钾测定试剂盒(丙酮酸激酶法)产品技术要求haomai
钾测定试剂盒（丙酮酸激酶法）
适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清或血浆中钾(K)的含量。
1.1 包装规格
试剂盒是由试剂R1和试剂R2组成的液体双试剂。规格见表1。
表1 规格
2.1 外观和性状
试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。试剂1为无色液体，试剂2为无色至淡黄色液体。校准品为无色液体。液体试剂不得有沉淀和絮状物。
2.2 净含量
用通用量具测量，液体试剂的净含量应不少于标示值。
2.3 试剂空白
2.3.1 试剂空白吸光度
在340nm处测定试剂空白吸光度，应≥1.2A。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率
试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.2A。
2.4 分析灵敏度
测试2.7mmol/L的被测物时，吸光度差值变化△A为（0.01～0.2）。
2.5 准确性
用参考物质（GBW09152）对试剂盒进行测试，相对偏差不超过±15%。
2.6 重复性
用不同浓度的两个样本进行检测，各重复检测10次，其批内变异系数（CV）应不超过5％。
2.7 线性
2.7.1在(2，10)mmol/L范围内，线性相关系数r应不低于0.990；
2.7.2 在(2，5.4]mmol/L范围内绝对偏差不超过±1.5mmol/L；(5.4，10)mmol/L 范围内相对偏差不超过±15%。
2.8 批间差
用三个批号的试剂盒测定同一份样本，试剂盒批间相对极差应不超过10%。
2.9 稳定性
该产品在2℃～8℃条件下贮存有效期为12个月，取到效期后的产品进行检测，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7的要求。
唾液酸酶法与常规镜检法的临床应用比较
唾液酸酶法与常规镜检法的临床应用比较 摘要：目的通过唾液酸酶检测法和白带常规镜检法的结果进行对比分析，探讨唾液酸酶法在细菌性阴道病（BV）中的诊断价值，为临床快速诊断BV提供可靠的方法。方法将480例患者按年龄分为四组（50岁），同时应用唾液酸酶法和常规镜检法检测，对比分析结果。结果唾液酸酶法的阳性率为17.91%，白带常规镜检法的阳性率8.75%，两种方法检测细菌性阴道病的阳性率的比较，差异有统计学意义（P50岁组的阳性率为最高（25.68%）。结论唾液酸酶法操作简便、快速，提高了阳性检出率和准确度，适合临床推广。 关键词：细菌性阴道病；阴道分泌物；白带常规镜检法；唾液酸酶法 Abstract：Objective To investigate the significance of sialidase test in diagnosis of bacterial vaginosis by comparing sialidase test with conventional microscopy，and provide rapid and reliable methods for diagnosis BV in clinic. Methods Sialidase test and conventional microscopy were used to determine 480 samples （50 years old group） and the results were analyzed comparatively. Results The positive rate of sialidase test for diagnosis BV was
丙酮酸和还原性氢进入线粒体
（2008年广东生物竞赛试题）每1分子葡萄糖在需氧呼吸第一阶段将分解产生2分子丙酮酸和2分子NADH。已知在线粒体中，每1分子NADH经电子传递将生成3分子ATP。但上述过程产生的NADH最终经线粒体中的电子传递只产生4分子ATP。损失ATP的原因是（ C ）。 A．该过程产生的NADH与线粒体中的NADH不是相同的物质 B．线粒体中的NADH不是全部都参与电子传递 C．细胞溶胶中的NADH跨线粒体膜运输消耗能量 D．细胞溶胶中的NADH不能与O2结合产生H2O 问题：NADH到底是怎样进入线粒体的，同时也带来一个问题，丙酮酸是怎样进入线粒体的。 分析： 1．NADH进入线粒体的途径 NADH是还原型辅酶，是一种特殊的核苷酸。NADH不能直接进入，所以它必须将氢转移给能穿过线粒体膜的受氢体，通过受氢体的转运而把氢从胞质带入线粒体内，这种作用称为穿梭作用。 目前了解比较多的是苹果酸穿梭作用和3-磷酸甘油穿梭作用。这两种作用使胞质中的NADH氧化为NAD+，使其浓度恢复到反应前的水平。氧化脱下的氢以穿梭分子的一部分被带到线粒体内，并在呼吸链中氧化生成水且伴有氧化磷酸反应产生能量物质ATP。 （1）苹果酸穿梭作用
当胞液中NADH浓度升高时，由苹果酸脱氢酶催化，使草酰乙酸还原成苹果酸。苹果酸在线粒体内膜转位酶的催化下穿过线粒体内膜，进入线粒体，在线粒体内，通过苹果酸脱氢酶作用，脱氢生成草酰乙酸，生成NADH+H+。生成的NADH+H+通过呼吸电子链传递进行氧化磷酸化，生成2.5分子ATP。 草酰乙酸不能直接透过线粒体内膜返回胞液，其在天冬氨酸转氨酶作用下从谷氨酸接受氨基生成天冬氨酸，谷氨酸转出氨基后生成α-酮戊二酸，α-酮戊二酸与天冬氨酸能在膜上转位酶的作用下，穿过线粒体内膜进入胞液，在胞液中的天冬氨酸与α-酮戊二酸在天冬氨酸转氨酶的作用下，又重新合成草酰乙酸和谷氨酸，草酰乙酸又可重新参与苹果酸穿梭作用。 （2）3-磷酸甘油穿梭作用
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)试剂盒说明书
