耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因检测与耐药性分析
金黄色葡萄球菌耐药机制及其防控策略

金黄色葡萄球菌耐药机制及其防控策略金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种广泛存在于人体及环境中的细菌。
它是导致多种疾病的病原体之一,包括皮肤感染、呼吸道感染、外伤感染等。
金黄色葡萄球菌的耐药性日益严重,对公众健康构成了巨大威胁。
本文将介绍金黄色葡萄球菌耐药机制及其防控策略。
一、金黄色葡萄球菌的耐药机制1. 静止叶酸代谢通路的变异:金黄色葡萄球菌耐药的一个重要机制是对静止叶酸代谢的变异。
叶酸是细菌合成必需的一种物质。
金黄色葡萄球菌可以通过特定的基因组突变来降低叶酸的合成,从而减少抗生素的作用。
2. 靶点突变:靶点突变是导致金黄色葡萄球菌耐药的另一个重要机制。
抗生素常常通过与细菌的特定靶点结合,干扰蛋白质的合成或代谢过程。
金黄色葡萄球菌能够通过突变靶点来改变抗生素与目标的互作,使其失去对抗生素的敏感性。
3. 抗生素的降解与排出:金黄色葡萄球菌可以通过产生降解酶来降解抗生素,从而减少抗生素在细胞内的浓度。
此外,它还可以通过质膜泵把抗生素从细胞内排出,使其无法起到抑制细菌生长的作用。
二、金黄色葡萄球菌的耐药机制与临床应用1. 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA):MRSA是一种对青霉素类抗生素甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌。
它广泛存在于医院和社区中,是造成院内感染和社区感染的主要致病菌之一。
MRSA的耐药机制包括靶点突变、产生酶类降解和抗生素的排出。
2. 耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA):VRSA是一种对万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌。
万古霉素是一种用于治疗耐药细菌感染的强效抗生素。
VRSA的耐药机制主要是通过改变细菌表面的结构,使其难以与万古霉素结合,从而降低抗生素对金黄色葡萄球菌的杀菌效果。
三、金黄色葡萄球菌的防控策略1. 加强监测和诊断:及时监测金黄色葡萄球菌的耐药性和流行情况,做好耐药菌株的诊断工作,为采取有效的防控措施提供科学依据。
2. 合理使用抗生素:合理使用抗生素是防控金黄色葡萄球菌耐药的重要措施。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 检测(荧光PCR法)

汇报人:XX
01
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04
荧光PCR法是一种 基于DN聚合酶链 反应的检测方法
荧光PCR法通过荧 强弱来定 量分析DN序列
荧光PCR法具有高 灵敏度、高特异性 、快速、简便等优 点
灵敏度高:能够检测到极低浓度的MRS 特异性强:能够准确区分MRS和其他细菌 快速简便:操作简便,检测时间短 结果准确:检测结果准确可靠,重复性好
护公众健康
灵敏度高:荧光PCR法具有 较高的灵敏度,能够检测到 极低浓度的MRS
特异性强:荧光PCR法具有 较高的特异性,能够准确区 分MRS和其他细菌
快速高效:荧光PCR法具 有快速高效的特点,能够在 短时间内完成MRS的检测
自动化程度高:荧光PCR法 可以实现自动化操作,提高 检测效率和准确性
荧光PCR法在MRS检测中的前景展望:提高灵敏度和特异性,提高检测准确性和 可靠性,降低检测成本,提高检测效率,推动MRS检测技术的发展。
汇报人:XX
临床诊断:用于检 测MRS感染,快速 准确
科研研究:用于研 究MRS的传播、变 异和耐药性
公共卫生:用于监 测MRS的流行病学 和防控策略
食品检测:用于检 测食品中的MRS污 染,保障食品安全
样本类型:血液、 尿液、痰液等
采集方法:无菌操 作,避免污染
保存条件:低温、 干燥、避光
处理方法:离心、 过滤、稀释等
样品采集:采集患者样本,如血液、痰液等
核酸提取:使用核酸提取试剂盒提取样本中的DN或RN
荧光PCR反应:将提取的核酸与荧光PCR反应试剂混合,进行 PCR反应
荧光PCR检测:使用荧光PCR检测仪检测反应产物,判断样本 中是否存在MRS
