可以再加1ml0.5%变色酸,混合后观察颜色
结果:呈现紫罗兰色
判定最低限 0.25%
4.3 ESB生物蛋白精检测
取 0.5g 二苯胺,倒入 20ml 蒸馏水,再慢慢加入 80ml 硫酸混匀即可。
3.4 0.5%的变色酸 取 0.5g 变色酸,倒入 100ml 硫酸中,搅匀即可。 3.5 20% NaOH
取 20g NaOH溶于蒸馏水里,然后定容到 100 毫升,混匀,室温保存。
3.6 奈斯勒试剂 3.5g KI加入 1.25g HgCl2 加入 80ml 蒸馏水,搅拌,加 12g NaOH ,用蒸馏水定容 到 100ml,用滤纸过滤溶液,将滤液保存到棕色玻璃试剂瓶中。

非蛋白氮的概述和检测方法(1).doc

非蛋白氮的概述和检测方法(1).doc

非蛋白氮的概述和检测方法发布时间:2002-11-081 非蛋白氮的概述非蛋白氮大致可以分为以下几类,①尿素及其衍生物类,如缩二脲、羟甲基尿素等;②氨态氮类,如液氨、氨水等;③铵类,如硫酸铵、氯化铵等;④肽类及其衍生物,包括氨基酸、酰胺、胺等;⑤动物粪便及其它废弃物类。

以下是几种常见的非蛋白氮的介绍:1.l 双缩脲又称缩二脲,是一种尿素缩合产品,其含氮量在35%上,蛋白质当量为219%。

缩二脲难溶于水,一般的定量检验方法为紫红色配位化合物比色法(原理:鱼粉中的双缩脲经抽提后,在酒石酸钠的碱性溶液中与硫酸铜生成紫红色配位化合物,在550nm 波长下比色从而测出其含量)。

1.2 尿素是氮和二氧化碳在高温高压下化合而成。

纯尿素的含氮量为47%,折合蛋白当量为293.75%。

易潮解,易溶于水,一般的定量检验方法有二种:一种为二甲基氨基苯甲醛显色法;另一种为二嗪衍生物显色法。

但以上两种方法只能测定游离性尿素而不能测定其衍生物。

1.3 尿素甲醛聚合物是由尿素和甲醛聚合而成,其含氮量为38.89%,折合蛋白当量为243.06%。

该聚合物难溶于水。

1.4 硫酸铵俗称肥田粉,其含氮量为20%左右,折合蛋白当量为125%。

硫酸铵的工业品一般为白色或微带黄色的结晶,易溶于水,其分子式为(NH4)2SO4。

1.5 异亚丁基二脲又名二脲异丁烷,简称IBDU,为尿素和异丁醛在催化剂的作用下综合反应生成。

IBDU为一种子的白色粉末或颗粒,总含氮量为32.18%,折合蛋白当量为201.13%,吸湿度远低于尿素。

以上是比较常见的非蛋白氮物质。

随着科技的发展,还会有越来越多的非蛋白氮物质被合成出来,从而使反刍动物所用的非蛋白氮使用广泛,而掺假者很容易将此物质掺入饲料原料中以提高原料的粗蛋白质。

2 非蛋白氮的检验2.l 非蛋白氮的定性检验在对原料样品的检测中,一般有定性检测和定量检测。

在定性检测中,使用的比较多的为显微镜检,包括直接镜检、分层镜检(用四氯化碳或三氯甲烷分层)、反应剂镜检(用化学物质和样品中的某些物质反应而在显微下区分)、染色镜检等。

