注射用还原型谷胱甘肽钠细菌内毒素检查法研究
加米霉素注射液细菌内毒素检查（凝胶法）方法学研究
加米霉素注射液细菌内毒素检查（凝胶法）方法学研究于小婷1，张漫2，鄢明华3，王俊菊4，姜淋洁1，王猛1，程雪娇1*（1.天津市中升挑战生物科技有限公司天津300380；2.天津市农业科学院农业质量标准与检测技术研究所天津300381；3.天津市农业科学院畜牧兽医研究所天津300381；4.天津市农业生态环境监测与农产品质量检测中心天津300402）照《中华人民共和国兽药典》2015版一部附录1143细菌内毒素检查法的有关规定，对加米霉素注射液内毒素限度及检查方法进行了研究。
结果显示，加米霉素注射液通过调节pH 并将供试品稀释到498倍及以上时，对细菌内毒素检查无干扰，内毒素限值确定为0.83EU/mg 。
对3批产品进行检查，结果均符合规定。
因此，细菌内毒素检查方法（凝胶法）可用于加米霉素注射液的细菌内毒素检查。
米霉素注射液；内毒素检查；凝胶法加米霉素[1,2]属大环内酯类抗生素，是由法国梅里亚公司研发的第二代大环内酯类抗生素的代表药物之一，在兽医临床具有广阔的应用前景。
细菌内毒素是革兰氏阴性菌的细胞壁成分，可引起人和动物发热[3,4]。
药品如果被细菌内毒素污染会产生严重的安全问题，尤其是对身体机能较差的患病及幼龄动物。
目前国内已有数家兽药企业进行了加米霉素注射液的研发和新兽药申报，但不同厂家研发的加米霉素注射液处方、工艺不尽相同，这也决定了企业需根据自身产品的特点，建立相应的内毒素检查方法学。
为保证加米霉素注射剂在使用过程中的安全性，本研究对加米霉素注射液细菌内毒素检查的可行性进行了方法学验证，为该产品细菌内毒素的检查提供依据。
1试验材料1.1仪器单人净化工作台，苏州净化设备有限公司；101型电热鼓风干燥箱，北京中兴伟业世纪仪器有限公司；QL-861型旋涡混合器，江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司；DZKW-4恒温水浴锅，北京中兴伟业仪器有限公司；试验所用玻璃器皿经250℃烘烤1h 以上。
1.2药品与试剂细菌内毒素工作标准品（批号：150601-201784，规格：80EU/支，中国食品药品检定研究院）细菌内毒素检查用水（批号：1807130，规格：5mL/支，湛江安度斯生物有限公司）鲎试剂（TAL ）（批号：1706022，灵敏度：0.25EU/mL ，规格：0.1mL/支，湛江安度斯生物有限公司）鲎试剂（TAL ）（批号：1704203，灵敏度：0.25EU/mL ，规格：0.1mL/支，湛江博康海洋生物有限公司）Tris 缓冲液（批号：1808240，规格：4mL/支，湛江安度斯生物有限公司）加米霉素注射液（批号：201801001，201801002，201801003，202001001，202001002，202001003规格：150mg/mL ，天津市中升挑战生物科技有限公司）。
动态浊度法测定注射用还原型谷胱甘肽的细菌内毒素含量
Ｑ ａ ｔ ａ ｖ ｅｅｍｉａ ｏ ｆＢ ｃｅｉｌＥ ｄ ｔｘｎ ｉ ｅ ｕ ｅ ｕａｈｏ ｅ ｆｒ Ｉｊｃ ｏ ｕ ｎｉ ｔ ｅ Ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｎ ｏ ａｔｒａ ｎ ｏｏ ｉ ｎ Ｒ ｄ ｃｄ Ｇｌｔｔｉｎ ｏ ｎｅｔ ｎ ｔｉ ｉ ｌ
ｂ Ｋ ｉ ｅ ｃ ｙ ｎ ｔ Ｔｕｒ ｉ ｍ ｅ ｒ ｃ ｉ ｂ ｄｉ ｔ ｉ Ａｓ ａ ｓｙ
维普８ ７ ２
动态浊度法测定注射用还原型谷胱甘肽 的细菌 内毒素含量
刘晓颖 范 能全 ，
（ ．重庆 医药高等专 科 学校 药理教研 室， １ 重庆 ４０ ３ ； ２ ０ ０ ０ ．重庆 市 药品检验 所 ， 重庆 ４０ ２ ） ０ ０ １
素的回收率均在 ５ ％ ～ ０ ％范围 内。 ０ ２０ 结论 用动态浊度 法测定注射用还原型谷胱甘 肽中的细茵内毒素含量 ， 法可行。 方 关键河 ： 注射用还原型谷胱甘肽 ； 细菌内毒素 ； 动态浊度法
中 图分 类 号 ： ９ ７ １ １ ７ ６ １ ２ ． ； ９ ５ ． １ １ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ：０６—４ ３ （０ ８ １ ０ ３ １０ ９ １２ ０ ）２— ０６—０ ２
