脂质体的研究与应用概况

脂质体（“ｌｉｐｏｓｏｍｅ）是由脂质双分子层构成的内部为水相的封闭囊泡。Ｂａｎｇｈａｍ等在２０世纪６０年代发现磷脂分子分散在水相中能形成封闭的囊泡，囊泡的内相与外相均为水溶液，在双分子膜之间有一个疏水区，这种囊泡状结构就被称为脂质体。脂质体可依其所包含的脂质双分子层的的层数，分为单室脂质体和多室脂质体。含有单一双分子层的囊泡称为单室脂质体，粒径在０．０２～０．０８μｍ为小单室脂质体，粒径在０．１～１．０μｍ者为大单室脂质体。含有多层双分子层的囊泡称为多室脂质体，粒径在１～５ｕｍ。最初，脂质体由于它的磷脂双分子膜与细胞膜结构类似，使其具有某些与生物体相似的性质，从而作为细胞模型，用于生物膜及膜蛋白的研究。在７０年代有人根据脂质体的主要原料磷脂是细胞的固有组分，有良好的生物相容性而没有免疫原性的特点，将脂质体用作药物的载体。随后人们对脂质体进行了广泛和深入的研究，本文就其组成、特点、种类、制备方法以及应用作一介绍。

１．脂质体的组成

多种脂质和脂质混合物均可用于制备脂质体，最常用的是磷脂。磷脂包括卵磷脂、脑磷脂、大豆磷脂以及合成磷脂等，主要成分有磷脂酰胆碱（ＰＣ），磷脂酰乙醇胺（ＰＥ），磷脂酰丝氨酸，磷脂酰甘油，磷脂酸等。其结构由一个离子型基团（或是强极性）的“极性端”和两条疏水性高级脂肪烃长链组成，在某一特定浓度条件下，其极性端部分与另分子的极性端相结合，非极性端与非极性端相结合，形成一个稳定的双分子层结构。构成中脂质的另一种物质是胆固醇，它在膜中主要起着调节磷脂双分子膜“流动性”的作用。当低于相变温度（脂质双分子层中脂酰基侧链从有序排列变为无序排列时的温度）时，胆固醇可使膜减少有序排列，增加流动性；高于相变温度时，胆固醇可增加膜的有序排列而减少膜的流动性。

２ 脂质体的特点

脂质体的研究与应用概况

脂质体有包封脂溶性药物或水溶性药物的特性，药物被脂质体包封后，在体内呈现出与药物本身不同的特

点。

２．１　靶向性和淋巴定向性　脂质体进入体内后，集中于肝、脾、骨髓等内皮网状系统丰富的组织，呈现被动靶向性；当脂质体经肌肉、皮下或腹腔注射后，首先进入局部淋巴结中，表现出淋巴的定向性。

２．２ 缓释性　将药物包封于脂质体中，由于脂质体的包裹作用或磷脂与药物之间的氢键等作用，使药物缓慢释放出来，从而延长了药物的作用时间，表现出一定的缓释性。

２．３ 细胞亲和性与组织相容性　因脂质体是类似于生物膜结构的囊泡，对正常细胞和组织无损害和抑制作用，可长时间吸附于靶细胞周围，使药物能充分向靶细胞靶组织渗透，表现出细胞亲和性和组织相容性。３　脂质体的种类

以磷脂和胆固醇为基本材料制成的脂质体，称为普通脂质体，在此基础上加入特异性的材料，可得到性质不同的脂质体。

３．１　温度敏感脂质体　当温度达到脂质体的相变温度时，脂质膜在由“凝胶”态转到“液晶”－态结构时，其磷脂的脂酰链紊乱度及活动度增加，膜的流动性增大，所包封药物的释放速率增大。根据这一原理制备的脂质体称为温度敏感脂质体。所用的脂质材料有二棕榈酰磷脂酰胆碱（ＤＰＰＣ）、二棕榈酰磷脂酰甘油（ＤＰＰＧ）和二棕榈酰神经鞘磷脂（ＤＰＳＰ），其相变温度为４１～４３℃。３．２　ｐＨ敏感脂质体　根据肿瘤细胞的ｐＨ值比周围正常组织低的事实，设计了ｐＨ敏感脂质体。其原理是含有二油酰磷脂酰乙醇胺（ＤＯＰＥ）的脂质体在中性ｐＨ条件下较稳定，当ｐＨ低时可导致脂肪酸羧基的质子化而引起六方晶体的形成，使脂质体膜的流动性增大，药物释放出来。

