红树林内生真菌的分离及代谢产物生物活性的初步研究
一株红树林内生真菌次级代谢产物中活性组分的活性跟踪法分离研究
一株红树林内生真菌次级代谢产物中活性组分的活性跟踪法分离研究梁小莉;高俊平;潘润恺;佘志刚;肖娜娜;蔡小玲;林永成【摘要】对从广西山口红树林保护区采集的21株植物内生真菌进行了抗菌、抗肿瘤筛选,得到4株活性菌株,其中SK11菌株活性最强.采取活性跟踪方法,从SK11菌株次级代谢产物中分离到了活性成分Lichexanthone和Bikaverin,并用分子生物学方法鉴定该菌株为链格孢霉菌(Alternaria sp.).这是首次从该属中分离得到这两种化合物.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2009(026)010【总页数】5页(P48-52)【关键词】链格孢霉菌;活性跟踪法;内生真菌;次级代谢产物【作者】梁小莉;高俊平;潘润恺;佘志刚;肖娜娜;蔡小玲;林永成【作者单位】中山大学化学与化学工程学院,广东省生物功能分子重点实验室,广东,广州,510275;中山大学化学与化学工程学院,广东省生物功能分子重点实验室,广东,广州,510275;中山大学化学与化学工程学院,广东省生物功能分子重点实验室,广东,广州,510275;中山大学化学与化学工程学院,广东省生物功能分子重点实验室,广东,广州,510275;中山大学化学与化学工程学院,广东省生物功能分子重点实验室,广东,广州,510275;中山大学化学与化学工程学院,广东省生物功能分子重点实验室,广东,广州,510275;中山大学化学与化学工程学院,广东省生物功能分子重点实验室,广东,广州,510275【正文语种】中文【中图分类】Q946.8;Q949.32海洋共生微生物是指与海洋动植物宿主互利共生的海洋微生物，包括附着在海洋动植物表面(包括内腔)的微生物以及生长在海洋动植物内部(细胞间或细胞内)并与动植物存在着互惠互利或一方受益的共生或寄生关系的微生物。
近几年, 本研究组已经分离海洋真菌2000多株，活性筛选800多株，鉴定100多株；从已经发酵培养的100多株菌株中，分离次级代谢产物400个化合物，新结构化合物200多个，初步确定具有抗肿瘤、抗病毒等活性的化合物有140多个,揭示了海洋真菌具有极大的药用开发前景[1～3]。
红树林内生真菌B77代谢产物研究及微量元素对其次级代谢的影响的开题报告
红树林内生真菌B77代谢产物研究及微量元素对其次级代谢的影响的开题报告1.研究背景真菌是一类特殊的微生物，其具有巨大的生物多样性，广泛分布于亚热带、热带等各种环境中，并在各自的生态环境中产生丰富多彩的代谢产物。
据统计，目前世界上约有10万种以上的真菌，其中仅有不到10%的真菌得到了完全解析。
因此，继续寻找新的、具有生物活性的真菌和其次级代谢物成为了当前的研究热点。
红树林是一种特殊的生态系统，其具有独特的物理、化学和生物学特性。
在红树林中，很多真菌在生长过程中会产生各种代谢产物，这些代谢产物往往具有重要的药理作用，如抗肿瘤、抗炎、抗菌等。
因此，研究红树林内生真菌代谢产物，不仅可以拓展药物资源，也可以为红树林保护提供科学依据。
2.研究目的本研究旨在从南海赤峰红树林内生真菌中筛选出具有活性的代谢产物，并深入研究其生物活性和生物合成途径。
同时，本研究还将探究微量元素对这些代谢产物的次级代谢过程的影响，从而为对红树林生态环境的保护提供理论依据。
3.研究内容和方法（1）红树林内生真菌的分离和鉴定从南海赤峰红树林采集真菌样品，进行分离和纯化，并使用分子生物学方法鉴定其物种。
（2）代谢产物的筛选与提取在体外培养条件下，通过评价相关活性，从红树林内生真菌中筛选出具有生物活性的代谢产物，并采用方法提取和纯化。
（3）代谢产物的鉴定和结构解析通过物质分析和波谱方法，对代谢产物进行鉴定和结构解析，并分析其生物合成途径。
（4）微量元素对代谢产物的次级代谢过程的影响在培养基中添加不同浓度的微量元素，探究其对红树林内生真菌代谢产物次级代谢过程的影响，并分析其机制。
4.研究意义研究红树林内生真菌代谢产物，可以帮助发现具有重要药理活性的天然产物，并为新药的研发提供合适的天然产物基础。
同时，这也有利于拓展中国南海赤峰红树林内生真菌资源，为红树林生态保护提供科学依据。
此外，本研究可以在代谢产物生物合成、微生物生态环境等方面深入探究，促进真菌次级代谢研究领域的发展。
南海红树林内生真菌GX—3代谢产物研究