饲料原料的掺假与伪劣识别

饲料原料的掺假与伪劣识别
铺工曹唇徊狡戊长咆效祸嚏烙惕胚阅囤障陀译闲渤招厂焉雏跳蛰臀纫粤馅饲料原料的掺假与伪劣识别饲料原料的掺假与伪劣识别
3.NPN的鉴别(1)---尿素
试剂: 1.生黄豆粉。将大豆磨成粉末(注意;切勿加热升温) 2.酚红:1g/L。 称取酚红(苯酚红)0.1g溶于100ml乙醇中。 步骤:取约0.5-2g样品,于50ml比色管内,再加约0.1-0.2g生黄豆粉,3-5滴酚红,40ml水,塞好塞子,摇动30秒,静止,如溶液变成红色,则样品中掺入尿素
饲 料 原 料 的 掺 假 与 伪 劣 识 别
轮冻韩圃诀咋仪暖又驯箱夕焚敬糖紧嘘譬沃采汹壶了盐督轨热哥溪拜瘟漾饲料原料的掺假与伪劣识别饲料原料的掺假与伪劣识别
前言
饲料是典型的原料依赖性产品,原料决定着产品的质量和成本,现有的饲料原料就有12类、近200多种,掌控其质量绝非易事。 根据实际体会介绍当前饲料原料的搀假的特点、发展趋势和识假方略,然后分类讲述一些近年来市场上掺假、造假最多的饲料原料的识别实例,希望起到警示作用,并能提高饲料企业的检测水平。
2.伪劣玉米蛋白粉的识别方法
(1) 检查氨基酸组成的变化 真玉米蛋白粉的氨基酸总和与粗蛋白基本一致(±5%之内),并且各氨基酸比例与数据库中的值相近,掺假后其总和与组成的比例均发生很大变化,可以凭此点判断是否掺假,但需要指出的是目前有部分产品掺NPN很少一点,大约提高粗蛋白(CP)值3—5个百分点,来获取更多的利润或达到合同要求,对这样的产品仅凭氨基酸总量与比例变化很难发现掺假,只有通过镜检和特效的定性检测才能发现。
挽力群芒捏僧悬撵更柞别炎皿破狄毡齿祭辊工辈混缚森侩塔幢旷烛其泰狱饲料原料的掺假与伪劣识别饲料原料的掺假与伪劣识别
二 .饲料原料掺假识别的基本方略1
一般饲料原料掺假识别可按如下步骤进行: 1、发现疑点: a 外观性状有明显差异(形状、大小、颜色、气味、手感、溶解度等)。 b 正常检测出现异常现象(滴定终点不清、定量结果过高或过低…) c 镜检出现可疑物 d 红外或紫外光谱扫描与标准物有明显差异

饲料原料掺假

饲料原料掺假

饲料原料掺假检测(华中农大)一、饲料原料掺假现状、形式与检测程序(一)饲料原料掺假现状国产鱼粉100%掺有植物质,50%掺有非蛋白含氮化合物,20%不同程度地掺有血粉或羽毛粉。

甚至进口鱼粉,也有50%掺有非蛋白含氮化合物,20%掺有皮革粉。

销售时多以“价格优惠”、“送货上门”、“看样订货”及“回扣”等手段迎合人们心理,而大宗发货时,却以假充真,面目全非。

当前饲料原料掺假不仅在鱼粉、豆粕、油脂等一些价格昂贵原料上,也向其它原料扩展,而且掺杂物种类繁多,手段五花八门,多不易用常规法检出,故更加加大了原料品质检测的难度。

