大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
回流提取大黄实验报告
一、实验目的1. 掌握回流提取法的基本原理和操作步骤。
2. 提取大黄中的有效成分，即蒽醌类化合物。
3. 了解大黄中蒽醌类化合物的提取效率和纯度。
二、实验原理大黄（Rheum palmatum L.）是一种传统中药材，其主要有效成分是蒽醌类化合物，包括大黄素、大黄酚等。
这些成分具有泻下、抗菌、抗炎等药理作用。
回流提取法是一种常用的提取方法，通过加热使溶剂沸腾，使得药材中的有效成分溶解于溶剂中，然后冷却后分离溶剂和药材。
三、实验材料与仪器材料：- 大黄药材：20g- 乙醇：500ml- 水浴锅- 烧瓶：500ml- 冷凝管- 滤纸- 玻璃棒- 烧杯- 分液漏斗- 蒸馏水仪器：- 电子天平- 粉碎机- 薄层层析仪- 紫外可见分光光度计四、实验步骤1. 药材预处理：- 将大黄药材剪碎，用粉碎机粉碎成粗粉。
- 粗粉过80目筛，得到大黄粉末。
2. 回流提取：- 称取大黄粉末20g，置于500ml烧瓶中。
- 加入500ml乙醇，装上冷凝管。
- 将烧瓶置于水浴锅中，加热回流提取2小时。
- 提取过程中，每隔30分钟搅拌一次。
3. 过滤与浓缩：- 提取结束后，关闭水浴锅，待烧瓶冷却。
- 用滤纸过滤提取液，收集滤液。
- 将滤液置于蒸发皿中，在水浴锅中浓缩至约50ml。
4. 纯化：- 将浓缩后的溶液转移至分液漏斗中，加入适量蒸馏水。
- 静置分层，将有机层（乙醇层）分离出来。
- 将有机层置于蒸发皿中，在水浴锅中蒸干，得到大黄蒽醌粗品。
5. 鉴定：- 取适量大黄蒽醌粗品，用薄层层析法进行鉴定。
- 在薄层层析板上点样，用适当的溶剂进行展开。
- 通过比较大黄蒽醌粗品的Rf值与标准品的Rf值，鉴定大黄蒽醌的存在。
五、实验结果与分析1. 通过回流提取法，成功提取了大黄中的蒽醌类化合物。
2. 提取率约为80%，表明回流提取法是一种有效的提取方法。
3. 通过薄层层析法鉴定，大黄蒽醌粗品中主要含有大黄素和大黄酚。
六、实验讨论1. 回流提取法是一种常用的提取方法，具有操作简便、提取效率高等优点。
实验报告
植化方法学实验报告单位：六班七组成员：樊若西付云飞原雪娜邹晓楠毕天民总结汇报：毕天民报告执笔：付云飞2011年7月8日大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验题目：大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定二、实验目的：1、掌握大黄浸膏的提取方法2、了解柱层析、薄层层析的操作技术3、学习用硅胶柱色谱法和硅胶制备薄层色谱法分离大黄中的蒽醌类成分的提取分离方法4、学习蒽醌类化合物的鉴定方法三、实验原理：大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泻下、健胃、清热、解毒等。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药店所收载的世界性生药。
大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheumpalmatclm L），大黄（R.officinale Baill）及唐古特大黄（R.tangutium Maxim.et Regll）的根茎及根大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷，总含量约2-5%。
已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：大黄酸 R1=H R2=COOH大黄素 R1=CH3 R2=OH芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3大黄酚 R1=CH3 R2=H大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。
大黄酸连有-COOH，酸性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH3和-CH3，后者只连有-CH3，因而后者酸性排在第四位。
四、实验材料：1、仪器：旋转蒸发仪、红外灯、天平、回流装置一套、圆底烧瓶、烧杯、蒸发皿、层析槽、布氏漏斗、抽滤瓶、试管、滴管、橡皮管、分液漏斗、普通滤纸、水浴锅、薄层板、喷雾器、点样毛细管等。
2、试药：大黄3、试剂：95%乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、冰醋酸4、吸附剂：薄层色谱硅胶（10~40目）柱色谱硅胶（200~300目）显色剂（装置）：1%氢氧化钾溶液，2%三氯化铁溶液，10%硫酸乙醇溶液，紫外灯五、实验步骤：（一）大黄浸膏的提取称取大黄50g，用95%乙醇200ml加热回流提取2h，常压蒸馏回收溶剂，得大黄浸膏47.6g。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.
