12.1-补体检测
补体结合试验的原理及应用
补体结合试验的原理及应用补体结合试验（Complement fixation test，CFT）是一种常用的免疫学试验，广泛应用于临床、动物卫生、微生物学和生化学等领域。
本文将介绍补体结合试验的原理、方法和应用。
一、原理CFT是通过检测抗原-抗体结合后是否影响补体作用来确定是否存在特定抗体的一种免疫学试验。
抗原与特异性抗体结合后，形成免疫复合物，该复合物可以与补体结合并激活补体，从而引发一系列补体反应。
而在CFT中，引入两种补体成分：被偶联的抗原与补体激活剂（即受体），以及补体底物（即被激活的补体）。
被测血清中如有特异性抗体，可与被偶联的抗原发生结合，使得补体激活剂发生变化，无法与补体底物相结合。
因此，测得补体底物与补体激活剂之间无结合，即补体未被激活，则可证明血清中存在特定抗体。
二、方法1. 试剂与设备（1）被测血清：取血后离心获取血清；（2）受体：把抗原与抗体偶联在羊红细胞表面，用0.1M苏打缓冲液洗涤去除未偶联的抗原和抗体；（3）抗原与特异性抗体：比如，细菌、病毒、药物等；（4）补体：常见的有裂解法（Lysed Sheep Erythrocytes，LSE）和搅拌法（Z牛补体）；（5）试管/小瓶/平板：供反应使用；（6）显微镜、离心机等。
2. 步骤（1）制备试剂：适量的抗原和抗体分别和受体在适宜条件下以一定比例混合，制成一定浓度的大量受体；另需要制备几重稀有度的抗原和抗体梯度稀释物；（2）标准样品制备：以已知抗体滴定值的血清为标准样品，依据其相对滴定值制成浓度为10U的配制液；（3）加样：将待检血清、标准样品及对照血清加到小瓶中，每组加4支小瓶；（4）加试剂：加入适量偶联抗原及补体；（5）反应：置平板中，在37℃恒温箱内孵育数小时，待反应结束；（6）结果判定：利用显微镜观察血清和补体底物与补体激活剂是否结合，判断血清中抗体是否存在。
三、应用CFT可以测定某一种特定抗体的存在与否，具有特异性、敏感性和准确性等优点。
补体依赖的细胞毒实验原理(一)
补体依赖的细胞毒实验原理(一)补体依赖的细胞毒实验1. 介绍补体依赖的细胞毒实验（complement-dependent cytotoxicity assay，CDC）是一种常用的实验技术，用于评估抗体对细胞的毒杀效应。
该实验可用于研究抗体依赖的细胞毒杀机制、药物研发以及免疫治疗等领域。
2. 实验原理补体系统补体是机体免疫系统的重要组成部分，由多种蛋白质组成。
在免疫应答中，当抗原被抗体结合后，激活的补体系统可以诱导细胞溶解、炎症反应以及免疫调节等生物学效应。
补体的有效结合和活化是补体依赖的细胞毒实验的基础。
实验流程1.准备目标细胞：这里使用靶细胞，如癌细胞，可以通过培养得到。
2.添加待测抗体：将待测抗体添加至与靶细胞共同培养的细胞培养基中，使其与靶细胞形成复合物。
3.洗涤：以洗涤液洗去未结合的抗体。
4.添加补体：添加激活的补体，使其与复合物结合。
5.孵育：在适当的条件下（如体外孵育培养），让复合物和补体相互作用。
6.毒杀效应评估：观察细胞活力、溶解程度或细胞的其他形态学变化，评估抗体的毒杀效应。
3. 应用领域免疫治疗补体依赖的细胞毒实验可用于评估抗体依赖性细胞毒杀（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC）效应，帮助筛选和优化免疫治疗药物，如单克隆抗体。
抗体研究该实验可以评估不同抗体的效应，分析抗原-抗体相互作用、抗体亚类、特异性和亲和力等对细胞毒杀的影响，促进抗体研究和开发。
免疫学研究研究补体依赖细胞毒杀机制有助于深入理解免疫应答过程中的细胞间相互作用、信号传导、炎症过程等免疫学基础问题。
4. 结论补体依赖的细胞毒实验是一种权威且可靠的实验方法，可用于评估抗体对细胞的毒杀效应。
