裸鼠胶质瘤模型
人脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植双荧光模型的建立重点
Ｐｒｏｊｅｃｔｓ ｏｆＸｉａｍｅｎ（２０１３Ｓ０００１）
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脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的、预后较差 的原发性恶性肿瘤，占颅内肿瘤的５０％～６０％，即使 给予传统的手术联合放、化疗的综合治疗，低级别 胶质瘤患者的平均存活时间仅为３～５年，而高级别 胶质瘤为１～２年【”。因此，成熟可靠的动物模型，对 研究胶质瘤的发生发展以及有效的治疗，具有十分 重要的意义。目前国内外学者已经建立了多种胶质 瘤的动物模型［２－４］。其中裸鼠胶质瘤模型是发展较
ｇｌｉｏｍａｓ．
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Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍ：Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｌａｎ
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维拉帕米对裸鼠胶质瘤U251模型卡氮芥疗效的影响
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・
论著 ・
Ｉ 森医 程２１年１月 ７ 第１期 Ｉ 刍 学工 ０ ０ ２ 第１卷 ２
维拉帕米对裸鼠胶质瘤 Ｕ 模型卡 ２ ５ １
吴 小明 ，仇 有 成 ，王存祖 ２ 欧 阳琦 。 ，黄钱 焕 ，杨伟 现 ，许 慧 中 （江苏 省宜 兴市 人 民 医院 神经外 科 ，江苏 宜 兴 ２４０ ； １２ ０ 江苏 大学 附属 医 院 神 经外 科 ，江苏 镇 江 ２２０ ； １０ １ 江苏 大学 基础 医学 与 医学 技术 学 院 ，江苏 镇 江 ２ ２ １ ； １０ ３
小鼠裸鼠肿瘤动物模型ppt课件
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小鼠肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法
汇报日期
20171214JXD
Mouse model：Powerful research tool
TumorMetabolic diseaseDrug evaluation
四种肿瘤模型
人体肿瘤异种移植性肿瘤模型
移植性肿瘤动物模型
03
二、诱发性肿瘤动物模型
定义：使用致癌因素(Carcinogens)在实验条件下诱发动物发生肿瘤的动物模型。原理：利用外源性致癌因素引起细胞遗传特性异常而呈现出异常生长和高增殖活性，形成肿瘤。
诱发性肿瘤动物模型建立方法
原位诱发致癌物直接与动物靶组织或靶器官接触而诱发该组织或器官发生肿瘤。异位诱发将与致癌物接触后的动物组织或器官埋置于该动物或另一正常动物皮下而 产生的该组织或器官的肿瘤。致癌物致癌物
注射给药
皮内注射：将药液注入表皮与真皮之间。此法多用于免疫、接种、过敏试验等皮下注射：将药液注入真皮之下。
肌内注射：又称肌肉注射，当给动物注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时，常采用此种方法。
腹腔注射：腹膜面积大，药物进入腹腔后容易扩散和吸收。
静脉注射：不同动物类型应选择不同的静脉血管。
自发性肿瘤动物模型的缺点
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肿瘤发生情况参差不齐。
01
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难以短时间内获得大量肿瘤材料，耗时长，耗资大。
02