货号：MS2203 规格：100管/96样磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC)试剂盒说明书 微量法 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： PEPC（EC 4.1.1.31）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是催化磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶，对三羧酸循环的运转起重要调节作用。 测定原理： 生成草酰乙酸和HPO42-，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰PEPC催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO 2 乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，在340nm测定NADH减少速率，计算PEPC活性。 自备实验用品及仪器： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 提取液：100mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体15 mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存； 试剂三：原液10μL×1支，4℃保存； 试剂三：稀释液5mL×1瓶，4℃保存； 样本的前处理： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 测定步骤和加样表： 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2、样本测定 （1）在试剂二瓶中加入10mL试剂一和7mL蒸馏水充分混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 （2）试剂三工作液的配制：将试剂三原液：试剂三稀释液=1μL:329μL稀释，混匀，用多少配多少。 （3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、20μL试剂三、170μL试剂二，混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值A1和5min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。 PEPC活性计算： a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 第1页，共2页
单项选择题
单项选择题 1. 由己糖激酶催化的反应的逆反应所需要的酶是 A．果糖二磷酸酶 B．葡萄糖-6-磷酸酶C．磷酸果糖激酶 D．磷酸化酶 E. 葡萄糖激酶 2. 正常情况下，肝获得能量的主要途径 A．葡萄糖进行糖酵解氧化B．脂肪酸氧化C．葡萄糖的有氧氧化D．磷酸戊糖途径 E．以上都是。 3．糖的有氧氧化的最终产物是 A．CO2+H2O+ATP B．乳酸C．丙酮酸 D．乙酰CoA E.ATP 4．需要引物分子参与生物合成反应的有 A.酮体生成B．脂肪合成 C．糖异生合成葡萄糖 D．糖原合成 E．以上都是 5．不能经糖异生合成葡萄糖的物质是 A．α-磷酸甘油B．丙酮酸C．乳酸D．乙酰CoA E．生糖氨基酸6．丙酮酸脱氢酶存在于下列那种途径中 A．磷酸戊糖途径 B．糖异生C．糖的有氧氧化 D．糖原合成与分解 E．糖酵解 7．丙酮酸羧化酶是那一个途径的关键酶 A.糖异生 B．磷酸戊糖途径C．胆固醇合成 D．血红素合成 E．脂肪酸合成 8．糖代谢中间产物中含有高能磷酸键的是 A．6-磷酸葡萄B．6-磷酸果 C．1，6-二磷酸果糖 D．3-磷酸甘油醛E．1．3-二磷酸甘油酸 9. 丙酮酸氧化脱羧生成乙酰辅酶A与许多维生素有关，但除外 A．B 1 B．B2 C．B6 D．PP E．泛酸 10．在糖原合成中作为葡萄糖载体的是 A．ADP B．GDP C．CDP D．TDP E．UDP 11．下列哪个激素可使血糖浓度下降 A．肾上腺素B．胰高血糖素C．生长素 D．糖皮质激素E．胰岛素
12．下列哪一个酶与丙酮酸生成糖无关 A．果糖二磷酸酶B．丙酮酸激酶C．丙酮酸羧化酶 D．醛缩酶E．磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 13．肌糖原分解不能直接补充血糖的原因是 A．肌肉组织是贮存葡萄糖的器官B．肌肉组织缺乏葡萄糖酶 C．肌肉组织缺乏葡萄糖-6-磷酸酶D．肌肉组织缺乏磷酸酶 E．肌糖原分解的产物是乳酸 14．葡萄糖与甘油之间的代谢中间产物是 A．丙酮酸 B.3-磷酸甘油酸C．磷酸二羟丙酮 D．磷酸烯醇式丙酮酸E．乳酸 15．三羧酸循环和有关的呼吸链反应中能产生ATP最多的步骤是 A．柠檬酸→异柠檬酸B．异柠檬酸→α-酮戊二酸 C．α-酮戊二酸→琥珀酸D．琥珀酸→苹果酸 E．苹果酸→草酰乙酸 16．丙酮酸羧化酶的活性可被下列哪种物质激活 A．脂肪酰辅酶A B．磷酸二羟丙酮C．异柠檬酸 D．乙酰辅酶A E．柠檬酸 17．下列化合物异生成葡萄糖时净消耗ATP最多的是 A．2分子甘油B．2分子乳酸C．2分子草酰乙酸 D．2分子琥珀酸E．2分子α-酮戊二酸 18．位于糖酵解、糖异生、磷酸戊糖途径、糖原合成和糖原分解各条代谢途径交汇点上的化合物是 A．1-磷酸葡萄糖B．6-磷酸葡萄糖C．1，6-二磷酸果糖 D．3-磷酸甘油酸E．6-磷酸果糖 19．动物饥饿后摄食，其肝细胞主要糖代谢途径 A.糖异生 B．糖有氧氧化C．糖酵解 D．糖原分解 E．磷酸戊糖途径 20．下列各中间产物中，那一个是磷酸戊糖途径所特有的 A．丙酮酸 B．3-磷酸甘油醛C．6-磷酸果糖 D．1，3-二磷酸甘油酸 E．6-磷酸葡萄糖酸 21．三碳糖、六碳糖与七碳糖之间相互转变的糖代谢途径是
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)试剂盒说明书