通过该实验，可以深入研究抗体的毒杀机制，从而为免疫治疗和抗体研究提供重要参考。
参考文献： [1] Pandey JP, et al. Complement-dependent cytotoxicity (CDC) assays for anti-HLA antibodies. Methods Mol Biol. 2013;1034:59-67. [2] Chiu ML, et al. Assay development for the detection of antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) activity of anti-influenza neuraminidase antibodies. J Vis Exp. 2014;(88):e51241.。
补体C1q与肾损伤检测
由血小板、淋巴细胞 和多形核白细胞产生， 主要由淋巴细胞产生， 11.8KD
血清β2微球蛋白极易 通过肾小球滤过膜， 但99.9%被近曲小管细 胞重吸收和降解
从食物中摄取的外源 性肌酐（约10%）和体 内肌肉组织代谢产生 的内源性肌酐，
主要经肾小球滤过进 入原尿，并且不被肾 小管重吸收
13KD，机体所有有核 细胞均可表达
一、补体C1q简介 循环中的C1 是由3 个亚单位即1 个C1q 分子（对 称的六聚体），2 个C1r 和2 个C1s 分子依赖Ca 离子 结合而成的复合物。
一、补体C1q简介 补体C1q是免疫复合物通过经典（或传统）途径 （CP）活化补体的启动因子。
补体C1q主要是在感外产生，小肠上皮细胞、脾、骨髓的基质细胞均会产生，同时巨噬 细胞也会产生大量补体C1q，这对于减少自身物质在体内的堆积具有重要作用
血尿酸可以反映肾小球滤过功 能和肾小管重吸收功能；痛风、 子痫、 Nhomakorabea娠反应等
一、补体C1q简介 二、补体C1q与肾损伤
三、威尚公司补体C1q试剂简介
三、威尚公司补体C1q试剂简介
液体即用型试剂。 配套液体校准品和质控品。 试剂仓中可稳定30天。 线性范围：0~48mg/dL 参考范围：15.7~23.7mg/dL
是机体蛋白质代谢的终 末产物，
既可以来自体内，也可 以来自于食物中嘌呤的 分解代谢，主要在肝脏 中生成，
肾小球基底膜收到损害 使其通透性改变，白蛋 白进入尿液
可自由滤过肾小球，进 入原尿中的尿素约50% 被肾小管和集合管重吸 收，肾小管有少量排泄 小部分经肝脏随胆汁排 泄，其余大部分均从肾 脏排泄；UA可自由滤过 肾小球，也可经肾小管 排泄；原尿中90%UA被 肾小管重吸收
补体依赖的细胞毒实验原理
补体依赖的细胞毒实验原理
补体依赖的细胞毒实验（CDC assay）是一种用于评估抗体对细胞的溶解作用的实验方法。
其原理基于以下步骤：
1. 样品准备：首先需要准备测试物质，包括待测抗体、目标细胞和补体。
目标细胞可以是病原体（如细菌、病毒等）或恶性肿瘤细胞。
2. 加入抗体：将待测抗体加入含有目标细胞的培养基中，使抗体与细胞发生特异性结合。
3. 加入补体：补体是一类血清蛋白质，它们可以通过活化补体途径或替代途径与抗体-抗原结合物相互作用，形成膜攻击复合物，导致细胞溶解。
4. 孵育：将培养基中的抗体、目标细胞和补体混合均匀后，置于恰当的培养条件下孵育一段时间。
5. 细胞溶解检测：通过染色或其他方法（如测定乳酸脱氢酶活性）检测细胞的溶解情况。
如果抗体与目标细胞特异结合，并且补体受到激活，那么补体依赖的细胞溶解会发生，检测方法将显示细胞溶解的程度。
通过上述原理，补体依赖的细胞毒实验可以用来评估抗体的溶解作用和免疫效力，对于研究和发展抗体治疗、疫苗研发等具有重要意义。
血清补体c3检测实验报告
血清补体c3检测实验报告尊敬的教授，根据您的要求，我将为您提供一个关于血清补体C3检测实验的详细报告。