因此，自发性肿瘤很少在抗肿瘤药物的常规筛选中应用。
发生肿瘤的动物肿瘤生长速度差异大，难以评价。
裸小鼠作为移植宿主
白藜芦醇对裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长的抑制作用
-543-
● 实验研究 ●
白藜芦醇对裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长的抑制作用
胡 森 张 慧 步星耀 冯淼淼 王帮庆 王君毅 杨 斌 杨华超
【摘要】 目的 探讨白藜芦醇（RES）不同途径给药对裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长的抑制效果。方法 取 80 只雄性无胸腺裸鼠 （BALB/c-nu；21~27 日龄，体重 10~12 g），采用 U87 细胞建立人裸鼠脑胶质瘤原位移植模型，采用随机数字表法分为 RES 干预组 （造模后 10 d，开始给药，1 次/d，40 mg/kg）和溶剂对照组（造模后 10 d，开始给药，1 次/d，10 mg/g；溶剂为 0.5%羧甲基纤维素钠）， 根据给药途径，RES 干预组又分为 RES 灌胃组和 RES 经鼻组，溶剂对照组又分为溶剂灌胃组和溶剂经鼻组，每组 20 只。经鼻给 药采用经鼻滴入法。采用 Kaplan-Meier 法分析生存曲线；造模后 14、21、28、35 d 测定肿瘤体积；采用 CD31 标记胶质瘤血管内皮 细胞并计算微血管密度（MVD），采用免疫组化方法检测胶质瘤血管内皮生长因子（VEGF）以及 Ki-67 表达，采用 TUNEL 法检测 胶质瘤细胞凋亡。结果 与溶剂对照组相比，RES 干预组裸鼠生存时间明显延长（P<0.05），造模后 28、35 d 肿瘤体积明显缩小 （P<0.05），肿瘤组织 MVD 明显减小（P<0.05），肿瘤组织 VEGF 和 Ki-67 表达水平明显降低（P<0.05），肿瘤细胞凋亡率明显增加 （P<0.05），而且，RES 经鼻给药较灌胃给药作用更明显（P<0.05）。结论 RES 可有效抑制裸鼠胶质瘤模型肿瘤生长，机制可能与 抑制肿瘤血管生成和促进肿瘤细胞凋亡有关。与灌胃给药相比，经鼻给药肿瘤抑制效果更好。
胶质瘤大鼠模型的建立
１ 材料 与方 法
点， 向前 １ｎｌ 矢状缝右旁开 ３５ｌ ｌ用直径 １ ｌ ｌ， ＩＴ ．Ｔ ， ｌ ｎ ｎ ｍ 的牙科 钻 钻 穿颅 骨 ， １ 微 量推 进 器 穿 刺硬 脑 用 ０ 膜 ６ｍｎ ｌ后针尖 回撤 １ｍ 注射 ｃ ｍ， ６细胞悬液。接 种量为 １ｘ１ Ｉ、０ １只。整 个 注 射 过 程 在 ｌ ０／ｚ １ ／ ｌ ， Ｏ
中图分类号 ： ７０ ２４ Ｒ ３ ．６ 文献标志码 ： Ｂ 文章编号 ：０ ２２６ ２ １ ）００ ２ －２ １０ －６ Ｘ（０ ０ ３ － ７０ ０
胶质细胞瘤由于其具有广泛的局部侵袭性的生 长特点 ， 目前缺乏有效的治疗手段 ， 因此建立简单易 行、 稳定可靠的胶质瘤动物模型对研究胶质瘤的发 病机制及治疗方法有重要意义。２０ ０９年 ８ １ ～１ 月， 我们采用立体定位法将胶 质瘤 ｃ ６细胞接种 于 Ｓ Ｄ 大 鼠尾壳核 处 ， 建立 了胶 质 瘤大 鼠模 型 。此 建 模 方
除 ２只外 ， 余脑组织均见肿瘤形成 ， 见肿瘤颅外生 长。肿 未
鼠尾壳核注射 １×１’ ０ 个胶质瘤 Ｃ ６细胞 ， 观察大 鼠生存状 况 ， ２ 于 ２ｄ麻醉后 活体 取脑 ， 制作成病 理切片 ， Ｅ染色 ， Ｈ 免疫组化检测神经胶质纤维酸性蛋白（ Ｆ Ｐ 。结果 ＧＡ ）
瘤周边界线 明显 ， 未见包膜 ， 内可见新生血管。结论 采用立体定位技术 于大 鼠尾壳核注入 ｃ 瘤 ６细胞 的方法建立 的胶质瘤大 鼠模型稳定可靠 、 操作简单 ， 符合恶性胶质细胞瘤生物学特性。 关键词 ： 胶质瘤 ； ６细胞 ； Ｃ 动物模型 ； 鼠 大
１ １ 实验材 料 ．
激反应 情况 ， 期测量 体质量 。 于接种后 ２ 、 鼠 定 ２ｄ 大 麻醉 后用 ４ 多聚 甲醛 左心 室 灌 注 ， 剖 取脑 ， 本 ％ 解 标
