杀菌剂毒力测定
5种杀菌剂对黄瓜白粉病室内毒力测定及田间药效
黄瓜白粉病（Erysiphe cichoracearum）又称白毛病、白霉病，具有分布广、潜伏期短、流行性强、传播快的特点，在全国各地都有发生，是保护地黄瓜的重要病害之一，主要阻碍叶片的光合作用，对黄瓜后期造成严重的影响。
苗期至成株期均可发生，主要侵害叶片，亦为害茎部和叶柄，一般不为害果实。
温室大棚内一旦发病，发展迅速，严重时可造成叶片干枯甚至提早拉秧，严重影响黄瓜产量和品质。
除为害黄瓜外，还能为害西葫芦、甜瓜、南瓜、西瓜、冬瓜、丝瓜等。
近年来，白粉病有加重趋势，而且一年四季均可发病，尤其在感病品种上为害程度甚至超过霜霉病，加之一定抗药性的产生，给防治带来一定难度。
目前化学防治起着非常重要的作用，在保护地栽培条件下占有不可替代的地位。
为解决上述问题，有效控制黄瓜白粉病发生和发展的速度，2018年进行室内毒力和田间药效试验，筛选防治黄瓜白粉病的有效药剂，本研究为有效防治黄瓜白粉病提供试验数据。
材料与法供试作物供试作物为黄瓜，品种为新泰密刺。
试验病原菌：黄瓜白粉病病菌[Sphaerotheca fuliginea(Schlecht)Poll.]。
大棚宽度10 m，黄瓜株距10 cm，行距100 cm，试验地肥力中等。
供试药剂25%乙嘧酚SC，深圳诺普信农化股份有限公司；4%四氟醚唑EW，陕西韦尔奇作物保护有限公司；10%醚菌酯EW，天津汉邦植物保护剂有限责任公司；40%苯醚甲环唑·嘧菌酯SC、20%四氟醚唑·醚菌酯SE，青岛瀚生生物科技股份有限公司。
室内毒力测定采用盆栽测定法进行室内毒力测定。
（1）育苗塑料营养钵育苗，基质为营养土（花卉土∶蛭石为2∶1），钵体上层覆盖约2 mm的营养土，每钵留2株苗，黄瓜2片真叶展开时开始试验。
（2）接种方法采集新鲜白粉病叶，配制孢子悬浮液，将新鲜孢子悬浮液喷施于接种叶片上，人工接种24 h后喷药，施药器械容量1 L、喷口直径1.0 mm的小型喷雾器。
杀菌剂咯菌腈对根腐病的室内毒力测定和田间防治效果
试验 大豆试验于 ２０２０年 ５月中旬至 ７月底在江 苏省徐州市睢宁县双沟镇陈王村进行。露天种植， 土壤为沙壤土，肥力水平中等。试验共设 ６个处理， 其中 ２５ｇ／Ｌ咯菌腈悬浮种衣剂设置 ３个用量处理， 分别为 ２００、４００、６００ｇ／１００ｋｇ种子；３５０ｇ／Ｌ精甲霜 灵种子处理乳剂和 ３０ｇ／Ｌ苯醚甲环唑悬浮种衣剂 按照 常 规 使 用 剂 量 各 设 １个 处 理，分 别 为 ８０、 ５００ｇ／１００ｋｇ种子。另设 １个空白对照。于 ２０２０年 ５月 １８日大豆播种前拌种包衣，晾干后进行播种。 随机区组排列，每个小区面积为 ２５ｍ２，重复 ４次， 共计 ２４个小区。按照 ６７．５ｋｇ／ｈｍ２ 的播种量进行 人工点播，行距为 ５０ｃｍ，株距为 １０ｃｍ。各小区大 豆长势较好且均匀一致，肥水管理及病虫害防治按 常规进行，试验期间不再施用其他防治大豆根腐病 的药剂。
菌丝生长平均抑制率 ＝（对照菌落直径 －处理 菌饼直径）／（对照菌落直径 －５ｍｍ）×１００％。
将菌丝生长抑制率转换成几率值，将药剂浓度 换算成对数值，以几率值为毒力回归方程应变量 ｙ， 药剂浓度对数值为毒力回归方程自变量 ｘ，计算毒 力回归方程和各药剂的 ＥＣ５０。 １．２．３ 咯菌腈对大豆根腐病和花生根腐病的防治
娄天成１，左 杨２，张心宁３，余文杰１，２，孙 凯２，刘永锋２，刘邮洲１，２
（１．南京农业大学植物保护学院，江苏南京 ２１００９５；２．江苏省农业科学院植物保护研究所，江苏南京 ２１００１４； ３．江苏省徐州市睢宁县农业农村局，江苏睢宁 ２２１２００）
