紫外分光光度法测定大承气冲剂中大黄总蒽醌的含量

第ｌ６卷　第７期　Ｖｏ１．１６　Ｎｏ．７　中莲为导般　Ｇｕｉｄｉｎｇ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　２０１０年７月　

Ｊｕｌｙ．２０１０　

紫外分光光度法　测定大承气冲剂中大黄总葸醌的含量　

刘云娣，李得堂，任结梅，范丽霞　（广州中医药大学第一附属医院，广东广州５１０４０５）　

【摘要】　目的：建立大承气冲剂中大黄总蒽醌含量紫外分光光度测定方法。方法：先采用ＣＨＣ１　超声振荡提取游离蒽醌，再　将残渣中结合蒽醌进行水解，ＣＨＣ１３热回流提取；利用大黄蒽醌类化合物能与醋酸镁反应显色的原理，以显色剂为空白，测定　样品溶液在５１０　ｎｍ波长处的吸收度。结果：对照品大黄素含量在Ｉ．２９—９．０２　ｔｘｇ／ｍＬ范围内，浓度与吸光度之间线性关系良好ｆｒ：　０．９９９７）；样品的平均回收率为９９．３７％，ＲＳＤ％为１．５４％（ｎ＝６）。结论：紫外分光光度法灵敏、快速、准确，适于大承气冲剂中大黄总　蒽醌的含量测定。　［关键词］紫外分光光度法；大承气冲剂；总蒽醌；含量测定　【中图分类号】Ｒ９２７．２　ｆ文献标识码】Ａ【文章编号】　１６７２—９５１Ｘ（２０１０）０７—０１０８—０２　

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　ＡｎｔｈｒａｑｕｉｎＯｎｅｓ　ｉｎ　Ｄａｃｈｅｎｇｑｉ　Ｇｒａｎｕｌｅｂｙ　Ｄｉｒｅｃｔ　Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔ　Ｌｉｕ　Ｙｕｎ击，Ｌｉ　Ｄｅｔａｎｇ，Ｒｅｎ　Ｊｉｅｍｅｉ，Ｆａｎ　Ｌｉｘｉａ　Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０４０５　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｄａｃｈｅｎｇｑｉ　Ｇｒａｎｕｌｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＣＨＣ１３　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｅｅ　ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　ｂｙ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｖｉｂｒａｔｉｏｎ，ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ　ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　ｉｎ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｗａｓ　ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙ　ｒｅｆｌｕｘ　ｉｎ　ＣＨＣ　Ｉ　３，Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｔｈｅｏｒｙ　ｔｈａｔ　ｃｏｌｏｕｒｉｎｇ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｗｉｌｌ　ｏｃｃｕｒ　ｗｈｉｌｅ　ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　ｉｎ　ｒｈｕｂａｒｄ　ｒｅａｃｔ　ｕｐｏｎ　ｍａｇｎｅｓｉｕｍ　ａｃｅｔａｔｅ，ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ａｔ　５　１０　ｎｍ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｔｏ　ｃａｌｃｕｌａｔｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕＩｖｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｂｅｎｃｙ　Ｗａｓ　ｌｉｎｅａｒ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｍｏｄｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　１．２９　Ｉｘｇ一９．０２　ｐ￣ｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９７）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｅｍｏｄｉｎ　ｗａｓ　９９．３７％，ＲＳＤ　ｗａｓ　１．５４％（ｎ：６）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ａｃｃｕｒａｔｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｏｔａｌ　ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　ｉｎ　Ｄａｃｈｅｎｇｑｉ　Ｇｒａｎｕｌｅ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ＵＶ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；Ｄａｃｈｅｎｇｑｉ　Ｇｒａｎｕｌｅ；Ｔｏｔａｌ　ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ；Ｃｏｎｔｅｎｔ　