货号：MS3500 规格：100管/96样磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK)试剂盒说明书 微量法 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： PEPCK（EC 4.1.1.32）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，催化草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸，是调节糖异生途径的关键酶。 测定原理： ，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO 2 NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。 自备实验用品及仪器： 分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体18 mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体16.5uL×1支，4℃保存； 试剂三：粉剂×1支， -20℃保存； 试剂四：粉剂×1支，-20℃保存； 样本的前处理： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 测定步骤： 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2、工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 3、试剂四的配制：临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 4、将工作液和试剂四置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。 5、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂四和180μL工作液，立即混匀，记录340nm处初始吸光值A1和 1min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。 注意：在该试剂盒中，若ΔA大于0.1，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA小于0.1可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。 第1页，共2页
唾液酸(SA)测定试剂盒(神经氨酸苷酶法)产品技术要求百奥泰康
唾液酸（SA）测定试剂盒（神经氨酸苷酶法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清或血浆中唾液酸的浓度。 1.1 产品规格
1.2 组成成分 1.2.1 试剂组成 试剂1： Tris缓冲液 0.1 mol/L PH=7.0 神经氨酸苷酶 >0.2U/mL 乳酸脱氢酶 >2U/mL 试剂2： Tris缓冲液 0.1 mol/L PH=9.0 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH） >0.13mmol/L N-乙酰神经氨酸醛缩酶 >2U/mL。 1.2.2 校准品的组成 单水平的液体校准品，在水基质中添加唾液酸（60mg/dL），稳定剂<0.1%； 定值范围：(50-70)mg/dL。 1.2.3质控品的组成 两个水平的液体质控品，在牛血清（30g/L）中添加唾液酸（60mg/dL和150mg/dL），稳定剂<0.1%； 定值范围：（50-70）mg/dL、（120-180）mg/dL。 2.1 外观 液体双试剂：试剂1:无色至淡黄色液体，试剂2：无色至淡黄色液体。 校准品：无色至淡黄色澄清液体。
质控品：无色至淡黄色澄清液体。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 空白吸光度 在规定参数下，试剂空白吸光度≥0.8。 2.4 分析灵敏度 浓度为60mg/dL时，吸光度变化应≥0.005.。 2.5 线性 在(0，200]mg/dL线性范围内，线性相关系数r ≥0.996。在(0，50]mg/dL范围内绝对偏差不超过5mg/dL，在（50，200]mg/dL范围内的相对偏差不超过±10%。 2.6 精密度 变异系数CV应≤8% 2.7 批间差 不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。 2.8准确度 回收试验：回收率应在90%-110%范围内。 2.9 质控品赋值有效性 测定值在质控靶值范围内。 2.10校准品溯源性要求 根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供唾液酸校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。校准品溯源至唾液酸纯品（Sigma）。
生物化学问答题
1、蛋白质变性后，其性质有哪些变化？ 答：蛋白质变性的本质是特定空间结构被破坏。变性后其性质的变化为：生物活性丧失，其次是理化性质改变，如溶解度降低，结晶能力丧失，易被蛋白酶消化水解。 2、参与维持蛋白质空间结构的历有哪些？ 答：氢键二硫键疏水作用范德华力盐键配位键 3、什么是蛋白质的变性作用？引起蛋白质变性的因素有哪些？ 答：蛋白质分子在变性因素的作用下，失去生物活性的现象为蛋白质变性作用。 物理因素：热、紫外线照射、X—射线照射、超声波、高压、震荡、搅拌等 化学因素：强酸、强碱、重金属、三氯乙酸、有机溶剂等。 4、什么是蛋白质的构像？构像与构型有何区别？ 答：在分子中由于共价键的旋转所表现出的原子或基团的不同空间排布。构象的改变不涉及共价键的断裂和重新组成，也没有光学活性的变化，构象形式有无数种。在立体异构体中的原子或取代基团的空间排列关系。构型有两种，即L—构型和D—构型。 构型改变要有共价键的断裂和重新组成，从而导致光学活性的变化。 5、乙酰辅酶A可进入哪些代谢途径？请列出。 