南海红树林内生真菌GX—3代谢产物研究摘要：采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶色谱法等分离纯化南海红树林内生真菌GX-3的代谢产物，并通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构。
结果表明，从南海红树林内生真菌GX-3的菌体中分离得到6个代谢产物。
经波谱解析，分别为：环（苯丙-甘）二肽（1）、环（丙-亮）二肽（2）、Fusaric acid （3）、3，6-di-sec-butyl-1，4-dihydroxypiperazine-2，5-dione（4）、环（脯-亮）二肽（5）、环（甘-亮）二肽（6）。
初步药理活性显示化合物1对口腔癌细胞KB、KBv200的抗肿瘤活性的LD50值分别为6.5和11.2 μmol/L。
通过鉴定，所有化合物均系首次从南海红树林内生真菌GX-3中分离得到。
关键词：红树林；内生真菌；代谢产物海洋微生物资源由于具有可持续开发性，其活性物质生产不受天然资源难再生的限制，能通过发酵进行胞外生产，与现代微生物技术相结合，较容易实现工业化生产，特别是其生产不对环境造成危害，符合当今绿色化学发展的方向。
而多数报道均显示海洋真菌都与红树林有着紧密的联系[1，2]，对红树林真菌生物活性物质的研究已成为海洋微生物资源开发利用，寻找天然药物先导化合物的重要途径。
近十几年来，已有学者对中国南海红树林内生真菌进行了系统的研究，并从中分离获得了一系列结构新颖、药理活性良好的海洋天然化合物[3-9]。
1 材料与方法1.1 仪器和试剂美国Varian公司的INOV A-500NB超导核磁共振谱仪、INOV A-300NB核磁共振仪、VG ZAB-HS双聚焦质谱仪、Thermo DSQ电子轰击电离质谱仪和Thermo MAT95XP高分辨质谱仪；北京泰克仪器有限公司的X-4数字显示显微熔点测定仪。
所用试剂均为广州化学试剂厂生产，化学纯，溶剂经重蒸后使用；柱层析硅胶为青岛海洋化工厂生产的200～300目硅胶，硅胶H，薄层硅胶GF254。
红树林内生真菌抗细菌和抗真菌活性的初步研究
红树林内生真菌抗细菌和抗真菌活性的初步研究【摘要】目的分离和挑选具有抗细菌和抗真菌活性的红树林内生真菌。
方式从红树林植物桐花树、海漆、秋茄、木榄、白骨壤、银叶树中分离到60株内生真菌，对其代谢产物进行抗菌检测，通过滤纸片法来检测内生真菌代谢产物抗细菌和抗真菌活性。
结果共有35株内生真菌具有抗细菌活性，占待侧菌株总数的58.3％，其中以不产孢类、青霉属、曲霉属、镰孢属为主，别离占活性菌株总数的51.4％、8.6％、8.6％、8.6％；共有49株内生真菌具有抗真菌活性，占待侧菌株总数的81.7％，其中以不产孢类和盘长孢属为主，别离占活性菌株总数的44.9％、17.1％。
结论红树林内生真菌是抗菌活性物质的一个潜在的、丰硕的资源库，值得进一步研究和开发。
【关键词】红树林；内生真菌；代谢产物；生物活性Abstract:Objective To isolate and screen fungal endophytes with antibacterial and antifungal activities from mangrove plants.Methods The antibacterial and antifungal activities test of fungal endophytes from mangrove plants were used by paper disc method.Results Sixty strains of endophytic fungi were isolated from Aegiceras corniculatum, Excoecaria agallocha, Kandelia candel, Bruguiera gymnorrhiza, Avicenniamariana, Heritiera littoralis.The result of the antibacterial and antifungal assay shows that thirty five strains of the endofungi (58.3% of total tested strains ) have antibacterial activities, the active strains mostly belong to sterile