(二)饲料原料掺假、使杂、伪造的含义与形式1.饲料原料掺假、使杂、伪造的含义(1)掺假:指在原料中掺入非原料可饲物质,以达以次充好,以假乱真。

(2)使杂:指在原料中掺入非原料不可饲物质,以达以杂增重。

(3)伪造:指以伪代真,名实不符。

2.饲料原料掺假、使杂、伪造的形式(1)掺兑:在原料中掺兑非原料物,出售时冒称原物者。

(2)替代:以它物部分或全部替代原物者。

(3)着色:以染料着色于非原料物,掩饰掺杂真相者。

(4)伪造:出售与商标完全不符的物质者。

(三)饲料原料掺杂的检测程序确定原料是否掺杂、伪造是一项十分细致的工作,因为检测的正确与否,是判断品质优劣和是否掺杂的关键。

饲料原料掺杂的检测一般按照以下程序进行。

1.调查了解和掌握当前(地)原料掺杂、伪造的基本情况和动态,以达缩小检测范围,做到心中有数。

2.购入或送检原料时,首先应采用感观法、筛分法、容重法等确定是否掺杂。

根据检测结果和经验,初步划定掺杂物范围。

3. 根据初步划定的掺杂物范围,可采取显微镜检和快速滴定进一步确定掺假的范围,最后再用化学检测的方法确认掺假的种类以及掺假物的含量。

二、饲料原料品质检测与鉴别方法(一)一般鉴别法饲料品质的一般鉴别法,是指用视觉、嗅觉、触觉等鉴别原料品质的一些方法,故又称感观法。

1.视觉法:指通过肉眼或放大镜观察原料形态、颜色、虫害及霉变的一种方法。

饲料原料掺假..

饲料原料掺假检测(华中农大)一、饲料原料掺假现状、形式与检测程序(一)饲料原料掺假现状国产鱼粉100%掺有植物质,50%掺有非蛋白含氮化合物,20%不同程度地掺有血粉或羽毛粉。

甚至进口鱼粉,也有50%掺有非蛋白含氮化合物,20%掺有皮革粉。

销售时多以“价格优惠”、“送货上门”、“看样订货”及“回扣”等手段迎合人们心理,而大宗发货时,却以假充真,面目全非。

当前饲料原料掺假不仅在鱼粉、豆粕、油脂等一些价格昂贵原料上,也向其它原料扩展,而且掺杂物种类繁多,手段五花八门,多不易用常规法检出,故更加加大了原料品质检测的难度。