擅要 ： 目的 应用动态浊度 法定量测定 注射用还原型谷胱甘肽 中细 菌内毒素的含量。 方法 通过干扰试验确 定样品检测浓度 ， 建立标准 曲线
并对样品进行细茵 内毒素的定量检 测。 结果 注射 用还原型谷胱甘肽稀释 至质量浓度为 １ ｇ ｍ ／ Ｌ时 ， ｍ 对鲎试剂检查无干扰作用 ， 细茵内毒
．
还 原 型 谷 胱 甘 肽 （ Ｓ 由谷 氨 酸 、 胱 氨 酸 和甘 氨 酸 组 成 ， Ｇ Ｈ） 半 含
吸 咀 （ 格 ２ ０ｐ ， 号 为 ０ １２ ； 格 １ ０ ．， 号 为 ０ １０ 。 规 ５ Ｌ 批 ． ６ １０ 规 ０ｐ 批 ０ Ｌ ６ １ １
注射用油细菌内毒素检查方法的研究
注射用油细菌内毒素检查方法的研究【关键词】,注射用油摘要注射用油为非水性液体，无法直接利用鲎试剂进行细菌内毒素检查。
本方法利用细菌内毒素可溶于水的特性对注射用油用水提取作前处理后，使之适用于凝胶反应。
结果表明：通过干扰试验、阳性对照和阴性对照试验，证实应用鲎试剂作注射用油的细菌内毒素检查是可行的，而且具有灵敏、准确、快速的优点。
关键词注射用油；细菌内毒素；干扰试验；鲎试剂。
注射用油是静脉脂肪乳注射液的主要原料之一，在制剂中的用量达10%~30%。
目前，国内外脂肪乳剂作为静脉滴注的大容量注射液，其质量标准中已增加细菌内毒素检查项目［1］。
鉴于注射用油的毛油来源较复杂，在精制过程中反复使用过除臭剂、脱色剂、吸附剂和助滤剂等,精制步骤繁多复杂，工艺周期长，比较容易被污染，而且油脂类物质本身容易被氧化酸败，使用的容器设备、管道装置不易进行清洗消毒，因而特别容易滋长微生物，成为工艺卫生控制的难点。
因此，对注射用油进行细菌内毒素的检查和控制是十分必要的，是确保脂肪乳注射液质量重要的和关键的有效措施。
1 实验仪器与材料1. 1 实验仪器垂直流层超净工作台（SYT-JH-12型深圳美加净化设备厂），小型离心机（上海化学仪器厂），电热恒温水浴箱（HW2-型北京医疗设备厂），漩涡混合器（XK96-A型江苏新康仪器厂），经240℃2 h除内毒素处理的玻璃仪器及内毒素检验专用器具。
1.2 实验试药供试样品（S）:注射用油、辽宁北亚药用油公司(批号001027、010209)，广州第十制药厂(批号001116、010523)。
1. 3 实验试剂鲎试剂（TAL）：广东湛江安度斯生物有限公司，批号010326 ，灵敏度0.125Eu/mL；广东湛江海洋生物制品厂，批号010515，灵敏度0.125Eu/mL。
内毒素工作标准品（CSE）: 中国药品生物制品检验所，批号00-02 10 Eu/mL。
细菌内毒素检查用水（BET）: 广东湛江安度斯生物有限公司，批号010316 100 mL/瓶;内毒素含量<0.015 Eu/mL。
复方骨肽注射细菌内毒素的检查方法研究
复方骨肽注射细菌内毒素的检查方法研究冯磊【摘要】目的建立复方骨肽注射细菌内毒素的方法.方法采用动态浊度法对复方骨肽注射液细菌内毒素检查进行研究.结果复方骨肽注射液细菌内毒素限值确定为17.5 EU/mL.结论采用动态浊度法控制复方骨肽注射液的质量是可行的.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2012(002)001【总页数】3页(P137-138,143)【关键词】复方骨肽注射液;细菌内毒素;动态浊度法【作者】冯磊【作者单位】中国食品药品检定研究院,北京100050【正文语种】中文【中图分类】R927骨肽及复方骨肽注射液均具有刺激成骨细胞增殖、调节骨代谢、促进新骨形成等多种药理作用，复方骨肽注射液是在骨肽注射液的基础上，采用现代生物工程技术，与全蝎提取液制成的复方肽类制剂，含有多种骨生长因子，具有消炎止痛，促进骨愈合、生长等作用。
临床多用于骨折和骨科手术愈合及风湿、类风湿性关节炎、原发性骨质疏松等疾病的治疗等[1-3]。
本品现有的质量标准的控制采用热原检查法，本研究确定了复方骨肽注射液的内毒素检查限值并研究其使用细菌内毒素检查法的可行性，为其质量标准提高提供依据。