groups (51.4 % of active strains), Penicillium(8.6%), Aspergillus(8.6%), Fusarium(8.6%); forty nine strains (81.7% of total tested strains) have antifungal activites, most of them belong to sterile groups (44.9 % of active strains), and Gloeosporium (17.1%).Conclusion Mangrove fungal endophytes were potential and rich resources of antimicrobial compounds, which need to explore further.Keywords: mangrove plants, fungal endophytes, metabolites，bioactivity内生真菌(endophyte)指生活于健康植物组织内部、不引发植物产生明显病症的一类真菌。
三种南海海洋红树林内生真菌次级代谢产物的研究的开题报告
三种南海海洋红树林内生真菌次级代谢产物的研究的开题
报告
题目：三种南海海洋红树林内生真菌次级代谢产物的研究
摘要：南海是我国具有重要意义的海洋资源之一，其中海洋红树林内生真菌是其中一种十分重要的生物资源。
本研究将选取三种南海海洋红树林内生真菌进行研究，分析其次级代谢产物及其生物活性，为南海海洋红树林内生真菌资源的开发和利用提供理论依据和实验依据。
研究思路：首先，将从南海海洋红树林内采集到的内生真菌进行筛选和鉴定，选取三种具有代表性的真菌进行研究。
其次，采用化学分离和纯化技术，分离并获得该三种真菌次级代谢产物。
然后，对所得次级代谢产物进行结构鉴定、生物活性测试与分析，寻找具有活性、生物功能组合的代谢物。
最后，深入研究代谢物的应用前景和开发利用方法。
研究意义：本研究将可深入了解南海海洋红树林内生真菌的代谢途径及产物与其生物活性之间的关系，为南海南海海洋红树林内生真菌资源的可持续利用、开发提供理论和实践支持。
关键词：南海海洋红树林；内生真菌；次级代谢产物；鉴定；生物活性。
(整理)红树林内生真菌次级代谢产物的分离提取
红树林内生真菌次级代谢产物的分离提取学生：李洋指导教师：苏香萍三峡大学化学与生命科学学院1、课题的来源本课题来源于三峡大学化学与生命科学学院毕业论文课题。
2、研究的目的及意义纤维素是高等植物细胞壁的主要成分，亦是地球上最丰富资源的一种。
但目前仅有小部分纤维素得到充分利用，秸杆即是很充足的纤维素资源，当前秸杆主要应用于农村炊事，喂养牲畜，、积肥还田等。
纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称；它不是单种酶，而是起协同作用的多组分酶系，主要有：β-1，4-葡聚糖水解酶.β-1，4- 葡聚糖纤维二糖水解酶。
它们能将植物纤维分解为葡萄糖，使植物细胞壁破坏，释放蛋白体、淀粉粒等营养成分，能消除饲料中非淀粉多糖的抗营养作用，提高饲料利用率和畜禽生产性能。
因此，选育出高活性纤维素酶的菌种将为开发利用纤维素资源和提高饲料营养价值奠定基础。
目前通过诱变所选育出的优良纤维素酶产生菌,几乎都是木霉属菌株,而木霉的纤维素酶系缺乏纤维素水解为葡萄糖的限速因子B-葡萄糖苷酶。
人们发现黑曲霉也具有产生纤维素酶的活力,尤其是有较高的B-葡萄糖苷酶。
因此我们选择黑曲霉作为出发菌株,通过紫外线(UV)对其进行了诱变育种,以期进一步提高其纤维素酶活力。
该课题是生物质能开发的基础研究，对再生能源的研究具有一定的意义。
3、参考文献及国内外的研究现状和发展趋势3.1参考文献[1] 王景林, 刘晓明, 吴东林等. 纤维素酶产生菌黑曲霉X-15 的选育及其产酶条件[J].中国兽医学报，2000（20）：97－99.[2] 王龙英, 费笛波, 皮雄娥. 纺织用纤维素酶、果胶酶高产菌株选育与固态发酵及其应用[J]. 浙江农业学报,2006(18):260-263.[3] 费尚芬, 鹿宁, 刘坤, 刘毅. 白腐菌纤维素酶高酶活菌株的筛选[J]. 安徽农业科学,2006(34):22-23.[4] 张秀红, 张彩琴, 张云茹. 高活性纤维素分解菌株的筛选及其产酶条件的研究[J]. 山西师范大学学报,2002(16):56-60.[5] 宁静. 碱性纤维素酶产生菌得筛选及其产酶条件[J]. 科技通报，2000（16）：216－218.[6] 齐云, 袁月祥,陈飞,刘晓风等. 一组纤维素分解菌的分离、筛选及其产酶条件的研究[J]. 天然产物研究与开发，2003（15）：510－512.[7] 王淑军,扬从发,陈静. 用于降解秸秆的纤维素酶产生菌的筛选研究[J]. 粮食与饲料工业,2001(12):21-23.[8] 宋颖琦, 刘睿倩, 杨谦, 宋金柱等. 纤维素降解菌的筛选及其降解特性的研究[J]. 哈尔滨工业大学学报，2002（34）：197－200。