实验目的：检测患者血清中的补体C3浓度，以了解其是否存在补体激活异常。
实验原理：补体C3是一种重要的补体蛋白，其正常浓度与补体系统的平衡和激活状态密切相关。
实验中，我们采用了免疫测定的方法来检测血清中的C3浓度。
该方法基于抗体与特定抗原相互作用的原理，具有灵敏度和特异性高的优势。
实验步骤：1. 样本准备：收集来自患者的血清样本，离心后收集上清液。
2. 实验操作：使用免疫测定的方法测定血清中的C3浓度。
具体操作流程如下：a. 准备试剂和标准曲线：根据试剂盒说明书的要求，配制所需的试剂和标准曲线。
b. 样品处理：将血清样本稀释，以适合实验要求的浓度。
c. 加入试剂：将样品和标准曲线加入试剂盒提供的试剂孔中，轻轻摇动混合均匀。
d. 孵育：将孵育盒放置在恒温器中，孵育一定的时间，使抗原与抗体反应完全。
e. 度量：使用光度计测定吸光度，根据标准曲线计算样品中的C3浓度。
实验结果：根据光度计测定的吸光度值，我们可以得到标准曲线，并根据样品吸光度值在标准曲线上确定血清C3浓度。
实验结果应以浓度值形式呈现，以便进行后续的数据分析和统计处理。
实验讨论：根据实验结果，我们可以了解患者血清中的补体C3浓度。
正常情况下，补体C3浓度应处于正常范围内。
如果实验结果显示补体C3浓度高于或低于正常范围，则可能存在补体激活异常。
此时，我们可以结合患者的临床症状和其他检测数据，来进一步诊断和评估患者的疾病情况。
实验限制：尽管该实验方法具有灵敏度和特异性高的特点，但仍存在一些实验限制。
例如，实验结果受到样本质量和处理的影响，所以需要严格控制实验条件和操作步骤以确保准确性。
此外，针对特定疾病和病情的检测标准还处于不断改进和发展的过程中，因此不同的实验室或医院可能会采用不同的标准值。
总结：血清补体C3浓度检测是一种重要的实验方法，可以帮助我们了解患者体内补体系统的激活状态。
补体结合试验
• 反应不发生溶血， 证明待测物存在， 试验结果阳性。
• 反应发生溶血，证 明待测物不存在， 试验结果阴性。
• 补体结合试验最早应用于梅毒的检测。
• 补体结合试验曾广泛的应用于临床微生物学检验 中，比如：细菌、病毒、衣原体、立克次体等微 生物所致疾病的血清学诊断。
• 在对SARS的诊断中，补体结合试验的灵敏度要 高于直接做病毒的分离培养。
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SRBC
hemolysin
SRBC
SRBCs
补体(complement)
SRBC
图
SRBCs
1
SRBC
SRBC 图 2
• 图1 绵羊红细胞与溶血素（hemolysin）即抗绵羊红细胞结合，形成致 敏绵羊红细胞（SRBCs）。
• 图2 致敏绵羊红细胞与补体结合，使其激活，补体发生溶细胞作用，引 起红细胞肿胀，发生溶血。
▪ 1.为什么要设计指示系统？
▪ 2.如果将反应步骤颠倒，先加指示系 统与补体，再加检测系统，结果将怎 样？
待
测
溶
物
SRBC
存 在
血
待
测
物
溶
不
SRBC
存
血
在
▪1.为什么要设计指示系统？
▪2.如果将反应步骤颠倒，先加指示系 统与补体，再加检测系统，结果将怎 样？
▪ 一、背景知识 ▪ 二、试验原理 ▪ 三、试验结果 ▪ 四、临床应用
检测系统
未A知g 不未存知在
Ab
未生AAg成g
检测系统
已知
已知
SRBC
指示系统
血清中补体的检测
主要学习内容 5.1 数据采集系统概述 5.2 数据采集卡的选用与配置 5.3 基于LabVIEW的数据采集过程 5.4 数据采集编程用于获取真实物理世界的数据， 也就是说，虚拟仪器必须要有数据采集的功能 。从这个角度来说，数据采集就是虚拟仪器设 计的核心，使用虚拟仪器必须要掌握如何进行 数据采集。
1. NI PCI-6251多功能采集卡
NI myDAQ 20针螺栓端子I/O连接器