答：①进入三羧酸循环氧化分解为二氧化碳和水，产生大量能量②以乙酰辅酶A为原料合成脂肪酸，进一步合成脂肪和磷脂等③以乙酰辅酶A为原料合成酮体作为肝输出能源方式 ④以乙酰辅酶A为原料合成胆固醇。 6、为什么摄入糖过多容易长胖？ 答：①糖类在体内经水解产生单糖，像葡萄糖可通过有氧氧化生成乙酰辅酶A，作为脂肪酸合成原料合成脂肪酸，因此脂肪是糖储存形式之一。②糖代谢过程中产生的磷酸二羟丙酮可转变为磷酸甘油，也可作为脂肪合成甘油的来源。 7、在糖代谢过程中生成的丙酮酸可进入哪些代谢途径？ 答：（1）在供氧不足时，丙酮酸在乳酸脱氢酶的催化下，有还原型的辅酶Ⅰ供氢，还原成乳酸。（2）在供氧充足时，丙酮酸进入线粒体在丙酮酸脱氢酶系的作用下，氧化脱羧生成乙酰辅酶A, 乙酰辅酶A进入三羧酸循环被氧化为二氧化碳和水及ATP。（3）丙酮酸进入线粒体在丙酮酸羧化酶的作用下生成草酰乙酸，后者经磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化下生成磷酸烯醇式丙酮酸，在异生成糖。（4）丙酮酸进入线粒体在丙酮酸羧化酶的作用下生成草酰乙酸，后者与乙酰辅酶A缩合成柠檬酸，柠檬酸出线粒体在细胞浆中经柠檬酸裂解酶催化生成乙酰辅酶A，后者可作脂肪、胆固醇的合成原料。（5）丙酮酸可经还原性氨基化生成丙氨酸等非必需氨基酸。决定丙酮酸的代谢方向是各条代谢途径中关键酶的活性。这些酶受到别构效应剂与激素的调节。 8、试从营养物质代谢的角度解释为什么减肥主要要减少糖类物质的摄入？
胞质NPM1突变蛋白稳定丙酮酸激酶增强白血病细胞有氧糖酵解表型
目录 英汉缩略语名词对照 (1) 中文摘要 (3) 英文摘要 (6) 论文正文：胞质NPM1突变蛋白稳定丙酮酸激酶增强白血病细胞有氧糖酵解表型9 前言 (9) 第一部分 NPM1突变蛋白参与调控白血病细胞的有氧糖酵解 (12) 1 材料与方法 (12) 2 结果 (22) 3 讨论 (26) 第二部分 NPM1突变蛋白稳定糖酵解关键酶PKM2 (28) 1 材料与方法 (28) 2 结果 (31) 3 讨论 (38) 第三部分 PKM2介导的糖酵解在白血病细胞生长中的作用 (41) 1 材料与方法 (41) 2 结果 (42) 3 讨论 (48) 全文总结 (50) 参考文献 (51) 文献综述 (55) 致谢 (64) 攻读硕士期间发表的文章及相关课题 (65) 万方数据
重庆医科大学硕士研究生学位论文 英汉缩略语名词对照 英文缩写英文全称中文全称 AML acute myeloid leukemia 急性髓系白血病 ATP adenosine triphosphate 三磷酸腺苷 cDNA complementary deoxyribonucleic acid 互补脱氧核糖核酸 CN-AML cytogenetically normal AML 核型正常的AML CHX cyclohexane 放线菌酮 d day 天 ddH2O double distillation water 双蒸水 DEPC diethyl purocarbonate 二乙基焦碳酸盐 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 EP eppendorf tube 微量离心管 FBP fructose-1, 6-bisphosphatase 1 果糖1,6-二磷酸酶-1 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 g gram 克 h hour 小时 HK hexokinase 己糖激酶 IF immunofluorescence 免疫荧光 IP/CO-IP immunoprecipitation/co-IP 免疫共沉淀 LB Lysogeny broth 细菌培养基 min minute 分钟 mRNA messenger RNA 信使RNA MS mass spectrometry 质谱检测 NPM1 nucleophosmin 核仁磷酸蛋白 NPM1-mA NPM1 mutant type A NPM1 A型突变 PBS phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲液 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链反应 PFK 6-phosphofructokinase 6-磷酸果糖激酶 1 万方数据
白带常规与BV唾液酸酶法联合检测的临床价值
白带常规与BV唾液酸酶法联合检测的临床价值 发表时间：2013-12-10T12:57:52.687Z 来源：《医药前沿》2013年11月第31期供稿作者：朱建新 [导读] 在育龄期妇女的阴道感染性疾病中，细菌性阴道炎、霉菌性阴道炎和滴虫性阴道感染是最为常见的妇科病。 朱建新（江苏省常熟市辛庄中心卫生院检验科江苏常熟 215500） 【摘要】目的对白带常规、BV唾液酸酶法在妇产科常规检查中的临床价值。同时观察BV合并霉菌滴虫感染情况。方法对本院妇产科门诊2012年11月至2013年10月321例阴道分泌物常规检查。通过盐水涂片法查找滴虫，进行革兰染色判断清洁度及检查念珠菌、线索细胞，通过唾液酸酶检测细菌性阴道病(BV)。结果清洁度Ⅱ度占31.46%；Ⅲ度占62.62%；Ⅳ度占5.92%；霉菌感染占20.87%；滴虫感染占3.43%；BV唾液酸酶法检测阳性占27.10%；念珠菌、滴虫和BV阳性混合感染占4.05%。结论白带常规与BV唾液酸酶法联合检测在妇科常规检查中两者都有其独立的临床价值，能更好的正确诊断、合理用药，规范治疗，提高治疗效果。 【关键词】白带常规 BV唾液酸酶法联合检测 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）31-0262-01 在育龄期妇女的阴道感染性疾病中，细菌性阴道炎、霉菌性阴道炎和滴虫性阴道感染是最为常见的妇科病。特别是对于孕前女性阴道分泌物常规筛查，女性患有阴道炎症会引起产道感染和宫内感染，还会造成早产、胎膜早破、低体重儿、先天发育畸形等严重后果。现对本院321例阴道分泌物检测结果分析报道如下。 1 资料与方法 1.1 临床资料对我院妇产科门诊2012年11月至2013年10月321例阴道分泌物进行白带常规与BV唾液酸酶法联合检测。 