(新)微生物学实验
微生物学实验
溶血链球菌（Streptomyces microflavus）：形态
链球菌呈球形或椭圆形，直径0.6-1.0μm，呈链状排列，长短 不一，从4-8个至20-30个菌细胞组成不等，链的长短与细菌的 种类及生长环境有关。该菌不形成芽胞，无鞭毛，易被普通的 碱性染料着色，革兰氏阳性，老龄培养或被中性粒细胞吞噬 后，转为革兰氏阴性。向一个方向分裂，若没有完全分开
自主设计实验：40%，包括设计实验方案、实验操作，总结， 汇报交流 实验考试10%：理论、实验操作
2. 细菌形态观察（装片） 基本概念： 细菌（Bacteria, Bacterium） 芽孢（spore） 鞭毛（flagella）：所有弧菌、螺菌类普遍着
生鞭毛和假单胞菌都长有端生鞭毛，约半数杆菌 和少数球菌有鞭毛。
1.6. 安全 常规：水、电、门、窗等 微生物与化学试剂 仪器使用：高压灭菌器、离心机 废弃物
1.7、微生物实验安排与考核
5个综合模块，共14次实验：50%
一、综合模块1-细胞水平：个体形态观察（9学时） 二、综合模块2-群体水平：目的微生物的分离筛选及纯化技术（9学时） 三、综合模块3-生理生化水平：生理生化测定、理化因素对微生物生长 的影响（9学时） 四、综合模块4-遗传水平、免疫水平：细菌转导、菌种保藏方法、血清 学反应（6学时） 五、综合模块5-分子水平：微生物系统发育学分析（9学时）
苏云金芽孢杆菌（Bacillus thruingiensis）：芽孢、伴胞晶体
芽孢在一端、易观察。形态与生理特征和蜡状芽孢杆菌相似，所不同的是在适合条件下 能产生伴孢晶体，晶体为菱形，因此被认为是蜡状芽孢杆菌的致病变种，最早由国外引 进，后在国内各地也陆续分离到很多相似的亚种，例如青虫菌、杀螟杆菌等。 存在于土壤及生病的鳞翅目昆虫上。 能使鳞翅目昆虫染病致死，广泛应用于生物防治，做生物杀虫剂。
微生物实验报告
动物微生物及免疫学实验报告一、实验目的（一）掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，熟悉一般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。
（二）掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法和革兰氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。
（三）掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。
二、实验用品（一）器材量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、pH试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎绳、放大镜、包装纸、洗耳球、酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜（二）试剂及材料肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、0.01%结晶紫水溶液、0.5%中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏三、实验步骤（一）培养基的制备（所有用到的器皿都已121℃高压灭菌15~30min，倾注平板在无菌操作台内完成，并放在无菌操作台内）1、麦康凯培养基（1）组成：蛋白胨17g、肘胨3g、猪胆盐5g、氯化钠5g、琼脂17g、乳糖10g、0.01%结晶紫水溶液10ml、0.5%中性红水溶液5ml、蒸馏水1000ml （2）方法：将蛋白胨、肘胨、猪胆盐和氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，调节pH至7.2。
