BcrAbl融合基因荧光定量RTPCR诊断试剂盒说明书
乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)操作说明
心数秒，按 43μl/管分装到反应管中。 2. 内参配制 将 n×3μl 内参（单通道仪器不加内参）及 n×50μl 核酸提取液 B 至于一新离心管中混匀备用（混合后避免反复冻融 使用，使用前混匀 5 秒钟） 。 3. 样本、对照品的处理 样本处理：取 100μl 待检血清样本（冻存血清使用前在室温融解，振荡混匀 10 秒钟）分别加入 100μl 核酸提取液 A， 振荡混匀 10 秒种，12000rpm 离心 10 分钟，弃上清；分别加入 50μl 核酸提取液 B 与内参的混合液至沉淀中（使用前一定 要充分混匀， 将颗粒和液体一起加入沉淀中， 其中颗粒量应在 15％以内） ， 振荡混匀 10 秒钟， 100℃保温 10 分钟， 12000rpm 离心 2 分钟。处理后的样品应在 1 小时内使用，或在-20℃～-80℃最长保存 1 个月（不宜反复冻融）。 血清对照品处理：按照血清标本处理方法处理试剂盒内阳性血清对照、弱阳性血清对照、阴性对照。（冻存血清对照品 使用前在室温融解，振荡混匀 10 秒钟）。 定量校准品处理：定量校准品无需处理，在样本加样前直接将定量校准品 1 号至 5 号振荡混匀 10 秒钟，低速离心数秒 后加样。 4. 样本加样 将样品处理上清液（冻存样品使用前室温充分融化，振荡混匀数秒，12,000rpm 离心 2 分钟）、阳性血清对照、弱阳性 血清对照、阴性对照以及定量校准品各 7μl 分别加入反应管中，低速离心数秒，取出置定量 PCR 仪上。 5. 仪器扩增程序 1、ABI7300/7500/Mx3000P/SLAN 双通道仪器：反应管先在 50℃反应 2 分钟，然后 94℃保温 5 分钟，再按 94℃10 秒→60℃45 秒 循环 40 次。60℃采集 FAM、JOE 荧光通道的信号。 2、LightCycler 480 仪器：反应管先在 50℃反应 2 分钟，然后 94℃保温 5 分钟，再按 94℃10 秒→60℃45 秒 循环 40 次。 60℃采集 FAM、RED 610 荧光通道的信号。 3、单通道仪器：反应管先在 50℃反应 2 分钟，然后 94℃保温 5 分钟，再按 94℃10 秒→60℃45 秒 循环 40 次，60℃采集 FAM 荧光通道信号。 6. 质量控制 试剂盒中提供定量校准品五个，阴性对照，阳性血清对照和弱阳性血清对照各一个。如试剂质量完好并操作正确，阳性 血清对照、弱阳性血清对照、定量校准品应表现为阳性结果，阴性对照应表现为阴性结果，阳性血清对照定量值为 5.0±2.5 ×10 IU/ml，弱阳性血清定量值为 5.0±2.5×10 IU/ml。如超过范围则实验无效，应检查仪器、试剂、扩增条件等方面的 误差。在每次检测中都应设置阴阳性对照品。 7. 结果判断 仪器程序运行完成后，按软件要求进行结果保存，输入HBV 定量校准品的量值，选择自动分析模式，软件将自动给出标 准曲线并计算各样本的HBV DNA 含量Q(IU/ml）。
双荧光素酶报告基因检测试剂盒说明
双荧光素酶报告基因检测试剂盒说明一、测定原理：双荧光素酶报告基因检测试剂盒的原理基于双荧光素酶系统。
该系统由两个互补性的荧光素酶组成：荧光素酶1（Fluc）和荧光素酶2（Rluc）。
荧光素酶1通过氧化反应使荧光素发出蓝色荧光，而荧光素酶2通过氧化反应使荧光素发出绿色荧光。