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药机制分析

1.3 MRSA 检测:采用纸片扩散法(KB 法)与最低 抑菌浓 度 法 (MIC 法)两 种 方 法 进 行 MRSA 检 测。 KB法使 用 头 孢 西 丁(FOX)药 敏 纸 片 检 测 MRSA, 药敏结果 判 读 参 照 美 国 临 床 实 验 室 标 准 化 委 员 会
(CLSI)2017 版 抗 微 生 物 药 物 敏 感 试 验 执 行 标 准 ,放 在(35±2)℃ 的 专 门 培 养 箱 里 面 48h 之 后 ,测 出 纸 片 附近的抑菌 圈 直 径,比 如:FOX 纸 片 直 径 ≤21 mm, 即判 为 MRSA,FOX 纸 片 直 径 ≥22 mm 者 判 为 MSSA,介于二者之间可进行 MIC法筛选。 1.4 mec基 因 检 测:①DNA 模 板 的 提 取:在 高 压 灭 菌 的 试 管 内 将 待 测 菌 株 用0.9% 氯 化 钠 注 射 液 调 到2.0(1.8~2.2)麦 氏 单 位 菌 悬 液,沸 水 中 煮 15 min,吸取1000μL 菌悬液于编好号的35个 EP 管
为:80V90 mA、连 上 电 源,在 恒 压 情 况 下 电 泳,之 后,通过凝胶成像系统来得到成像,且将结果存留。 1.5 基 因 测 序:采 取 mec 基 因 且 阳 性 较 好 的 菌 株,将其 PCR 产 物 送 英 潍 捷 基 (上 海)贸 易 企 业 做 测序,之后,将得到 的 数 据 和 GenBank 里 面 的 相 关
1 材 料 与 方 法 1.1 菌株来 源:实 验 所 用 菌 株 来 源 山 西 医 学 科 学 院 、山 西 大 医 院 从 临 床 标 本 分 离 的 剔 除 重 复 与 污 染
文献[3],由 上 海 生 工 生 物 工 程 公 司 合 成。 引 物 序 列 见 表 1。
杀白细胞素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性分析

It a d,a u r 0 2, 13 No 1 n L bMe Jn ay 21 Vo . 3, . J
—
・ 23 ・
—
・
论
著 ・
杀 性 分 析
s s e tb lt he M RSA ta n o 1 i ds o ntbi is wast s e a if son m e ho PV L n a t c e l — u c p iiiy oft s r i s t k n fa i otc 4 e t d by ag r df u i t d. ge e w sde e t d by po y
性 M R A 对 氨 基 糖 苷 类 、 福 平 、 环 素 、 霉 素 、 丙 沙 星 、 胺 硫 霉 素 等 抗 茵剂 全 部 耐 药 , 盐 酸 克 林 霉 素 的 耐 药 率 为 9 . ; S 利 四 红 环 亚 对 55
P vL基 因 阴性 MRS 对 上 述 抗 茵剂 的耐 药性 虽 比 P A VL基 因 阳性 MR A 轻 , 耐 药 率 也 在 8 . 以上 , S 但 80 2组 间耐 药性 比 较 , 异 差 有 统 计 学意 义( P< 0 0 ) 对 复 方 新 诺 明 敏 感 率 在 9 . 以 上 , .5 。 00 未发 现 对 万 古 霉 素 耐 药株 。 结论
Ca gz o s t lo Tr diin lCh n s n se nMe iie, n z o Hee 6 0 1 Chn ) n h uHopi f a to a ieea d Wetr d cn Ca g h u, b i0 1 0 , i a a
Abta tOb et e Tosu y t erssa c fp no - aeielu o ii PVL) p st emehcl nr ssa tS a h lc c u sr c : jci v t d h e itn eo a tn v lt e k cdn( n o iv t iii—e itn tp yo o c s i l
41株金黄色葡萄球菌耐药性分析及PVL基因检测

安徽 合肥
பைடு நூலகம்
春 , 王 中新 , 方
欣。
2 3 0 6 0 1 )
( 1 . 安徽 省疾病预 防控 制中心微 生物检验 室, 安徽 合肥
