枸杞子中多糖含量的测定(1)
枸杞多糖测定

枸杞多糖测定稀释至刻度,备用。
2.6 样品中多糖的测定吸取适量样品液,加蒸馏水至2 ml,按标准曲线下的方法测吸光度A为0.2343,查标准曲线得样品液中葡萄糖含量4.69(μg/ml)。
2.7 结果计算多糖含量%=p?D?F?100 m式中:p:样液葡萄糖浓度(μg/ml);D:样品液稀释因素;F:换算因素;m:样品质量(μg)。
测量结果代入得:多糖含量%=12.51%3 实验讨论(1)苯酚-硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸杞多糖成分在H2SO4的作用下,水解成单糖,并迅速脱水生成糠醛衍生物,与苯酚缩合成有色化合物,再用分光光度法测定其枸杞多糖含量。
本法操作简单,显色稳定,灵敏度高,重现性好,可作为枸杞及其它多糖含量的测定方法。
(2)枸杞子水提物中含有单糖、低聚糖等杂质, 且呈红色, 因此在测定之前要先用乙醇除去单糖、低聚糖等杂质并以丙酮-石油醚脱脂脱色, 才不至于对测定产生干扰。
(3)试验中发现,浓硫酸的加入方式对实验的结果影响较大,采取移液管悬空,垂直加入浓硫酸,立即摇匀的方式,显色反应充分,且显色结果稳定。
(4)各种单糖的标准曲线均只在0~30 μg含量范围内呈较好的线形关系,因此制作标准曲线时,单糖浓度不宜太大。
(5)本法采用精制的枸杞多糖作为对照品,计算出枸杞多糖与葡萄糖的换算因子,再乘以用硫酸-苯酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量,这样可避免直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差,结果更准确。
(6) 多糖提取工艺以及分离、纯化方法决定了产品的纯度, 另外枸杞子产地的不同也可能对研究结果有影响。
由于目前市场枸杞多糖产品主要作为保健产品,需较高的收率和较低的成本。
而采用乙醇沉淀法提取的枸杞多糖含量较高,收率可达8%左右,并且乙醇可回收,既使成本进一步降低,又减少了对环境的污染,且取得了很好的经济效益。
本实验所测得枸杞含糖量高,实验材料为上好的宁夏枸杞。
枸杞多糖的提取与含量测定

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实验试剂仪器
实验试剂
干燥枸杞子、葡萄糖标准溶液、蒽酮、浓硫酸、95% 乙醇、无水乙醇、三氯甲烷‐正丁醇(4:1)。
实验仪器
分析天平、托盘天平、离心机(大)、离心机(小)、 水浴锅、电炉、漩涡震荡仪、真空烘箱、分光光度计、 800ml烧杯、100ml烧杯、离心管、分液漏斗、50ml容量瓶、 玻璃棒、量筒、加盖试管若干。
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实验数据记录与处理
标准曲线的绘制
以下表格是不同浓度的标准葡萄糖溶液吸光度的实验数据。
即可得到如下标准曲线。
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实验数据记录与处理
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实验数据记录与处理
枸杞多糖的含量测定
根据标准曲线可以查得枸杞多糖样液吸光度的数值。
样液1含0.02367mg枸杞多糖, 样液2含0.04735mg枸杞多糖。
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实验内容
标准曲线的绘制
取干燥试管6 支,按下表数据配置一系列不同浓度的葡萄糖溶液 。
在620nm波长下以第一管为空白试验,迅速测量吸光值,以葡 萄糖含量(mg)为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘出标准曲线。
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实验内容
枸杞多糖的含量测定