1 资料与方法1.1 仪器与试剂细菌内毒素测定仪，型号BET-72（天津市天大天发科技有限公司）；鲎试剂（TAL，厦门鲎试剂实验厂有限公司，批号:100420，规格1.7 mL/支，湛江安度斯生物有限公司，批号 :1010142，检测范围 =10.00 ～ 0.03 EU/mL，1.25 mL/支）；细菌内毒素检查用水（BET水，中国食品药品检定研究院，内毒素含量＜0.005 EU/mL，规格:10 mL/支）；细菌内毒素国家标准品（NSE，中国食品药品检定研究院，批号:150600-200707，10 000 EU/支）；复方骨肽注射液（常州方圆制药有限公司，规格：5 mL∶ 75 mg，批号：20110219A，20110219B，规格：2 mL∶30 mg，20110313A，20110104A；南京新百药业有限公司，规格：5 mL∶75 mg，批号：110301，110302，规格：2 mL∶30 mg，批号：110105，110301。
注射用复方骨肽细菌内毒素检查法研究
注射用复方骨肽细菌内毒素检查法研究张晓宇;刘柳【摘要】目的:建立注射用复方骨肽细菌内毒素检查法.方法:按2005年版<中国药典>二部中细菌内毒素的相关规定进行实验.结果:样品在给定条件下对细菌内毒素检查无干扰作用.结论:建立注射用复方骨肽细菌内毒素检查法具有可行性.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2010(007)024【总页数】2页(P45,70)【关键词】注射用复方骨肽;细菌内毒素;干扰试验【作者】张晓宇;刘柳【作者单位】保定三九济世生物药业有限公司,河北定兴,072656;保定三九济世生物药业有限公司,河北定兴,072656【正文语种】中文【中图分类】R968注射用复方骨肽适用于风湿、类风湿性关节炎、骨质疏松、颈椎病等疾病的症状改善，同时用于骨折及骨科手术后愈合，可促进骨愈合和骨新生，为我公司获批生产的冻干粉针剂，其规格为30 mg的多肽物质，热原控制[1]采用家兔法。
研究复方骨肽的细菌内毒素检查法的可行性，分析如下：1 仪器与试药细菌内毒素工作标准品（规格：5 EU/支，批号：0903140，湛江博康海洋生物有限公司）；鲎试剂（TAL，规格：0.25 EU/ml，批号：0811040、0902202，湛江博康海洋生物有限公司与湛江安度斯生物有限公司）；细菌内毒素检查用水（BET水，规格：5 ml/支，批号：090223，湛江博康海洋生物有限公司）；注射用复方骨肽（规格：30 mg，批号：091003、091108、091205，保定三九济世生物药业有限公司）；并按照2005年版《中国药典》二部中方法所用试管、吸管等玻璃仪器准备。
2 方法与结果2.1 TAL灵敏度复核采用BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成2.00 λ、1.00 λ、0.50 λ、0.25 λ 等系列浓度进行试验。
方法根据《中国药典》2005年版二部附录细菌内毒素检查法[2]进行。
结果：两批鲎试剂灵敏度测定值λc均在0.5 λ～2.0 λ范围内，灵敏度符合规定。
细菌内毒素检测方法
细菌内毒素检测方法细菌内毒素是一类由细菌产生的有毒物质，它们可以对人体和动物产生严重的危害。
因此，对细菌内毒素进行及时、准确的检测显得尤为重要。
本文将介绍几种常见的细菌内毒素检测方法，以供参考。
首先，常见的细菌内毒素检测方法之一是生物学检测法。
这种方法利用动物、细胞或其他生物体对内毒素的反应来进行检测。
例如，利用小鼠腹腔注射内毒素，观察其生理反应来判断内毒素的存在与否。
虽然这种方法具有较高的灵敏度和特异性，但由于涉及动物实验，存在一定的道德和法律问题，因此在实际应用中受到一定的限制。
其次，化学检测法也是一种常用的细菌内毒素检测方法。
该方法利用化学试剂与内毒素发生特定反应，通过观察反应产物的形成或颜色变化来判断内毒素的存在与否。
例如，内毒素在特定条件下可与Limulus试剂发生凝集反应，形成凝集物。
这种方法具有操作简便、结果快速的优点，但也存在一定的特异性和灵敏度问题。
另外，免疫学检测法也是一种常见的细菌内毒素检测方法。
该方法利用抗体与内毒素特异性结合，再通过染色、发光等方式来检测结合产物，从而判断内毒素的存在与否。