两株南海红树林内生真菌(SK7、SK11)次级代谢产物的研究的开题报告
两株南海红树林内生真菌(SK7、SK11)次级代谢产物的研
究的开题报告
一、研究背景
红树林是近海地区重要的生态系统，具有天然的防风固沙、保护海岸线、保护生物多样性等功能。
同时，红树林内生微生物是具有巨大研究价值的资源之一。
其中，
红树林内生真菌能够合成大量次级代谢产物，具有广泛的生物活性和药理作用。
因此，深入研究红树林内生真菌的次级代谢产物具有重要的理论和应用意义。
二、研究目的
本研究旨在从南海红树林内生真菌中筛选出具有生物活性和药理作用的次级代谢产物，并对其进行结构鉴定和生物活性测试，为寻找新型天然产物提供科学依据和理
论指导。
三、研究内容和方法
1、采集南海红树林样品，进行微生物分离和鉴定。
2、利用高效液相色谱、气相色谱及质谱等技术对红树林内生真菌的次级代谢产
物进行分离纯化和结构鉴定。
3、通过生物活性测试，对筛选出的次级代谢产物进行药理学评价。
四、预期成果
1、从南海红树林内生真菌中筛选出具有生物活性和药理作用的次级代谢产物。
2、对筛选出的次级代谢产物进行结构鉴定和生物活性测试，探讨其可能的药理
作用和应用前景。
3、为后续糖尿病、心血管等疾病药物开发提供基础数据和理论依据。
北仑河红树林内生放线菌分离、鉴定及活性研究
删 ｃ ｅ ｎ ｓ Ｓ Ａ６ Ｔ的 相似 度 为 ９ ８ ‘ ３ ６ ％， 菌株 ＵＭＢ Ｒ １ ０ ２ ８ 与Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍｙ ｃ ｅ ｓ ｐ ｒ ａ ｔ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ ｃ ｈ ２ ４ Ｔ的相 似度 为 ９ ８ ． ４ ９ ％，
这４ 株 内生 放 线菌 的相 似度 都 低于 ９ ８ ． ６ ％， 可 能为拟 诺 卡 氏菌属 和链 霉 菌属 的潜 在新 种 。有 ３ ８ 株 对 至少
共 分 离到 菌株 ２ ０ ０ 株， 其 中从 白骨 壤（ Ａ ｖ ｉ ｃ ｅ ｎ ｎ ｉ ａ ｍ ａ ｒ ｉ ｎ ａ ） 、 秋茄 （ Ｋ ａ ｎ ｄ ｅ ｌ ｉ ａ ｃ ａ ｎ ｄ ｅ １ ） 、 红海 榄（ Ｒ ｈ ｉ ｚ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ａ ｓ ｔ ｙ ｌ ｏ ｓ ａ ） 、
臻 ｍ ｕ
Ｏｎ ｌ ｉ ｍ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ：
…
Ｏ ｎ ｌ ｉ ｎ ｅ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ ： ｈ 笛 ｔ ｐ ： ｌ ｗ ｗ ｗ ｊ ａ ｂ ｉ ｏ ｔ ｅ ｃ ｈ ｏ ｒ ｇ ｇ ｙ ， ■ ｌ
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株 细 菌有抑 菌 作用 ， ３ ５ 株 对 至少 一株 白色念 珠 菌有抑 菌 作用 ， 阳性 率分 别达 到 ３ ５ ． ８ ％和 ３ ３ ． ０ ％。广 西 北
仑河 红 树植 物 内生 放 线菌 资源 丰 富 ， 抗 菌活 性较 高 ， 值得 深 入研 究 。研 究 结果 将促 进 我 国红 树林 植 物 资 源 的保护 与红 树植 物 内生放 线菌 药用 资源 的深入 开 发 。 关键 词 红树 植物 ， 内生放 线菌 ， 分离， 抗 菌活 性
Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ，Ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｂｉ ｏ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｅｎ ｄ ｏ ｐ ｈ ｙ ｔ ｉ ｃ Ａｃ ｔ ｉ ｎ ｏ ｍｙ ｃ ｅ ｔ ｅ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｍａ ｎ ｇ ｒ ｏ ｖ ｅ Ｐ ｌ ａ ｎ ｔ ｓ ｉ ｎ Ｂ ｅ ｉ ｌ ｕ ｎ Ｒｉ ｖ ｅ ｒ
五种南海红树林真菌次级代谢产物的研究的开题报告
五种南海红树林真菌次级代谢产物的研究的开题报告标题：南海红树林真菌次级代谢产物研究摘要：南海红树林是地球上独特的珍贵生态系统，其中各种微生物生物量大且物种丰富。
真菌是其中重要的组成部分，具有丰富多样的次级代谢产物。
本文采用分离纯化、质谱分析等方法，分别研究了南海红树林中5种常见真菌的次级代谢产物，并从中筛选出具有生物活性的化合物，对其进行初步的活性评价，为今后的深入研究提供参考。
内容：1. 研究背景和意义2. 研究对象与方法3. 研究进展与成果4. 展望与期望正文：一、研究背景和意义南海红树林是我国特有的生态系统，包括了红树林、海草床和珊瑚礁等生态群落，具有丰富的生物资源和生态学价值。
其中，各种微生物丰富多样，真菌作为其中的一个重要组成部分，具有很高的生物多样性和生物活性，被广泛应用于医药、农业、环境等领域。
红树林真菌的次级代谢产物具有很大的潜在应用价值，加之南海红树林真菌物种繁多、资源丰富，因此研究红树林真菌的次级代谢产物具有实际的应用价值和科学研究的意义。
二、研究对象与方法2.1 研究对象本研究选取了南海岛屿附近红树林中5种常见真菌进行研究，包括：Penicillium glabrum、Aspergillus flavus、Fusarium equiseti、Phoma sp. 和Trichoderma sp.。
2.2 研究方法采用分离纯化、质谱分析等方法，分别研究各菌株次级代谢产物，并从中筛选出具有生物活性的化合物。
实验流程如下：1. 真菌分离将采集的南海红树林样品进行分离纯化，得到单菌株。
2. 发酵条件的优化选用培养基、发酵条件进行优化，以提高次级代谢产物的产量。
3. 提取和分离次级代谢产物进行次级代谢产物的提取和分离，得到纯化的化合物。
4. 质谱分析采用质谱分析技术，结合NMR等分析方法对各纯化物进行鉴定。
5. 活性评价对筛选出的具有生物活性的化合物进行初步的活性评价，分析其对植物、微生物等的生物活性。
红树林来源真菌Xylaria sp. HNWSW-2异香豆素类次生代谢产物及其生物活性的研究
红树林来源真菌Xylaria sp. HNWSW-2异香豆素类次生代谢产物及其生物活性的研究作者：权云帆王佩王昊袁靖喆戴好富梅文莉来源：《热带作物学报》2019年第08期摘要为了研究红树林来源真菌Xylaria sp. HNWSW-2的次生代谢产物及其生物活性，综合利用多种色谱技术对该菌株发酵产物进行分离纯化，结合波谱学与理化常数分析进行化合物结构鉴定，分别采用液体浸泡法和Ellman比色法对化合物的全齿复活线虫致死活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性进行测试。
从Xylaria sp. HNWSW-2发酵产物乙酸乙酯萃取物中分离鉴定了7个异香豆素类化合物，分别为（S）-（+）-8-O-methylmellein （1），（3S，4S）-（+）-4-hydroxy-8-O- met hylmellein （2），（3S，4R）-（+）-4-hydroxy-8-O-methylmellein （3），（3S，4S）-（+）-4-hydroxymellein （4），（3S，4R）-（+）-4- hydroxym ell ein （5），（3R，4R）-（-）-4-hydroxy-5-methylmellein （6）和（3R，4S）-（+）-4-hydroxy-5-methylmellein （7）。
其中，化合物1具有较强全齿复活线虫致死活性，化合物1～3、6和7具有一定的乙酰胆碱酯酶抑制活性。
本研究首次发现化合物（S）-（+）-8 O- methy mellein具有较强的抗线虫活性，为相关杀线虫药物的研发提供理论依据。