精密称定20mg 多糖粗品,溶于50ml 蒸馏水中,制成样品液。 分别吸取0.5ml,1ml 多糖溶液至试管中,加蒸馏水至总体积为 1ml。冰浴中冷却,再加入4ml 蒽酮试剂,沸水浴中煮沸10min ,取出后自来水冷却,620nm 比色,其他条件与作标准曲线同 。测得吸光度值由标准曲线查出样品液的糖含量。
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实验内容
枸杞子多糖含量的测定实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除枸杞子多糖含量的测定实验报告篇一:实验三多糖含量的测定实验三多糖含量的测定一、实验目的1、分光光度法测多糖的原理和方法2、用officeexcel作标准曲线二、仪器与试剂1、仪器:7200分光光度计、水浴锅、电子天平2、试剂:1水葡萄糖、5%苯酚溶液、浓h2so4、dh2o3、器皿:50ml容量瓶、10ml量筒、玻棒、洗耳球、烧杯、试管三、步骤1、标准曲线的绘制①取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶,加入蒸馏水溶解并小心稀释至刻度,再取5ml于50ml容量瓶,加蒸馏水稀释,即1.0mg/ml。
②分别量取0.25ml,0.5ml,1.0ml,1.5ml,2.0ml,2.5ml分别置于已编号的50ml容量瓶,加蒸馏水定容。
③分别吸取上述溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4,摇匀后,室温5min,90oc水浴15min,冷却至室温。
空白对照:2ml蒸馏水+1ml5%苯酚+5ml浓硫酸吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=ax+b④准确量取多糖溶液(待测)2.0ml于50ml容量瓶中,加蒸馏水定容,方法同上述。
四结果①计算浓度(待测液)本组所测得多糖溶液(待测)的吸光度为的0.385,代入根据吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=14.255x+0.0309,可得待测液的浓度为0.025*25=0.625mg/ml.。
②实验主要步骤(记录)步骤记录:Ⅰ首先配制浓度分别为0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的葡萄糖溶液;然后取配好的溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4,;不断震荡,溶液逐渐变为褐色,放出热量,且随着葡萄糖浓度的增加,溶液的颜色也不断变深;室温5min,90oc水浴15min,反应更为充分,溶液颜色有稍微加深,冷却至室温;最后用7200分光光度计一一测量其吸光度,得到的的数据是0.098、0.19、0.337、0.412、0.584、0.774。
枸杞中枸杞多糖含量的测定

枸杞中枸杞多糖含量的测定一、实验内容用分光光度法测定枸杞中枸杞多糖的含量。
二、实验目的与要求(1)掌握用分光光度法测定枸杞中枸杞多糖含量的原理及方法。
(2)熟练掌握分光光度计的原理及使用方法。
三、实验原理用80%乙醇溶液提取以除去单糖、低聚糖、苷类及生物碱等干扰性成分,然后用水提取其中所含的多糖类成分。
多糖类成分在硫酸作用下,先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后和苯酚缩合成有色化合物,用分光光度法于适当波长处测定其多糖含量。
四、试剂80%乙醇溶液:用95%乙醇或无水乙醇加适量蒸馈水配制。
硫酸。
苯酚液:取苯酚100g,加铝片O.lg与碳酸氢钠0.05g,蒸馏收集1721馏分,称取此馏分10g,加水150mL,置于棕色瓶中即得。
葡萄糖标准溶液:精密称取105T:干燥至恒重的标准葡萄糖O.lOOOg,加水溶解并定容至lOOOmL即得。
五、仪器)实验室用样品粉碎机、分光光度计、电热恒温水浴。