2 3 0 6 0 1 ; 2 . 安徽 医科大学第一 附属 医院检 验科 ,
2 3 0 0 2 2 ; 3 . 安徽 医学高等专科 学校 , 安徽 合肥
摘要: 目的
了解临床分离金葡菌对常用抗生素的耐药性和杀 白细胞 毒素 ( P V L ) 基因携带情况 。方法
采用头孢 西 丁纸 片扩
散法检测耐 甲氧西林金黄 色葡 萄球 菌( M R S A ) , K — B 法检测 临床分离 的 4 l 株 金葡菌对常 用抗 生素 的敏感 性 , P C R法检测 m e c A 基 因和 P V L基因携带情况。结果 4 1株金 葡菌 中 MR S A占 5 1 . 2 %, MR S A对克林霉素 、 红 霉素 、 氨基糖苷类和喹诺酮类耐药率 明显高 于甲氧西林敏感金黄色 葡萄球菌 ( MS S A) , MR S A和 M S S A对复方新诺 明敏感率 分别为 9 0 . 5 %和 9 5 %, 未发现 对万古霉
0 f S t a 1 c I h V l 0 c 0 c c u s a ur e u s
L I Ch u n , W ANG Z h o n g - x i n , FANG Xi n
( 1 . T h e Mi c r o b i o l o g y L a b o r a t o r y o fA n h u i C e n t e r f o r D i s e a s e C o n t r o l a n d P r e v e n t i o n , H e f e i , A n h u i 2 3 0 6 0 1 ; 2 . T h e C l i n i c a l ab L o r a t o r y fF o i r s t A f i f l i a t e d H o s p i t a l fA o n h u i Me d c i a l U n i v e n i t y , H e f e i , A n h u i 2 3 0 0 2 2;
62株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药分析

nu irgrs t t f S . h eu f h rgsn ivt t t r a t w : t c c n ( 8 7 % ) l o o a i lhd ei a A T er l o ed e s i y e e s e o s t r yl e 3 . 1 、 vf x c u s n o MR se t u t i s a f l ea i e l n
存在使 M S R A呈 现 多 重 耐 药性 , 引 起 广 大 医 务 人 员 的 高 度重 视 。 应
mc eA基因系 M A所 特有 , S 它的
【 关键词 】 耐甲氧西林金黄色葡萄球 菌 ; 耐药性 ;eA基 因 mc 【 中图分类号】 4 6 5 R 4 . 【 文献标识码】 A 【 文章编号 】045 1 (0 0 0 —100 10 — 1 2 1 ) 30 6 -3 5
重 耐 药 性 及 检 测 MR A所 带 的 meA 基 因 , S c 以指 导 临 床 合 理 用 药 。 方 法 的 mc eA基 因检 测 采 用 P R扩 增法 。结 果 C 药物 敏感 试 验 采 用 K—B法 ;M S RA 6 2株 MR A呈 现 多 重 耐 药 性 , 万 古 霉 素 、 考 拉 宁 、 奈 唑 烷 S 仅 替 利
没有 出现耐药 , 它耐 药率 由高 到低依 次 为: 霉素 10 、 其 青 0 % 红霉 素 9 . 3 、 0 3 % 环丙 沙 星 9 . 6 、 0 1 % 庆大 霉素 8.1 、 3 6 % 左氧氟沙星 7 . 8 、 霉素 7 .1 、 8 5 % 克林 54 % 复方磺胺 5 .7 、 8 0 % 四环素 3 . 1 、 霉素 2 . 5 。8株 87% 氯 29% MR A都检测 到 m c S eA基因 , 大约在 53b 位置产生 了相 同的条带 。结论 3 p
耐甲氧西林金葡菌
5 浓度梯度(Etest)法