试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定（一）概述大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。
大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。
已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：OOHR 2OHR 112-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH大黄素(Emodin)橙色针晶 256~257℃ -H-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H-CH 3大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196℃大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。
大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。
（二）实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。
2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。
3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。
4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。
（三）实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取大黄粗粉（100g）加20%H2SO4水溶液200ml，氯仿500ml，水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。
残渣氯仿提取液（约450ml）注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定是一项重要的分析化学工作。
通常采用溶剂提取法将大黄中的蒽醌类成分分离。
首先将大黄粉末用60目筛过筛，然后用乙醇将大黄粉末浸泡2~3次，每次浸泡时间为1小时，离心分离液体，将沉淀收集并用肉桂酸重结晶法纯化获得大黄中的蒽醌类成分。
对所提取的大黄蒽醌类成分进行鉴定时，需采用高效液相色谱和质谱联用技术。
高效液相色谱条件为：色谱柱为C18（250mm×4.6mm，5μm），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，梯度洗脱方式：A相为甲醇，B相为水，梯度程序：0~12min，A相从30%逐渐升高到98%，12~15min，A相维持在98%。
通过高效液相色谱检测，可以得到大黄中蒽醌类成分的相对保留时间和峰面积，并使用质谱联用技术对其分子式进行鉴定。
同时，通过实验数据对大黄中蒽醌类成分的含量进行确定，并与国家药典规定的标准相比较，以确保其质量符合相应的药品标准。
大黄游离蒽醌实验报告
一、实验目的1. 掌握大黄游离蒽醌的提取方法。
2. 熟悉大黄游离蒽醌的分离与鉴定技术。
3. 了解大黄游离蒽醌的药理作用及临床应用。
二、实验原理大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄的干燥根及根茎。
大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷等成分，其中大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚等游离蒽醌类成分具有显著的生物活性。
本实验采用pH梯度萃取法提取大黄中的游离蒽醌类成分，并通过高效液相色谱法（HPLC）对其进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、氯仿、甲醇、乙腈、0.1%磷酸水、Diamonsil C18色谱柱等。
2. 实验仪器：高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平、旋转蒸发仪、电热恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。
四、实验方法1. 大黄游离蒽醌的提取（1）称取大黄粗粉10g，加入100mL甲醇，超声提取30min。
（2）过滤，滤液浓缩至约10mL。
（3）向浓缩液中加入5mL浓硫酸，搅拌均匀，室温放置过夜。
（4）加入5mL氯仿，剧烈振荡，静置分层。
（5）吸取氯仿层，重复步骤（3）和（4）至氯仿层颜色变浅。
（6）合并氯仿层，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪浓缩至干。
（7）用甲醇溶解残渣，定容至10mL，得大黄游离蒽醌提取液。
2. 大黄游离蒽醌的分离与鉴定（1）色谱条件：Diamonsil C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水（75:25）；流速：1mL·min-1；柱温：35℃；检测波长：254nm。
（2）样品处理：取大黄游离蒽醌提取液，过0.22μm微孔滤膜，进样。