六、操作步骤1-样品处理精密称取样品粉末0.4g (精确到0.000lg)置于圆底烧瓶中,加80%乙醇溶液 200ml回流提取lh,趁热过滤,残渣用80%热乙醇溶液洗涤(约10mL x 10次),残渣连同滤纸置于烧瓶中,加蒸馏水l00ml,加热提取1h,趁热过滤,残渣用热蒸馏水充分洗涤(约lOmLxl0次),洗液并入滤液,冷却后移入250mL容量瓶中,用水定容,待Ho2•标准曲线的绘制 %精密吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1-OmL 中,各加蒸馏水使体积为2. OmL,再各加苯酚液l.OmL,摇匀,迅速滴加硫酸5.0mL,摇匀后放置5min,置沸水浴中加热15min,取出冷却至室温;另以蒸馏水 2mL,加苯酚和硫酸,同上操作为空白对照。
于490nm处测定吸光度,绘制标淮曲线。
3.试样的测定准确吸取待测液一定量(视待测液含量而定),加蒸馏水至2niL,以下操作按标准曲线绘制下的方法测定吸光度,根据标准曲线查出显色液中葡萄糖含量。
枸杞多糖的超声法提取法

枸杞多糖的超声法提取法及抗氧化性研究1、枸杞多糖的含量测定1)、标准曲线的绘制精密称取于105%干燥至恒重的无水葡萄糖对照品100 mg,加入100 ml容量瓶中,用纯化水溶解至刻度。
分别精密移取对照品储备液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 ml于100 ml量瓶中,加水稀释至刻度,然后各取1.0 ml于10 ml比色管中,分别加入5%的苯酚溶液1.0 ml,摇匀后加入5.0 ml浓硫酸,立即摇匀,在沸水浴中加热15 min,冷却至室温。
以纯化为空白对照,在487 nm处测吸光度值A。
以吸光度值为横坐标,浓度为纵坐标,绘制标准曲线。
2)、样品含量的测定取干燥的枸杞多糖供试品,按实际实验结果将其稀释至合适浓度。
精密吸取待测液1.0 ml,置于10 ml比色管中,按“2.1.1”方法显色,测定A值,按公式计算多糖含量。
按下式计算多糖含量(% ) = 3. 17C ×D /W×100%,式中C为样品溶液的葡萄糖质量浓度(mg/m1),D为样品溶液的稀释倍数,f为换算因子(f=3.17) ,w为样品质量(mg)2、正交试验考察提取工艺(单因素试验)1)、料液比的影响称取枸杞样品4份,均为5g,分别加入lO、20、30、40倍水量,在50℃,pH=7,超声提取30 min,浓缩至20 ml左右,加5倍95%乙醇沉淀,沉淀再溶解,测定吸光度,从而比较多糖含量的提取率。
2)、时间的影响称取枸杞样品4份,均为5 g,加入10倍水量,在50~C,pH=7,分别超声提取10 min、20 min、30 min、40min,浓缩至20 ml左右,加5倍95%乙醇沉淀,沉淀再溶解,测定吸光度,从而比较多糖含量的提取率。
3)、温度的影响称取枸杞样品4份,均为5 g,加入10倍水量,分别在40℃、50℃、60℃、70℃,pH=7,超声提取从而比较多糖含量的提取率。
4)、pH值的影响称取枸杞样品4份,均为5 g,分别加入10倍水量,分别在pH=7、8、9、10,50℃,超声提取30 min,浓缩至20 ml左右,加5倍95%乙醇沉淀,沉淀再溶解,测定吸光度,从而比较多糖含量的提取率。
不同等级枸杞中枸杞多糖的含量测定与比较

2 6 回收率试验 取宁夏枸杞特级, 精密 称取枸杞多糖粉末 0 1017g, 加人葡萄糖 0 0182g, 加 80% 的乙 醇液 50mL , 45kHz 超声提 取 2 次, 每次 25min。过滤, 滤渣 加水 50mL 于 45kHz 超声提取 20min, 过 滤, 再加水 50mL 重复超声提取 1 次, 合并 两次提取 液, 然 后 定 容 于 250mL 容 量 瓶 中, 从 中 精 密 吸 取 10 00mL , 照标准曲线制 备项下的方法测定吸光 度, 计算 回收 率。 表 4 枸杞多糖回收率试验结果
品种 宁夏枸杞 宁夏枸杞 宁夏枸杞 宁夏枸杞
产地 宁夏 宁夏 宁夏 宁夏
枸杞多糖含量( % ) 12 84 11 32 10 79 9 86