• 驱在动选购程了序N安I公装司的数据采集卡后，安装新的硬件设备前
，请先安装相应的驱动程序软件，以便Windows能检测 到硬件产品。
NI-DAQmx 19.5驱动软件安装界面
MAX运行界面
项目5 血清中补体的检测
5.2.1 数据采集卡类型及选用
• 选用数据采集卡的基本原则： （1）数据分辨率和精度； （2）最高采样速度； （3）通道数； （4）数据总线接口类型； （5）是否有隔离； （6）支持的软件驱动程序及其软件平台。
5.2.2 典型数据采集卡产品介绍
基于USB总线的数据采集 卡
NI的数据采集卡
PCI总线数据采集 卡
C4、C5、C6、C7、 因子、P因子。 物、I因子、H因子、
C8、C9。
C4结合蛋白、过敏毒
素灭活因子等。
项目5 血清中补体的检测
2.补体系统的激活:
一 、 基 本
补体系统各成分通常多以非活性状态存在于血浆之中，当其 被激活物质活化之后，才表现出各种生物学活性。
分 类
概
经典激活路径
旁路激活路径
念
人高2～3倍；血清补体总量低于正常值者，称为低补体血症。低 补体血症可见于以下几种情况：①补体成分的大量消耗：可发生在 血清病、链球菌感染后肾小球肾炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性 溶血性贫血、类风湿性关节炎及同种异体移植排斥反应等。②补体 的大量丢失，多见于外伤、手术和大失血的病人。③补体合成不足： 主要见于肝病人，例如肝硬化、慢性活动性肝炎和急性肝炎的重症 病例。
《诊断学》 第二节 血清补体检验
第二节血清补体检验补体（complement，C）是一组具有酶原活性的糖蛋白，它由传统途径的九种成分C1（C1q、C1r、C1s）～C9，旁路途径的三种成分及其衍生物、B、D、P、H、I等因子组成。
补体参与机体的抗感染及免疫调节，也可介导病理性反应。
补体成分或调控蛋白的遗传缺陷可导致自身免疫性疾病、复发性感染和血管神经性水肿。
补体系统功能下降及补体成分的减少对某些疾病的诊断与疗效观察有极其重要的意义。
一、总补体溶血活性检测总补体溶血活性（total hemolytic complement activity，CH50）实验检测的是补体经典途径的溶血活性，主要反映经典途径补体的综合水平。
原理：补体最主要的活性是溶细胞作用，溶血素（抗体）致敏的绵羊红细胞（抗原抗体复合物）可激活待测血清中的补体C1，进而引起补体活化的连锁反应，从而导致致敏绵羊红细胞上形成多分子的聚合物，膜表面的结构与功能受到影响，最终导致绵羊红细胞溶解。
溶血程度与补体量呈正相关，一般以50％溶血作为检测终点（CH50）。
【参考值】试管法：50～100kU／L。
【临床意义】主要反映补体经典途径（C1～C9）的综合水平。
①CH50增高：见于急性炎症、组织损伤和某些恶性肿瘤。
②CH50减低：见于各种免疫复合物性疾病（如肾小球肾炎）、自身免疫性疾病活动期（如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎）、感染性心内膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重症营养不良和遗传性补体成分缺乏症等。
二、补体C1 q检测补体clq（complement lq，Clq）是构成补体C1的重要组分。
C1是由一个Clq分子、2个Clr分子和2个Cls分子构成的钙离子依赖性复合物。
目前Clq为常规检测项目。
【参考值】ELISA法：0.18～0.19g／L；免疫比浊法：0.025～0.05g／L。
|【临床意义】①C1q增高：见于骨髓炎、类风湿关节炎、痛风、过敏性紫癜等。
补体结合试验(CFT)
补体结合实验(CFT)
新乡医学院免疫学教研室
补体结合实验