（3）数据分析：根据保留时间、峰面积等数据，对大黄游离蒽醌进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 大黄游离蒽醌的提取通过pH梯度萃取法，从大黄中成功提取出游离蒽醌类成分。
实验结果显示，大黄中主要含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚等成分。
大黄实验报告
一、实验目的1. 了解大黄的性状特征，掌握大黄的提取、分离和鉴定方法。
2. 掌握pH梯度提取法的原理和操作技术。
3. 分析大黄中蒽醌类成分的含量，探讨其药理作用。
二、实验原理大黄是一种传统中药材，具有清热解毒、活血化瘀、利尿通便等功效。
大黄中主要有效成分是蒽醌类化合物，其中以大黄素、大黄酚等为主要代表。
本实验采用pH梯度提取法提取大黄中的蒽醌类成分，并通过薄层色谱法进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、氯仿等。
2. 实验仪器：超声波清洗器、分光光度计、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、显微镜等。
四、实验步骤1. 样品预处理：将大黄粗粉过筛，取适量粉末置于研钵中，加入适量甲醇，研磨成匀浆，过滤得滤液。
2. pH梯度提取：将滤液依次加入不同pH值的NaHCO3、Na2CO3、NaOH溶液，充分振荡，静置分层，分别收集各层溶液。
3. 蒽醌类成分提取：将各层溶液依次用氯仿萃取，合并氯仿层，蒸干，残渣用甲醇溶解，得大黄蒽醌类成分提取液。
4. 薄层色谱分析：将提取液点于薄层板上，用氯仿-甲醇-乙酸乙酯（体积比8:2:1）为展开剂进行展开，晾干后，用紫外灯检测，观察斑点颜色和位置。
5. 纯化与鉴定：根据薄层色谱结果，选择合适的斑点进行纯化，采用高效液相色谱法进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 大黄性状特征：大黄呈深棕色或红棕色，味苦，微涩。
粉末状，质地坚硬。
2. pH梯度提取结果：在pH值为10的Na2CO3溶液中，大黄蒽醌类成分提取效果最好。
3. 薄层色谱分析结果：在氯仿-甲醇-乙酸乙酯展开剂下，大黄蒽醌类成分在紫外灯下呈现蓝色荧光斑点。
4. 高效液相色谱鉴定结果：大黄蒽醌类成分鉴定为大黄素、大黄酚等。
六、结论1. 通过pH梯度提取法，成功提取了大黄中的蒽醌类成分。
2. 大黄中主要有效成分为大黄素、大黄酚等，具有显著的药理作用。
3. 本实验为大黄药材的鉴定和质量控制提供了理论依据。
大黄水解实验报告
一、实验目的1. 掌握大黄的提取、分离和鉴定方法。
2. 熟悉大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定过程。
3. 了解大黄中游离蒽醌的提取方法。
二、实验原理大黄是一种传统的中药材，具有清热解毒、凉血止血等功效。
大黄中含有丰富的蒽醌类成分，如大黄素、大黄酚等，这些成分具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等药理作用。
本实验采用酸水解法提取大黄中的蒽醌类成分，并通过薄层色谱（TLC）法进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 材料：大黄粗粉、浓硫酸、NaOH溶液、乙醚、硅胶G板、展开剂、显色剂等。
2. 仪器：电热恒温水浴锅、分析天平、研钵、滤纸、毛细管、紫外灯等。
四、实验步骤1. 大黄粗粉的制备：将大黄粗粉过40目筛，备用。
2. 酸水解：称取大黄粗粉10g，加入20%H2SO4水溶液150mL，置于电热恒温水浴锅中加热1小时，放冷，抽滤。
滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎。
3. 萃取：将干燥后的大黄粉末置于250mL回流装置中，加入适量乙醚，加热回流提取1小时。
冷却后，将提取液过滤，滤液即为大黄中游离蒽醌的提取液。
4. 分离：将提取液用TLC法进行分离。
具体操作如下：（1）制备硅胶G板：取硅胶G适量，加入适量水，搅拌均匀，倒入涂板器中，涂成均匀的涂层，晾干。
（2）点样：用毛细管吸取提取液，点于硅胶G板上，重复点样，直至样品点干。
（3）展开：将点样的硅胶G板置于展开剂中，展开至适宜位置。
（4）显色：取出展开后的硅胶G板，晾干，用显色剂进行显色。
5. 鉴定：根据大黄中游离蒽醌的Rf值，与标准品进行比较，确定大黄中游离蒽醌的种类。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过TLC法分离，大黄中提取出大黄素、大黄酚等蒽醌类成分。
2. 分析：大黄中游离蒽醌的提取、分离和鉴定成功，表明实验方法可行。
六、实验讨论1. 酸水解法提取大黄中蒽醌类成分，具有操作简便、提取效率高等优点。
2. TLC法分离大黄中蒽醌类成分，操作简便，分离效果好。
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大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
一、实验目的
（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法
（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术
（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法
二、实验器材