1.2 试剂（1）0.9％的氯化钠溶液。（2）细菌性阴道病检测试剂盒（唾液酸酶法）。 1.3 仪器江元医疗AT-1600全自动细菌性阴道病检测仪。 1.4 检测方法通过显微镜检和形态学检测阴道毛滴虫、霉菌、线索细胞和清洁度。 （1） 0.9％氯化钠湿片法：阴道毛滴虫采用0.9％氯化钠湿片法高倍镜观察20个视野，找到波状运动的阴道毛滴虫可以判断为阳性。（2）革兰染色法：霉菌性阴道炎采用革兰染色法，油镜观察。霉菌可以找到革兰氏阳性孢子或假菌丝与出芽细胞相连接，成链状及分枝状。（3）细菌性阴道病检测（唾液酸酶法）：根据仪器操作规程与细菌性阴道病检测（唾液酸酶法）试剂盒操作规程操作。 1.5 白带常规清洁度判定标准：参照《全国临床检验操作规程》第三版。 2 结果 2.1 妇产科门诊321例白带常规与BV唾液酸酶法联合检测结果。见表（1）。 表（1） 321例白带常规与BV唾液酸酶法联合检测结果 3 讨论 通过阴道分泌物检查除了可以判断阴道有无炎症，还能进一步诊断炎症发生的原因。当清洁度达到Ⅲ、Ⅳ度时，多数情况下可诊断为阴道炎症（如滴虫性阴道炎、真菌性阴道炎和细菌性阴道炎）为炎症的治疗提供依据。单纯清洁度增高多见于非特异性阴道炎。在检查中发现有阴道滴虫可诊断为滴虫性阴道炎或滴虫感染。有阴道霉菌时可作为霉菌性阴道炎的诊断依据。此外，清洁度、阴道霉菌、阴道滴虫，它们与BV无直接关联。但患有滴虫性阴道炎和霉菌性阴道炎的患者由于其阴道内正常菌群数量减少，更易感染BV，也就是会出现合并感染。 镜检有线索细胞，但BV检测不一定是阳性。因为镜检时有人为带来的错误，而且现在主张线索细胞占20%以上才能判断线索细胞阳性。所以，如果把镜检有线索细胞就认为BV检测一定阳性这错误的观点用在诊断和治疗中，就会产生不良的后果。BV则是由于阴道内原有的菌群比例发生了改变，加特纳菌、厌氧菌占绝对优势而引起的阴道病症，和长期滥用抗生素有关，该病阴道黏膜无充血的炎症表现。在临床上，清洁度II度时，BV检测阳性率也占了一定的百分比。因此，白带常规与BV唾液酸酶法联合检测，在临床妇科病的诊断和治疗中有积极意义。 参考文献 [1] 《全国临床检验操作规程》第三版 324. [2] 辛华，占伏良等《白带常规找线索细胞检测细菌性阴道炎与Amsel、BV Blue结果比较》检验医学 2006,21(3) 307-308.
唾液酸测定试剂盒(神经氨酸苷酶法)产品技术要求danda
唾液酸测定试剂盒（神经氨酸苷酶法）适用范围：本品用于体外定量测定人血清中唾液酸的含量。 1.1规格 规格1： (试剂1：15mL；试剂2：5mL)； 规格2： (试剂1：30mL；试剂2：10mL)； 规格3： (试剂1：60mL；试剂2：20mL)； 校准品：（选配）: 规格1（0.3mL×1；1水平)；规格2（0.5mL×1；1水平)；规格3（1.0mL×1；1水平)； 质控品：（选配） 规格1（0.5mL×2；2水平)；规格2（1.0mL×2；2水平)。 1.2组成 试剂盒组成见表1 表1 唾液酸测定试剂盒组成
注：校准品及质控品赋值具有批特异性，每批次浓度详见标签。 2.1试剂 2.1.1外观 试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰；组分齐全，液体无漏液；试剂1、试剂2为透明液体，不得有沉淀和絮状物。 2.1.2装量 每瓶不少于标示值。 2.1.3试剂空白吸光度 用指定的空白样品测试试剂（盒），在光径1cm下，在340 nmm处测定试剂空白吸光度≥0.8A，空白吸光度变化率≤0.01A。 2.1.4分析灵敏度 试剂测定75mg/dL被测物，吸光度变化≥0.01A。 2.1.5线性范围 2.1.5.1在[2，200] mg/dL内,相关系数R≥0.990。
2.1.5.2在[2，40] mg/dL内，线性绝对偏差不超过±4mg/dL；(40，200] mg/dL 内，线性相对偏差不超过±10%。 2.1.6 重复性 重复测试（75±15）mg/dL和（150±30）mg/dL样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。 2.1.7批间差 测定（75±15）mg/dL和（150±30）mg/dL样本，所得结果的批间相对极差（R）应不大于10%。 2.1.8准确度 ）中加入一定体积高于200 mg/dL的唾液酸纯在正常浓度范围的临床样本（C 品（Cs）或由纯品配制的标准溶液，回收率应在90%-110%范围内。 2.2校准品 2.2.1外观 校准品为淡黄色液体。 2.2.2装量 每瓶不少于标示值。 2.2.3准确度 与配套试剂组成测试系统，指标要求同2.1.8。 2.2.4 校准品溯源性 根据GB/T21415-2008的要求，校准品溯源至工作校准品，工作校准品采用上海聚创医药科技有限公司SA试剂盒进行方法学比对赋值。 2.3质控品
生物化学：第五章 当的分解与合成代谢
第五章糖类的分解与合成代谢 （一）双糖和多糖的降解 1．淀粉和纤维素分解有两条途径： 水解→产生葡萄糖；磷酸解→产生磷酸葡萄糖 2.参与淀粉水解的酶主要有三种：淀粉酶、脱支酶、麦芽糖酶，淀粉酶是指参与淀粉a-1,4-糖苷键水解的酶，有a-淀粉酶和b-淀粉酶两种。 3.a-淀粉酶：（a-1,4-葡聚糖水解酶）可水解任何部位的a-1,4-糖苷键，所以又称为内切淀粉酶。只有酶蛋白与Ca2+结合才表现出活性。 4.脱支酶：水解a-1,6-糖苷键,只能水解支链。 5.淀粉的磷酸解，其中，淀粉磷酸化酶又叫P-酶。淀粉的磷酸解与水解相比，其优越性有：耗能少；产物不易扩散到胞外,而水解产物葡萄糖会因扩散而流失 6.由蔗糖合酶催化：蔗糖＋NDP→NDPG ＋果糖 UDPG和ADPG是葡萄糖的活化形式，在合成寡糖和多糖时作为葡萄糖基的供体。这比将蔗糖水解要经济，因为从水解产物葡萄糖合成NDPG需要消耗能量。 （二）糖酵解（EMP） 1.糖酵解途径又称 EMP途径：指葡萄糖通过一系列步骤降解成三碳化合物（丙酮酸）并伴随着ATP生成的过程。 2.EMP的两个阶段 第一阶段——五步反应——磷酸丙糖生成阶段——耗能阶段； 第二阶段——五步反应——丙酮酸生成阶段——产能阶段。 