枸杞多糖含量的准确检测
枸杞多糖测定

枸杞多糖测定稀释至刻度,备用。
2.6 样品中多糖的测定吸取适量样品液,加蒸馏水至2 ml,按标准曲线下的方法测吸光度A为0.2343,查标准曲线得样品液中葡萄糖含量4.69(μg/ml)。
2.7 结果计算多糖含量%=p?D?F?100 m式中:p:样液葡萄糖浓度(μg/ml);D:样品液稀释因素;F:换算因素;m:样品质量(μg)。
测量结果代入得:多糖含量%=12.51%3 实验讨论(1)苯酚-硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸杞多糖成分在H2SO4的作用下,水解成单糖,并迅速脱水生成糠醛衍生物,与苯酚缩合成有色化合物,再用分光光度法测定其枸杞多糖含量。
本法操作简单,显色稳定,灵敏度高,重现性好,可作为枸杞及其它多糖含量的测定方法。
(2)枸杞子水提物中含有单糖、低聚糖等杂质, 且呈红色, 因此在测定之前要先用乙醇除去单糖、低聚糖等杂质并以丙酮-石油醚脱脂脱色, 才不至于对测定产生干扰。
(3)试验中发现,浓硫酸的加入方式对实验的结果影响较大,采取移液管悬空,垂直加入浓硫酸,立即摇匀的方式,显色反应充分,且显色结果稳定。
(4)各种单糖的标准曲线均只在0~30 μg含量范围内呈较好的线形关系,因此制作标准曲线时,单糖浓度不宜太大。
(5)本法采用精制的枸杞多糖作为对照品,计算出枸杞多糖与葡萄糖的换算因子,再乘以用硫酸-苯酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量,这样可避免直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差,结果更准确。
(6) 多糖提取工艺以及分离、纯化方法决定了产品的纯度, 另外枸杞子产地的不同也可能对研究结果有影响。
由于目前市场枸杞多糖产品主要作为保健产品,需较高的收率和较低的成本。
而采用乙醇沉淀法提取的枸杞多糖含量较高,收率可达8%左右,并且乙醇可回收,既使成本进一步降低,又减少了对环境的污染,且取得了很好的经济效益。
本实验所测得枸杞含糖量高,实验材料为上好的宁夏枸杞。
枸杞中总糖的测定

枸杞中总糖的测定1(实验原理在沸热条件下,用还原糖溶液滴定一定量的菲林试剂时,将菲林试剂中的二价铜还原为一价铜,以亚甲基蓝为指示剂,稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。
2.仪器设备? 实验室用样品粉碎机? 电热恒温水浴? 1000W调温电炉? 玻璃仪器:200ml、250ml容量瓶,250ml锥形瓶,50ml碱式滴定管 3.试剂配制? 碱性酒石酸铜甲液:称取15g硫酸铜及0.05g次甲基蓝溶于水中并稀释至1000ml。
? 碱性酒石酸铜乙液:称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠,溶于水中,再加入4g亚铁氰化钾完全溶解后稀释至1000ml,贮存于橡胶塞棕色瓶中? 乙酸锌溶液:称取21.9g乙酸锌,加入3ml冰乙酸,加水溶解并稀释至100ml。
10.6%亚铁氰化钾溶液:称取10.6g亚铁氰化钾溶于水中并稀释至100ml?即得。
? 6mol?L盐酸:量取247ml浓盐酸(相对密度1.19),加水稀释至500ml即得。
? 30%氢氧化钠溶液:称取30g氢氧化钠溶于水中定容100ml。
? 0.2%甲基红溶液:称取0.2g甲基红溶于水中,定容100ml。
? 葡萄糖标准溶液:精密称取1.000g(精确到0.0001g)经过98?~100?干燥至恒重的纯葡萄糖,加水溶解后加入5ml盐酸并用水稀释至1000ml容量瓶中,此溶液每毫升相当于mg葡萄糖。