例如，ELISA法是一种常用的免疫学检测方法，它具有高度的特异性和灵敏度，且可以进行高通量检测，因此在实际应用中得到了广泛的应用。
最后，分子生物学检测法也是一种较为先进的细菌内毒素检测方法。
该方法利用PCR、基因芯片等技术，通过检测内毒素相关基因或基因产物来判断内毒素的存在与否。
这种方法具有高度的特异性和灵敏度，且可以进行多重检测，因此在临床诊断和科研领域得到了广泛的应用。
综上所述，针对细菌内毒素的检测方法有生物学检测法、化学检测法、免疫学检测法和分子生物学检测法等多种选择。
在实际应用中，可以根据需要的特异性、灵敏度、操作简便性等因素来选择合适的检测方法。
希望本文所介绍的内容能够对相关人士有所帮助。
建立注射用还原型谷胱甘肽钠近红外光谱法快速比对模型的研究
建立注射用还原型谷胱甘肽钠近红外光谱法快速比对模型的研究曹霞飞1 毛新武1 宋安华1 肖 剑1 戚 平1 彭明军1 刘 肃21.广州市食品检验所，广东广州 511405；2.广州市药品检验所，广东广州 510160[摘要] 目的 采用近红外光谱法建立快速鉴定进口药品“注射用还原型谷胱甘肽钠”的一致性检验模型。
方法 收集广州市药品检验所进口抽检的两个厂家的合格药品“注射用还原型谷胱甘肽钠”，其中包括Pharminvest SPA厂家14批及BIOMEDICA FOSCAMA厂家2批,共16批。
分别采用隔玻璃瓶底测和直接接触测两种方法采集每批样品的近红外漫反射光谱，在OPUS光谱分析软件的Setup Conformity Test模块中，选择谱段范围为：8998.9～7795.5cm-1、7413.6～6985.5cm-1、6823.5～4023.1cm-1，进行一阶导数化和矢量归一化预处理建立一致性检验模型。
结果 采用隔玻璃瓶底测方式采集的注射用还原型谷胱甘肽钠谱图建立的快速比对模型专属性和耐用性较好，可区分出两个厂家的样品。
而采用直接接触测方式采集谱图所建立的快速比对模型专属性不可行，无法区分出两个厂家的样品。
结论 该玻璃模型可快速鉴别出两个厂家生产的注射用还原型谷胱甘肽钠，并可有效地应用于药品检测车的现场筛查打假中。
[关键词] 近红外；质量控制；还原型谷胱甘肽钠；一致性检验模型[中图分类号] R917 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2019）09-27-06 Establishment of a rapid comparison model for near infrared spectroscopy of reduced glutathione sodium for injectionCAO Xiafei1 MAO Xinwu1 SONG Anhua1 XIAO Jian1 QI Ping1 PENG Mingjun1 LIU Su21.Guangzhou Institute for Food Control,Guangzhou 511405,China;2.Guangzhou Institute for Drug Control,Guangzhou 510160,China[Abstract] Objective To establish a consistency test model for rapid identification of imported drugs “reduced glutathione sodium for injection” by near infrared spectroscopy. Methods The qualified “reduced glutathione sodium for injection” from two manufacturers imported by Guangzhou Institute of Drug Control were collected, included14 batches from Pharminvest SPA and 2 batches from BIOMEDICA FOSCAMA,total 16 batches.Near-infrared diffuse reflectance spectra of