关键词红树林;真菌;次生代谢产物;异香豆素;生物活性中图分类号 R284.1 文献标识码 AAbstract In order to study the secondary metabolites of the mangrove-derived fungus Xylaria sp. HNWSW-2 and the biological activities， seven isocoumarin derivatives were isolated by various column chromatographic techniques. The chemical structures were identified as （S）-（+）-8-O-methylmellein （1），（3S，4S）-（+）-4-hydroxy-8-O-methylmellein （2），（3S，4R）-（+）-4-hydroxy-8-O-methylmellein （3），（3S，4S）-（+）-4-hydroxymellein （4），（3S，4R）-（+）-4-hydroxymellein （5），（3R，4R）-（-）-4-hydroxy-5-methylmellein （6） and （3R，4S）-（+）-4-hydroxy-5-methylmellein （7） based on a combined analysis of spectral data and physicochemical properties. In addition， all compounds were tested for the nematicidal activity against Panagrellus redivivus and acetylcholinesterase （AChE） inhibitory activity by liquid immersion method and Ellman colorimetric method， respectively. Among them，compound 1 exhibited nematicidal activity against P. redivivus. Compounds 1–3， 6 and 7 showed AChE inhibitory activity. The potential nematicidal activity of compound 1 would provide scientific evidences for its development of nematicide.Keywords mangrove; fungus; secondary metabolites; isocoumarin derivatives; bioactive activitiesDOI 10.3969/j.issn.1000-2561.2019.08.023紅树林是分布于热带、亚热带海岸潮间带的植物群落[1]。
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第49卷第2期2010年3月中山大学学报(自然科学版)ACTA SCIENTIARU M NAT URALI U M UNI VERSIT AT IS SUNY ATSENIVol149No12M ar12010红树林内生真菌的分离及代谢产物生物活性的初步研究*邓祖军1,2,曹理想2,周世宁2(1.广东药学院基础学院,广东广州510006;2.中山大学生命科学学院//有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广东广州510275)摘要:从8种红树林植物中共分离出85株内生真菌,经鉴定发现其主要类群为无孢类群(M yceli a sterilia),短梗霉属Aureob a si d iu m spp.和盘长孢属Gloeos poriu m spp.,分别占菌株总数的5016%、1810%、1416%。
对这85株内生真菌的代谢产物生物活性研究发现:其菌丝和发酵液提取物对试验细菌表现出较好的抗性:对大肠杆菌有抗性的菌株比例分别为2214%、2112%、金黄色葡萄球菌为1219%、1411%,枯草芽胞杆菌为2010%、3615%;其发酵液提取物对酿酒酵母Saccha ro myces cerevisia e、白色念珠菌Ca ndi da a lbica ns、新月弯孢霉Curv ula r2 ia l una ta等试验真菌均有较好的抗性,抗性菌株占菌株总数的比例分别为2519%,2315%,2812%,而菌丝提取物均未表现出抗性;有8株(占菌株总数的910%)可产生抑制小麦发芽和芽生长的代谢物,具有除草剂活性;通过本实验建立的全细胞定向筛选模型发现:有14个菌株的代谢产物对耐药性大肠杆菌具有拮抗活性,占菌株总数的1615%。