摘要：根腐病是生产中的一种重要的土传真菌病害，为明确药剂咯菌腈对根腐病的防效，给生产上提供合理有效 的用药方案。采用室内离体试验和田间小区试验相结合的方式，进行 ２５ｇ／Ｌ咯菌腈悬浮种衣剂对根腐病的室内毒力 测定和田间防效试验。结果表明，咯菌腈对病原菌立枯丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ）和高粱镰孢菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｎｄｉｙａｚｉ） 菌丝生长的抑制作用较强，对禾谷镰孢菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）和尖孢镰孢菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｐｏｒｕｍ）菌丝生长的抑制 作用次之，对层出镰孢菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｕｍ）菌丝生长无抑制作用。在 ２５ｇ／Ｌ咯菌腈悬浮种衣剂按照使用剂量 ２００、 ４００、６００ｇ／１００ｋｇ种子进行大豆根腐病的防治试验中，出苗后 １０ｄ，对大豆根腐病的防效为 ７５６０％ ～９０．５８％；出苗 后 ３０ｄ，对大豆根腐病的防效为 ６９．６１％ ～８４．４３％；出苗后 ６０ｄ，对大豆根腐病的防效为 ５８３７％ ～７５．３１％。随着用 量的增加防效显著提高，在 ０．０５水平上，３个剂量的处理防效具有显著差异。在 ２５ｇ／Ｌ咯菌腈悬浮种衣剂进行花生 根腐病防治试验中，出苗后 １０ｄ，咯菌腈低、中、高 ３个使用剂量对花生根腐病的防效为 ６１．２６％ ～８３．７９％；出苗后 ３０ｄ， 对花生根腐病的防效为 ５６．１８％ ～７９．３０％；出苗后 ６０ｄ，对花生根腐病的防效为 ４９．７６％ ～６９７８％，在 ０．０５水平上，３ 个剂量的处理防效具有显著差异。此外，对照药剂 ３５０ｇ／Ｌ精甲霜灵种子处理乳剂的平均防效与咯菌腈低剂量防效 相当，３０ｇ／Ｌ苯醚甲环唑悬浮种衣剂的防效与咯菌腈中剂量防效相当。结果表明，２５ｇ／Ｌ咯菌腈悬浮种衣剂能有效防 治大豆根腐病和花生根腐病，随着时间的推移，其防效呈逐渐下降趋势。 关键词：根腐病；咯菌腈；抑制作用；田间防效；悬浮种衣剂；毒力测定 中图分类号：Ｓ４８２．２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２１）１１－００８０－０５
杀菌剂毒力测定
时，每重复了随机观察3个以上视野， 调查孢子总数不少于200个，分别记 录萌发数和孢子总数。
29
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
40
一、杀菌剂毒力测定方法
4 扩散法 管碟法： 在试验平面上放4个牛津杯（外径8mm，
内径6mm，高10mm）。用移液管将已 知浓度的标准液和不同浓度的待测液 移圆筒内，在适温下培养，让其形成 抑菌圈。测其直径。
41
一、杀菌剂毒力测定方法
4 扩散法：农用抗菌素效价测定
抗菌素效价的衡量单位分两类：
一般规定孢子的浓度最好是5万/ml。 15 10*10观察时，每个视野约有35个。
一、杀菌剂毒力测定方法 孢子浓度可用计数器测定 纽鲍尔（Neubauer）血球计数器。 边长为0.05mm的小方格，深度为
0.1mm
16
一、杀菌剂毒力测定方法
1.4 孢子萌发条件 A、温度：各种真菌孢子萌发的最适
6. 数据处理 计算校正的孢子萌发率，求出毒力回
