实验课教学(革兰氏染色)

去 残
水
晾
干
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六、实验预期结果
大 肠 杆 菌 （ ）
G-
金
黄
色
葡
萄
混合涂片染色
球
菌
（
）
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G+
七、注意事项
➢ 细菌因素：选择活跃生长期菌种（18-24h），老 龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。
➢ 操作因素：涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成 假阳性。
➢ 染色因素：脱色是革兰氏染色是否成功的关键， 脱色过度造成假阴性，脱色不够造成假阳性。
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三、实验原理
➢细菌细胞壁结构和组成差异所决定：
革兰氏阳性菌细胞壁:肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，网孔结构 可以滞留碘-结晶紫复合物，呈蓝紫色。 革兰氏阴性菌细胞壁:较薄，肽聚糖含量低，交联度低，脂质含量高。
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四、实验器材
1.菌种
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌（18h牛肉膏蛋白胨琼脂 斜面培养物）
2.溶液和试剂
草酸铵结晶紫染液，卢戈氏碘液，95%乙醇，番红复染 液等。
3.仪器和其他用品
酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二 甲苯），擦镜纸，接种环，试管架，镊子，载玻片支 架，滤纸，滴管等
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五、实验步骤
水 洗
初染 （1-2min）
水 洗
媒染 （1min）
脱色 （20-30s）
水
水
洗 复染 洗 吸
（2min）
➢ 显微镜保养：正确使用，用毕，擦拭油镜，登记。
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八、总结与思考
实验报告
1.油镜下菌体图像（拍照或绘制）
2.结果记录表：
菌名
菌体颜色
细菌形态
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
结果（G+,G-）
思考题
1.革兰氏是否成功，有哪些问题需要注意，为什么？
2.你认为革兰氏染色法中哪个步骤可以省略？在何种情况下 可以省略？
3.为什么用老龄菌进行革兰氏染色会造成假阴性？
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Thank You!
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细菌的革兰氏染色 Gram stain
时间：10分钟 岗位代码：1217 考生：曾颖
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一、背景知识
➢丹麦病理学家Christain Gram，1884年
➢德国病理学家Carl Weigert,番红染色
➢鉴别染色为
革兰氏阳性菌（G+） 革兰氏阴性菌（G-）
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二、目的要求
➢学习并掌握革兰氏染色法 ➢了解革兰氏染色原理 ➢巩固显微镜操作技术（油镜）