each batch of samples were collected by two methods of glass bottle bottom measurement and direct contact measurement respectively.In the Setup Conformity Test module of OPUS spectral analysis software,the range of selected spectral bands were 8998.9-7795.5cm-1,7413.6-6985.5cm-1 and 6823.5 -4023.1cm-1,the consistency test model was established by first derivative and vector normalization pretreatment. Results The rapid comparison model for spectrogram of reduced glutathione sodium for injection collected by glass bottle bottom measurement was more specific and durable,which could distinguish the samples of two manufacturers.However,it was not feasible to use the rapid comparison model established by spectrograms which collected by direct contact measurement,and it was impossible to distinguish the samples of two manufacturers. Conclusion The glass model can quickly identify the reduced glutathione sodium for injection produced by two manufacturers,and can be effectively used on-site screening and counterfeiting of drug testing vehicles.[Key words] Near infrared;Quality control;Reduced glutathione sodium;Consistency test model注射用还原型谷胱甘肽钠主要成分是还原型谷胱甘肽钠，是人类细胞中自然合成的一种肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，广泛分布于机体各器官内，为维持细胞生物功能发挥着重要的作用。
注射用还原型谷胱甘肽钠细菌内毒素检查法研究
注射用还原型谷胱甘肽钠细菌内毒素检查法研究王宗春;姜俊勇;周延安;宋金春【摘要】Objective To establish a method for the detection of bacterial endotoxin in Reduced Glutathione Sodium for Injection.Methods Three batch of samples were used for the experiment of interference test and bacterial endotoxin test in accordance with appendix ⅪE,volume two, China Pharmacopoeia 2010 edition.Results By using tachypleus amebocyte lysates whose sensitivity was 0.5 EU/mL, the sample did not interfere the congregating reactivity of tachypleus amebocyte lysate with bacterial endotoxin when the concentration of reduced glutathione sodium was below 8.0 g/L.Conclusion The method of bacterial endotoxin test is feasible for the Reduced Glutathione Sodium for Injection.