翟光喜　张天民（山东大学药学院，济南２５００１２）

生物药物

３．３　免疫脂质体此指连有单克隆抗体（简称单抗）的脂质体。通过单抗与靶细胞的特异结合，将脂脂质体包载的药物导向靶组织，从而使脂质体具有主动靶向性。优良的免疫脂质体应具有以下特征：能在血中滞留较长时间，以利于向靶组织聚集；表面连接单抗达到一定数目，并且连接到脂质体上的单抗仍保持足够的导靶活性。３．４　长循环脂质体长循环脂质体（Ｉｏｎｇｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｌｉｐｏｓｏｍｅ）又称立体稳定脂质体或空间稳定脂质体（ｓｔｅｒｉｃａｌｌｙｓｔａｂｉｌｉｚｅｄｌｉｐｏｓｏｍｅ）或隐形脂质体（ｓｔｅａｌｔｈｙｌｉｐｏｓｏｍｅ）。它是通过在脂质体的成分中加入一定比例的糖脂（如单唾液酰神经节苷脂）或在磷酸分子上联接含多羟基团的物质（如聚乙二醇，ＰＥＧ），使脂质体表面暴露出一些亲水性的多糖或多羟基基团等方式，减少与血浆中一些成分的结合，从而增加其在血液中的稳定性。长循环脂质体能更持久地延长药物在血流中的时间，避免网状内皮系统的吞噬，以获得更充足的时间到达靶向部位。如ＰＥＧ――二硬脂酰磷酯酰乙醇胺（ＤＳＰＥ）修饰的紫杉醇脂质体，２４ｈ后在血液中驻留３５％以上，在肝、脾组织中摄取不足１０％，而紫杉醇传统脂质体在血液中驻留１０％，被单核吞噬细胞系统捕获５０％以上［１］。

３．５　前体脂质体　前体脂质体通常为干燥、具有良好流动性能的颗粒或粉末，应用前与水混合可水合分散或溶解成等张的脂质体。这种脂质体解决了稳定性和高温灭菌等问题，为工业生产奠定了基础。如冷冻干燥法制备抗乙肝免疫核糖核酸前体脂质体［２］。

３．６　磁性脂质体　磁性脂质体是在脂质体中掺入铁磁性物质制成。在体外磁场的作用下，把抗癌药物选择性地输送和定位于靶区，从而降低药量，减小毒性，提高疗效。在交变磁场作用下，到达靶区的磁性粒子能迅速升温至有效治疗温度，导致肿瘤组织坏死，而无磁性脂质体的正常组织则不受损伤。磁性脂质体一般由磁性材料、脂质及药物等组成，多采用四氧化三铁为磁性载体［３］。

３．７　柔性脂质体　在脂质体组分中加入少量适宜的其他表面活性剂如胆酸钠、脱氧胆酸钠，可以形成柔性脂质体。由于胆酸钠等表面活性剂插入磷脂双分子层中，增加了磷脂分子间距离，干扰磷脂酰基链的顺序，使其流动性增加。在皮肤水合作用下，柔性脂质体发生变形，从而促进药物的经皮渗透［４，５］。

３．８　膜融合脂质体　此指含有脂质结构膜的病毒与脂质体通过融合所形成的产物。它利用病毒膜上的融合蛋白与细胞融合，能有效地将包封在脂质体内的抗原导入到细胞质中，诱发细胞毒Ｔ淋巴细胞反应，无不良反应，可作为一种有发展前途的抗原导入系统。现已有人将其作为疫苗的载体应用于鼻腔给药［６］。