4.样品提取液制备用四分法取样,粉碎至均匀(枸杞可以先冷冻再粉碎),精密称取5.00g~10.00g 样品,转入250ml容量瓶中,加水至容积约为200ml,置80??2?水浴保温30min,期间摇动数次,取出加入乙酸锌及亚铁氰化钾溶液各5ml摇匀,冷却至室温用蒸馏水定容。
过滤(初滤液抛弃约30ml),滤液备用。
吸取滤液50ml与100ml容量瓶中,加入6mol?L盐酸10ml,在80??2?水浴中加热水解15min,取出用冷水冷却至室温,加甲基红指示剂一滴,用30%氢氧化钠溶液中和,然后用蒸馏水定容,备用。
枸杞多糖的提取与含量测定

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实验试剂仪器
实验试剂
干燥枸杞子、葡萄糖标准溶液、蒽酮、浓硫酸、95% 乙醇、无水乙醇、三氯甲烷‐正丁醇(4:1)。
实验仪器
分析天平、托盘天平、离心机(大)、离心机(小)、 水浴锅、电炉、漩涡震荡仪、真空烘箱、分光光度计、 800ml烧杯、100ml烧杯、离心管、分液漏斗、50ml容量瓶、 玻璃棒、量筒、加盖试管若干。
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实验数据记录与处理
标准曲线的绘制
以下表格是不同浓度的标准葡萄糖溶液吸光度的实验数据。
即可得到如下标准曲线。
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实验数据记录与处理
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实验数据记录与处理
枸杞多糖的含量测定
根据标准曲线可以查得枸杞多糖样液吸光度的数值。
样液1含0.02367mg枸杞多糖, 样液2含0.04735mg枸杞多糖。
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实验内容
标准曲线的绘制
取干燥试管6 支,按下表数据配置一系列不同浓度的葡萄糖溶液 。
在620nm波长下以第一管为空白试验,迅速测量吸光值,以葡 萄糖含量(mg)为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘出标准曲线。
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实验内容
枸杞多糖的含量测定
精密称定20mg 多糖粗品,溶于50ml 蒸馏水中,制成样品液。 分别吸取0.5ml,1ml 多糖溶液至试管中,加蒸馏水至总体积为 1ml。冰浴中冷却,再加入4ml 蒽酮试剂,沸水浴中煮沸10min ,取出后自来水冷却,620nm 比色,其他条件与作标准曲线同 。测得吸光度值由标准曲线查出样品液的糖含量。
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实验内容
枸杞子多糖含量的测定实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除枸杞子多糖含量的测定实验报告篇一:实验三多糖含量的测定实验三多糖含量的测定一、实验目的1、分光光度法测多糖的原理和方法2、用officeexcel作标准曲线二、仪器与试剂1、仪器:7200分光光度计、水浴锅、电子天平2、试剂:1水葡萄糖、5%苯酚溶液、浓h2so4、dh2o3、器皿:50ml容量瓶、10ml量筒、玻棒、洗耳球、烧杯、试管三、步骤1、标准曲线的绘制①取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶,加入蒸馏水溶解并小心稀释至刻度,再取5ml于50ml容量瓶,加蒸馏水稀释,即1.0mg/ml。