同时，两个荧光素酶都能够自催化反应，从而有效降低假阳性结果的发生。
二、实验步骤：1.取适量细胞或组织，使用含有测试物的培养基或缓冲液进行处理。
2.将细胞或组织溶解，并离心收集上清液。
3.加入测试试剂盒提供的荧光素底物混合液，共孵育一段时间。
4.使用荧光分析仪测量反应混合物中蓝色和绿色荧光的强度。
5.根据荧光信号的强度计算得出相应的基因表达水平。
三、注意事项：1.本试剂盒需要严格按照说明书操作，避免操作失误导致结果错误。
2.在每一步操作前，请先将试剂保持在合适的温度下，以确保试剂的活性。
3.细胞或组织样本的采集、溶解和上清液的收集需要严格按照操作规范进行，避免样本的损失和污染。
4.在孵育过程中，避免剧烈振荡或震动，以免影响荧光素酶反应的进行。
5.在测量荧光强度时，确保荧光分析仪的参数设置正确，并注意避光操作，以免干扰荧光信号的测量。
四、结果解读：根据测量得到的蓝色和绿色荧光强度，可以计算得到相应的基因表达水平。
一般来说，荧光素酶1的荧光强度与被检测基因的表达水平成正比，而荧光素酶2的荧光强度则用作内参对照。
通过计算荧光素酶1与荧光素酶2的比值，可以更准确地反映被检测基因的表达水平。
结果解读时需要注意的是，双荧光素酶报告基因检测试剂盒只能提供相对量化的结果，无法给出绝对的基因表达水平。
因此，在结果解读时需要结合其他实验数据和相关文献进行综合分析。
总结：双荧光素酶报告基因检测试剂盒是一种常用的基因表达水平检测工具，该试剂盒通过双荧光素酶系统实现对基因表达水平的测定。
在使用时需严格按照说明书操作，注意操作规范和注意事项。
结果解读时应综合考虑其他实验数据和相关文献，以得到准确可靠的结论。
BCR-ABL概述
继续使用相同的TKI药物 更换可替代的TKI药物 继续使用相同的TKI药物 继续使用相同的TKI药物或更换可替代的TKI药物
加大伊马替尼的使用量，最大可至800mg。（在没有可替代的TKI药物时） 更换可替代的TKI药物 更换可替代的TKI药物
加大伊马替尼的使用量，最大可至800mg。（在没有可替代的TKI药物时） 继续使用相同的TKI药物 更换可替代的TKI药物 更换可替代的TKI药物
ABL激酶区突变种类
伊马替尼耐药机制中，主要是BCR-ABL点突变，超过 90%，可分为4 类 ：
在 ATP 结合位点形成突变( P-loop) 、 发生于激活环，阻止形成伊马替尼结合所需的构象激酶 发生于催化区 直接损害伊马替尼结合
NCCN推荐BCR-ABL激酶突变分析的检测规范
2%-5%的儿童 ALL 患者中。
BCR-ABL
• 根据BCR基因的断裂点不同，可分为 m-BCR（p190），M-BCR(p210)，uBCR(p230)三种。
在30-50%的成人ph+的ALL，20-30% 儿童ph+的ALL病例中BCR/ABL融合基 因是p210型的。 60%的ph+的ALL患者的BCR-ABL融合 基因是p190型的 。 其中P230融合基因非常罕见。 p190刺激细胞增殖的能力比p210要 强，病情发展快、恶性程度更高，
e1a3
测序结果：
采用VCP化疗方案联合伊马替尼治 疗1个月后，BCR-ABL融合基因转阴， 进一步证实e1a3对TKI敏感。
e14a3和e19a2
伴不典型 BCR-ABL 融合基因 的CML发病率极低，酪氨酸 及酶抑制剂或 HSCT 都 可 以 取得疗效。
实例分析：e13a3
白血病患者融合基因检测
ｌ２ ２ 密 度 梯 度 法 提 取 单 个 核 细 胞 抽 取 骨 髓 液 （ 周 血 ） ＿． 外 ３