４ 脂质体的制备方法

４．１　薄膜分散法　将脂质材料溶解在有机溶剂中，然后在旋转蒸发器上，减压蒸去溶剂，使脂质材料在器壁上形成薄膜，加入适量缓冲液，充分水合分散，即形成乳白色的脂质体混悬液。为降低脂质体的粒径或使脂质体的粒径均匀，可在一定压力下（小于７Ｘ１０５Ｐａ）通过一定孔径的滤膜。

４．２　超声波分散法　水溶性药物（欲包封的药物为水溶性者按此操作）溶于磷酸盐缓冲液，加入磷脂与胆固醇及脂溶性药物（欲包封的药物为脂溶性者按此操作）共溶于有机溶剂的溶液，搅拌蒸发除去有机溶剂，残留液经超声波处理，即可得到脂质体混悬液。本法制备的大多为单室脂质体，如维生素Ｅ脂质体、５－氟脲嘧啶脂质体等。４．３　前体脂质体法［７］　为提高脂质体的稳定性，可将其制成固体粉末。将形成脂质体的脂质材料用薄膜法分散于含有一定量水溶性支持体（粉状氯化钠、山梨醇或多糖等）缓冲液中，形成脂质体混悬液，进行冷冻干燥或喷雾干燥，水分蒸发后脂质体颗粒附着于支持体中形成固体粉末；加水振摇后支持体溶解，脂质体颗粒重新分散于水中形成混悬液。．

４．４　中和法　首先将卵磷脂和药物溶于冰醋酸中，然后加入碳酸氢钠中和，使卵磷脂与药物共沉淀。在共沉淀的过程中包裹药物形成脂质体，其中的小离子通过生理盐水透析去除［８］。

４．５　乙醇注入法　将磷脂与胆固醇等脂质及脂溶性药物溶于乙醇，该溶液经注射器迅速注射到磷酸盐缓冲液（可含水溶性药物）中，形成脂质体。该法主要缺点是包封率低，乙醇很难除尽。

４．６　乙醚注入法　将磷脂与胆固醇等脂质及脂溶性药物溶于乙醚中，经注射器缓缓注入加热至５０℃并用磁力搅拌的磷酸盐缓冲液（可含水溶性药物）中，不断搅拌至乙醚除尽为止，即得脂质体。将其混悬液通过高压乳均机

生物药物

两次，所得成品大多为单室脂质体，少量为多室脂质体，粒径绝大多数在２ｕｍ以下。优点是方法较温和，包封率高且被氧化的可能性小，缺点是制备周期长，不适合大量制备。

４．７ 逆相蒸发法　将磷脂等膜材溶于有机溶剂如氯仿、乙醚等，加入待包封药物的水溶液进行短时超声，直至形成稳定的水／油乳剂。然后减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后，加入缓冲液，旋转下蒸发，制得水性混悬液。通过凝胶色谱法或超迷离心法，除去未包封的药物，即得到大单层脂质体。此法适用于包裹水溶性药物、生物活性物质如各种抗生素、胰岛素、免疫球蛋白、碱性磷脂酶、核酸等。

４．８ 复乳法　先将少量水相（或含水溶性的药物）和较多量的含脂质成分（或含脂溶性药物）的有机相，在一定条件下形成水／油乳剂，再加入大量的水相，乳化形成水／油／水乳剂，减压蒸去有机溶剂，即可得脂质体混悬液。

５ 脂质体作为药物载体的应用

５．１ 作为抗癌药物的载体　由于脂质体对淋巴系统的定向性和对癌细胞的亲和性，改变了药物在组织中的分布，使药物选择性的杀死癌细胞或抑制癌细胞的增生，从而提高疗效，减少剂量，降低毒性，减轻变态和免疫反应。如毛声俊等［９］将甘草次酸与硬脂醇、琥珀酸酐偶联，合成两亲性的导向分子，将其掺入脂质体中，该修饰脂质体与肝细胞表面的甘草次酸受体特异结合，实现了脂质体对肝细胞的主动靶向作用。另有研究”