3 讨论 3 1 现代药理研究表明, 枸杞多糖对机体 免疫功能有促进和 调节作用。枸杞多糖能显著提高小鼠吞噬 细胞百分率和吞噬 指数, 并显著提高血清溶 菌酶活 力。枸杞多 糖能通 过对小 鼠 白细胞介素- 2 活性的影响使 淋巴细胞 增殖水 平得到 提高, 且 能显著提高正常健康人的淋巴细 胞转化率。应用超适剂量的 SRBC 免疫法( SO I) 表明: 适宜剂量的 枸杞多糖对 老年小 鼠抑 制性 T 细胞( T s) 有明显的调节 作用, 也就是免疫 双向调 节功 能。枸杞多糖的药理作用在很大程度上代 表了枸杞药材的功 效, 许多由枸杞为原料中药 保健产 品都是 应用枸 杞的免 疫调 节功能, 所以, 我们选择测定枸杞多糖含量 来考察不同等级商 品枸杞的质量。 3 2 苯酚- 硫酸比色法测定枸杞多糖的原理 是枸杞多糖 成分 在浓 H2SO4 的作用下, 水 解成 单糖, 并 迅速 脱水 生成 糠醛 衍 生物, 与苯酚缩合成有色化合物, 再用分光 光度法测定其枸杞 多糖含量。本法操作简单, 显色稳定, 灵敏度高, 重现性好, 可 作为枸杞及其它多糖含 量的测定方法 5 。 3 3 由 试验中发现, 浓 硫酸加 入方式 的选择: 加入 浓硫酸 的 操作方法是影响显色结 果的主要因素常规试剂加入方法引起 显色结果不平行。采 取 移液管 悬空, 垂直加 入浓硫 酸, 立 即 摇匀 的方式和 缓慢沿壁加入浓 硫酸, 分层, 静置一定时间后
枸杞多糖提取方法及两种不同产地枸杞中多糖含量的比较研究

枸杞多糖提取方法及两种不同产地枸杞中多糖含量的比较研究阿依姑丽・艾合麦提,王颖,杨晓君,韩海霞,包晓玮,朱金芳,于娜娜(新疆农业大学药学院,乌鲁木齐 830052)摘 要:采用传统提取方法和超声提取法提取来自两种不同产地的枸杞(即宁夏枸杞和新疆精河枸杞)中的有效成分枸杞多糖,对其得率和含量进行分析比较。
结果表明,以传统法提取宁夏枸杞多糖得率为7.87%,新疆精河枸杞的多糖得率为9.41%;而以超声提取法提取宁夏枸杞多糖得率为8.61%,精河枸杞的多糖得率为13.77%。
证明超声提取法提取枸杞多糖具有快速、高效、节能、不破坏提取物性状等特点,与传统提取法相比能够提高药材有效成分的利用率。
同时还表明,采用同种提取方法提取出的新疆精河枸杞的多糖得率高于宁夏枸杞。
关键词:枸杞多糖;传统提取法;超声提取法;得率中图分类号:S5671099 文献标识码:A 文章编号:1001-4330(2007)05-0724-05Study on Extraction Method and Assay of Polysaccharidesof Lycium barbarum L.from Tw o Different SourceAyiguli ・Aihemeiti ,W ANG Y ing ,Y ANG X iao -jun ,H AN Hai -xia ,BAO X iao -wei ,ZH U Jin -fang ,Y U Na -na(College o f Pharmacology ,Xinjiang Agricultural Univer sity ,Urumqi ,Xinjiang 830052,China )Abstract :The Lycium barbarum polysaccharides (LBP )were extracted by the traditional extraction method and method of ultras onic extraction and the contents and yield of the polysaccharides extracted with those tw o kinds of methods were analyzed.The result showed that ,the yield of LBP from Ningxia lyceum extracted with traditional method was 7.87%,and 9.41%from Jinghe ,X injiang Lyceum ;but the yield of LBP from Ningxia Lyceum extracted with ultras onic method was 8.61%and 13.77%from Jinghe Lyceum.The results als o showed that extraction efficiency