骨髓染色
骨髓细胞过氧化物酶染色标准操作程序
骨髓细胞过氧化物酶染色标准操作程序1. 检验目的急性白血病类型鉴别；诊断遗传性过氧化物酶缺乏症。
2. 检测原理（包括结果计算）pereira 建立的碘化钾MPO染色法，安全、实用，其原理未明。
一般认为髓过氧化物酶分解H2O2，产生新生态氧，后者氧化KI析出碘，碘与W-G结合，生成颗粒状沉淀定位于细胞浆中。
3. 性能特征无。
4. 标本要求4.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。
凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。
4.2 标本类型：骨髓。
4.3标本容器：洁净载玻片。
4.4 标本存放:4.4.1未检测标本的存放：放于细胞室未检测标本架上。
4.4.2已检测标本的存放：骨髓存片柜，保存10年以上。
4.5 标本运输:室温条件下运输。
4.6 标本拒收标准：参照《采集手册》。
5.仪器和试剂5.1试剂名称：瑞吉氏染色液、过氧化物酶染色液。
5.2试剂成份：5.2.1 氧化瑞吉氏染色液：Wright 染色剂粉 1 gGiemsa 染色剂粉 0.5 g甘油 10 ml无水甲醇 500 ml加30% H202 50～100 ul，储存于棕色瓶，备用。
5.2.2过氧化物酶染色液：100 μl碘化钾溶液和1 ml磷酸盐缓冲液混和。
（1）磷酸盐缓冲液：0.067 mol/ L 磷酸盐，pH 5.8（2）碘化钾溶液：碘化钾 500 mg，蒸镏水50 ml，储存于棕色瓶，备用。
5.3 试剂来源：自配试剂。
6. 环境和安全此试剂为体外诊断用，存在一定的刺激性和毒性；不要入口，避免和眼睛，皮肤或衣服接触，一旦接触，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。
7. 检测前准备在玻片头端贴上标签编号。
8. 校准/定标无。
9. 质量控制无。
10. 标本检测10.1在干燥的骨髓涂片或外周血涂片体尾处用红蜡笔划两条平行线，防止染液溢出；在两条平行线间滴加氧化瑞吉氏染色液，并布满，立即滴加等量过氧化物酶染色液，染色1-2分钟；在显微镜下观察到阳性对照，即用过氧化物酶染色液冲洗；晾干，镜检。
骨髓细胞化学染色简易操作卡
骨髓细胞化学染色简易操作卡
中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
工作液配制：取B液30μl,C液30μL混匀，静置2分钟，再加蒸馏水1ml，D液30μl,混匀。
染色步骤：1.干燥涂片，滴加A液固定剂（用前恢复室温，并充分摇匀）固定约30-60秒，蒸馏水冲洗，甩干；
2.滴加或浸入工作液15分钟，蒸馏水冲洗2-3分钟，甩干
3.E液(使用前务必摇匀！)复染1-2分钟，蒸馏水冲洗，干后镜检
酸性α-醋酸萘酚酯酶染色（ANAE）
工作液配制：于试管内加B液50μL，C液50μL混匀，静置1分钟，再加D液1.5ml，E 液50μl,混匀，（分为两份，其中一份作为NaF抑制试验加NaF液1滴）静置2分钟备用。
染色步骤：1.干燥涂片，直接滴加工作液做第二步或滴加A液（用前恢复室温，并充分摇匀）固定约30-60秒，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干（涂片不固定直接做ANAE
染色，阳性反应强于固定者）；
2.滴加或浸入工作液布满涂片（37℃）孵育分钟，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干。
3.F液复染1-2分钟，蒸馏水冲洗，干后镜检。