②分别量取0.25ml,0.5ml,1.0ml,1.5ml,2.0ml,2.5ml分别置于已编号的50ml容量瓶,加蒸馏水定容。
③分别吸取上述溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4,摇匀后,室温5min,90oc水浴15min,冷却至室温。
空白对照:2ml蒸馏水+1ml5%苯酚+5ml浓硫酸吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=ax+b④准确量取多糖溶液(待测)2.0ml于50ml容量瓶中,加蒸馏水定容,方法同上述。
四结果①计算浓度(待测液)本组所测得多糖溶液(待测)的吸光度为的0.385,代入根据吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=14.255x+0.0309,可得待测液的浓度为0.025*25=0.625mg/ml.。
②实验主要步骤(记录)步骤记录:Ⅰ首先配制浓度分别为0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的葡萄糖溶液;然后取配好的溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4,;不断震荡,溶液逐渐变为褐色,放出热量,且随着葡萄糖浓度的增加,溶液的颜色也不断变深;室温5min,90oc水浴15min,反应更为充分,溶液颜色有稍微加深,冷却至室温;最后用7200分光光度计一一测量其吸光度,得到的的数据是0.098、0.19、0.337、0.412、0.584、0.774。
关于不同枸杞子中枸杞多糖的含量分析

关于不同枸杞子中枸杞多糖的含量分析关于不同枸杞子中枸杞多糖的含量分析摘要:不同枸杞当中多糖含量存在着较大的区别,以此可作为枸杞品质鉴别参考。
本研究通过相关实验提取方法对枸杞多糖进行了提取,取得了一定的成果,供以参考。
关键词:枸杞;多糖;含量作为一种常见的中药药材枸杞不仅仅能够药用,同时具有良好的保健成效。
它具有补肾保肝、抗脂肪肝、抗疲劳、抗肿瘤、延缓衰老等作用。
不同产地、批次枸杞在组分含量上有着一定的区别,特别的在多糖含量上存在着较大的差异。
枸杞对免疫功能有着显著的影响,可让巨噬细胞的吞噬功能得以提升,同时能够让血清当中溶菌酶作用得以增强,由此可促进抗绵羊红细胞抗体效价上升【1】。
枸杞提取物具有较好的降血糖效果且持续性较长、毒性较小,可促进机体的糖耐量提升。
在相关研究中发现实验大鼠食用枸杞当中的甜菜碱可促进磷脂水平提升,胆固醇呈降低太,对碱性磷酸脂酶、胆碱酯酶等都有明显的改善作用【2】。
另外枸杞具有抗癌成效,可对癌细胞DNA合成产生抑制作用并对有丝分裂产生显著的干扰作用,从而降低癌细胞的实际生殖能力。
从产地来看目前我国优质的枸杞大局部来自宁夏,在相关研究中也证实宁夏地区及周边产地枸杞多糖含量较其他地区更高,这也表达了不同地域环境下枸杞果实的差异。
本研究通过相关实验对不同类别的枸杞进行了鉴定,并以多糖含量对枸杞的品质进行了分析。
一、实验样品、器材及试剂实验样品:市场上的交易的不同批次的宁夏枸杞。
实验试剂:苯酚、碳酸氢钠、石油醚、乙醚、乙醇、丙酮等,上述试剂均为分析纯,基准试剂为葡糖糖溶液。
实验仪器:紫外分光管度计、旋转蒸发仪、电子分析天平、恒温枯燥箱、水浴锅等。
二、实验方法先制备苯酚试剂,用分析天平准确称取100g苯酚、0.05g碳酸氢钠以及0.01g铝,三者均至于圆底烧瓶当中,加热蒸馏,蒸馏温度控制在180摄氏度左右,冷却后将馏分提出,并用蒸馏水溶解,密封保存。
然后制备标准曲线,先配置标准葡萄糖溶液,取枯燥后葡萄糖0.1006g置入100ml容量瓶配制标准也。
枸杞中枸杞多糖含量的测定