是1988年AB Biodisk公司推出, 在含20 g/L NaCl的MH琼 脂平板上, 贴上苯唑西林的试条, 菌液调至0.5~1麦氏 浊度, 35°C孵育24 h, 直接读取MIC值。MIC<2 μg/ml 为敏感, >4 μg/ml为耐药。Etest法结合了纸片扩散法 和肉汤稀释法的优点, 长塑料条含有连续的呈指数梯度 变化的苯唑西林(0.016~256 μg/ml), 故在检测低水平 或中等程度耐药的MRSA时结果更为准确。Novak[11]等 报道, 用Alamar法和Etest法对127株MRSA的检测比较, 两者结果相关较高, 用Etest法检测127株MRSA, 其中93 株MIC>256 μg/ml, 28株在6~256 μg/ml, 检出率达 96%, Etest法具有精确、可靠、稳定性好的特点, 但缺 点是价格昂贵。
2 获得性耐药
是质粒介导的耐药。某些菌株通过耐药因子产生大量β内酰胺酶, 使耐酶青霉素缓慢失活, 表现出耐药性[7], 多为临界耐药。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分型 MRSA分型对追踪传染源,研究型别与感染种类,耐药性的关 系有重要作用。国外开展较早的噬菌体分型,将待测菌于肉 汤中,35°C孵育6 h,涂于分型琼脂平板上,待干后将23种 噬菌体注入琼脂平板中的小方格内,再置35°C孵育6 h后移 至室温过夜观察结果。用4组23种噬菌体,将MRSA分为4群, 一般以Ⅰ群为最多[8],也有报告以Ⅲ群为多。噬菌体分型 结果常不满意,日本小粟 子证实有29.3%菌株不能分型,且 重复性差,不宜用于流行病学调查。质粒图谱分型较为可靠, 可分为18个型,能准确地分析菌株之间的相关性,将流行菌 株与非流行菌株加以区别。国内MRSA广泛存在分子量为1.6 Md、1.8 Md及2.67 Md的质粒,不同地区和不同医院会有特殊 质粒带。免疫印迹分型法将MRSA分为9个型,以B.C型为最常 见,各型含有特征性的分子带,该法比较稳定。染色体限制 性内切酶分析可识别病原体DNA链上特异位点及核苷酸序列, 能从基因水平显示病原体特征,MRSA还可用血清学、凝固酶、 耐药谱等方法分型。现在Southern印迹法也逐渐运用于MRSA 的分型。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析和mecA基因检测
耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)是医院和社区感染的重要病原菌。
自20世纪90年代初起MRSA检出率有逐年上升趋势,已引起全世界重视。
MRSA不仅对β内酰胺类抗生素耐药,还常对喹诺酮类、氨基糖苷类和大环内酯类等抗菌药物耐药。
由于其多重耐药性,易造成医院感染的暴发流行,全身感染的病死率高达50%以上。
已成为临床抗感染治疗的一大难题[1]。
为正确掌握临床分离MRSA耐药性,给临床用药提供参考,我们分析了太原地区3所综合性医院临床分离的101株MRSA来源、分布、耐药监测情况并对其进行了mecA基因检测。
1材料和方法1.1菌株来源:收集2007—2008年太原地区3所综合性医院(山西省人民医院、山西医科大学第一医院、山西医科大学第二医院)临床分离的MRSA101株,剔除同一患者相同部位的重复菌株。
来源于住院和门诊患者的各类临床标本,包括痰、导管末段、血液、脓液、脑脊液、伤口分泌物、引流液、穿刺物等。
1.2主要试剂与仪器:金黄色葡萄球菌凝集试剂Slidex Staphplus,APIStaph葡萄球菌鉴定试条,VITEK-60全自动微生物分析系统均为法国生物梅里埃公司产品;药物敏感实验培养基为MH培养基购自天津金章生物技术公司现成品;抗生素药敏纸片为Oxoid公司产品。
聚合酶链反应(PCR)扩增所需试剂均为上海生工工程公司产品。
1.3药敏实验:采用纸片扩散法(Kirby-Bauer法)进行。
质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923。
药敏实验结果按美国临床实验室标准化委员会(CLSI)标准判断结果,采用Whonet5.4软件统计分析数据。
1.4MRSA检测:根据CLSI推荐的头孢西汀纸片扩散法检测。
应用标准的纸片扩散法实验条件,金黄色葡萄球菌孵育18h,使用反射光阅读头孢西汀抑菌圈直径。
判断标准是若抑菌圈直径≤21mm判断为MRSA。
抑菌圈直径≥22mm,判断为MSSA。
1.5mecA基因检测,用PCR法。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型与耐药性研究
[] 6漆
坚, 程
献 . 绿 假 单 胞 菌 耐 药 性 分 析 [ ] 中华 医 院 感 染 学 铜 J.