糖原染色(PAS)
滴染：1.干燥涂片，滴加A液（用前恢复室温，并充分摇匀），布满涂片固定约30~60秒，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干。
2.滴加B液布满涂片作用5~10分钟，蒸馏水冲洗5分钟，待干或滤纸吸干。
3.滴加C液布满涂片作用10~15分钟，蒸馏水冲洗5分钟。
4.D液复染2~5分钟，干后镜检。
骨髓片染色方法
骨髓片染色方法一、前言骨髓片染色是一项重要的实验技术，用于检测血液病变和诊断疾病。
本文将介绍骨髓片染色方法的详细步骤和注意事项。
二、实验器材和试剂1. 骨髓样本2. 血液计数板3. 75%乙醇4. 碘化钾5. Wright-Giemsa染料6. 磷酸盐缓冲液（pH7.2）三、实验步骤1. 准备样本从患者或小鼠等动物的胫骨中采集约1ml的骨髓，将其分别注入两个含有抗凝剂的离心管中。
轻轻倒置离心管，使抗凝剂与样本充分混合。
然后，用血液计数板检测白细胞、红细胞和血小板的数量。
2. 制备干片取出一支离心管，将其中0.5ml的样本加入到试管中，并加入0.5ml 75%乙醇进行固定。
固定后，在试管中加入碘化钾溶液，静置10-15分钟。
然后，将样本离心5分钟，倒掉上清液，留下沉淀。
用吸管吸取沉淀，并滴在玻璃片上制成干片。
3. 染色将干片放入Wright-Giemsa染料中浸泡5-10分钟。
然后，用磷酸盐缓冲液洗涤干片3次，每次洗涤5分钟。
最后，在空气中晾干。
四、注意事项1. 采集骨髓样本时需注意卫生和安全，避免交叉污染。
2. 在制备干片时需要控制好乙醇和碘化钾的时间和浓度，以免影响样本质量。
3. 在染色过程中要避免过度染色和过度洗涤，否则会影响结果的准确性。
4. 染色后的干片应在阴凉干燥处保存，并避免阳光直射。
五、总结以上就是骨髓片染色方法的详细步骤和注意事项。
通过正确操作和控制实验条件，可以得到高质量的样本和准确的结果。
这项技术对于诊断血液疾病具有重要的意义，希望本文能够对读者有所帮助。
骨髓细胞病理学检查及诊断
骨髓细胞病理学检查及诊断全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：骨髓细胞病理学检查及诊断是一种重要的临床检查方法，用于帮助医生诊断和治疗各种血液疾病。
骨髓细胞病理学检查主要是通过对骨髓细胞的形态、数量、组织形态学等方面进行分析和判断，从而明确病变的性质和病情的严重程度。
接下来，我们将详细介绍骨髓细胞病理学检查及诊断的方法和意义。
一、骨髓细胞病理学检查的方法1. 骨髓穿刺：骨髓穿刺是获取骨髓细胞最直接、最常用的方法。
医生在骨骼中穿刺抽取骨髓液和组织，然后通过显微镜观察细胞形态学变化。
2. 骨髓涂片染色：骨髓涂片染色是将骨髓细胞涂在载玻片上，然后用不同染色剂染色，如Wright染色、Giemsa染色等。
通过观察染色后的细胞形态，可以分析出异常细胞的数量和性质。
3. 流式细胞术（FCM）：流式细胞术是一种通过激光散射和荧光标记技术，对细胞表面抗原进行定量和定性分析的方法。
通过流式细胞仪，可以准确地检测骨髓细胞中的各种蛋白质及其表达水平。
4. 分子生物学检测：利用PCR技术、融合基因检测等技术，对骨髓细胞的基因突变、融合基因进行检测，帮助医生对骨髓疾病进行诊断和治疗。
1. 辅助疾病诊断：通过骨髓细胞病理学检查，可以辅助医生对各种血液疾病进行诊断，如白血病、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血等。
2. 判断疾病严重程度：通过对骨髓细胞病理学检查结果的分析，可以判断疾病的进展程度和严重程度，为医生制定治疗方案提供重要依据。