［１０］表明脂质体猪苓多糖能显著减少黑色素瘤肝转移癌生成作用，而空白脂质体和游离态猪苓多糖则无明显作用，说明脂质体的包封提高了药物在病灶区的药物浓度。５．２ 作为抗寄生虫病的药物载体　由于脂质体相对于游离的药物来说，主要聚集于网状内皮系统，因此，在治疗利什曼病（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｓｉｓ）等网状内皮系统疾病方面，可显著降低用药剂量，提高疗效。氯氰碘柳胺制成脂质体后以２．５ｍｇ／ｋｇ对寄生肝片吸虫的绵羊进行皮下注射，对照组以５．０ｍｇ／ｋｇ原料药同样方式给药，连续给药２０ｄ后，发现实验组与对照组的虫卵转阴率均为８６．８％，虫卵减少率分别为９５．８％和９１．３％，说明氯氰碘柳胺制成脂质体后降低５０％的用药剂量，可达到与原料药同样的治疗效果［１１］。５．３ 作为皮肤治疗药物的载体　近２０年来，皮肤局部用脂质体制剂日益引起关注。脂质体用于皮肤局部给药有如下的特点：（１）能较好地包裹亲水或亲脂性药物，降低药物对皮肤的刺激性；（２）对难溶性药物有增溶性，能增加药物在皮肤的滞留量和滞留时间；（３）具有药物全身吸收的限速膜屏障作用，减少药物的全身吸收，从而降低药物的不良反应。文献报道，相同浓度的吡罗昔康（ｐｉｒｏｘｉｃａｍ）脂质体凝胶的抗炎效果是普通凝胶制剂的２倍［１２］；氯法齐明（ｃｌｏｆａｚｉｍｉｎｅ）脂质体凝胶剂，与普通凝胶剂比较能显著减少外伤的愈合时间［１３］。

另外，选用含一定浓度磷脂与乙醇的脂质体或加入一定表面活性剂如胆酸钠的柔性脂质体，都可作为全身给药的载体，携带大分子的药物如低分子肝素［１４］、胰岛素［４］等透过皮肤进入体内。

５．４ 作为基因药物的载体　基因治疗是指将遗传物质（外源性正常基因）转移入病变细胞或体细胞，并整合至染色体中，取代突变基因，补充缺失基因或关闭异常基因，产生正常基因表达产物，从而达到治疗机体疾病或有益于治疗的目的。脂质体作为基因载体无毒、无免疫原性，制备简单，可被细胞生物膜利用，可以运载不同大小的基因片断、质粒ＤＮＡ，甚至可以运载整个染色体或细胞核。其内容物超过其他基因载体，不受宿主限制，可将基因引入动物细胞、植物细胞和细菌。脂质体与细胞膜融合后，重组基因导入细胞，脂质体被降解。脂质体介导的基因转移被认为是最有前途的基因治疗方法，已被美国癌症协会批准为临床基因治疗的第一方案［１５］。如Ｋｒａｕｓｓ等［１６］发现白介素－４基因转染能增强恶性黑色素瘤细胞的免疫原性及诱导机体显著的抗肿瘤免疫效应，并显著延长荷瘤动物生存时间。给３０例恶性黑色素瘤患者瘤体内注射阳离子脂质体包裹的ＨＬＡＢ７质粒ＤＮＡ进行Ｉ期临床研究，结果表明３０％患者瘤体缩小，局部Ｔ细胞浸润增加。Ｋｕｒａｎｅ等［１７］针对腺癌设计了一种高度特异的转基因方法，他们用抗ＬｅｗｉｓＹ抗原（ＬｅｗｉｓＹａｎｔｉｇｅｎ，ＬＹＡ）的单克隆抗体与含有嵌合的癌胚抗原（ｃａｒｃｉｎｏ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ａｎｔｉｇｅｎ，ＣＥＡ），启动子的质粒和阳离子脂质体的复合物，转染能产生ＣＥＡ且ＬＹＡ阳性的腺癌细胞株。结果获得的转基因表达比不产生ＣＥＡ且ＬＹＡ阴性的腺癌细胞株高２００倍。（下转１８页）

