弓形虫IgM酶联免疫法检测试剂盒.

弓形虫IgM酶联免疫法检测试剂盒

（TOXO IgM ELISA TEST SYSTEM）

体外诊断试剂产品编号：8Z8651M

简介：

宙斯（Zeus）公司的弓形虫IgM 酶联免疫检测试剂盒是应用酶联免疫技术定性检测人血清中的刚地弓形虫IgM 抗体的系统。目的是为急性、有活性的或近期发生的刚地弓形虫的感染提供血清学证据。本试剂盒必须结合抗弓形虫IgG抗体的方法同时使用。本产品FDA没有明确可以用于检测血液和血浆供体。本方法还未能用于怀孕妇女和新生儿的检测。

背景：

刚地弓形虫是一类分布在世界范围内的细胞内原生动物寄生虫（1，2）。虽然猫科动物是其终宿主，但该生物体却能感染几乎所有的哺乳动物和鸟类。血清学数据表明虽然不同国家的人弓形虫盛行的种类不同，但大部分的工业化国家有大约30%的人都会慢慢受到该原虫的感染，（3）。

弓形虫有三种存在形式：滋养体、包囊和卵囊（1，2）。滋养体（速殖子）在急性感染阶段是具有攻击性的形式。原虫在宿主细胞胞质中繁殖以后形成组织包囊形式，此时的包囊可以包含数千个生物体（缓殖子）。卵囊只在猫科动物的小肠上皮细胞中发育，并未在其他宿主中发现。卵囊随着猫科动物排泄的粪便排出体外，数天后发育成熟。

人类或其他动物摄取了具有包囊的生的、未加工的肉或具有卵囊的被猫的粪便污染了的食物便得到感染。一旦消化，该寄生虫便从包囊中（缓殖子）被释放出来，卵囊（孢子体）被消化酶消化并侵染小肠粘膜。寄生虫就地繁殖然后以包囊的形式转移到其他器官，包囊可以在宿主的生命中长期存在。包囊主要存在于脑、心脏和骨骼肌中。

感染刚地弓形虫的人大多数（80~90%）是无症状的（4）。感染急性弓形虫的成年人大多表现的临床症状为无症状的单结或多结淋巴结病症状，伴随淋巴结病症状还有发热、身体不适和非典型性淋巴细胞增多，症状与单核细胞增多症相同。少数宿主患者通常会出现严重的并发症，像脑炎、心肌炎或局部急性肺炎等（1）。

尽管感染刚地弓形虫对于一般寄主通常并无疾病影响，但是，对于那些患有免疫缺陷疾病的寄主却是致命的（5）。免疫缺陷的病人可以发展成具有严重传染性的弓形虫病，或弓形虫性脑炎，或者同时患上这两种病。弓形虫在艾滋病患者体内通常会侵染患者的中枢神经系统（6）。血清学证据表明，弓形虫性脑炎是艾滋病患者身上的潜在传染病，大约30%的弓形虫抗体阳性的艾滋病患者将会发展成弓形虫性脑炎（7）。

当一名血清学检测阴性的妇女在怀孕期间感染了弓形虫，该生物体便通过胎盘传送给胎儿（1，8）。胎儿感染的严重性根据感染的时期不同而有所不同，前期感染的可以导致孕妇自然性流产，或者顺利生产但新生儿有明显的疾病症状。如果在怀孕后期感染，新生儿通常会没有症状，所以不易识别（8）。

先天性感染弓形虫病的新生婴儿大约有75%是无症状的。然而，几乎所有具有潜在弓形虫病的儿童在他以后的成长过程中其视力或神经系统发育均会留下后遗症。大约80~85%的儿童发育成视网膜炎，甚至一些儿童会失明或者患上精神性运动或智力障碍。

目前，有很多种检测刚地弓形虫抗体的血清学方法作为辅助诊断急性传染或评价先前感染弓形虫的方法。常用的方法包括：Sabin-Feldman 染色法、直接凝集法、间接凝集法、乳胶凝集法、间接免疫荧光法和ELISA法（9）。