%目的建立注射用还原型谷胱甘肤钠的细菌内毒素检查法.方法按照2010年版<中国药典(二部)>附录ⅪE细菌内毒素检查法,对3批样品进行干扰试验和细菌内毒素检查.结果用灵敏度λ为0.5 EU/mL的鲎试剂,当注射用还原型谷胱甘肽钠的质量浓度为8.0g/L 时,供试品不干扰鲎试剂与细菌内毒素的凝集反应.结论建立的注射用还原型谷胱甘肤纳细菌内毒素检查法可行.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2011(020)017【总页数】2页(P28-29)【关键词】注射用还原型谷胱甘肤钠;细菌内毒素;鲎试剂【作者】王宗春;姜俊勇;周延安;宋金春【作者单位】武汉大学人民医院药学部,湖北武汉,430060;武汉大学人民医院药学部,湖北武汉,430060;武汉大学人民医院药学部,湖北武汉,430060;武汉大学人民医院药学部,湖北武汉,430060【正文语种】中文【中图分类】R927.11;R975+.5注射用还原型谷胱甘肽钠临床用于化学治疗(尤其是大剂量化学治疗)、放射治疗、肝脏疾病、低氧血症以及有机磷、胺基或硝基化合物中毒的辅助治疗。
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４． ２． １ ０， ５， ．２ ／Ｌ。 ０， ０， ． ０． ０ ５ ｇ
基 化 合 物 中毒 的辅 助 治 疗 。００年 版 《 国药 典 （ ２１ 中 二部 ） 中关 于 注 》
药 物鉴定
２１ 年第２ 卷第 １ 期 ０１ Ｏ ７
注 射 用还原 型 谷胱 甘 肽钠 细 菌 内毒 素 检查 法研 究
王宗春 ， 姜俊勇 ， 周延安 ， 宋金春
（ 武汉大 学人 民医院药学部 ， 湖北 武汉 ４ ０６ ） ３ ０ ０
摘 要： 目的 建 立 注射 用还 原 型谷 胱 甘 肽 钠 的 细 菌 内毒 素 检 查 法 。 法 按 照 ２ １ 版 《 国药典 （ 部 ） 附 录 Ⅺ Ｅ细 菌 内毒 素检 查 法 ， 方 ０ ０年 中 二 》 对 ３批 样 品 进行 干扰 试 验 和 细 菌 内毒 素检 查 。 果 用 灵敏 度 为 ０ ５ Ｕ ｍ 结 ． ／ Ｌ的 鲎试 剂 ， Ｅ 当注 射 用还 原 型 谷 胱甘 肽 钠 的 质 量 浓度 为 ８０ｇ Ｌ ． ／ 时 ， 试 品 不干扰 鲎试 剂 与 细 菌 内毒 素 的凝 集 反应 。 供 结论 建 立 的注射 用还 原 型谷 胱 甘 肽钠 细 茵 内毒 素 检 查 法 可行 。 关键词 ： 注射 用还 原 型 谷胱 甘肽 钠 ； 菌 内毒 素 ； 细 鲎试 剂
中 图分 类 号 ： ９ ７ １ ； ９ ５ ． Ｒ ２ ． １ Ｒ ７ ５ 文献 标 识码 ： Ａ 文章 编 号 ：０ ６ ９ １ ２ １ ）７— ０ ８— ２ １０ —４ ３ （０ １ １ ０ ２ ０
Ｓ ｕ ｙ ＯｌＢ ｃｅ ｉｌＥｎ ｏｏ ｉ ｅｔｉ ｄ ｃｄ Ｇｌｔｔ ｉｎ ｏ ｉｍ ｏ ｎｅｔ ｎ ｔｄ ｉ ａ ｔｒａ ｄ ｔｘｎ Ｔ ｓ ｎ Ｒｅ ｕ ｅ ｕａｈｏ ｅ Ｓ ｄｕ ｆｒ Ｉｊｃｉ ｏ
注射 用 还 原 型 谷 胱 甘 肽 钠 临 床 用 于化 学 治 疗 （ 其 是 大 剂 量 尤 化 学 治 疗 ）放 射 治 疗 、 脏疾 病 、 氧 血症 以及 有 机 磷 、 基 或 硝 、 肝 低 胺
菌 内毒 素 限 值 ， ０ １５Ｅ ｍ ， 即 ． ２ Ｕ／ ｇ 目前 市 售 的 鲎试 剂 Ａ常 为 ０５ ．， ０ ２ ，．２ ，． ６ ００ Ｕ ｍＬ 对 应 的 样 品 最 小 有 效稀 释浓 度 为 ．５ ０ １５０ ０ ，． ３Ｅ ／ ，
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