～
５ｎｌ肝 素 抗 凝 ， 慢 注 入 ４ ｍｌ 巴 细 胞 分 离 液 （ ０ ／ ｌ ， 缓 淋 ２１０ｒ
液科 住 院或 门诊 随访 的 ５ Ｏ例 白血 病 患 者 ， 中 Ｃ 者 ３ 其 ＭＩ 患 Ｏ 例， ｌ例， １ 男 ６ 女 ４例 ， 位 年 龄 ５ 中 ４岁 （ ７ ８ ） ； 诊 时 病 ３～ ０岁 就 程 Ｏ ７年 ， 均 病 程 ２年 ； ～ 平 治疗 方 案包 括 羟基 脲 、 扰 素 ａ或 干 甲磺 酸 一 伊 马 替 尼 （ 列 卫 ） 格 。ＡＰ Ｌ患 者 １ ， ８例 ， ７ ５例 男 女
例， 中位 年 龄 ４ ７岁 （ ４ ６ ） ； 为 初 发 患 者 ， 诊 时 病 程 ＜ ２～ ４岁 均 就
ａ ｎ ２ ｎ 。取 中 间 细 胞 层 ， Ｂ ｒｉ ， ０ ｉ） ａ ｒ Ｐ Ｓ洗 涤 （ ５ ０ｒ ｍｉ ， ｍｉ） １ ０ ／ ｎ ５ ｎ 。 弃 上 清 ， 入 蒸 馏 水 ２ ， 坏 红 细 胞 １ ｎ 加 入 ｌ８ Ｎ Ｃ 加 破 ｍｌ ， ｍｉ ＿ ａ １ ２ｍｌ１ ０ ｍｉ ， ｒｉ） 弃 上 清 液 ， （ ０ｒ ｎ ５ ｎｎ ， ５ ／ 留取 １ 。 个 核 细 胞 。 Ｏ单 １ ２ ３ ｍＲ ．． ＮＡ 提 取 用 Ｔ ｉ ｌ 上 海 生 物 工 程 有 限 公 司 ） ｒ ｏ（ ｚ 提 取 骨 髓 单 个 核 细 胞 总 Ｒ Ａ， 紫 外 分 光 光 度 计 测 定 吸 光 度 Ｎ 用
合基 因 的 准确 性 高 ， 辅 助 临 床 诊 断 和 白血 病 患 者 药 物 疗 效 判 定 方 面都 有较 大 的应 用价 值 。 在
abclonal的pcr逆转录的说明书
abclonal的pcr逆转录的说明书Abclonal 是一家提供各种生命科学试剂和服务的公司，其中包括逆转录PCR（RT-PCR）试剂。
RT-PCR 是一种将RNA转化为DNA的过程，常用于检测和量化特定RNA的表达。
以下是一份Abclonal RT-PCR 试剂的使用说明书的大致内容。
一、实验目的本实验的目的是使用 Abclonal 的 RT-PCR 试剂，逆转录特定 RNA，以便进行后续的定量或定性分析。
二、实验原理逆转录PCR (RT-PCR) 是一种用于检测和量化特定RNA分子的技术。
首先，使用逆转录酶将RNA分子转化为cDNA。
然后，使用PCR技术扩增cDNA，以便进行后续分析。
Abclonal 的RT-PCR 试剂盒包含所有必要的酶和引物，以方便用户进行此实验。
三、所需材料1. Abclonal RT-PCR 试剂盒2. 逆转录酶 (如 M-MLV 或 SuperScript III)3. 随机引物或特异性引物4. RNA样品5. 热稳定DNA聚合酶 (如 Taq DNA 聚合酶)6. dNTPs (脱氧核苷酸)7. 缓冲液和稳定剂8. 离心管和移液器9. 离心机和PCR仪（如果需要）四、操作步骤1. 准备RNA样品：将RNA样品按照标准方法进行分离和纯化。
确保RNA 的质量和浓度适合后续的逆转录和PCR反应。
2. 逆转录：将RNA、缓冲液、dNTPs、随机引物和逆转录酶混合在一个离心管中。
按照试剂盒说明书的指示进行逆转录反应。
3. PCR扩增：将逆转录产物、PCR缓冲液、dNTPs、特异性引物和热稳定DNA聚合酶混合在一个离心管中。
按照试剂盒说明书的指示进行PCR反应。
4. 分析结果：对PCR产物进行电泳、荧光检测或其它适当的分析方法，以确定目标RNA的表达水平。