第一步：葡萄糖——己糖激酶，镁离子——6-磷酸葡萄糖，己糖激酶是关键酶，磷酸化 第二步：6-磷酸葡萄糖——磷酸葡萄糖异构酶—6-磷酸果糖 第三步：6-磷酸果糖——磷酸果糖激酶——1，6-二磷酸果糖，磷酸化，关键酶（变构酶）第四步：1，6-二磷酸果糖—醛缩酶—磷酸二羟丙酮，3-磷酸甘油醛 第五步：磷酸二羟丙酮——磷酸丙糖异构酶—3-磷酸甘油醛 第六步：3-磷酸甘油醛—3-磷酸甘油醛脱氢酶—1，3-二磷酸甘油酸 第七步：1，3-二磷酸甘油酸—磷酸甘油酸激酶—3-磷酸甘油酸，底物磷酸化 第八步：3-磷酸甘油酸—磷酸甘油酸变位酶—2-磷酸甘油酸 第九步：2-磷酸甘油酸—烯醇化酶—磷酸烯醇式丙酮酸 第十步：磷酸烯醇式丙酮酸—丙酮酸激酶—丙酮酸，底物磷酸化 两次磷酸化，-2ATP;两次水平底物磷酸化：+4ATP；总计：+2ATP （三）丙酮酸去路 1.丙酮酸的去路：在无氧或相对缺氧时——发酵，有两种发酵：酒精发酵、乳酸发酵；酒精发酵：由葡萄糖→乙醇的过程。 2.在无氧或相对缺氧时——酒精发酵 葡萄糖+2ADP+2Pi——2乙醇+2CO2+2ATP+2H2O 3.在无氧或相对缺氧时——乳酸发酵 葡萄糖+2ADP+2Pi——2乳酸+2ATP+2H2O 4.在有氧条件下——丙酮酸有氧氧化丙酮酸被彻底氧化成CO2。 丙酮酸+NAD+——丙酮酸脱氢酶系——乙酰辅酶A+NADH+H+ 丙酮酸脱氢酶系：TPP（焦磷酸硫胺素）、CoASH、FAD、NAD+、Mg2+和硫辛酸 2NAD+→2NADH ，+5ATP （四）三羧酸循环（TCA） 1．三羧酸循环：又叫做TCA循环，是由于该循环的第一个产物是柠檬酸，它含有三个羧基，
稗草磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶_PEPCase_基因的克隆与分析
Vol .31,No .10 pp .1365-1369 Oct .,2005 作 物 学 报 ACTA AGR ONOMICA SINICA 第31卷第10期 2005年10月 1365～1369页 稗草磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase )基因的克隆与分析 张桂芳 1,3 赵 明 2,＊ 丁在松2 张 丽1 肖俊涛 1 (1中国农业大学农学与生物技术学院,北京100094;2中国农业科学院作物科学研究所,北京100081;3 北京师范大学生命科学学院,北京 100875) 摘 要:为揭示C 4野生植物稗草(Echino chlo a crus galli )PEPCase 的结构和功能特点,探索改善作物高光效新途径,克隆了稗草(E .crusgalli )磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(ppc )的cDNA 全长,测序及同源性比较分析结果证实,稗草ppc 的cDNA 全长为2886bp ,编码961个氨基酸(GenBank 登录号:AY251482);核苷酸序列与谷子(Setaria italica )C 3型、高粱(Sorghum bicolor )C 3-2型、玉米(Z ea mays )C 3-2型、水稻(Oryza sativa )C 3型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的同源率分别达94.8%、93.2%、93.0%和89.7%。推导的氨基酸序列中C 末端第771位氨基酸是丙氨酸(A ),表明是一个C 3型基因。与其他植物几种不同形式PE PCase 进行的多重序列比对与系统进化分析结果也证实,此基因的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列与所有参与对比的C 3型序列的同源性均远远高于与C 4型的同源性。与玉米、高粱C 3-2型PEPCase 的同源性分别高达96.5%、96.4%,与高粱、玉米的C 3-1型PEPCase 的同源性分别为84.3%、83.8%,而与谷子、玉米、甘蔗和高粱的C 4型PEPCase 的一致性相对较低,分别为82.2%、79.1%、77.1%和76.6%。因此进一步推论新克隆的稗草ppc 基因属于C 3-2型。对其编码的蛋白序列进行了结构域、活性位点和功能位点预测。关键词:稗草;磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶;基因克隆与分析中图分类号:S451 Cloning and Characterization of Phosphoenolpyruvate Carboxylase Gene from Ech inochloa crusgalli ZHANG Gui -Fang 1,3,ZHAO Ming 2, ＊ ,DI NG Zai -Song 2,ZHANG Li 1,XI AO Jun -Tao 1 (1C o lleg e o f Ag ro n o my a nd Bio -te chn ol og y o f Ch ina Ag ric ultu ralUn ive rs ity ,Bei jin g 100094;2In stitu te o f C ro p Scien ces ,C AAS ,Beij ing 100081;3C ol leg e o f Life Sci enc e ,Bei jing No r mal Unive rs ity ,Beijin g 100875,Ch ina ) Abstract :Phosphoenolpyruvate carboxylase (PEP Case )has a variety of functions in plants .In order to eluc idate structur al and functional char ac ters of PEPCase fr om Echinochloa c rusgalli ,and searc h a ne w approach to improve crops photosynthesis ,a full -length c DNA for PEPCase was