(二)饲料原料掺假、使杂、伪造的含义与形式1.饲料原料掺假、使杂、伪造的含义(1)掺假:指在原料中掺入非原料可饲物质,以达以次充好,以假乱真。

(2)使杂:指在原料中掺入非原料不可饲物质,以达以杂增重。

(3)伪造:指以伪代真,名实不符。

2.饲料原料掺假、使杂、伪造的形式(1)掺兑:在原料中掺兑非原料物,出售时冒称原物者。

(2)替代:以它物部分或全部替代原物者。

(3)着色:以染料着色于非原料物,掩饰掺杂真相者。

(4)伪造:出售与商标完全不符的物质者。

(三)饲料原料掺杂的检测程序确定原料是否掺杂、伪造是一项十分细致的工作,因为检测的正确与否,是判断品质优劣和是否掺杂的关键。

饲料原料掺杂的检测一般按照以下程序进行。

1.调查了解和掌握当前(地)原料掺杂、伪造的基本情况和动态,以达缩小检测范围,做到心中有数。

2.购入或送检原料时,首先应采用感观法、筛分法、容重法等确定是否掺杂。

根据检测结果和经验,初步划定掺杂物范围。

3. 根据初步划定的掺杂物范围,可采取显微镜检和快速滴定进一步确定掺假的范围,最后再用化学检测的方法确认掺假的种类以及掺假物的含量。

二、饲料原料品质检测与鉴别方法(一)一般鉴别法饲料品质的一般鉴别法,是指用视觉、嗅觉、触觉等鉴别原料品质的一些方法,故又称感观法。

1.视觉法:指通过肉眼或放大镜观察原料形态、颜色、虫害及霉变的一种方法。

原料掺假

(4)汽泡鉴别法:取少量样品放入烧杯中,加入适量稀盐酸或白醋,如果出现大量汽泡并发出吱吱声,说明掺有石粉,贝壳粉、蟹壳粉等物。
(5)显微镜检法:显微镜检法是最常用的一种方法,可以识别出大多数掺假物,但因为需要使用立体显微镜,故一般常用于大中型饲料企业或养殖户。使用显微镜检法需要熟悉一些常见掺假物的典型显微特征。谷壳粉中谷壳碎片外表面有纵横条纹;麦麸中麦片外表面有细皱纹,部分有麦毛;棉籽饼中棉籽壳碎片较厚,断面有褐色或白色的色带呈阶梯型,有些表面附有绵丝;菜子饼中菜籽壳为红褐色或黑色,较薄,表面呈网状;贝壳粉颗粒方形或不规则,灰白色,不透明或半透明;花生壳有点状或条纹状突起,也有成锯齿状;碱处理的骨粒出现小孔。
(三)快速点滴试验
快速点滴试验是指利用饲料的某些特性,或者通过与化学试剂发生某种特定反应,以检测或鉴别原料是否掺假、伪造的一种方法。该法具有快速、准确、不需特殊设备,适合于现场操作等特点。
三、常见原料的掺杂、伪造的检测与鉴定
(一)鱼粉的掺假检验
A.物理方法:
(1)感官检查法:根据鱼粉成分的形状、结构、颜色、质地、光泽度、透明度、颗粒度等体征来检查。
①标准鱼粉一般为颗粒大小均匀一致,稍显油腻的粉状物,可见到大量疏松呈粉末的鱼肌纤维及少量的骨刺、鱼鳞、鱼眼等物;颜色均匀一致,呈浅黄、黄棕或黄褐色;手握有疏松感,不结块,不发粘,不成团;有浓郁的烤鱼味,略有鱼腥味。
②鱼粉色泽随鱼种而异,墨罕敦鱼粉呈淡黄色或淡褐色,沙丁鱼粉呈红褐色,白鱼粉为淡黄色或灰白色。加热过度或含油脂高者,颜色加深。如果鱼粉色深偏黑红,外观失去光泽,闻之有焦糊味,为储藏不当引起自燃的烧焦鱼粉。如果鱼粉表面深褐色,有油臭味,是脂肪氧化的结果。如果鱼粉有氨臭味,可能是贮藏中脂肪变性。如果色泽灰白或灰黄,腥味较浓,光泽不强,纤维状物较多,粗看似灰渣,易结块,粉状颗粒较细且多成小团,触摸易粉碎,不见或少见鱼肌纤维,则为掺假鱼粉,需要进一步检验。

饲料中非蛋白氮

当温度在325 ℃ 和 350 ℃ 时,产生少量三聚氰胺。
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三聚氰胺
目前,工业合成的主要工艺为尿素的热反应:
– 6 (NH2)2CO → C3H6N6 + 6 NH3 + 3 CO2
反应过程分两个步骤. 首先,尿素在吸热反应中降解为氰酸和氨:
– (NH2)2CO → HCNO + NH3
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曾经用于掺假的物质:
Urea ammonium sulfate Biuret Melamine melamine formaledehyde resin,
Urea-farmaldehyde resin Mixed compounds Next ?
using the dye eosin Y
A. A. Waheed, and P. D. Gupta (1996)
a method for estimating submicrogram quantities of proteins using the dye eosin Y. The increase in sensitivity of this assay is approximately two fold under optimal assay condition. 0.01 and 0.05%
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尿素
N%:46.7,
白色固体,无臭,但有刺激性气味。 熔点:132.7–135 °C 由无机物合成的第一个有机物。
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尿素加热所生成的物质
Cyanuric acid
melimine
triuret

非蛋白氮的定量检验

非蛋白氮的定量检验在非蛋白氮定量的检测方法中,比较常用的方法是硫酸铜沉淀法和氨基酸测定法。

除此之外,本文根据非蛋白氮的组成结构的不同,采用水解蒸馏法对样品中的非蛋白氮进行检验。

一、硫酸铜沉淀法根据非蛋白氮的化学性质来看,大部分溶于水,一部分在常温下不溶水,但在沸水中溶解。

根据此种性质,可以先将样品煮沸,用硫酸铜将样品中的蛋白质沉淀下来,由于非蛋白氮已经溶于水,故可用过滤方法将其与样品中的蛋白质分离。

在过滤时,水的温度一定不能太低,否则象双缩脲一类的物质会因为不溶于常温水而不能被过滤掉。

用此种方法测定出的蛋白质含量称为样品的真蛋白质。

但实际上,此种方法有很大的局限性。

如果非蛋白氮不溶于沸水,或者将一般的非蛋白氮微囊化,此种方法测出的结果会与样品中的实际真蛋白有很大的差异。

二、氨基酸测定法为了真正能够判定样品中是否掺有非蛋白氮,需测定样品中的氨基酸含量。

无论采用经典的氨基酸自动分析仪分析(柱后衍生),还是采用比较快捷的HPLC分析(往前衍生),将所测定的氨基酸总量相加得到一个总氨基酸数值,然后将此数值乘以6.25为M,和用凯氏定氮法测定的粗蛋白质N相比较,M至少为N的85%(M可能略大于N)。