3. 指导治疗策略：根据骨髓细胞病理学检查结果，医生可以选择合适的治疗方法，如化疗、干细胞移植等，提高治疗效果。
4. 监测疾病疗效：在治疗过程中，通过不断监测骨髓细胞的病理学变化，可以及时评估治疗效果，调整治疗方案，提高治疗成功率。
5. 预测疾病预后：一些骨髓疾病具有较高的复发率和预后不良的特点，通过骨髓细胞病理学检查，可以帮助医生预测患者的预后，并采取相应的治疗措施。
1. 白血病：白血病是一种由于造血干细胞发生异常增生，导致血液恶性肿瘤的疾病。
骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查
骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查是一种用于诊断血液疾病的特殊检查方法。
该检查可以通过染色技术直接观察血液细胞中特定的染色体、酶或其他化学物质，进而判断疾病的类型和程度。
下面我们将从步骤、原理及应用等多个方面进行细致的阐述。
一、步骤1.取样骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查需要从患者的骨髓中取得样本。
通常采用穿刺取骨髓的方法，使用空心针将骨髓组织抽取出来。
2.制片将采集到的骨髓组织用特定的方法制成薄片，然后将制片玻片放入预处理液中，去除组织中的脂肪和血液。
3.固定用甲醛等化学物质将薄片固定在制片玻片上，以免组织失去结构。
4.染色根据不同的需求，使用不同的染色方法染色。
常用的染色方法有Gear （G）染色、Wright（W）染色、Giemsa（G）染色、PAS染色、酶组织化学染色等。
5.观察染色完成后，使用显微镜观察染色后的组织和细胞，看到目标物质的颜色或形态变化，从而判断患者的疾病类型及程度。
二、原理骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查的原理是通过染色技术观察不同的物质反应，从而帮助医生确定患者的诊断。
例如，由于白血病细胞存在着特殊的染色体核型，因此通过染色技术可以直接观察到这些染色体。
又如，用PAS染色技术可以看到细胞中的糖原，发现是否存在糖尿病等疾病。
这些染色方法可以同时应用于细胞形态与细胞化学特性的研究。
三、应用骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查广泛用于对各种血液疾病的诊断，特别是在白血病、贫血、血小板疾病、骨髓增生异常综合症等疾病的确诊和辅助诊断中得到了广泛应用。
通过该检查方法的组织学检查，可以检查人体中蛋白质、酶液、糖原、脂肪等物质，并进一步辅助疾病的诊断和治疗。
而且，该检查方法具有操作简便、灵敏度高、结果准确等优势，可以为医生提供诊断血液疾病的重要实验依据，为患者提供更好的诊治服务。
总之，骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查是一种具有较高研究价值和应用前景的检查方法。
骨髓细胞内外铁染色临床意义
骨髓细胞内外铁染色临床意义1. 引言大家好，今天咱们聊聊一个可能听起来有点专业，但其实挺有趣的主题——骨髓细胞内外的铁染色。
别看名字长，其实这东西跟我们的身体健康息息相关，简直就是“隐藏的宝藏”。
你有没有想过，骨髓里那些小小的细胞，怎么就能透露出你身体的秘密？接下来就让我们一起探讨一下它的临床意义。
2. 什么是骨髓铁染色？2.1 基础知识首先，得说说什么是骨髓铁染色。
简单来说，就是通过特殊的染色方法，观察骨髓中铁的含量。
铁，这个我们常说的“金属元素”，在血液的运输、氧气的供给上可是个“大功臣”。