将琼脂加入600ml蒸馏水中，并加入乳糖，加热熔化。
将两液混合，分装于烧瓶内，用纱布、扎绳等捆好后，121℃高压灭菌15~30min。
待冷却至50 ~ 55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。
注：结晶紫和中性红水溶液配好后需经高压灭菌。
2、血清平板（1）组成：营养琼脂、牛血清（2）方法：将灭菌的营养琼脂加热熔化，冷却至45~50℃时，加入牛血清，并混匀，倾注平板。
注：不得将牛血清一并加入后再灭菌。
《微生物学实验》操作步骤
实验一培养基的制备与灭菌实验步骤：（一）伊红美蓝培养基（EMB，用成品，分离大肠杆菌用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基。
按成品说明称量、放入搪瓷杯，加水，加热完全溶化，倒入三角瓶，塞棉花塞，牛皮纸封口，包扎，作标记（培养基名称、批次组别、日期，下同），灭菌。
（二）营养琼脂培养基（即牛肉膏蛋白胨培养基，用成品，分离芽孢杆菌用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基，方法同上，灭菌。
（三）PDA培养基（即马铃薯蔗糖培养基，分离酵母菌、根霉用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基。
培养基配方：马铃薯20%、蔗糖（白砂糖）2%、琼脂 2%，加水至所需体积，pH自然。
配制方法：马铃薯去皮，称量，切成小方块，放入搪瓷杯，加水适量，煮沸20 min，取汁液，补水至所需体积，加入蔗糖（白砂糖），加热溶化，最后加入琼脂（琼脂要预先单独用水浸泡，然后挤干再加入），加热至琼脂完全溶化，分装三角瓶，塞棉花塞，牛皮纸封口，包扎，灭菌。
培养基统一高压蒸汽灭菌（121℃25 min）。
（四）无菌平皿准备（下次实验倒平板用）每组10套，报纸包扎，高压蒸汽灭菌（121℃25 min）后，置干燥箱80℃烘干1 h。
（五）枯草样预处理及预培养（下次实验分离芽孢杆菌用）枯草样预处理：每组1瓶。
100 ml三角瓶＋自来水约50 ml，加5%可溶性淀粉，溶解。
枯草若干，剪短，浸入三角瓶水中，牛皮纸封口，包扎，置水浴中煮沸10 min，然后置培养箱30℃预培养3～7 d。
（六）葡萄样（或其它水果）酵母菌预培养（下次实验分离酵母菌用）每组1瓶。
葡萄（或其它水果）适量，捏碎，皮渣与汁液一起放入250 ml 三角瓶（装量1/2～2/3），封口，置培养箱25℃预培养3～7 d，观察自然发酵过程。
实验二微生物的分离与纯化实验步骤：（一）污水中大肠杆菌的分离（稀释倒平板法）1）用三角瓶取污水样适量。
微生物学实验
实验八
放线菌的形态观察
一、实验目标与基本要求： 学习并掌握观察放线菌形态的基本功 方法，了解放线菌的形态特征。
二、实验内容： 观察放线菌菌落形态。 三、材料： 1、菌种：白色链霉菌、红色链霉菌。 2、0.1%美蓝染液、载片和盖片。
四、步骤 1、菌落形态及菌苔特征： 以无菌操作分别取白色链霉菌、红色链霉菌 制成菌悬液在平板培养基上用划线法接种，2528℃培育5-7天，观察菌落的表面形状、大小、 颜色和边缘等；并注意放线菌在基质上着生紧 密情况。 区别基内菌丝，气生菌丝及孢子丝的着生部 位，取斜面培养的白色链霉菌、红色链霉菌观 察菌苔特征，注意孢子颜色，营养菌丝颜色和 色素分泌情况等。
2、步骤 1）单用紫外灯 在无菌室内或在接种箱内打开紫外线 灯开关，照射30min，将开关关闭。 2）化学消毒剂与紫外线照射结合使用 在无菌室内，先喷洒化学消毒剂溶液， 再用紫外线灯照射15imn
四、实验报告 记录无菌检查结果 五、问题和思考 1.高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内 冷空气排尽?灭菌完毕后，为什么待压力 降低“0”时才能打开排气阀，开盖取物？ 2.过滤除菌应注意哪些问题?