如果低于此数值,则可以判定该样品中掺有非蛋白氮。

三、水解蒸馏法1、原理:非蛋白氮主要包括五类:尿素及其衍生物类、氨态氮类、铵类、肽类及其衍生物、动物粪便及其它废弃物类。

如果在原料中掺有氨态氮类、铵类和粪便比较容易判断(可采用硫酸铜沉淀法加镜检),一般很少将肽类及其衍生物掺入其中,剩下比较难鉴别的就是尿素及其衍生物。

尿素和尿素衍生物经过强酸或强碱水解为氨盐或氨和其它的物质,在强碱的条件下可以蒸馏出氨气,原料中的蛋白质经过水解成氨基酸盐,氨基酸盐在强碱条件下稳定,从而可将非蛋白氮和真蛋白氮进行分离。

2、仪器和设备:酒精喷灯,试管和其它常用的仪器。

3、试剂与溶液:6mol/l 的盐酸溶液和其它常用的试剂。

4、测定方法:本文只列出用酸水解的方法。

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饲料掺假原料中非蛋白氮的快速检测方法探讨
摘要:本文主要探究饲料掺假原料中主要几种非蛋白氮的快速定性检测方法,包括尿素、铵盐、硝酸盐-亚硝酸盐、尿醛聚合物、生物蛋白精、三聚氰胺的快速定性检测。

快速定性检测方法在实际原料掺假检测工作中与其标准检测方法比较更简便、经济、实用、结果直观、选择性强,是一种实用性强、易推广的饲料掺假原料中非蛋白氮的检测方法。

关键词:非蛋白氮;尿素;铵盐;硝酸盐-亚硝酸盐;尿醛聚合物;生物蛋白精;三聚氰胺
饲料是发展畜牧业的物质基础,饲料中所含的营养物质及有害物质直接影响畜禽产品的质量,进而影响人类健康。

近年来,由于对原料的使用处理不当,二噁英、瘦肉精、苏丹红等由饲料安全问题引发的畜产品安全问题不断出现,已成为全球性关注的社会和政治问题,因而饲料原料的检验工序已是饲料生产中的重要程序。

实验以大量的生产实践为基础,探究出更为实用、简便、快速、准确的测定饲料原料中非蛋白氮的检测方法,为以后饲料检测水平的改进提供理论依据。

1 检测方法
对部分样品进行脱脂,脱脂有两种方法,包括慢速脱脂和快速脱脂。

慢速脱脂:粗称取样品10g,把样品用滤纸包好,把滤纸包放入烧杯并加入石油醚,浸泡脱脂2~3h。

然后取出滤纸包,将滤纸包放入通风橱中,把石油醚挥发干净。

快速脱脂:粗称取样品10g,把样品直接放入一个100mL小烧杯中,加30~40mL 石油醚浸没样品,充分搅拌,浸泡萃取15min左右。

然后把上清液倒掉,用滤纸过滤,收集脱脂样品。

把脱脂样品放通风橱中,使石油醚挥发干净。

1.1 尿素、铵盐、硝酸盐-亚硝酸盐的快速定性检测
粗称2g上述脱脂样品于试管中,加10mL蒸馏水,用涡旋混合器混合10~15s,静置10min,取用上清液测非蛋白氮。