没它可真不行！而骨髓是生产血细胞的地方，所以铁的状况直接影响到我们的健康。
2.2 临床检测在医院里，医生通常会根据病人的情况，要求做骨髓检查。
如果检查结果显示骨髓里铁的含量异常，医生就能迅速找到问题的根源。
这就像是破案，越早发现，越能对症下药，不然可就得花费一番周折。
3. 骨髓铁染色的临床意义3.1 贫血的“侦探”说到骨髓铁染色，咱们不得不提一个大热门话题——贫血。
贫血就像个“隐形人”，早期不太明显，但越到后面，越让人受不了。
通过铁染色，医生能很快判断出是缺铁性贫血，还是其他类型的贫血。
这可是为病人节省了不少时间和精力啊！3.2 白血病的“警报”再说说白血病，这可是个让人闻风丧胆的病。
骨髓铁染色可以帮助医生判断骨髓中是否存在异常细胞。
假如有不正常的铁沉积，可能就暗示着白血病的潜在风险。
及时发现问题，及时采取措施，就能把风险降到最低。
3.3 铁负荷过量的“监测”不仅仅是贫血和白血病，骨髓铁染色还能够监测铁负荷过量的问题。
你看，有的人身体里铁太多，反而成了“铁人”。
这种情况也不容小觑，长期下去可会引发其他疾病。
因此，医生通过这种检查，就能及时发现并进行干预。
4. 结论总的来说，骨髓细胞内外的铁染色，虽然听起来有些生涩，但它在临床上可真是个大帮手。
通过这项检查，医生可以迅速了解病人身体的铁状态，帮助诊断多种疾病。
骨髓涂片瑞氏染色步骤
骨髓涂片瑞氏染色步骤
骨髓涂片瑞氏染色步骤如下:
1. 采集骨髓涂片:通常使用新鲜骨髓或骨髓提取物制备涂片。
在采集过程中,需要使用一次性手套和消毒工具,确保不会对样本造成污染。
2. 处理骨髓涂片:将骨髓涂片放入含有酒精的消毒溶液中浸泡,以去除表面的细胞和血小板。
然后,将涂片放入含有单克隆抗体的溶液中浸泡,以识别不同的细胞类型和生物标记。
3. 标记细胞:使用标记抗体将骨髓涂片上的细胞类型进行分类。
常用的标记包括CD3、CD4、CD8、CD10、CD19、CD30、CD45、CD133、B220等。
在采集骨髓涂片之前,需要使用标记抗体进行预处理,以确保涂片上有足够的细胞类型。
4. 染色:将骨髓涂片与瑞氏染色液混合,并轻轻地涂抹在涂片上。
染色后,涂片会被染成红色或深红色,以显示不同的细胞类型。
常用的瑞氏染色液包括瑞氏试剂盒和瑞氏试剂管。
5. 分析细胞类型:将染色后的骨髓涂片放入显微镜下观察,以确定细胞类型。
可以使用光学显微镜或电子显微镜进行观察和分析。
骨髓涂片是一种常用的细胞学检测方法,可以用于诊断多种血液疾病和其他疾病。
通过使用瑞氏染色步骤,可以识别不同的细胞类型,帮助医生确定病情和制定治疗方案。
骨髓细胞染色试验步骤
【实验原理】染色体是染色质的高度凝集状态，化学成分与染色质相同，都由DNA和组蛋白等成分组成。
在细胞分裂中期染色体的形态最清晰，最易于观察。
动物骨髓细胞是制作动物细胞染色体标本的理想材料。
骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞数量较多，给动物活体内注射秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增殖状态的骨髓细胞停止在中期。
从而收集到较多的中期分裂相，通过低渗处理，可使细胞膜胀破、染色体分散；固定液处理使染色体结构清晰。
为此，骨髓细胞制备染色体标本比利用其它组织可获得更多的分裂相。
同时该方法还具有简便易行，不需要特殊的设备和无菌操作等优点。
【实验用品】1．器具：显微镜、离心机、恒温水浴箱、天平、酒精灯、火柴、预冷载玻片、解剖盘、剪刀、镊子、吸管、10ml刻度离心管、试管架、5ml注射器、染色架、二甲苯、香柏油、擦镜纸。