动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型
动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型一、嘉美实验裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建方法采用腋窝皮下接种PC-9人肺癌细胞，建立PC-9人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型并给与药物进行干预，观察药物对肿瘤的作用。
二、裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建及后续实验操作1、25只BALB c裸鼠，适应性饲养一周后，调整制备好的PC-9人肺腺癌细胞单细胞悬液浓度，用1m 1l无菌注射器吸取细胞悬液，于每裸鼠右侧腋下皮下注射0.2mL细胞悬液(接种细丹包量约为1×x102/ml)，细胞悬液接种于裸鼠的右侧腋下7-10d后，观察成瘤情况，肿瘤仁本积大于100m3后，选取肿瘤大小相近的小鼠按肿瘤体积随机分为4组:(1)对照组，5只；(2)高剂量组，7只:(3)中剂量组，7 )顺铂组，6只。
当天高剂量组、中剂量组、顺铂组开始给药其中，高剂量组连续21天每天灌胃给药，顺铂组每三天腹腔注射给药，齐量5m/e次。
每两天测量荷瘤裸鼠体重和冲瘤体积。
于第22天停止给药病禁食2h，第再次测量肿瘤体积，计算相对肿瘤体积(RTV)，绘制肿瘤生长曲线，毛材当天称量最后一次体重和瘤重计算肿瘤指数完整剥离瘤块，其中一半瘤块组织于 10%福尔马林中固定，备用；另半肿瘤组织存放于液氮中冻存。
血样用109 mmol/L枸櫞酸钠19抗凝，分离血浆。
2、小鼠接种PC-9人肺腺癌细胞后 9天左右，可观察到裸鼠右侧腋下均现黄豆大小瘤块，于当天开始测量肿瘤体积并称重。
于接种第11天时，测量肿瘤生长指数和体重时发现，各组荷瘤裸鼠肿瘤体积均值达到100mm3，于当天开始分组给药在给药过程中发现，顺铂组荷瘤裸鼠的体重下阳夆明显，与对照组相比具有极显著性差异루(P<0.01)高剂量组荷瘤裸鼠的体重于d7、dI 3、d19天时有显著性差异(P~0.05)，其他各组体重与对照组相比均无明显差异。
顺铂组肿瘤体积于d13、d17、dl9、d21 d23时与对照组相比明显减小，并有显著性差 :(P<0.05)，在d15天时有极显著性差쿠(P<0.01)。
裸鼠模型在肿瘤治疗研究中的应用
裸鼠模型在肿瘤治疗研究中的应用近年来，肿瘤治疗研究一直是医学界的热门话题。
而其中一个被广泛应用的模型就是裸鼠模型。
该模型是一种没有免疫系统的小鼠，其所患种类繁多的人类癌症与人体癌症的生理和生化特征高度一致。
因此，裸鼠模型被视为一种可靠的人类癌症模型，在肿瘤治疗研究中得到越来越广泛的应用。
一、裸鼠模型有助于肿瘤药物筛选和剂量的选择裸鼠模型的特点是没有免疫系统，因此可以有效地模拟人类癌症患者对化疗药物的反应。
研究人员可以将不同类型的人类肿瘤细胞种植到裸鼠的体内，然后观察不同药物的疗效以及适应性。
这种方法可以帮助筛选出最有效的化疗药物，并确定最佳的剂量方法，以降低剂量过大或过小的患者药物副作用和治疗效果不佳的风险。
二、裸鼠模型可以用于研究免疫药物的作用机制裸鼠模型的另一个重要特点是它们缺乏免疫系统。
因此，在研究免疫药物的作用机制时，其免疫抑制作用可以被完全消除。
这些免疫药物通常用于治疗肿瘤细胞免疫逃逸的疾病。
研究人员可以在裸鼠体内种植癌细胞，并给予不同的免疫药物处理，以便研究药物在治疗肿瘤免疫逃逸方面的作用和机制，为开发更加有效的肿瘤免疫疗法提供理论基础。
三、裸鼠模型可以模拟人类癌症的药物耐受性药物耐受性是肿瘤治疗中的一个重要问题。
但是直接在人体内进行研究很难获得满意的结果，因为某些药物在实验室中表现出的耐受性可能与实际情况不同。
通过使用裸鼠模型，可以准确地模拟人类癌症的耐受性情况，并研究这些药物的各种机制。