枸杞中枸杞多糖含量的测定一、实验内容用分光光度法测定枸杞中枸杞多糖的含量。
二、实验目的与要求(1)掌握用分光光度法测定枸杞中枸杞多糖含量的原理及方法。
(2)熟练掌握分光光度计的原理及使用方法。
三、实验原理用80%乙醇溶液提取以除去单糖、低聚糖、苷类及生物碱等干扰性成分,然后用水提取其中所含的多糖类成分。
多糖类成分在硫酸作用下,先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后和苯酚缩合成有色化合物,用分光光度法于适当波长处测定其多糖含量。
四、试剂80%乙醇溶液:用95%乙醇或无水乙醇加适量蒸馈水配制。
硫酸。
苯酚液:取苯酚100g,加铝片O.lg与碳酸氢钠0.05g,蒸馏收集1721馏分,称取此馏分10g,加水150mL,置于棕色瓶中即得。
葡萄糖标准溶液:精密称取105T:干燥至恒重的标准葡萄糖O.lOOOg,加水溶解并定容至lOOOmL即得。
五、仪器)实验室用样品粉碎机、分光光度计、电热恒温水浴。
六、操作步骤1-样品处理精密称取样品粉末0.4g (精确到0.000lg)置于圆底烧瓶中,加80%乙醇溶液 200ml回流提取lh,趁热过滤,残渣用80%热乙醇溶液洗涤(约10mL x 10次),残渣连同滤纸置于烧瓶中,加蒸馏水l00ml,加热提取1h,趁热过滤,残渣用热蒸馏水充分洗涤(约lOmLxl0次),洗液并入滤液,冷却后移入250mL容量瓶中,用水定容,待Ho2•标准曲线的绘制 %精密吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1-OmL 中,各加蒸馏水使体积为2. OmL,再各加苯酚液l.OmL,摇匀,迅速滴加硫酸5.0mL,摇匀后放置5min,置沸水浴中加热15min,取出冷却至室温;另以蒸馏水 2mL,加苯酚和硫酸,同上操作为空白对照。
于490nm处测定吸光度,绘制标淮曲线。
3.试样的测定准确吸取待测液一定量(视待测液含量而定),加蒸馏水至2niL,以下操作按标准曲线绘制下的方法测定吸光度,根据标准曲线查出显色液中葡萄糖含量。
枸杞多糖的超声法提取法

枸杞多糖的超声法提取法及抗氧化性研究1、枸杞多糖的含量测定1)、标准曲线的绘制精密称取于105%干燥至恒重的无水葡萄糖对照品100 mg,加入100 ml容量瓶中,用纯化水溶解至刻度。
分别精密移取对照品储备液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 ml于100 ml量瓶中,加水稀释至刻度,然后各取1.0 ml于10 ml比色管中,分别加入5%的苯酚溶液1.0 ml,摇匀后加入5.0 ml浓硫酸,立即摇匀,在沸水浴中加热15 min,冷却至室温。
以纯化为空白对照,在487 nm处测吸光度值A。
以吸光度值为横坐标,浓度为纵坐标,绘制标准曲线。
2)、样品含量的测定取干燥的枸杞多糖供试品,按实际实验结果将其稀释至合适浓度。
精密吸取待测液1.0 ml,置于10 ml比色管中,按“2.1.1”方法显色,测定A值,按公式计算多糖含量。
按下式计算多糖含量(% ) = 3. 17C ×D /W×100%,式中C为样品溶液的葡萄糖质量浓度(mg/m1),D为样品溶液的稀释倍数,f为换算因子(f=3.17) ,w为样品质量(mg)2、正交试验考察提取工艺(单因素试验)1)、料液比的影响称取枸杞样品4份,均为5g,分别加入lO、20、30、40倍水量,在50℃,pH=7,超声提取30 min,浓缩至20 ml左右,加5倍95%乙醇沉淀,沉淀再溶解,测定吸光度,从而比较多糖含量的提取率。
2)、时间的影响称取枸杞样品4份,均为5 g,加入10倍水量,在50~C,pH=7,分别超声提取10 min、20 min、30 min、40min,浓缩至20 ml左右,加5倍95%乙醇沉淀,沉淀再溶解,测定吸光度,从而比较多糖含量的提取率。