五、注意事项1. 请遵循所有试剂盒和酶的操作说明，以确保实验的准确性和安全性。
2. 在处理RNA时，要特别注意防止其降解和污染。
人类KRAS7种突变检测试剂盒(荧光PCR法)说明书-P4.2-12T-2015.10.09
人类KRAS基因7种突变检测试剂盒（荧光PCR法）说明书【产品名称】通用名称：人类KRAS基因7种突变检测试剂盒（荧光PCR法）英文名称：Human KRAS Gene 7 Mutations Fluorescence Polymerase Chain Reaction (PCR) Diagnostic Kit【包装规格】12测试/盒【预期用途】KRAS基因是人体肿瘤中常见的致癌基因。
该基因的突变常见于多种恶性肿瘤，在肺癌患者中的突变率为15～30%，在结直肠癌患者中的突变率为20～50%。
导致KRAS处于激活状态的突变主要位于第12和13密码子上。
KRAS 基因突变一般会使肺癌患者对EGFR酪氨酸激酶抑制剂产生耐药，使结直肠癌患者对抗EGFR抗体类药物产生耐药。
但是，2010年10月的最新研究发现第13密码子上的Gly13Asp（G13D）突变亦对抗EGFR抗体类药物有治疗反应性（参见：De Roock. W. JAMA. 2010;304(16):1812-1820）。
因此，KRAS基因突变检测能提高肿瘤临床治疗的针对性，降低治疗费用，节省宝贵的治疗时间。
大部分肿瘤的突变都是体细胞突变，突变细胞往往与野生型细胞混杂在一起，因此所提取的DNA常带有大量野生型DNA，所以对体细胞突变检测需要较高的特异性，而目前广泛使用的直接测序法检测能力有限，不能完全满足临床需要。
本试剂盒用于检测人类KRAS基因的12和13密码子上7种热点体细胞突变（见表1），试剂盒以DNA为检测样本，提供突变状态的定性评估。
辅助临床医生筛选出可受益于肿瘤靶向药物的大肠癌等癌症患者。
该产品用于组织中提取DNA的KRAS基因7种突变的检测，为临床医生对大肠癌或肺癌患者选择肿瘤靶向药物治疗提供参考。
表1 人类KRAS基因的12和13密码子上7种热点体细胞突变突变名称氨基酸变化碱基变化Cosmic ID 公司命名Gly12Asp 甘氨酸到天门冬氨酸GGT>GAT 521 12-2-A Gly12Ala 甘氨酸到丙氨酸GGT>GCT 522 12-2-C Gly12Val 甘氨酸到缬氨酸GGT>GTT 520 12-2-T Gly12Ser 甘氨酸到丝氨酸GGT>AGT 517 12-1-A Gly12Arg 甘氨酸到精氨酸GGT>CGT 518 12-1-C Gly12Cys 甘氨酸到胱氨酸GGT>TGT 516 12-1-T Gly13Asp 甘氨酸到天门冬氨酸GGC>GAC 532 13-2-A 【检测原理】本试剂盒基于实时PCR平台结合了特异引物和双环探针两种技术，检测DNA样品中含有的突变基因。
荧光定量试剂盒
北京经济技术开发区宏达北路10号万源商务中心5001室 邮编：100176 北京经济技术开发区宏达北路10号万源商务中心5001室 邮编：100176电话：4006501950 传真：************-816电话：4006501950 传真：************-816AML1-ETO 荧光定量试剂盒使用说明书【产品名称】中文名：AML1-ETO 荧光定量试剂盒英文名：Leukemia related AML1-ETO fusion gene Fluorescent Quantitative PCR DetectionKit （FQ-PCR)【包装规格】 20人份/盒【用 途】本试剂盒适用于白血病AML1-ETO 融合基因定量检测，仅供科研使用，辅助临床诊断及治疗。