of ultras onic extraction was higher than that of traditional extraction.The utilization ratio of active constituent of medicinal materials can be increased in com paris on with the traditional method.Also the yield of Lycium polysaccharide from Jinghe extracted with the same method w as higher than that of NingxiaLycium.K ey w ords :Lycium polysaccharide ;LBP traditional extraction method ;ultras onic extraction method ;yield枸杞属植物枸杞(Lycium barbarum L.)为多棘刺落叶小灌木,抗旱能力很强,其浆果枸杞子在《神农本草经》中引为上品,是我国传统名贵中药材,素有“红宝”美称[1],其甘寒无毒,治五内不足,味甘、淡,具有清肝、润肺、滋肾明目、益气生精,祛虚痨、强筋骨、抗癌等功效,它既含有碳水化合物、蛋白质、脂肪、胡萝卜素、核黄素、钙、磷、铁、锌,还含有多种维生素及玉蜀黍黄素[2],因而一直受到中外医学与食疗专家的高度重视。
枸杞多糖的测定

枸杞多糖的测定一、实验原理:用80%乙醇溶液提取以除去单糖,低聚糖等干扰成分,然后用水提取其中所含的多糖类成分,多糖类成分在硫酸作用下,先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后和苯酚缩合成有色化合物,用分光光度计法于适当波长处测其多糖。
二、仪器设备:可见光分光光度计,电炉,烘箱,回流装置,蒸馏装置等三、试剂配制:1.葡萄糖标准溶液:称取0.1g(精确到0.1000)105度混干恒重的样品,溶解后转移到1000ml容量瓶中,定容。
2.苯酚液:称取苯酚100g,铝片0.1g 碳酸氢钠0.05g与蒸馏瓶中,收集172度六份,称取溜出液10g 加入150ml蒸馏水。
四、实验步骤:1.样品的制备:称取0.4g样品用80%乙醇回流反应一个小时后,过滤,用热乙醇冲洗后用收集残渣,加蒸馏水100ml回流一小时后过滤收集滤液,转移至250ml 容量瓶中定容。
2.标准曲线的绘制:吸取配置好的葡萄糖标准溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml于试管中,加蒸馏水至2ml,加入苯酚液1ml,迅速加入硫酸5m后水浴锅煮沸15min。
等冷却后495纳米处测定吸光度。
另吸取2ml蒸馏水做空白试验。
3.试样的测定:吸取一定量的样品溶液,按标准曲线溶液方法配制后测吸光度。
五、测定结果的记录及计算:1.标准曲线的制定:葡萄糖标准液吸光度2.试样的检测:样品吸光光度值代入公式得x=59.6计算公式:W=(ρ×250×∫(3.19)/m×v×106)×100=19.8% (ρ:显色中葡萄糖的含量,单位为μg。
)检测结果:粗多糖含量为19.8%。
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枸杞子中多糖含量的测定柳婷,胡浩斌(陇东学院化学化工学院,甘肃庆阳 745000)摘要:本文是用分光光度法测定枸杞子中的含糖量[1]。
先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、生物碱等干扰成分,然后用蒸馏水提取其中所含的多糖类成分。
多糖在硫酸作用下,水解成单糖,并迅速脱水生成糠醛衍生物,与苯酚缩合成有色化合物。
用紫外分光光度法[2]测定其枸杞子多糖含量,本法简便,显色稳定,灵敏度高重现性好。