1)斜面接平板
a.划线法：见平板划线分离法。
b.点种法：一般用于观察霉菌和酵母细胞，轻 轻点在平板的表面（根霉点一点，曲霉、酵母 可点3-4点）即可。
2)平板接斜面：一般是将经平板分散培养得到 的单菌落接种到斜面，以便作离时，为何要将融化的培养基冷却 到50℃左右，才倒入装有菌液的培养皿内？ 2.接种时，为何要尽量使试管平放？
5、子囊孢子的观察 将面包酵母接种于麦芽汁或豆芽汁液 体培养基中，28-30度培养24h，如此 连续传代3-4次，使其生长良好，然后转 到醋酸钠斜面培养基上25-28度培养3 天。用水浸片法制片或用芽孢染色，观 察子囊孢子形状，并注意每个子囊内的 子囊孢子数目。
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告（本科）实验室：姓名：学号：班级：海南医学院微生物学与免疫学教研室编写二OO四年四月第一次实验【实验内容】实验一微生物的形态与结构的观察实验二微生物的分布【结果记录及判定】实验一微生物的形态与结构的观察1、细菌正常形态及特殊结构的观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：特殊结构：霍乱弧菌破伤风梭菌芽胞形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：肺炎链球菌荚膜伤寒沙门菌鞭毛形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：炭疽杆菌脑膜炎球菌2、病毒包涵体观察及记录（示教）：绘图并描述描述：狂犬病毒包涵体（H-E染色）3、真菌的形态观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：白假丝酵母菌皮肤癣菌4、革兰染色法结果观察及记录：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌大肠埃希菌实验二微生物的分布结果记录：1、空气中的细菌种类（种）：数量（个）：2、水中细菌数检测（1）自来水中细菌的种类（种）：数量（个）：（2）污水中细菌的种类（种）：数量（个）：3、物品和手指上的细菌检查（记录本人结果）物品表面的细菌种类（种）：数量（个）：手指表面的细菌种类（种）：数量（个）：结论：成绩：_________________批改教师签名：____________批改时间：________________第二次实验【实验内容】实验三微生物的分离培养实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌【结果记录及判定】实验三微生物的培养1、细菌分离培养方法（分区划线接种法），生长现象为：2、纯种细菌接种技术（1）琼脂斜面接种培养，大肠埃希菌生长现象：（2）液体培养基接种法，大肠埃希菌生长现象：（3）半固体培养基接种技术①标本名称：大肠埃希菌半固体培养基②标本名称：痢疾志贺菌半固体培养基穿刺线：穿刺线：培养基：培养基：结论：结论：3、沙保弱琼脂平板上的真菌菌落观察及描述（示教）：类酵母型菌落：丝状菌落：实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌一、紫外线灭菌法（示教）玻璃盖遮住平板的一半现象：现象：分析：分析：二、机械除菌法（示教）：1、未经过滤的液体培养基培养后的现象：2、经过过滤的液体培养基培养后的现象：分析：成绩：_________________批改教师签名：____________第三次实验【实验内容】实验六细菌的致病性实验七化脓性感染的细菌学检查【结果记录及分析】实验六细菌的致病性一、透明质酸酶试验（示教，实验动物：家兔）测量试验侧与对照测的黑墨水扩散范围（cm×cm）：实验侧：对照侧：分析：二、破伤风外毒素的毒素作用（实验动物：小鼠）实验现象：实验侧：对照侧：分析：实验七化脓性感染的细菌学检查一、病原性球菌的形态观察（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌链球菌形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌二、病原性球菌的鉴别：三、血清学试验抗“O”试验（乳胶凝集法）实验现象：阳性对照：阴性对照：标本1：标本2：结果判定：标本1为________，标本2为_________。
微生物实验报告
微⽣物实验报告概要：微⽣物在⾃然界是分布最⼴、种类最多的⼀类⽣物物种；⽆论在万⽶的⾼空，还是在万⽶的深海，或是⾼原冻⼟，抑或是极地冰⼼，⽕⼭喷发地域、盐湖、热泉等都能寻找到它们的踪迹；可以这么说，微⽣物的⽣存环境涵盖了地球上的所有⽣物。
由于这些微⽣物个体微⼩、造型简单和⾁眼难以观察到，因此，⼈们往往忽略了它们的存在，⽽这些微⽣物⼜常是引起⼯⼚、医院和微⽣物学实验室中各种实验材料、实验菌种、产品和⼿术创⼝等污染的祸根。
所以研究微⽣物的多样性、识别菌种种类、掌握⽆菌操作技术具有相当⼤的现实意义。
本论⽂分为四个实验，它包括：环境微⽣物的采集与观察、细菌的形态特征观察与鉴定、放线菌与真菌的形态特征观察与鉴定、环境中噬菌体的分离与纯化。