杂 志 ,0 7 1 (0 :2 5 2 0 ,7 1 ) 1 8 .
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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中 国实 验 诊 断 学
21 0 2年 7月
第 1 6卷
第 7期
—
11 5 一 9
念 珠菌感 染 主要 危 险 因素 , 其 耐 药 性 的分 析 有 助 对
于 肺部 真菌感 染 的诊 治[ 1 。
[] a e F re An rl ,ta. ni trasc tdp e — 4 B u r T, errR, gi e 1Ve tao-soi e nu T lJ l - a mo i: cdn er kfco n . co M o y[] S m i epi nai iec ,i atr dmi b g J . e R s n s a r n r
ge o rvnin J . eprC r,0 5 5 :2 . i frpee t  ̄] R si ae2 0 ,0 7 5 s o [] 3曹 玉 , 伟 , 孙 冷 萍 , I U 呼 吸 机 相 关 性 肺 炎 病 原 菌 的构 等.C
新疆乌鲁木齐地区PVL阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性检测
摘 要 :目 的 了解 乌鲁 木 齐地 区杀 白细 胞 素 ( P VL ) 阳性 耐 甲氧 西 林 金 黄 色 葡 萄 球 菌 ( MR S A) 的耐药情况 , 指 导 临 床 合 理 用 药 。 方 法 采 用 P C R法 进 行 P VL基 因 的 检 测 ; 采 用 Ki r b y - B a u e r 法进行 药敏试验 , 分析其耐药性 。
中 图分 类 号 : R3 7 8 . 1 文献标识码 : A 文章编号 : 1 0 0 9 — 5 5 5 1 ( 2 0 1 3 ) 0 3 — 0 3 3 0 — 0 4
Dr u g r e s i s t a n c e a na l y s i s o f me t hi c i l l i n — r e s i s t a n t s t a p hy l 0 c 0 c c u s a u r e u s
第 3 6卷 第 3期 2 0 1 3年 3 月
新 疆 医 科 大 学 学 报 J o u r n a l o f Xi N i a n g Me d i c a l Un i v e r s i t y
V0 l | 3 6 No .3
Байду номын сангаасMa r . 2 O13
s i s t a n c e S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s( M RS A)i n Ur u mq i f o r i mp r o v i n g c l i n i c a l t h e r a p y . M e t h o d s Th e P a n t o n — Va l e n t i n e Le u k o c i d i n g e n e P VL wa s d e t e c t e d b y p o l y me r a s e c h a i n r e a c t i o n( P CR)m e t h o d s a n d t h e a n t i mi —
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因 阳性 菌株 感 染 患 者 的 临 床 资 料 进 行 分 析 ; VI TE K 2 一 c o mp a c t 全 自动微 生 物 测 试 仪 进 行 药 敏 试 验 。结 果
4 0株 MR S A检 出 7
株P VL基 因 阳 性 , 阳性 率 1 7 . 5 , P VL基 因 阳性 菌株 所 致 的感 染 分 别 为 坏 死 性 皮 肤 软 组 织 感 染 3例 , 血 流 感 染 3例 和乳 腺 脓 肿 1 例 。MRS A 携带 或 不 携 带 P VL基 因菌 株 的药 敏 试 验 结 果 有 所 不 同 , 未 检 出 对 万 古 霉 素 不 敏 感 菌 株 。结 论 MR S A 携 带 或不携带 P VI 基因对抗菌药物敏感性有差异 , 本 地 区 MR S A — P V L基 因 阳性 率 较 高 , 应加强监测。 关键词 : 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 ; 社 区 获 得 性 MR S A; 杀 白细胞 毒 素 ; 耐药性 ; 实时荧光 P C R