关键词:枸杞子;多糖;紫外分光光度计Detection of Polysaccharide in Lycium barbarumLiu Ting, Hu Hao-Bin(College of Chemistry & Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 74500, China) Abstract:This paper is utilized spectrophotometry to detect Polysaccharide in Lycium barbarum..First,use 80% ethanol to remove simple sugars, oligosaccharides, alkaloids etc interference ingredients, and then extracted the ingredients. Of polysaccharose with distilled water. In Sulfuric acid condition, polysaccharide hydrolysis into monosaccharides, and rapidly dehydrated to furfural derivatives, then condense with phenol into colored compounds. Using spectrophotometry to detect polysaccharide in Lycium barbarum,the method is simple, color stability, high sensitivity and good reproducibility.Key words:Lycium barbarum; polysaccharose; spectrophotometry枸杞子(Lycium barbarum是我国传统的中药材和重要经济作物,性状呈类纺锤形,略扁,长6~21 mm,直径3~10 mm。
表面鲜红色或暗红色,顶端有小凸起状的花柱痕,基部有白色的果梗痕,果皮柔韧,皱缩,果肉肉质,柔润而有粘性,种子多数,类肾形,无臭,味甜,微酸,具有滋肾补肝、润肺明目等功能。
近年来,人们对枸杞子的药理作用进行了深人研究,发现枸杞子能增强机体免疫力[3]、抗肿瘤、抗辐射[4]、抗疲劳[5]、防衰老、增加造血功能等。
临床医学研究还表明,枸杞子对糖尿病[6]、高血压[7]、视神经萎缩、肾炎、肝炎[8]等有显著疗效。
对于枸杞子的上述功能的重要作用因子,一般认为与枸杞子中存在的枸杞多糖有关。
因此,开始研究枸杞多糖,测定枸杞多糖的含量就显的非常重要。
鉴于枸杞多糖的分离纯化[9]困难,有关结构性质方面的研究报道甚少,枸杞多糖的生理活性,还必需从分离纯化、结构特征及药理作用3方面展开深入研究。
这样,医学临床应用与保健型枸杞饮品[10]的开发才有坚实的理论基础。
本试验主要完成枸杞多糖的分离与提纯,并对其含量用分光光度计[11]进行初步测定,为今后更深人地研究枸杞多糖的化学结构和活性功能[12]等工作提供基础资料。
1 实验材料1.1实验药品葡萄糖标准液:精确称取105 ℃干燥恒重的标准葡萄糖100 mg,置100 ml容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度。
苯酚液:取苯酚100 g,加铝片0.1 g,碳酸氢钠0.05 g,蒸馏收集182℃馏分,称取此馏分10 g,加蒸馏水150 g,置棕色瓶中备用。
新鲜枸杞子,石油醚,80%乙醚,氯仿,活性炭,95%乙醇,浓硫酸,蒸馏水,80%乙醇,无水乙醇,丙醇1.2 实验仪器721紫外分光光度计,圆底烧瓶,烧杯,100 ml容量瓶,250 ml容量瓶,抽滤装置,真空干燥器,电子天平,减压浓缩装置,回流装置,蒸馏装置,电炉子,分液漏斗,温度计,棕色试剂瓶。
2 实验方法与结果2.1 枸杞多糖精制的大体流程枸杞多糖的提取[13]分离过程:枸杞子—剪碎—石油醚脱脂—乙醚浸泡—滤渣加蒸馏水—滤液—减压浓缩—氯仿—活性炭脱色—抽滤—滤液加入95%乙醇—静置过夜—过滤—沉淀物洗涤—真空干燥—得枸杞多糖2.2 枸杞多糖的提取与精致称取剪碎的枸杞子100 g,经石油醚(60-90 ℃)500 ml回流脱脂二次,每次2 h,回收石油醚。