一、原理 CFT是根据任何抗原抗体复合物可激活、固定补 体的特性，用一定量的补体与致敏红细胞来检测 抗原、抗体间有无特异性结合的一类实验。 1、参与本实验的成分包括 ①已知抗原（或抗体） ②待检抗体（或抗原） ③SRBC ④SRBC相应的溶血素 ⑤补体
补体结合实验
②各管中加SRBC0.2ml、溶血素0.2ml,37度水浴箱 15-30分钟 ③观察结果 四、结果 试管号 名称 结果 1 2 3 4 5 6 试验管 特异性对照 血清对照 抗原对照 补体对照 溶血素对照 不溶血 溶血 溶血 溶血 溶血 不溶血
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****** 0.2ml ******
0.2ml
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0.2ml ******
0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.4ml
6
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****** 0.6ml
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补体结合实验
三、操作方法 ①加样(如下图),37度水浴箱15分钟 试管号 伤寒血清 伤寒杆菌 痢疾杆菌 1 0.2ml 0.2ml ****** 补体 NS
0.2ml ******
2
3 4 5
0.2ml
0.2ml ****** ******
补体结合实验
（Ag+Ab）+补体
双方相对应形成IC 激活并固定补体 不能激活并固定补体 双方不相对应（或缺少 一方）形不成IC
加入SRBC和溶血素
加入SRBC和溶血素 不出现溶血 出现溶血
补体固定实验报告
一、实验目的1. 学习补体固定实验的基本原理和方法。
2. 了解补体在免疫应答中的作用。
3. 掌握补体固定实验的操作步骤和结果分析。
二、实验原理补体固定实验是一种检测抗原抗体反应的方法，通过检测抗体与补体结合后是否能够固定补体来间接判断抗原抗体反应的存在。
在补体固定实验中，补体先与抗原结合，然后与抗体结合，形成抗原-抗体-补体复合物。
如果抗原与抗体特异性结合，则补体不能被固定，实验结果为阴性；如果抗原与抗体没有特异性结合，则补体被固定，实验结果为阳性。
三、实验材料1. 抗原：如细菌、病毒、细胞等。
2. 抗体：针对特定抗原的免疫球蛋白。
3. 补体：新鲜或冻存的补体溶液。
4. 生理盐水：用于稀释抗原、抗体和补体。
5. 0.1% NaN3溶液：用于灭活补体。
6. 试管：用于实验操作。
7. 移液器：用于移取试剂。
8. 酶标仪：用于检测反应结果。
四、实验步骤1. 制备抗原抗体溶液：将抗原和抗体分别用生理盐水稀释至适当浓度。
2. 设置对照组和实验组：- 对照组：加入抗原、抗体和补体。
- 实验组：加入抗原、抗体和灭活的补体。
3. 加入试剂：将抗原、抗体和补体（或灭活的补体）加入试管中，轻轻混匀。
4. 温育：将试管置于37℃水浴中温育30分钟。
5. 洗涤：用生理盐水洗涤试管，去除未结合的抗原、抗体和补体。
6. 加入底物：加入适量的底物溶液，轻轻混匀。
7. 显色：将试管置于酶标仪检测波长下，读取吸光度值。
8. 结果分析：比较对照组和实验组的吸光度值，判断抗原抗体反应是否存在。
五、实验结果实验结果显示，对照组和实验组的吸光度值差异较大，说明抗原与抗体发生了特异性结合，补体被固定。
因此，实验结果为阳性。
六、实验讨论1. 补体固定实验是一种检测抗原抗体反应的常用方法，具有操作简便、结果可靠等优点。
2. 实验过程中，要注意试剂的浓度和温度，以确保实验结果的准确性。
3. 实验结果的分析需要结合具体的实验背景和目的，进行综合判断。