3)、温度的影响称取枸杞样品4份,均为5 g,加入10倍水量,分别在40℃、50℃、60℃、70℃,pH=7,超声提取从而比较多糖含量的提取率。
4)、pH值的影响称取枸杞样品4份,均为5 g,分别加入10倍水量,分别在pH=7、8、9、10,50℃,超声提取30 min,浓缩至20 ml左右,加5倍95%乙醇沉淀,沉淀再溶解,测定吸光度,从而比较多糖含量的提取率。
枸杞多糖的提取与鉴定

枸杞多糖的提取与鉴定1242818杨立君实验原理强酸可以使糖类脱水生成糠醛。
生成的糠醛或羟甲基糠醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色。
颜色的深浅可以作为定量的标准。
这一方法具有很高的灵敏度,糖含量在30μg左右就能进行测定,所以可以作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适]1[。
实验试剂1.标准葡萄糖试剂:将葡萄糖105℃烘干至恒重(2h),准确称取50mg,无离子水定容至500mL,终浓度为0.1mg/mL.2.蒽酮-浓硫酸试剂:称取0.1997g蒽酮,溶于100mL浓硫酸,现用现配。
3.葡萄糖,阿拉伯糖,甘露糖]3[],2[4.硫代硫酸钠溶液,活性炭,正丁醇,无水乙醇,丙酮。
三氯甲烷,甲苯胺乙醇溶液实验器材分光光度计,超速离心机,电炉,烧杯,试管,干燥器,滤纸,层析缸以及其他相关玻璃仪器实验流程(一) 提取枸杞干果粉碎,氯仿- 甲醇(2∶1)回流脱脂8~10 h 近无色,挥干溶剂以后将脱脂后的枸杞样品放入烧杯中,分3次加15、12、10 倍量的蒸馏水于90 ℃水浴提取,每次2 h;收集3 次的滤液减压浓缩至约200 mL,转移到大烧杯中,加4 倍量的95%乙醇,沉淀12 h 后抽滤,并依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤,干燥后便得到枸杞多糖的粗制品。
]4[(二)纯化多糖粗品加水溶解,4 000 r/min 离心10 min 后取上清液,加30%双氧水适量,40 ℃保温4~6 h 后,加三氯甲烷-正丁醇(4∶1,Sevag 法)溶液沉淀蛋白,取上清液;此步骤反复多次,直到无白色絮状沉淀出现。
将除去蛋白的多糖溶液浓缩后,转移到分子排阻为8 000~10 000 Da 的透析袋中,流水透析24 h 后,蒸馏水透析过夜,溶液颜色变淡,浓缩后真空干燥得枸杞多糖精制品。
]4[(三) 理化性质分析将枸杞多糖精品分别加入水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和正丁醇中,观察其溶解性。
另在浓硫酸存在下观察枸杞多糖与α-萘酚的作用,于界面处观察颜色变化。
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申请科研资助项目申报书
项目或课题名称:枸杞多糖含量的准确检测
申请单位:宁夏瑞碧枸杞产业有限公司
联系者姓名:
联系者电话:
宁夏瑞碧枸杞产业有限公司
二00八年二月
一、申请单位的基本情况:
宁夏瑞碧枸杞产业有限公司是由陕西方舟健康产业集团投资,以枸杞汁﹑枸杞干果﹑枸杞冻干粉﹑枸杞提取物等枸杞系列产品为主的专业供应商。
目前,公司在宁夏枸杞原汁产业中属龙头企业。
公司注册资本1800万,员工63人,与南梁农场等通过有机认证的基地建立了稳定的鲜果原料供应关系,并建成目前国内最大的枸杞原汁加工线,每榨季产量可达2000吨以上。
公司严抓质量管理,已通过ISO 认证﹑HACCP认证及Kosher认证。