我们通过对⼟壤和⽔库中的微⽣物的采集，获得⼀系列不同种类的微⽣物，然后对得到的微⽣物进⾏选择培养和纯化，分离出细菌、放线菌、真菌、噬菌体等，再对其进⾏进⼀步的观察和研究，从⽽了解各种微⽣物的基本形态特征、结构特点及⽣活环境对其⽣长的影响等。
同时通过⾃⼰动⼿，我们的实验操作技术得到强化，掌握了光学显微镜的基本操作、⽆菌操作技术及染⾊、培养、分离和计数等微⽣物实验的基本操作⽅法。
关键词多样性分离纯化形态特征⽆菌操作培养实验⽬的1.树⽴严格的⽆菌意识和掌握正确的⽆菌操作⽅法。
2.了解光学显微镜显微观察的基本操作和油镜头的使⽤⽅法及微⽣物的稀释涂布分离⽅法与技术3.学习观察细菌、放线菌以及霉菌的群体形态及培养特征；4.了解⾰兰⽒染⾊原理，掌握⾰兰⽒染⾊技术；5.熟悉细菌芽孢和荚膜的染⾊⽅法；6.初步学习平板菌落计数以及活菌检测的⽅法7.初步掌握平板菌落转接平板及固体斜⾯的菌种纯化⽅法8.掌握观察放线菌和丝状真菌以及酵母菌显微结构及菌落的基本⽅法9.掌握测定微⽣物细胞⼤⼩的测微技术和单细胞微⽣物进⾏显微直接计数的⽅法。
10.了解从环境污⽔中分离噬菌体的普通原理11.熟悉并掌握噬菌体的扩增、培养与检测的实验⽅法和噬菌斑效价的测定⽅法。
微生物学实验报告
微生物学实验报告（格式标准）(生命科学专业)*****目录索引实验一油镜的使用和细菌的简单染色法 3实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5实验三常用培养基的配制7实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8实验五、微生物大小的测定与显微计数10实验六环境中微生物的检测和分离纯化11实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12实验八（综合实验）化能异养微生物的分离与纯化13课程名称：微生物学实验班级：化生系生命科学本科实验日期：指导教师：黎勇实验一油镜的使用和细菌的简单染色法〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术；观察细菌的基本形态；学习观察细菌的运动性的基本方法。
〔基本原理〕1. N·A=n·sinα2. D=λ/2N.A3. 目镜可提高放大倍数，但有效放大率取决于镜口率。
已经分辨的物体不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。
4. 用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时，可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。
〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸；细菌、放线菌等固定装片；培养18小时左右的B.subtilis. S.arueus 菌斜面培养物；无菌水、生理盐水。
〔方法步骤〕：（一）油镜的使用镜检装片在中倍（或高倍镜）下找到目的物，并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置，虹彩光圈开到最大，镜头转开成八字形在玻片的镜检部位（光斑处）滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台（缩短镜头与装片距离，镜头浸入油中，至油圈不扩大为止镜头几与装片接触）粗调器徐徐下降载物台（密切注视视野，当捕捉到物像时，立即用细调器校正）仔细观察并绘图取出装片，清洗油镜：擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留（用手指辅助，迅速拭擦一、二次）用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯（2-3次）。
（二）细菌的简单染色法：涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察（三）细菌运动性的观察取洁净盖玻片，四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察〔结果分析〕1、画一圆圈表示视野，选取所观察的微生物绘图，注意特殊结构、形状和排列。
微生物学实验技术
微生物学实验技术
微生物学实验技术是研究和发掘微生物的重要方法，也是一门多种实验技术和方法的
综合。
它既可以应用于生物体内，对微生物调查，可以使用培养基或特定介质进行鉴定，
也可以用来通过遗传工程分离、改造微生物，了解不同微生物的全部 trait 特性。
一、培养微生物
培养微生物是一种最常用的微生物实验技术，需要使用特定的培养基，通过控制温度、湿度等变量的变化来培养不同的微生物。
通过检测培养基中的微生物数量及某些代表性特征，可确定微生物的分类特征，来鉴定微生物的种类和形式。
二、基因组测序
基因组测序是一种实验技术，是分析一个微生物种类全部 genetic 的方法。
主要利
用高通量DNA测序技术，对样品中贮藏的 DNA 进行范围检测，得到 DNA 的测定序列，从
而确定微生物的遗传结构、物种种类，以及特定物种生态和功能特征。
三、共价法抗菌药敏试验