这种方法可以帮助人们更好地了解药物耐受性的机制，促进新药物的开发，改善现有的肿瘤治疗方法。
四、裸鼠模型可以进行肿瘤的转移研究在许多情况下，治疗肿瘤并不仅仅是消灭原发肿瘤，还需要防止肿瘤进行转移。
而裸鼠模型在这个方面有很大的应用潜力，尤其是在研究转移性肿瘤时。
研究人员可以通过种植具有转移潜力的细胞系，观察肿瘤转移的过程和机制，并测试不同的治疗方案，以便开发更加有效的肿瘤转移治疗方法。
五、裸鼠模型可以用于研究基因治疗基因治疗是一种新型的肿瘤治疗方法，其作用机制涉及基因转导、表达、调控和重组等方面。
小鼠裸鼠肿瘤动物模型课件
小鼠裸鼠模型在体内肿瘤药理学研究中的 应用
药物代谢
研究小鼠裸鼠对药物的代谢 和转化，为药物治裸鼠对不同药物治 疗的反应和耐药性。
肿瘤生长及转移
研究小鼠裸鼠肿瘤生长和转 移机制，探索抑制肿瘤发展 的方法。
1 易于培养和繁殖
小鼠裸鼠繁殖速度快，能够满足大规模实验的需求。
2 易于操控
小鼠裸鼠对基因编辑和药物处理的反应性高，便于研究者进行实验操作。
3 相似的生理特征
小鼠裸鼠与人类有许多相似的生理特征，有助于预测药物疗效。
小鼠裸鼠模型的建立方法
1
移植裸鼠
将人体肿瘤细胞或肿瘤组织移植到小鼠裸鼠体内。
2
基因编辑技术
小鼠裸鼠肿瘤动物模型
肿瘤研究中的重要工具，通过建立小鼠裸鼠模型，我们可以深入了解肿瘤的 发展和治疗方法。
常用的实验动物模型
小鼠
被广泛用于基础生物学、药 物研发和疾病模型研究。
裸鼠
因其缺乏皮肤毛发而成为理 想的肿瘤研究动物。
其他动物
包括大鼠、猪、犬等，具有 特定的研究目的和应用场景。
小鼠裸鼠作为肿瘤模型的优点
小鼠裸鼠模型在肿瘤研究中的 局限性
小鼠裸鼠模型无法完全模拟人体内的复杂环境，其它动物模型和体外实验仍 然具有重要意义。
小鼠裸鼠模型未来的发展及前 景
未来，借助基因编辑和体外模型技术的发展，小鼠裸鼠模型将更加准确和可 靠，为肿瘤研究带来更多突破。
利用CRISPR-Cas9等方法改变小鼠裸鼠的基因表达，模拟人类肿瘤。
3
毛发缺失技术
通过遗传或激素处理使小鼠裸鼠丧失毛发，便于观察肿瘤生长。
小鼠裸鼠模型在体外药物筛选中的应用
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（1）丁香园总结：
瘤子长不出无非两方面原因，老鼠或者细胞。
关于裸鼠，楼上已有描述，接种部位和接种年龄。
一般来说，左侧前肢靠近心脏，血供会比较丰富，容易生长新血管。
虽然文献都报道在腋窝注射，但如果局部皮下组织致密，会相对容易形成浓聚的小包块，容易达到有效的细胞浓度。
裸鼠周龄不要小于四周，否则动物可能不能耐受，过
早死亡，也不可大于六周，否则免疫力会增强，不容易形成肿瘤。
如果以上都不能成瘤，实验室之前又没有固定protocol，动物可以尝试NOD/SCID。
细胞数量每个细胞株不同而有不同剂量，恶性程度高，有些胶质瘤，4次方就已经足够了，有些难长的，
恐怕7次方都嫌不够。
但一般达到2×10的7次方就不能再往上加，因为细胞悬液已
经达到饱和状态，再往上增加细胞可能在注射时针管会对细胞有物理损伤。
细胞悬液
大概是一个注射点150微升左右。
另外，还可以添加matrigel，理论上可以促进成瘤。
裸鼠种植瘤需注意： 1、肿瘤细胞的状态 2、细胞的数量:每只注射 2X106-107 3、裸鼠的选择：5-8周龄 4、种植部位：血供丰富区域，如腋窝中后部、腹股沟中上部。
（2）具体操作解析：
1、能不能成瘤，首先要考虑你的肿瘤细胞系能否成瘤，其次关键是你的肿瘤细胞数，一般肿瘤细胞存活力还是蛮高的，所以你重点要考虑细胞数的问题，但最高不要超过
1*107
2、接种时间，最好在1小时之内完成。
但在我实际操作过程中，裸鼠的数量又多，1
小时之内根本做不完的，所以你可以预先将细胞放在冰盒里暂为保存。
效果还是不错
的
3、成瘤时间，每个肿瘤细胞不太一样，细胞数合适，一般一周左右应该能出来了；另外，如果你是打皮下，你要考虑是否有打到深层组织，比如肌肉，那即使成瘤了，也
不大好摸出来。