2．材料：小白鼠。
3.试剂：0.01%的秋水仙素、0.075 mol/L KCl、 Carnoy固定液、10% Giemsa 染液。
【试剂配制】1．0.01%的秋水仙素：秋水仙素10mg，加灭菌生理盐水至100ml。
（抑制微管聚集，纺锥丝不能形成，使染色体停留于中期时像，具最典型形态）2．0.075 mol/L KCl：称取KCl 5.6 g , 加蒸馏水至1000ml。
3．Carnoy固定液：甲醇与冰醋酸按 3 ：1 容积比混合即可。
4．10% Giemsa染液：（1）贮存液：Giemsa粉末1 g、纯甘油66ml、甲醇66ml.称取Giemsa粉末1 g 置于研钵中，加少量甘油充分研磨，成无颗粒糊状。
再将全部甘油加入，置于560C温箱2小时，然后加入甲醇混匀，静止1天后过滤，保存于棕色瓶中，2周后即可使用。
（2）1/15 mol/L 磷酸盐缓冲液(pH6.8) ：A液（1/15 mol/LKH2PO4）：称取 KH2PO4? 9.08g，加蒸馏水至1000ml，混匀溶解即可。
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骨髓细胞化学染色
(一) 过氧化酶染色（POX）
【结果判断】
细胞中出现蓝绿色颗粒为阳性反应。
按颗粒大小和密集程度分为强阳性和弱阳性。
【临床意义】
过氧气酶主要存在于粒细胞系统，除早期原始粒细胞外，其后各阶段均呈阳性反应。
单核细胞从幼稚单核细胞起呈弱阳性反应。
淋巴细胞各阶段均为阴性。
故对急性粒细胞白血病和急性淋巴细胞、急性粒细胞与急性单核细胞白血病的鉴别诊断有帮助。
急性淋巴细胞白血病全部阴性，急性单核细胞白血病POX颗粒细小、染色浅淡。
(二) 中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)
碱性磷酸酶主要存在于成熟中性粒细胞中，其他细胞均阴性。
网状细胞及吞噬细胞的酶活性很强。
【结果判断】
染色结果，在细胞浆中出现灰色至棕黑色颗粒者为阳性，阴性与阳性程度可表示为：
(一) 胞浆呈淡红色，无颗粒。
(＋) 全部胞浆呈淡灰色，无颗粒。
或胞浆中出现棕黑色或黑色颗粒，但不超过整个细胞的1/4。
(十十) 同(＋)，胞浆呈灰色，或颗粒不超过细胞1/2。
(＋十十) 胞浆内充满棕黑色或黑色颗粒，但尚不十分致密，范围可超过整个细胞的3/4。
(十十十十) 颗粒粗大稠密，甚至遮盖细胞核。
以积分值表示：正常人阳性率一般在40%左右，NAP积分值80分左右，以弱阳性为主。
【临床意义】
(1) 急性白血病与中性粒细胞类白血病样反应的鉴别。
前者NAP减弱，后者活性明显增强。
(2) 慢性粒细胞性白血病时降低。
阵发性睡眠性血红蛋白尿患者的成熟粒细胞NAP降低。
(3) 急性淋巴细胞白血病、淋巴肉瘤、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、骨髓硬化症患者NAP明显增强。
(4) 再生障碍性贫血时NAP增强，而其他类型贫血多无变化。
(5) 激素的影响，垂体肾上腺皮质功能亢进，或应用皮质激素时NAP增强。
妊娠亦出现 NAP 增强。
(三) 糖原染色 (PAS)
糖原存在于细胞浆内，粒系统细胞自早幼粒细胞开始就可呈现阳性，阳性程度随细胞成熟而增强。
成熟中性分叶粒细胞糖原最为丰富。
单核细胞呈弱阳性。
成熟巨核细胞亦呈阳性。
淋巴细胞和幼稚红细胞亦现阳性。
【结果判断】
(1) 中性粒细胞
(十) 胞浆内呈淡红色，无颗粒。
(十十) 胞浆呈粉红色，有少量小颗粒 o
(十十十) 胞浆内呈片状深红色。
(十十十十) 胞浆内呈深紫红色。
(2) 淋巴细胞