【储存条件】储存温度：-20℃。
避光保存。
【有 效 期】有效期：见试剂盒标签。
【原 理】本试剂盒使用荧光标记探针杂交方法，采用核酸扩增技术，对白血病BCR-ABL-190融合基因进行RNA 定量检测。
【试剂盒组分】1.2.未提供组分：淋巴细胞分离液、RPMI1640、生理盐水、离心管、PCR 反应管等耗材试剂。
3.本试剂盒中的参比品、阳性对照品和临界对照品均为克隆质粒DNA 。
4.不同批号试剂盒中的各组分不要交叉使用，以影响结果。
【适用仪器】ABI PRISM 系列Real Time PCR 仪； BIO-RAD iCycler Real Time PCR 仪； ROCHE LightCycler Real Time PCR 仪。
【样本要求】1. 本试剂盒适用于骨髓标本检测。
2. 骨髓2~3ml ，建议采用枸橼酸钠或EDTA 抗凝，不能使用肝素抗凝。
3. 建议采用进口无菌离心管及移液吸头，使用无RNase 的耗材和试剂。
北京经济技术开发区宏达北路10号万源商务中心5001室 邮编：100176 北京经济技术开发区宏达北路10号万源商务中心5001室 邮编：100176电话：4006501950 传真：************-816电话：4006501950 传真：************-816【检验方法】1．骨髓单个核细胞分离注意事项：a. 淋巴细胞分离液应置于4℃保存，使用前应从冰箱拿出待恢复至室温后使用。
Realtime PCR荧光定量试剂盒(SYBR Green I)说明书
北京索莱宝科技有限公司
第1页共1页Realtime PCR 荧光定量试剂盒(SYBR Green I)说明书
货号：SR1110
规格：50T（1.25ml）/200T（5ml）
保存：本产品-20℃保存有效期至少一年，4℃保存有效期至少1星期。
避免反复冻融，用量少时可酌情分装。
使用方法：
根据用量取PCR 反应体系1/2体积该预混液，加入相同体积含引物和模板的水溶液混匀即可。
总体积即为PCR 总体系，引物和模板用量可根据此体系计算。
产品简介：
本产品为应用SYBR Green Ⅰ染料进行Realtime PCR 扩增反应的高效预混系统。
该预混系统提供了经过优化的缓冲液、dNTP、HotStart Taq DNA 聚合酶、SYBR Green I 染料和MgCl 2，使用者只需加入适量的引物、模
板和水，即可进行荧光定量PCR 检测。
该预混系统中的优化缓冲液和HotStart Taq DNA 聚合酶等可大大提高PCR 产物的灵敏度和特异性。
Realtime PCR MasterMix 采用高效HotStart Taq DNA 聚合酶，使PCR 反应具有更高灵敏度和特异性。
产品特性：
高特异性：本产品采用热启动DNA 聚合酶，90℃以上2min 后具有扩增活性，可大大提高PCR 产物的特异性。
灵敏度：本产品包含的优化的缓冲液可检测低拷贝数的模板，且重复性好。
高适用性：本产品可适用于任意荧光定量PCR 仪。
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PML/RARα融合基因荧光RT-PCR诊断试剂盒
一、试剂盒采用荧光定量RT-PCR方法，快速、特异、灵敏、定量地检测临床白血病标本中PML/RARα融合基因的情况, 约