以上结果表明:红树林内生真菌蕴含丰富的生物活性物质,在新型药物先导物和除草剂的开发方面都表现出潜在的应用前景。
关键词:红树林;内生真菌;代谢产物;生物活性中图分类号:Q93915文献标志码:A文章编号:0529-6579(2010)02-0100-05Isola tion and M etabolite B ioactivities ofM angrove Funga l EndophytesDE NG Zujun1,2,CA O Li x iang2,Z HOU Shining2(1.School of Basic Courses,Guang Dong Phar m aceu tica lUniversity,Guangz hou510006,Ch i n a;2.School of Lif e Sciences//State K ey Laboratory of Biocontro,lSun Yat2sen Un i v ersity,Guangzhou510275,Ch i n a)Abstr act:E i g hty2five endophytic f ungi stra i n s were i s olated f ro m e i g h t k i n ds of mangrove plants.The ma i n taxa are mycelia sterilia,A ure oba si d i u m spp.and Gloeos poriu m spp.,accounting f or1810%, 1416%of the tota l stra i n s respectively.The ir metabolite bioacti v iti e s were pri m arily studied.R esu lts in2 d icated that the extract of hypha and f er m entati o n liquor have good i n h i b ition activity to test bacteria,the acti v e strains proporti o n to E scheric hia c oli is2214%,2112%respecti v e l y,to Staphylococc us aure us is 1219%,1411%,to Ba cillus subtilus is2010%,3615%;f er m entation li q uor also has good i n h i b ition acti v ity to Candida a lbic ans,Sa cc ha ro myces c ere visia e,Curv ula ria luna ta,accounti n g f or2519%, 2315%,2812%of the total stra i n s respective ly,but their hypha extract has no inh i b ition activity to test f u ng.i M etabolites of eight stra i n s(occupyi n g910%of the tota l stra i n s)can i n h i b it ger m i n ation and bud gro wth ofwheat and have herb icida l acti v ity.M etabolites of f ourteen stra i n s(occupyi n g1615%of t h e to2 tal strains)can inhibit antibiotic2resistance E1c oli by whol e2ce ll targeted screen i n g mode.l These results sho wed mangrove f ungal endophytes wou l d be a rich resource pool f o r ne w dr ug and herbic i d e.K ey w ord s:mangrove plants;f unga l endophytes;metabolites;b i o activity*收稿日期:2009-03-17基金项目:国家高科技研究与发展(863)基金资助项目(2007A A09Z448,2008AA09Z402)作者简介:邓祖军(1979年生),男,讲师;通讯作者:周世宁;E2m ai:l sszs@l m ail1sysu1edu1cn第2期邓祖军等:红树林内生真菌的分离及代谢产物生物活性的初步研究内生真菌(endophyte)指生活于健康植物组织内部、不引发植物产生明显病症的一类真菌。