生物药

物

参考文献

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需氨基酸合理，富含ＶＢ１、ＶＢ２、食物纤维、类黄酮。据日本研究，有防治高血脂、高血压，减肥、美容等功效。日本开发荞麦酱作健康调味品受到国际注目。

荞麦酱是在蒸煮的大豆中加荞麦、食盐混合发酵而成，外观酱红色，味香、风味佳，含有云香苷１．５ｍｇ％，含１８种氨基酸总量达１９０６ｍｇ／１００ｇ，远比米酱（１０９４ｍｇ／１００ｇ）及麦酱（１０３７．９ｍｇ／１００ｇ）高。其中鲜味氨基酸含量谷氨酸达２６６．３ｍｇ／１００ｇ，为米、麦酱含量的１倍左右。赖氨酸、精氨酸、亮氨酸、甘氨酸及其它游离氨基酸均比米酱、麦酱高，这是荞麦酱风味与营养优于其它谷类原料酿造酱的最大特点与优势。荞麦酱的生产工艺

１　原料精选荞麦，除杂加水湿润使含水３５．４％，用饱和蒸气使γ化，再冷风干燥到含水１８～２８％，调整到温度３０℃以下，分离壳。

２　原料处理荞麦γ化后，撒水（使含水３６％）、均匀吸水，于常压蒸煮４５分钟；大豆，加３倍水，浸１６小时，除去水份，再加３倍水，于０．５ｋｇ／ｃｍ２蒸气蒸４０分钟，除去豆汁，冷却。３　制荞麦荞麦中接入种Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｇｚａｅ，用常法制，于４０小时出。成中含γ淀粉酶（２２００μ／ｇ）、葡萄糖淀粉酶（２００μ／ｇ）、酸性蛋白酶（１４４００μ／ｇ）、中性蛋白酶（１２８９０μ／

ｇ）、碱性蛋白酶（６０４０μ／ｇ）、酸性羧肽酶（２４０００μ／ｇ）、荞麦的蛋白酶、羧肽酶活性大大高于米和的麦。

４　发配配料蒸煮大豆５．２ｋｇ、荞麦３．８９ｋｇ、食盐（精白度６０％～６５％）１．２４ｋｇ（达食盐浓度１１％）、酵母４０ｍｌ（耐盐酵母Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａ－ｒｏｍｙｃｅｓｒｏｕｘｉｉ）、种水９６９．５ｍｌ，ｐＨ４．８～４．９。

酵母培养基正宗特级酿造酱油１６０ｍｌ（不含防腐剂），精制葡萄糖５０ｇ，磷酸二氢钾０．１ｇ，食盐１０００ｇ，２８～３０℃，振荡培养４８ｈ。

５　配料后温度　在２５℃下，熟成３０天。成品含水５５．９％，食盐１０．８％，ｐＨ５．０，酸度９．９，蛋白溶解率５１．５％，蛋白分解率２３．４％，还原糖生成率４５．３％，乙醇１．９％。６　保存荞麦酱易变色，需放置在１５℃以下暗密闭保存。为防止包装酱胀包，一般酱中加２．０％～２．５％乙醇混合均匀。保健调味新品荞麦酱

［１０］张中冕，等．白求恩医科大学学报，１９９９，８（３）：１８０［１１］陈桂香，等．河南职技师院学报，２００１，２９（１）：３６［１２］ＣａｎｔｏＧＳ，ｅｔａＩ．ＤｒｕｇＤｅｖｌｎｄＰｈａｒｍ，１９９９，２５（１２）：１２３５

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［１７］ＫｕｒａｎｅＳ，ｅｔａｌ．ＪｐｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９９８，８９（１１）：１２１２

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