大承气冲剂（广州中医药大学第一附属医院制剂室生　产，批号：２００８０５２３）由大黄、厚朴等数味药材提取精制而成，　是大承气汤的改进剂型，具有峻下热结的功效，用于肠梗阻、　腹腔感染引起的肠源性内毒素血症等的治疗Ⅲ，促进肠管运　动、增加胃动素的释放、促进胃液分泌等。大黄总蒽醌类成分　为大黄的泻下有效成分。这些成分是大承气汤药理作用的物　质基础，也是质量控制常用的指标物，结合本品组成的特点，　笔者通过研究建立了测定制剂中总蒽醌等成分含量的ｕＶ法，　为有效地控制产品质量提供了依据。　１仪器与试药　ＵＶ一２４０分光光度计（日本岛津），超声波清洗器（上海科　导超声仪器有限公司）；恒温干燥箱（北京市朝阳区来广营医　疗器械厂）。ＤＫ—Ｓ　型电热恒温水浴锅（上海精宏试验设备有　限公司），大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：　０８２３—９８０２），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。　１０８　２方法与结果　２．１　对照品溶液的制备精密称取干燥２　ｈＡ的大黄素对照　品１．６１　ｍｇ，置５０　ｍＬ量瓶中，加甲醇至刻度，得含大黄素　０．０３２２　ｍｇ／ｍＬ的对照品溶液，备用。　２．２供试品溶液的制备精密称取本品约２．５　ｇ，置具塞三角　烧瓶中，加入ＣＨＣ１　３０　ｍＬ，超声振荡３０　ｍｉｎ，滤过，滤液备用。　残渣加人２．５　ｍｏｌ・Ｌ—Ｉ　Ｈ：ＳＯ　３０　ｍＬ振摇使溶，直火加热１　ｈ，冷　却至室温，加入ＣＨＣＩ　３０ｍＬ回流３０ｒａｉｎ，放冷后，吸取ＣＨＣ１，　液，重复４次，合并ＣＨＣ１，提取液，蒸馏水洗至中性，与水解前　ＣＨＣ１，提取液合并，回收ＣＨＣ１，至干，残渣加１．０％Ｍｇ（Ａｃ）：甲醇　溶液溶解，并定容至５０　ｍＬ量瓶中。精密吸取上述溶液１　ｍＬ，　置２５　ｍＬ容量瓶中，甲醇稀释至刻度作为供试品溶液。　２．３对照药材溶液的制备取大黄对照药材１　ｇ，按“２．２项　下”供试品溶液制备方法制备对照药材溶液。　２．４提取条件的考察查阅文献［４１和制剂工艺等因素考虑，　第１６卷　Ｖ０１．１６　第７期　Ｎｏ．７　

中莲药导艘　

Ｇｕｉｄｉｎｇ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　２０１０年７月　

Ｊｕｌｙ．２０１０　

选取了几种大黄总蒽醌的提取方法：（１）ＣＨＣ１，提取，残渣加　２．５　ｍ０Ｉ儿Ｈ，Ｓ０　水解后再ＣＨＣ１　提取；（２）乙醇提取；（３）甲醇　提取：结果表明，ＣＨＣ１　提取含量高于其他两种方法提取。为　更完全地提取蒽醌衍生物，笔者采用先ＣＨＣ１，超声振荡提取　游离蒽醌，再将残渣中结合蒽醌进行水解，ＣＨＣ１，热回流提　取。故我们选择此法提取制备供试品溶液。　２．５检测波长的选择１２　】分别精密吸取大黄素对照品溶液、　大黄对照药材溶液各ｌ　ｍＬ、样品供试液、阴性对照液４　ｍＬ，置　具１０　ｍＬ带塞容量瓶中，水浴挥干，残渣加１．０％Ｍｇ（Ａｃ）　乙醇　溶液溶解并稀释至刻度，以显色剂（１．０％醋酸镁乙醇溶液）为　空白，在４００—７００　ｎｍ波长范围内扫描。４种溶液，除阴性溶液　外，其它均在５１０　ｎｍ波长处有最大吸收。在此波长处样品的　吸收度为０－３ｌ５，而阴性样品的吸收度仅为０．０１１，（Ａ阴性，Ａ样　品）ｘｌＯ０％＝２．７％。即空白样品对样品测定基本无影响，故测　定波长选择为５１０　ａｍ。（见图１）　