这类真菌在全部或部分生活周期生活在植物体内,与植物形成互惠共生的关系:一方面,植物为内生真菌提供光合产物和矿物质;另一方面,内生真菌产生的代谢物,或能刺激植物的生长发育,或能提高宿主植物对生物胁迫或非生物胁迫的抵抗能力[1-2]。
关于内生真菌代谢产物生物活性的研究已成为微生物资源开发的一个热点,目前已从植物内生真菌中发现多种具有抗肿瘤、抗病毒、降血糖、抗菌、杀虫、免疫抑制、酶抑制剂或激活剂等活性代谢产物,在医药业、农业的生物防治方面都显示出重要的应用价值[2-6]。
红树林作为自然生长在热带和亚热带海湾河口潮间带的一种特殊的木本植物群落,一直处于高盐、频繁的潮汐、强风、高温、强紫外辐射和缺氧污泥的特殊环境[7]。
这类植物不仅在自然生态平衡中起着特殊的作用,而且其化学成分也具有广泛的药理活性[8-9]。
由于红树林生境独特且具有广泛的药理活性,其内生菌可能蕴含着生物活性多样,结构新颖的代谢物,因而红树林内生真菌引起了人们的广泛关注。
近年来关于红树林内生真菌类群和代谢产物的抗肿瘤活性及抗氧化活性[10-11],抑制乙酰胆碱酯酶活性研究已报道[1,12-14],但对其抗菌活性,特别是对耐药菌的抑制活性和除草剂活性的研究很少有报道。
本研究对深圳福田红树林自然保护区的8种红树林植物的内生真菌进行了较为系统的分离和类群分析,并对分离到的内生真菌进行体外抗菌活性,除草剂活性的筛选,同时使用本实验建立的全细胞定向筛选模型对红树林内生真菌拮抗耐药菌的活性进行了研究,以期为保护红树林资源、开发新型药物先导化合物和除草剂奠定基础。
1材料与方法111材料11111植物来源桐花树Ae gice ra s cornic ula tum、海漆Excoec aria aga lloc ha、秋茄Kandelia c andel、木榄Br uguiera gymnorrhiz a、白骨壤Avicennia marian2 a、银叶树H eritie ra littora lis、老鼠簕Ac anthus ilici2 folius、无瓣海桑Sonnera ti a a cida采集于深圳福田红树林保护区。
红树植物采集叶、根皮、气根、茎皮。
样品采集后放于冰盒中保存,在4h内处理样品。
11112培养基¹PD A培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂15g,w=50%人工海水1000mL。
º玉米培养基(供发酵用):黄玉米粉50g,蔗糖10克,酵母粉110g,水1000mL。
»促孢培养基:K H2PO4110g,KNO3110g,MgS O417H2O 015g,KC l015g,淀粉012g,葡萄糖012g,蔗糖012g,琼脂15g,水1000mL。
11113试验菌及来源金黄色葡萄球菌Staphylo2 c occ us aure us N I C PBP26112,屎肠球菌Ente rococc us fa ecium N I CPBP32223,铜绿色假单胞菌P se udo2 mona s aeruginos a N I CPBP10104,白色念珠菌Can2 dida a lbic a ns ATCC10231,酿酒酵母Sa cc ha ro myces ce re visia e M I G2134,大肠杆菌E sc herichia c oli ATCC 8739,枯草芽孢杆菌Ba cillus subtilus M I G1122购自广东省微生物研究所或中国药品生物制品检定所。
E1c oli D H5A和卡那霉素抗性E1c oli M15(pREP4)均为中山大学生科院有害生物控制与资源利用国家重点实验室惠赠;pBR322质粒(Apr Tcr)购自华美公司,新月弯孢霉Curvularia luna t a为本实验室保存。
112方法11211内生真菌的分离参考文献[2]中方法对红树林内生真菌进行分离和纯化。