为加强公司技术力量,我们先后与中国科学院上海有机化学研究所、陕西师范大学生命科学院﹑北京食品研究所、西北大学生命科学学院、西安理工大学理学院、第四军医大学等建立了密切的合作关系,在科研开发上不断精进,以增强公司核心竞争力。
二、课题研究的目的及意义:
国内一些大专院校科研单位的科技工作者近几年来从事宁夏枸杞有效成份分析,认为枸杞多糖是宁夏枸杞最主要的生物活性物质。
科学试验证明,枸杞里的一种特有成份能使P—24抗体测值增加,促进T淋巴细胞增高。
所谓的一种特有成份就是指枸杞多糖(LBP)。
研究表明,枸杞多糖是由阿拉伯糖、鼠李糖、术糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖及半乳糖醛酸组成的酸性杂多糖的糖链与蛋白质的肽链以共价键的形式结合的含肽链多糖,分子量均大于1万。
北京医科大学、华中农业大学和中科院上海有机化学研究所等单位对枸杞多糖进行了分离纯化,并且对分子量、结构、基本性质进行
了深入的研究工作,但在枸杞多糖的准确测量方面研究很少,这为我们的市场开拓带来了很多困惑。
当客户要我们提供枸杞的活性成分以及检测方法时,我们并不能拿出令客户信服的数据,这在重视科学数据而又对枸杞知之甚少的欧美市场尤为明显,严重影响了我们扩大欧美市场。
因此本课题力图回答这些问题:得到枸杞多糖样品,用药理学实验证明我们所分离的枸杞多糖的活性,在此基础上建立枸杞多糖的准确检测方法。
这个项目完成后将大大增加公司核心竞争力,使我们站在新的高度开拓国内外市场,为公司进一步的发展打下坚实的科学基础。
三、主要研究开发内容及采用的工艺技术路线:
主要研究开发内容:枸杞粗多糖的获得和进一步分离纯化,枸杞多糖化学组成分析及进行药理学实验,枸杞多糖准确检测方法的建立。
采用的工艺路线为纯化出具有显著药理活性的枸杞多糖后,在对枸杞多糖进行结构、成分、紫外吸收特征等研究基础上,改进硫酸苯酚法以适合车间低成本准确检测。
四、本研究创新点及技术关键:
1 本研究创新点
(1)枸杞多糖提取方法选择膜分离,以避免常规提取方法对枸杞多糖的破坏;
(2)本研究在改进硫酸苯酚法时,将对样品提取过程中多糖降解、
小分子糖干扰、以多种组成单糖作对照进行研究。
2 技术关键
分离纯化介质直接关系到能否分离到枸杞多糖和枸杞多糖的纯度,而且在进行后期实验中需要大量枸杞多糖纯品,分离介质将直接影响到能否得到大量样品以供药理学实验,因此对分离纯化介质的选择是本项目的技术关键。
五、项目完成后需达到的主要技术指标:
本研究完成后得到枸杞多糖1000g,含量大于95%,得到药理学数据,建立枸杞多糖低成本准确检测方法。
六、研究进度:
(1)2008.2—2008.4 查阅资料;
(2)2008.5—2008.11 分离纯化得到枸杞多糖,并对工艺进行完善;
(3)2008.12—2009.1对枸杞多糖组成进行分析,建立枸杞多糖检测方法。
七、成果保护及年经济效益、社会效益:
本项目完成后将申请专利对本公司知识予以保护。
本项目的完成将增加公司枸杞汁产品的出口,每年可增加数百万元的利税效益,同时也为本地区的社会发展带来好处,对于宁夏经济的繁荣和健康产业的发展十分有益。
八、本项目研究的工作基础:
项目主持单位根据市场情况,已经调用相关人力物力进行前提研
究论证工作,但深感力量单薄,无法依靠自己的力量完成此项工作,迫切需要政府部门给予资助,不使此商机丧失。
九、经费预算及主要用途:
查阅资料:40000元,自己筹备;
实验设备:300000元,外部筹措;
人工费:50000元,自己筹备;
药理学实验费:200000元,外部筹措。
十、参加研究人员及分工:
在执行此项目过程中,本公司将投入研发部骨干人员,联合中国科学院有机化学研究所田庚元研究员、西安理工大学杜永峰博士、第四军医大学刘新医师以保证本项目的完成。