共价法抗菌药敏试验是研究微生物对一类药物或多类药物的抗性程度的重要方法之一。
通过检测药物剂量的不同，在药物浓度相同的情况下微生物在某种时间内生长情况不同，
来确定微生物对某种药物或多类药物的抗性情况。
四、特异性提取
特异性提取是一种以特定方法从微生物中提取出特定“ biomolecule ”，比如 DNA、蛋白质等，分离和纯化微生物某功能元件或特征分子的实验技术。
这种技术既可以提取大
量的基因片段，也可提取微量的特异性物质。
五、遗传修饰
遗传修饰是一种利用遗传工程改造或添加微生物特定遗传物质来改变微生物的特性的
实验技术，常用来进行分子育种和改良育种，以提高产品的质量和性能。
微生物的实验报告
一、实验目的1. 学习微生物分离和纯化的基本方法。
2. 掌握微生物形态观察和简单生理生化试验的方法。
3. 熟悉微生物鉴定的一般程序。
二、实验原理微生物分离与鉴定是微生物学的基本实验技术。
通过纯化培养，可以得到单一种类的微生物，便于对其进行观察和研究。
微生物鉴定则是对纯化后的微生物进行分类和命名。
三、实验材料与仪器1. 材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂、生理盐水、革兰氏染色液、显微镜、酒精灯、接种环等。
2. 仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、酒精灯、显微镜等。
四、实验步骤1. 微生物分离（1）土壤样品采集：取适量土壤样品，置于无菌试管中。
（2）土壤样品处理：将土壤样品加入适量的生理盐水，振荡混匀，制成土壤悬液。
（3）稀释涂布平板法：将土壤悬液进行10倍系列稀释，取适量稀释液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，37℃恒温培养24小时。
（4）挑取单菌落：用接种环挑取单个菌落，转接至新的牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，37℃恒温培养24小时。
2. 微生物形态观察（1）革兰氏染色：将纯化后的菌落涂片，进行革兰氏染色，观察菌体的形态和染色特性。
（2）显微镜观察：将菌落制成临时涂片，在显微镜下观察菌体的形态、大小、排列等特征。
3. 微生物生理生化试验（1）糖发酵试验：将纯化后的菌落接种于糖发酵管中，37℃恒温培养24小时，观察菌落是否产生气泡。
（2）V-P试验：将纯化后的菌落接种于V-P试剂中，37℃恒温培养24小时，观察菌落是否产生红色沉淀。
4. 微生物鉴定根据微生物的形态、生理生化特征，结合已知的微生物分类学知识，对纯化后的微生物进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 微生物分离：成功分离出多个单菌落，菌落呈圆形、光滑、湿润、乳白色。
2. 微生物形态观察：革兰氏染色结果显示，菌体为革兰氏阳性菌，呈杆状。
3. 微生物生理生化试验：糖发酵试验结果显示，该菌能发酵葡萄糖，产生气泡；V-P试验结果显示，该菌能产生红色沉淀。
4. 微生物鉴定：根据以上实验结果，该菌为葡萄球菌属。
《微生物实验》课件
实验三 微生物的纯种分离法 思考题 在你所实验的三种培养基平板上长出的菌落属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 稀释分离时，为什么要将融化的琼脂培养基冷却到45～50℃左右才能倾入装有菌液的培养皿内？ 划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 培养时为什么要将培养皿倒置培养？
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验器材
实验室环境微生物、大肠杆菌、酿酒酵母、放线菌及霉菌。
菌种：
马铃薯固体培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基、高氏一号固体培养基
培养基：
无菌培养皿、无菌棉签、火柴、超净工作台及恒温培养箱。
其他：
斜面接种
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验方法
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验方法 液体接种 斜面 液体培养基 接种环 将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。
中心实验室提供
微生物学实验教学课件
汇报人姓名
目 录
实验一 培养基的配置、分装和灭菌 实验二 环境中微生物的检测和菌落识别 实验三 微生物的纯种分离 实验四 细菌染色法和光学显微镜的使用 实验五 微生物的间接计数法——水中细菌总数的测定 实验六 放线菌和真菌的培养和形态观察 实验七 微生物显微镜直接计数法 实验八 细菌芽孢染色法 实验九 微生物生长量的测定和生长曲线的绘制 实验十 物理、化学因素对微生物生长的影响 实验十一 细菌鉴定中的生理生化反应 实验十二 食用菌菌种的分离和制种技术 实验十三 环境中细菌分离鉴定综合实验
实验一 培养基的配ຫໍສະໝຸດ 、分装与灭菌 实验方法实验一 培养基的配置、分装与灭菌 实验方法