再用80%乙醚500 ml浸泡过夜,回流提取二次,每次2 h,将滤渣加蒸馏水3000 ml,90 ℃热提取1 h,滤液减压浓缩至300 ml,用氯仿多次萃取,以除去蛋白质,加活性炭1%脱色,抽滤,滤液加入95%乙醇,使含醇量达80%,静置过夜。
过滤,沉淀物用无水乙醇、丙醇、乙醚多次洗涤,真空干燥,即得枸杞多糖。
2.3 标准曲线制备吸取葡萄糖标准液10、20、40、60、80、100 μl,分别置于带塞贴标签试管1、2、3、4、5、6中,各加蒸馏水使体积为2.0 ml,再加苯酚试液1.0 ml,摇匀,迅速滴加浓硫酸5.0 ml,摇匀后放置5 min,置沸水浴中加热15 min,取出冷却至室温;另以蒸馏水2 ml,加苯酚和浓硫酸,加入0号带塞试管,同上操作做空白对照。
于490 nm处测吸光度(表1浓度与吸光度关系表),绘制标准曲线(图1浓度与吸光度对应图)。
0 1 2 3 4 5 6浓度(c)0 1.25 2.50 5.00 7.50 10.00 12.50吸光度(A)0.1427 0.1718 0.2004 0.2090 0.2839 0.3342 0.4175表1 浓度与吸光度关系精确称取枸杞多糖20 mg,置100 ml容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度(贮备液)吸取贮备液200 ml,测吸光度A为0.2182,从标准曲线中求出试液中葡萄糖的含量为3.75 μg/mL,按下式计算因素F=m/(p×D)。
式中:m为多糖质量(μg);p为多糖液中葡萄糖的浓度;D为多糖的稀释因素;测得F=3.192.5 样品溶液的制备精确称取样品粉末0.2 g,置于圆底烧瓶中,加80%乙醇100 ml回流提取1 h,趁热过滤,残渣用80%乙醇洗涤(10 ml ×3).残渣连同滤纸置于烧瓶中,加蒸馏水100 ml,加热提取1 h,趁热过滤,残渣用热水洗涤(10 ml×3),洗液并入滤液,放冷后移入250 ml容量瓶中,稀释至刻度,备用。
2.6 样品中多糖的测定吸取适量样品液,加蒸馏水至2 ml ,按标准曲线下的方法测吸光度A 为0.2343,查标准曲线得样品液中葡萄糖含量4.69(μg/ml )。
2.7 结果计算多糖含量%=100mF D p ⨯⨯⨯ 式中:p :样液葡萄糖浓度(μg/ml );D :样品液稀释因素;F :换算因素;m :样品质量(μg )。
测量结果代入得:多糖含量%=12.51%3 实验讨论(1)苯酚-硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸杞多糖成分在H 2SO 4的作用下,水解成单糖,并迅速脱水生成糠醛衍生物,与苯酚缩合成有色化合物,再用分光光度法测定其枸杞多糖含量。
本法操作简单,显色稳定,灵敏度高,重现性好,可作为枸杞及其它多糖含量的测定方法。
(2)枸杞子水提物中含有单糖、低聚糖等杂质, 且呈红色, 因此在测定之前要先用乙醇除去单糖、低聚糖等杂质并以丙酮-石油醚脱脂脱色, 才不至于对测定产生干扰。
(3)试验中发现,浓硫酸的加入方式对实验的结果影响较大,采取移液管悬空,垂直加入浓硫酸,立即摇匀的方式,显色反应充分,且显色结果稳定。
(4)各种单糖的标准曲线均只在0~30 μg 含量范围内呈较好的线形关系,因此制作标准曲线时,单糖浓度不宜太大。
(5)本法采用精制的枸杞多糖作为对照品,计算出枸杞多糖与葡萄糖的换算因子,再乘以用硫酸-苯酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量,这样可避免直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差,结果更准确。
(6) 多糖提取工艺以及分离、纯化方法决定了产品的纯度, 另外枸杞子产地的不同也可能对研究结果有影响。
由于目前市场枸杞多糖产品主要作为保健产品,需较高的收率和较低的成本。
而采用乙醇沉淀法提取的枸杞多糖含量较高,收率可达8%左右,并且乙醇可回收,既使成本进一步降低,又减少了对环境的污染,且取得了很好的经济效益。
本实验所测得枸杞含糖量高,实验材料为上好的宁夏枸杞。
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