isolated from E .c rusgalli .Using the progr am of Blast on NCBI GenBank database ,the sequence pr esented a ver y high match with the genes from other plants .After alignment on ClustalW program ,the identities of the cloned fr agment with PEP Case genes fro m Se taria italica C 3-for m ,Sorghum valgare C 4-for m ,Zea mays C 4-for m and Oryza sativa C 3-form were about 94.8%,93.2%,93.0%and 89.7%,r espectively .E .c rusgalli ppc OR F is 2886bp ,enc oding 961amino acid residues .The sequence has been submitted to the GenBank database ,the acc ession number is AY251482.Alignment and phylogenetic anal ysis of the amino acid sequenc e deduced fr om the fragment and the PEPCase sequences of other plants r etrieved from GenBank were carr ied out by Clustal W pr ogra m ,which showed that the sequenc es ho mology of E .crusgalli with C 3-for m was higher than with C 4-for m .To identify amino acid residues and or domains r esponsible for C 4 C 3-specific properties ,we found the putative amino acid sequenc e contains a C 3conserved alanine at position 771,and the sequence shared a homology of 96.5%,96.4%with the C 3-2-for m PEPCase of Zea mays and Sorghum valgare ,83.8%,84.3%with the C 3-1-for m PEPCase of Ze a mays and Sorghum valgare ,and 82.2%,79.1%,77.1%,76.6%with the C 4-form PEPCase of S .italica ,Z .mays ,S .spontaneum and Sorghum valgare .In conclusion ,the cloned sequence is a C 3-2-for m of PEPCase gene fr om E .c rusgalli .The do main ,active sites and fuction sites of Echinoc hloa crusgalli PEPC pr otein are predicted .Key words :Echinoc hloa crusgalli ;Phosphoenolpyr uvate c ar boxylase (PEPCase );Gene cloning and char acterization 基金项目:国家重点基础研究和发展规划(973)项目:作物高效抗旱的分子生物学及遗传学基础(2003CB114300);作物抗旱的遗传学基础 (2003CB114301)。国家研究与开发专项(863):优质、抗逆转基因新品种(系)的选育与转基因技术创新研究(JY03-B -11)。作者简介:张桂芳,女,博士,作物生理专业。＊通讯作者:赵明,男,博士,作物栽培专业。Tel :010-********. R eceived (收稿日期):2004-10-20,Accepted (接受日期):2005-01-18.
丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)试剂盒说明书
货号：MS2201 规格：100管/96样丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）试剂盒说明书 微量法 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： PK（EC 2.7.1.40）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化糖酵解过程中的最后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是产生ATP的关键酶之一，因此测定PK活性具有重要意义。 测定原理： PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸，乳酸脱氢酶进一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PK活性。 