中图分类号 : R 3 7 8 . 1 1 文献标志码 : A 文章编 号 : 1 0 0 9 - 7 7 0 8 ( 2 0 1 3 ) 0 4 — 0 2 8 9 - 0 4
De t e c t i o n o f pa nt o n - v a l e n t i n e l e u k o c i d i n g e ne a n d a na l y s i s o f a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e
叶 晓涛 , 卢 月梅 , 马焕 丽 , 袁 文斌 , 张 旭 , 张 丽玲 , 黄衍 锋 , 刘雄伟 , 罗 丹
摘要: 目的 采 用 实 时荧 光 P C R检 测 耐 甲 氧西 林 金 葡 菌 ( MR S A) 杀 白细胞素 ( P VL ) 基因, 并 分 析 其 对 抗 菌 药 物 敏感 性 , 指 导 临床 合 理 用 药 。方 法 采用双重实时荧光 P C R技术对血液 和脓液 分离 的 4 0株 MR S A进 行 P V L基 因检 测 , 并对 P VI 基
i n me t hi c i l l i n — r e s i s t a n t Sf 口 p Z D c o c c a u r e us
Y E Xi a o t a o,L【 ,Y u e me i ,M A Hu a n l i ,YUAN We n b i n,ZH AN G Xu,ZH ANG Li l i n g ,H U ANG Ya h —
l i n - r e s i s t a n t S 口 p^ Z 0 f D c c “ s a u r e u s .Th e a n t i mi c r o b i a 1 s u s c e p t i b i l i t y wa s a l s o t e s t e d f o r t h e s e p a t h o g e n s f o r r e a s o n a b l e c l i n i c a l
中 国 感 染 与 化疗 杂 志 2 0 1 3年 7月 2 O日 第 1 3卷 第 4期 C h i n J I n f e c t C h e mo t h e r , J u l y 2 0 1 3 ,Vo l 1 3 , No .4
28 9
・
论 著 ・
耐 甲氧 西林 金 黄 色葡 萄球 菌杀 白细胞 素 基 因检 测 与 耐 药 性 分析
p r e s c r i p t i o n .M e t h o d s A t o t a l o f 4 0 M RS A s t r a i n s we r e i s o l a t e d f r o m b l o o d a n d p u s .Th e M RS A s t r a i n s c a r r y i n g Pa n t o n - Va l e n t i n e l e u k o c i d i n g e n e( P VI 一 M RS A )we r e i d e n t i f i e d b y d u p l e x r e a l t i me P CR. Th e p a t i e n t s c a r r y i n g P VL— M RS A we r e s u r — v e y e d .An t i mi c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g wa s t e s t e d wi t h VI TEK2 一 Co mp a c t s y s t e m. Re s u l t s A t o t a l o f 7( 1 7 . 5 ) PVL —
Ho s pi t a l o f S h e n z h e n,S h e n z h e n 5 1 8 1 1 6,Ch i n a )
Hale Waihona Puke Ab s t r a c t : Ob j e c t i v e We d e v e l o p e d a r e a l — t i me P CR a s s a y f o r d e t e c t i o n o f p a n t o n - v a l e n t i n e l e u k o c i d i n( PVL)g e n e o f me t h i c i l —
f e n g,L J U Xi o n g we i ,L U O D a n .
( De p a r t me n t o f Me d i c a l L a b o r a t o r y。L o n g g a n g Di s t r i c t C e n t r a l