1.1.1 尿素的快速定性检测
尿素是一种白色、易潮解的结晶固体,纯尿素含氮量为46.6%(折合粗蛋白质含量291.3%)。

这是最简单的非蛋白氮类化合物。

是生产中使用范围最广、时间最长、用量最大的一种非蛋白氮。

1kg尿素相当于2.88kg粗蛋白质,相当于7kg 大豆饼。

快速检测尿素有两种方法。

第1种方法:先加6~8滴上清液到白色点滴板上,然后加2~3滴0.1%溴百里酚兰和4~5滴0.4%尿素酶到白色点滴板上,观察颜色变化情况。

若为阳性反应结果呈蓝色,阳性最低检测限是0.25%。

第2种方法:取试样5g左右,置于一张干净的滤纸上,再加入5g左右的生豆粉,搅拌均匀,用蒸馏水润湿,滴入数滴甲酚红试剂,让其反应3~5min,若有尿素存在即显出红色,且散开得像蜘蛛网似的,无尿素则显出黄色。

1.1.2 铵盐快速定性检测
加6~8滴上清液到点滴板上,然后滴加2~3滴奈斯勒试剂,观察颜色变化结果。

阳性反应的结果:开始为黄色,逐渐变为深桔色,一会就变灰色,若只出现深桔色、基本不变色或由黄色直接变为灰色或很快变为灰色,则是阴性。

最低检测限是0.1%。

1.1.3 硝酸盐-亚硝酸盐的快速定性检测
加6~8滴上清液到点滴板上,然后加2~3滴0.5%二苯胺,观察颜色变化结果。

阳性反应的结果:在点滴板中间是深蓝色,最低检测限是0.05%。

1.2 脲醛聚合物的快速定性检测
快速检测脲醛聚合物有两种方法。

第1种方法适用范围:动物性原料和植物性原料
动物性原料脱脂(植物性原料不用脱脂),样品过45目筛,加6~8滴0.5%变色酸到点滴板上,取一些筛下样品也加到点滴板上,往点滴板上再加0.5%变色酸,观察颜色变化结果。

阳性反应的结果:在5~10min内,出现蓝紫色,最低检测限是0.15%。

第2种方法适用范围:仅动物性原料
称3g样品加到50mL带盖离心管中,加35mL煮沸的20% NaOH溶液,用涡旋混合器混匀,静置大约5min,倒掉上清液,留下底部沉淀,加35mL蒸馏水,混合,静置5min,倒掉上清液,反复洗3~4次,洗到沉淀无色(白到灰色),用蒸馏水将沉淀转移到10mL的试管中,吸出试管内大部分水,仅留1cm高的水。

加1mL 0.5%变色酸,混匀,再观察颜色。

阳性反应的结果:蓝紫色,最低检测限是0.25%。

1.3 生物蛋白精的快速定性检测
蛋白精又叫蛋白胨,是一种脲醛树脂聚合物(CO(NH2)2+CH2O),主要用于工业生产。

生物蛋白精的最大特点是含氮量高(可达66%)、价格低。

在饲料中少量掺入就可以迅速提高其“蛋白”含量。

如果在饲料中,每增加1个百分点的生物蛋白精,会使用“凯氏定氮法”测定的表观粗蛋白质虚涨4个以上的百分点。

生物蛋白精添加到饲料中,由于其本身没有任何营养价值,不能被动物所吸收,它们降低了饲料中真蛋白质的含量,影响了动物性能,甚至可能对动物产生危害。

据有关研究表明,动物若食用含有较高浓度“蛋白精”的饲料后,可以使动物发生肾衰竭并导致死亡。

生物蛋白精的检测方法:将样品过45目筛,取一些筛下样品加点滴板上,加0.5%二苯胺,覆盖住样品,在显微镜几倍镜下观察结果。

阳性结果:漂浮着灰白色小颗粒,有时偏黄色,不光滑,表面好像是鱼子样的小突起状的晶体,最低检测限是0.1%。

1.4 三聚氰胺的快速定性检测
三聚氰胺俗称蜜胺,又称氰尿酰胺、三聚氰酰胺,是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,是重要的尿素后加工产品,其含氮量达66.88%左右(折合粗蛋白含量418%)。