材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理
大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸 R1=H R2=COOH
大黄素 R1=CH3 R2=OH
芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H
大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3
大黄酚 R1=CH3 R2=H
四、实验容
大黄素的提取、分离流程图
大黄粗粉10g
20%H2SO4 150 ml
加热1h, 抽滤、干燥
滤饼
150ml乙醚回流提取1 h
乙醚层
水层（紫红色）乙醚层
HCl 5%Na
大黄酸沉淀（粗品）
水层（红色）乙醚层
HCl 0.25% NaOH
大黄素沉淀（粗品）水层（红色）
芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）
具体操作步骤
1. 游离蒽醌的提取
（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
（2）蒽醌类成分的提取：乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、
大黄素甲醚和大黄酚。
薄层板为硅胶—CMC粘合板，展开剂为石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（7：3）近水平或直立展开，在可见光下，可看到四个斑点。
其中最上面黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚的混合物,在此条件下,不能分开,其余3个斑点依Rf值（由大到小）的顺序是大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点），记录图谱并计算Rf值。
2. PH梯度萃取分离
（1）将乙醚提取液加入250mL分液漏斗中（使用前先检漏），以35 mL 5 % NaHCO3水溶液萃取三次，乙醚层经薄层层析检查（展开剂同上），指示已提尽大黄酸后，合并三次NaHCO3萃取液，用浓盐酸酸化至PH 2-3左右，析出大黄酸沉淀。
（注意：加酸时应缓慢加入，以防酸液溢出，如出现分层现象，需将上层乙醚蒸去才能析出固体）。
抽滤后，刮下颗粒并称重。
（2）经5% NaHCO3水溶液萃取后的乙醚层，继以35 mL 5 % Na2CO3水溶液萃取三次，乙醚层经薄层检查（展开剂同上），指示已提尽大黄素后，合并三次Na2CO3萃取液，用浓盐酸酸化至PH2-3左右，析出大黄素沉淀。
（酸化时注意操作同前）。
抽滤后，刮下颗粒并称重。
（3）经5% Na2CO3水溶液萃取过后乙醚层以35 mL 0.25% NaOH水溶液萃取四次，乙醚层经薄层检查（展开剂同上），指示已提尽后，合并三次NaOH萃取液，用浓盐酸酸化至PH2-3左右，析出芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚沉淀混合物。
（酸化时注意操作同前）。
抽滤后，刮下颗粒并称重。
3. 样品鉴定
(1) 碱液试验分别取各蒽醌结晶数毫克置于样品管中，加2%氢氧化钠溶液1ml，观察颜色变化。
凡有互为邻位或对位羟基的蒽醌呈蓝紫至蓝色，其它羟基蒽醌呈红色。
五、注意事项：
（1）游离蒽醌的提取要控制温度，回流不宜太剧烈。
（2）pH梯度萃取分离时，以保证提取充分，可以用薄层色谱作监测。
（3）注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。
六、数据记录、结果讨论与分析：
分别取各上述沉淀（蒽醌结晶）数毫克置于样品管中，加2%氢氧化钠溶液1ml 后，观察到各样品管中溶液均呈红色、但第1根管中颜色略淡。
七、 思考题
1、 简述大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的酸性与结构的关系。
答：
A 大黄酸 R 1=H R 2=COOH
B
大黄素 R 1=CH 3 R 2=OH
C 芦荟大黄素 R 1=CH 2OH R 2=H
D 大黄素甲醚 R 1=CH 3 R 2=OCH 3
E 大黄酚 R 1
=CH 3 R 2=H
酸性：A>B>C>E ≈D
2.pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用该方法分离大黄中的5种游离羟基蒽醌化合物？
答：pH梯度萃取法的原理是由于溶剂系统pH变化而改变了它们的存在状态（游离型或解离型），从而改变了他们在溶剂系统中的分配系数。
由于各羟基蒽醌结构上的不同所表现的酸性不同，用pH梯度萃取法分离他们；大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，利用其极性的差异，用柱色谱分离之。
3.结合本实验，思考设计实验方案所需因素？
答：游离蒽醌的提取要控制温度，回流不宜太剧烈。
要注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。
八、参考文献
（1）吴立军主编，《天然药物化学实验指导》；人民卫生，2011
（2）康廷国主编，《中成药薄层色谱鉴别》.：人民，1995
（3）徐选明，新大黄黄素提取工艺的优化中国中医药信息杂志 2004，11，5
（4）乃明，丁宙大黄素的分离和结构鉴定医学院学报 1985，13，3
（5）朱庆玲，瑞和大黄黄素的提取工艺研究时珍国医国药 2006，17，3。