(十) 胞浆内呈弥散淡红色或少数红色颗粒(<9个)。
(十十) 胞浆内呈弥散较深的淡红色，或少数红色颗粒(>10个)。
(十十十) 胞浆内多数红色颗粒或小块或大块红色物质。
(十十十十) 胞浆内多数红色颗粒或红色块状物。
(3) 幼稚红细胞
(一) 无反应，正常红细胞为(一)。
(十) 胞浆内有少数红色散在颗粒，或弥漫淡红色。
(十十) 胞浆内有1～10个中等大小的红色颗粒或弥漫性红色。
(十十十) 胞浆中有11～20个较粗红色颗粒，或弥漫深红色。
(十十十十) 胞浆中深紫红色粗大而呈块状或充满均匀的红色物质。
以积分值表示：正常人成熟淋巴细胞PAS阳性率参考值为20%以下，积分值一般在30以下。
幼稚红细胞积分参考值<40。
【临床意义】
(1) 急性白血病鉴别诊断。
急性粒细胞白血病PAS多为阳性。
急性单核细胞白血病阳性率和积分较高，颗粒细小而多，急性淋巴细胞白血病的幼稚细胞中PAS染色呈大块红色物。
(2) 慢性淋巴细胞白血病中的淋巴细胞糖原增加，而慢性粒细胞性白血病中的淋巴细胞糖原积分正常。
(3) 淋巴细胞增生性疾病。
如淋巴肉瘤、何杰金病、传染性单核细胞增多症等，淋巴细胞的糖原积分增高，一般病毒感染性疾病糖原在正常范围。
感染、骨髓增生综合征及再生障碍性贫血，成熟中性粒细胞糖原增加。
(四) 酸性磷酸酶染色 (ACP)
网状细胞、吞噬细胞、白细胞系统(其中粒细胞系统最强)均有此酶活性。
【结果判断】
在细胞内有酶活性部位可呈现棕黄色；近乎黑色的硫化铅沉着，主要在细胞浆。
【临床意义】
(1) 此酶对网状细胞、吞噬细胞、高雪(Gaucher)细胞、组织细胞、单核细胞均呈阳性反应。
在急性单核细胞白血病时，原始及幼单核细胞常有强的反应。
急性粒细胞性白血病的原始细胞酶的反应不一，急性淋巴细胞性白血病原始细胞常有弱阳性反应。
亦有助于高雪病的诊断。
(2) 毛细胞性白血病细胞呈阳性反应，且不为左旋-酒石酸所抑制，故本法加酒石酸抑制试验有助于毛细胞性白血病的确诊。
(3) 感染类白血病样反应，成熟中性粒细胞此酶常增高。
(五) 特异性酶酶染色 (SPE)
此酶为中性粒细胞所特有。
【结果判断】
细胞浆中出现红宝石样颗粒为阳性。
阳性反应见于粒系细胞，原始粒细胞呈弱阳性；早幼粒细胞呈强阳性；嗜酸性粒细胞呈阴性或弱阳性；嗜碱性粒细胞呈强阳性。
单核细胞一般为阴性，也可出现弱阳性反应；淋巴细胞呈阴性反应。
【临床意义】
急性粒细胞性白血病时，原粒和幼粒细胞SPE呈强阳性反应，但成熟粒细胞的酶活性下降或消失；急性单核细胞性白血病一般呈阴性反应，若出现弱阳性，则可用非特异性脂酶染色法及氟化纳抑制试验来进行判断；急性淋巴细胞白血病为阴性反应。
(六)非特异性酶酶染色 (SPE)
非特异性酯酶又称单核细胞酯酶，主要存在于单核细胞和组织细胞内
【结果判断】
胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性。
在单核细胞、吞噬细胞中此类酶的含量较多且多数受到氟化钠（NaF）抑制；粒细胞、淋巴细胞、部分幼红细胞、巨核细胞和血小板等呈阴性。
【临床意义】
1.非特异性酯酶又称单核细胞酯酶，主要存在于单核细胞和组织细胞内，正常单核细胞细胞各阶段均成阳性，且可被氟化钠抑制。
2.急性粒细胞白血病可呈阳性或弱阳性，急性早幼粒细胞白血病细胞呈强阳性，但不被氟化钠抑制。
3.急性淋巴细胞白血病一般为阴性。
(七)铁染色
正常骨髓中有一定量的铁，以含铁血红素形式贮存，供细胞利用，以合成血红蛋白，这种贮存铁称为细胞外铁;骨髓中有核红细胞也含有铁颗粒，称细胞內铁，他们经盐酸作用释放出高铁离子，与亚铁氰化钾作用，形成亚铁氰化铁，呈蓝色颗粒。
【结果判断】
【临床意义】。