自备实验用品及仪器： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水 试剂的组成和配制： 提取液：100mL×1瓶，4℃保存; 试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；； 试剂二：粉剂×1支，-20℃保存； 试剂三：液体17μL×1支，4℃保存； 样本的前处理： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 测定步骤： 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2、样本测定 （1）在试剂二瓶中加入17mL试剂一和1mL蒸馏水充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 （2）在试剂三中加入1mL蒸馏水充分溶解，冰上放置备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 （3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂三和180μL试剂二，混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。 PK活性计算： a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 第1页，共2页
细胞唾液酸化相关酶的荧光成像检测新方法研究
细胞唾液酸化相关酶的荧光成像检测新方法研究糖基化是一种重要的蛋白质翻译后修饰,它们在各种基础生命活动的过程中起重要作用,并且对机体的恶性转化特别敏感。绝大部分聚糖的生物合成发生在细胞的内质网和高尔基体中,然而即使在糖蛋白生物合成之后,聚糖结构的修饰依然在酶催化作用下不断的进行着,这一过程称为聚糖重构。 聚糖重构主要受两类酶的催化作用,糖基转移酶和糖苷水解酶,它们的作用分别为生成和降解糖苷键。由于细胞的糖基化程度通常与疾病,尤其是肿瘤,密切相关,因此糖基转移酶和糖苷水解酶作为潜在的药物靶点和肿瘤诊断标志物引起了研究人员的极大兴趣。 唾液酸化是糖基化中一个备受关注的分支,可以在附着于蛋白质或脂的聚糖链末端位置引入唾液酸(N-乙酰神经氨酸),肿瘤细胞中唾液酸的表达普遍是异常的。糖缀合物上唾液酸的表达主要受唾液酸转移酶和唾液酸酶的活性的影响。 然而在大多数情况下,肿瘤细胞中唾液酸化异常改变的机理,唾液酸化相关酶的活性与唾液酸化聚糖的表达之间的相互关系仍然未知。为了阐明唾液酸化相关酶的生物学和病理学功能以及使其作为疾病诊断和治疗的工具,发展检测唾液酸转移酶和唾液酸酶活性的新方法已成为迫切需求。 因此,本工作将化学生物学,细胞学和分子生物学等进行交叉结合,并利用荧光显微技术,纳米材料等,设计发展了新型分析检测方法和纳米探针,对肿瘤细胞中唾液酸转移酶,唾液酸酶的活性分别进行了原位无创检测,为研究聚糖生物合成机理、肿瘤临床诊断和药物开发提供了有力工具。具体包括以下两个部分工作:1、基于化学选择性识别的活细胞内唾液酸转移酶活性检测唾液酸化的聚糖结构是由唾液酸转移酶(Sialyltransferase,ST)催化合成的,为了阐明唾液酸转移
7生物化学习题(答案)
7糖的生物合成 一、名词解释 1、光合作用：含光合色素主要是叶绿素的植物和细菌，在日光下利用无机物质（CO 2、H2O、H2S）合成有机物质，并释放氧气或其他物质的过程。 2、天线色素：全部叶绿素b、类胡萝卜素和大部分叶绿素，吸收光能并传递到作用中心色素分子。 3、作用中心色素：位于内囊体膜上具有特殊状态和光化学活性的少数叶绿素a分子，利用光能产生光化学反应，将光能转变成电能。 4、光合色素： 5、光合磷酸化：在叶绿体ATP合成酶催化下依赖于光的由ADP和Pi合成ATP的过程。 6、糖异生：由简单的非糖前体转变为糖的过程。糖异生不是糖酵解的简单逆转。虽然由丙酮酸开始的糖异生利用了糖酵解中的7步近似平衡反应的逆反应，但还必须利用另外4步糖酵解中不曾出现的酶促反应绕过糖酵解中的三个不可逆反应。 二、填空 1、光合作用分为光反应和暗反应两个阶段。第一阶段主要在叶绿体的类囊体膜部位进行，第二阶段主要在叶绿体的基质部位进行。 2、高等植物光反应的最终电子供体是H2O，最终电子受体是NADP+。 3、光合电子传递链位于叶绿体类囊体膜上，呼吸电子传递链位于线粒体内膜上。 4、光合磷酸化有环式和非环式两种类型。 5、在光合碳循环中，每固定6CO 2 形成葡萄糖，需消耗12NADPH+H+和18ATP。 6、C 4植物的Calvin循环在维管束鞘细胞中进行，而由PEP固定CO 2 形成草酰乙酸是在叶肉细胞中进 行。0 7、糖异生主要在肝脏（细胞溶胶）中进行；糖异生受Pi、AMP、ADP抑制，被高水平ATP、NADH激活。 8、在糖异生作用中由丙酮酸生成PEP，在线粒体内丙酮酸生成草酰乙酸是丙酮酸羧化酶催化的，同时要消耗ATP；然后在细胞质内经PEP羧激酶催化，生成磷酸烯醇丙酮酸，同时消耗GTP。 9、植物体内蔗糖合成酶催化的蔗糖生物合成中葡萄糖的供体是UDPG，葡萄糖基的受体是果糖。 10、合成糖原的前体分子是UDPG，糖原分解的产物是G-1-P。 三、单项选择题 1、用于糖原合成的葡萄糖-1-磷酸首先要经什么化合物的活化？ A、ATP B、CTP C、GTP D、UTP E、TTP 2、RuBisCO催化RuBP羧化反应的产物是（RuBisCO－核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶；RuBP—核酮糖-1,5-二磷酸；PGA－3-磷酸甘油酸）（书上393也） A、PGA B、PEP C、OAA D、IAA 3、不能经糖异生合成葡萄糖的物质是：（乙酰CoA只能进入TCA分解，不能经糖异生合成葡萄糖） A、α-磷酸甘油 B、丙酮酸 C、乳酸 D、乙酰CoA E、生糖氨基酸 4、丙酮酸羧化酶是那一个途径的关键酶： A、糖异生 B、磷酸戊糖途径 C、胆固醇合成 D、血红素合成 E、脂肪酸合成 5、动物饥饿后摄食，其肝细胞主要糖代谢途径： A、糖异生 B、糖有氧氧化 C、糖酵解 D、糖原分解 E、磷酸戊糖途径 6、下面哪种酶在糖酵解和糖异生中都起作用： A、丙酮酸激酶 B、丙酮酸羧化酶 C、3-磷酸甘油醛脱氢酶 D、己糖激酶 E、果糖1，6-二磷酸酯酶 7、糖异生途径中哪一种酶代替糖酵解的己糖激酶？ A、丙酮酸羧化酶 B、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 C、葡萄糖-6-磷酸酶 D、磷酸化酶 8、光合作用中Calvin循环是在叶绿体的： A、外膜上进行 B、基粒上进行 C、基质中进行 D、类囊体腔内进行