感染刚地弓形虫的患者大多数在第一周即可出现IgM抗体，并且仅存在短暂的时期（1）。检测IgM抗体的血清学方法能够帮助鉴别近期获得传染的病人（1，2，4）。

检测刚地弓形虫IgM抗体的血清学方法包括间接荧光法、免疫凝集法和ELISA法（4，9，10，11）。ELISA法最早是由Engvall和Perlman 提出的（12，13），以后，ELISA 检测系统被广泛应用于各种各样的抗原和抗体检测（14）。应用ELISA法检测刚地弓形虫是非常特异的、灵敏的和可靠的（9，11）。ELISA法在每一个测试样本中都加入了确定的目标抗体，适用于检测大量的病人样本。

IgG抗体是弓形虫IgM的高度类似物，如果它存在于标本中，会干扰IgM抗体的特异性检测。高度类似物IgG抗体可以先于IgM抗体与刚地弓形虫抗原结合，造成IgM 抗体假阴性结果（14）；同样，类风湿性因子（RF）如果与IgG特异性抗原同时存在，它可以与IgG特异结合而造成IgM抗体假阳性的结果（15）。以上两个问题可以通过在测试前去除标本中的IgG来得到解决。目前，已经有几种方法被应用于分离IgG。这些方法包括，过滤法、蛋白A吸收法、离子交换层析法和抗人IgG血清共沉淀法。

ELISA法检测原理：

宙斯公司的TOXO IgM ELISA 检测系统是针对由于感染TOXO抗原而产生IgM类抗体，并对此抗体进行检测而设计的测试系统。整个检测步骤包括三步温育过程。

1．用提供的样品稀释液稀释待测血清。样品稀释液中含有抗人IgG，它可以将样品中的IgG和类风湿因子沉淀掉，使IgM得以和弓形虫抗原反应。在样品温育过程中，特异性的IgM抗体将与免疫抗原结合。然后洗去未结合的抗体和血清中其他的成分。2．结合有过氧化物酶的羊抗人IgG（ 链），加到微孔板上温育。结合物与第一步中事先连接在板上的抗体杂交。然后洗去未反应的结合物。

3．固定在微孔板上的免疫过氧化物酶结合物与其底物溶液反应，底物水解发生颜色变化。一定时间后终止反应，读取光吸收值即可。溶液颜色的深浅与原始待测样本中的抗体浓度有关。

2.

试剂盒提供成份

每个试剂盒内包含有足够数量的下列组份，以便于能进行包装所示的试验次数。

1．酶标板。96孔12条╳8孔板，用灭活弓形虫（ RH链）抗原包被的酶标板，酶标板放置在酶标板框架上并密封在一个含有干燥剂的包装袋中。

2．结合剂。辣根过氧化物酶结合的抗人IgM（μ链）。直接使用，15ml，一瓶，白色盖子。内加防腐剂。

3．阳性对照（人血清）。0.35ml一支，红色盖子。内加防腐剂。

4．校正品（人血清）。0.5ml一支，蓝色盖子。内加防腐剂。

5．阴性对照（人血清）。0.35ml一支，绿色盖子。内加防腐剂。

6．样品稀释液。30ml，一瓶（蓝色盖子）。溶液中含有Tween-20、BSA、磷酸盐缓冲液（PH7.2±0.2）和抗人IgG(γ链)，。紫色溶液，直接使用。注：使用前充分混匀。

（产品编号：005M）。内加防腐剂。

7．TMB。15ml一瓶，琥珀色瓶子（琥珀色盖子），含有TMB，直接使用。溶液中含DMSO ≤15%（W）。

8．终止液。15ml一瓶，红色盖子，溶液中含有1 M H2SO4，0.7M HCl。直接使用。9．浓缩洗板液（10╳浓度）：1份浓缩洗板液加9份的去离子水或蒸馏水。100ml一瓶(透明盖子)，含有10╳浓度磷酸盐缓冲液（PH7.2±0.2）、Tween-20（蓝色溶液）。内加防腐剂。（注：1╳浓度的溶液PH应为7.2±0.2。）

以下溶液不是每批都有差别的，可以通用于ELISA试剂盒：TMB、终止液、洗板液。