三聚氰胺是一种用途广泛的有机化工原料,但在饲料中添加,不仅对养殖业具有不良影响,还对人类健康存在着严重威胁。

三聚氰胺本身在剂量很低时是无毒的,但当和三聚氰酸结合后能够生成不溶于水的异氰尿酸蜜胺盐,易引起肾结石,并具有致命性。

快速检测三聚氰胺有两种方法。

第1种方法:(0.5%二苯胺/奈斯勒试剂法)
样品过45目筛,取一些筛下样品加到点滴板上,加0.5%二苯胺,覆盖样品,在显微镜镜下用低倍镜观察,三聚氰胺是乳白色颗粒。

通过下面的方法确定三聚氰胺阳性结果:
从脱脂的筛下样品中挑出疑似的晶体,夹到点滴板上。

加2滴75%H2SO4 ,等1min,再加5滴奈斯勒试剂,等3~5min,在显微镜下观察颜色变化结果,阳性反应的结果:亮橙色颗粒,最低检测限是0.05%。

第2种方法:(三聚氰酸法)
仅动物性原料
粗称10g样品于100mL小烧杯中,加30~40mL石油醚,充分搅拌,浸泡萃取15min左右。

然后把上清液倒掉,用滤纸过滤,收集脱脂样品。

把脱脂样品放通风橱中,把石油醚挥发干净。

把样品过45目,称取4g样品,将筛下样品加到一个离心管中,加10mL 40%乙醇,盖上盖子,用震荡器震荡5min,150r/s,离心,3 000r/min,10min,用滤纸过滤,加1mL饱和三聚氰酸溶液,观察反应结果。

阳性结果:白色雾状沉淀。

最低检测限:鱼粉/鱼头粉/鸡肉粉/猪肉粉 0.03%;鱿鱼肝脏粉 0.05%。

仅植物性原料粗称5g样品,样品过45目,将筛下样品放到一个试管中,加高氯仿至管口部位,萃取3~5min后,倒掉试管中的上浮物和高氯仿,管身倾斜将管内壁的固体物一并倒弃,仅留2cm高氯仿即可。

再倒入高氯仿少许,转动清洗内壁
面,片刻后将上面的液体吸出弃去,可反复清洗3~4次,管底部仅留1mL或更少液体。

将试管放烘箱或沸水浴上加热将氯仿挥发掉,沉淀干燥,将试管冷却到室温,加2mL蒸馏水。

加1mL饱和三聚氰酸溶液(60℃左右),观察反应结果。

阳性结果:白色雾状沉淀物产生,最低检测限:菜籽粕/小麦谷朊粉 0.03%;玉米蛋白粉/豆粕/小麦面粉 0.05%。

2 检测结果
测结果见表1。

表1 蛋白饲料样品中非蛋白氮检测结果
3 讨论与结论
在传统方法中尿素、铵盐、硝酸盐-亚硝酸盐和尿醛聚合物的检测用分光光度比色法。

三聚氰胺检测方法有试剂盒检测法(ELISA)、液相检测法和气质检测法。

这些标准方法操作繁琐、消耗大、试验周期性长。

本文中非蛋白质含氮化合物快速检测方法结合了感官检测、显微镜检测、物理、化学和生物学检测,各种检测方法
相辅相成。

在实践中经过多次和传统的标准常规检测方法对比,上述检测方法更简便、快速、经济、实用、检测结果直观、技术易掌握,甚至非专业人员都可掌握,应大力提倡。

作为饲料工作者尤其检验人员应对各种饲料原料生产工艺流程有一定了解,用上述方法快速检测原料是否掺有非蛋白氮时,还应注意其生产工艺中是否有残留非蛋白质含氮化合物,在实际快速检测过程中还应注意原料的假阳性问题,如玉米酒精糟中的铵盐的假阳性和加浆玉米皮中的铵盐的假阳性,一旦遇到此现象,一定要通过原料镜检、试剂鉴别、对比试验和空白试验来共同决定。

用0.5%二苯胺检测生物蛋白精和三聚氰胺时,在显微镜下镜检时要注意两者的区别:两者都为白色颗粒,但是生物蛋白精要比三聚氰胺发白,且用探针在显微镜下拨动颗粒时,三聚氰胺为完整颗粒不会散开,而生物蛋白精用探针拨动时会散开。

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