有90%的急性早幼粒细胞白血病患者骨髓细胞和血细胞中会出现PML/RARα融合基因。因此检测PML/RARα融合基因已成
为诊断急性早幼粒细胞白血病以及治疗后追踪残余白血病细胞的主要依据。
二、试剂盒组成(20人份)
RNA提取液 （20ml /瓶） 1瓶 Taq酶 （40μl /管） 1管
反应液I （165μl /管） 1管 定量标准品 （50μl /管） 8管
反应液II （165μl /管） 1管 DEPC H2O （500μl /管） 1管
反应液Ⅲ （350μl /管） 1管 去离子水 （1100μl /管） 1管
逆转录酶 （25μl /管） 1管
三、检测步骤
1．标本采集
抽取外周血5ml抗凝后密封送检，或3ml新鲜骨髓标本密封送检。
2．标本处理
将5ml抗凝外周血或3ml骨髓加入等体积生理盐水稀释，取10ml离心管，先加入2ml淋巴细胞分离液，再取稀释好
的标本5ml沿管壁缓慢加入，4℃静置5分钟后，2,000rpm离心15分钟，小心吸取白细胞层于1.5ml离心管中，离心留
沉淀，用生理盐水洗沉淀一次，沉淀加入0.5ml RNA提取液，充分混匀。室温静置5分钟，加入0.2ml氯仿，盖上管盖，
用力振摇15秒，4℃静置2-3分钟，4℃ 12,000rpm离心15分钟， 离心后反应管分三层，底层为微黄色的氯仿层，中间
层及无色水相上层，水相上层的体积一般为提取液体积的60%。小心将上层水相转移至灭菌的离心管中，加等体积异丙醇
4℃静置10分钟，然后4℃，12,000rpm离心10分钟，离心前通常看不见RNA沉淀，离心后可见胶状沉淀。去上清，加入
400μl 75%的乙醇洗涤RNA沉淀，混匀，4℃ 7,000 rpm离心5分钟，小心吸去大部分乙醇。将沉淀在室温空气中干燥10
分钟。(注： 75% 乙醇配制时须用试剂盒中提供的DEPC H2O）。用40μl DEPC H2O溶解沉淀，吸出部分溶液，测A260-A280
处的吸光值，并计算RNA含量。
3．逆转录反应：取灭菌0.5ml离心管, 按以下要求配备逆转录体系
反应液I 逆转录酶 模板（RNA） DEPC H2O 总反应体积
6.5μl 1μl 2μg（或5μl） 7.5μl 20μl
反应条件：37℃水浴60分钟。
4．第一步PCR扩增：取灭菌0.2ml PCR反应管, 按以下要求配备PCR体系
反应液II Taq酶 模板（cDNA） 去离子水 总反应体积
6.5μl 0.5μl 5μl 13μl 25μl
反应条件：94℃→4分钟预变性, 然后按94℃ 30秒→54℃ 30秒→72℃ 60秒, 共做20个循环。
5．第二步PCR扩增：取灭菌0.2ml PCR反应管, 按以下要求配备实时定量PCR体系
反应液Ⅲ Taq酶 模板（PCR产物） 去离子水 总反应体积
14μl 1μl 5μl 30μl 50μl
注：每次实验取105、10６、10７、10８一组阳性标准品瞬时离心上机即可
反应条件：93℃→2分钟预变性, 然后按93℃ 45秒→55℃ 60秒, 共做40个循环。
6．结果分析条件的设定与判定
反应结束后分析实验数据，仪器自动得出未知标本数值Ｍ。2μg RNA标本的PML/RARα融合基因cDNA含量Ｂ＝４×
Ｍ，最终计算结果按下列公式换算：A (拷贝数/μg总RNA) = B (拷贝数/μl cDNA) ÷ 样本RNA的OD260值×5/6。
【适用仪器】 ABI Prism 7000，ABI 5700，DA7600
【 贮 藏 】 本试剂盒保存于－20℃，试剂应避免反复冻融
【 有效期 】 6个月