图１　对照及样品紫外吸收光谱图　１一大黄素对照品　２一大黄对照药材溶液　３一供试品溶液４一缺大黄的阴性样品溶液　２．６标准曲线制备及线性范围的考察精密量取上述标准　溶液０．２０、０．４０、０．６０、０．８Ｏ、１．０ｏ、１．２０、１．４０分别置于５　ｍＬ量瓶　中，水浴挥去甲醇，残渣用１．０％Ｍｇ（Ａｃ）　乙醇溶液溶解，并定容　至刻度，摇匀，以１．０％Ｍｇ（Ａｃ）２乙醇溶液为空白对照，于５１０　ｎｍ　波长处测定其吸收度，经回归得直线回归方程：Ａ＝０．０１２０９Ｃ＋　０．０６０８３，ｒ＝Ｏ．９９９７，线性范嗣１．２９—９．０２￣ｇ／ｍＬ。　２．７颜色稳定性试验精密吸取大黄素对照品溶液１　ｍＬ及　样品供试液４ｍＬ，按“２．５”项下方法同法操作，显色放置０，０．５，　１．０，１．５，２．０，３．０　ｈ，分别测定吸收度。结果表明，对照品溶液及　样品供试液均在０　ｈ不稳定，在０．５—３　ｈ内稳定，ＲＳＤ％分别为　０．１７％、０．２４％。（见表１）　表１颜色稳定性试验结果　｛ｈ）　

２．８显色剂浓度的考察精密吸取大黄素对照品溶液１　ｍＬ　及样品供试液４　ｍＬ，按“２．５”项下方法进行含量测定时，用不　同浓度Ｍｇ（Ａｃ）：乙醇溶液显色，并以对应浓度的试剂空白调　

零，测得含量结果见表２（ｎ＝３）。　表２显色剂浓度结果　

结果表明，１．Ｏ％与１．５％的Ｍｇ（Ａｃ）　乙醇溶液作显色剂，其　吸收度相差无几，１．５％较高一点，１．Ｏ％较低，故选择１．０％的浓　度为佳。　２．９精密度试验精密吸取大黄素对照品溶液１　ｍＬ及供试　品４　ｍＬ，按“２．５项”下方法同法操作，显色放置０．５　ｈ，分别测定　吸光度，结果对照品和样品的ＲＳＤ％分别为０．０９％、０．１３％。表　明精密度良好（ｎ＝６　ｏ　２．１０重复性试验取同一批样品６份，按“２．２”项下方法制　备供试品溶液，测定，以含量为指标计算ＲＳＤ，考察方法的重复　性。结果样品的含量分别为１２．７５、１２．７６、１２．７１、１２．８６、１２．６８　ｍ　，　ＲＳＤ％为１．９７％（ｎ＝５）。　２．１１加样回收率试验取已知含量的样品，精密称定，定量　加入大黄素对照品，同“２．２”项下方法制备供试品溶液，依法　测定即得，计算回收率，结果见表３。　表３加样回收率试验结果　（ｎ＝６）　

２．１２样品测定取３批样品按“２．２”项下方法制备供试品溶　液，在５１０　ｎｍ波长处依法测定吸光度，重复测定３次，通过回　归方程计算，得３批样品的平均得率为１２．７７　ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ％为　０．３ｌ％。　３讨　论　大黄总蒽醌的含量测定方法常用ｕＶ，其提取常用ＣＨＣ１，　热回流提取　。为更完全地提取蒽醌衍生物，本文采用先ＣＨＣ１，　超声振荡提取游离蒽醌，再将残渣中结合蒽醌进行水解，　ＣＨＣ１３热回流提取。　大承气冲剂由多味中药组成，成分复杂，用紫外法测定　复方制剂中单一成分含量不能很好控制质量。故采用大黄总　葸醌的含量测定，文献大多报道采用水解后再提取、测定的　方法，操作步骤都繁琐，但是对本品来讲，制得供试品溶液中　大黄总蒽醌含量较高，大黄中的游离与结合蒽醌均具有与醋　酸镁反应显色的官能团　（苯环上的邻位羟基）。因此，直接　测定的结果即为总蒽醌的含量。且该方法简便、快速、准确、　重现性好，是测定大黄及其复方制剂中总蒽醌含量较理想的　方法