归线，EC50，EC90及95%置信限。
30
一、杀菌剂毒力测定方法
2 生长速率法(mycelium growth rate test)
将不同浓度的药液与融化的培养基混 合，制成带毒培养基平面，在平面上 接种病原菌，以病原菌生长速度快慢 来判定药剂毒力大小。
玉米小斑病菌孢子，适当加入一点玉 米苗的新鲜汁液，在26℃下2h，孢子 萌发率高，整齐。
22
一、杀菌剂毒力测定方法
1.5 调查方法 一般病菌培养20~24小时即可镜检。
29种常用杀菌剂对番茄枯萎病菌和青枯病菌的室内毒力测定
29种常用杀菌剂对番茄枯萎病菌和青枯病菌的室内毒力测定摘要：在实验室内，采用菌丝生长速率法测定了29种杀菌剂对番茄枯萎病菌的抑菌效果，采用纸碟法测定了29种杀菌剂对番茄青枯病菌的抑菌效果。
结果表明，有10种杀菌剂对番茄枯萎病菌的毒力较强（Ec50值相对抑制率计算公式如下：抑菌率=对照菌落直径-处理菌落直径对照菌落直径-菌饼直径×100%。
1.2.2杀菌剂对番茄青枯病菌的毒力测定方法菌液的制备：将番茄青枯病菌在LB斜面上活化，移入50mLLB培养液中，在28℃下振荡（150r/min）培养过夜。
用无菌水将番茄青枯病菌菌液稀释至浓度约为106cFU/mL，备用。
纸碟测定方法参照文献[12-15]：将29种杀菌剂分别制成浓度为1000、100、10、1mg/L，吸取20μL在LB平板中央，每处理重复3皿。
设清水对照。
用上述番茄青枯病菌稀释液（106cFU/mL）喷雾后，28℃培养过夜，调查抑菌圈直径，计算相对抑制率。
应用Excel软件处理系统求出各单剂毒力回归方程、Ec50值及相关系数。
2结果与分析2.1杀菌剂对番茄枯萎病菌的毒力测定采用菌丝生长速率法测定了29种杀菌剂对番茄枯萎病菌的抑菌效果。
2.2杀菌剂对番茄青枯病菌的毒力测定采用纸碟法测定了29种杀菌剂对番茄青枯病菌的抑菌效果。
结果表明，有3种杀菌剂对番茄青枯病菌有较强的毒力，其Ec50值均小于10mg/L（表3、图2），其中3%中生菌素的毒力最强，Ec50值为3.3742mg/L。
其余26种杀菌剂对番茄青枯病菌不表现毒力。
表33种杀菌剂对番茄青枯病菌的室内毒力测定结果药剂名称毒力回归方程相关系数（r）Ec50（mg/L）3%中生菌素y=7.10x+1.250.96823.374280%代森锰锌y=5.58x+0.830.97565.58872%春雷霉素y=4.11x+1.210.94198.35873结论与讨论番茄具有较高的营养价值，深受广大消费者的喜爱。
杀菌剂的毒力测定和
（2）抑菌圈法
广泛地应用于真菌细菌的杀菌剂筛选，基本原理是 将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与琼脂培养基混匀冷 凝后，在培养基平面放上消毒的并蘸有不同浓度药 剂的圆形滤纸片（直径6mm）左右，或放特制的直 径8mm高10mm的不锈钢环，将配好的药液定量加 在钢环内，经定温培养一定时间后，由于药剂的扩 散作用，使病菌生长受到抑制，即形成“抑菌圈”。 测量抑菌圈的大小，以比较杀菌剂的毒力。
11
（2）治疗作用：
测定方法是先在植株上接菌，保温，保湿 一定时间，待病菌菌丝侵入或始见发病，再 进行喷药处理，其他调查统计方法同上。
12
（3）内吸作用：
测定根的内吸输导试验，可以采用水培的稻株或棉株，在营 养液中加定量的药剂，待24h或48h后进行接菌，发病后调查， 若以土培盆栽方法，则药液定量灌入土中，程序与上相同。
❖ 持效期的试验：
以上各种方法，用先喷药后接菌或先接菌后喷药，间隔不同 日期进行处理，可以测定杀菌剂残效。
❖ 剪叶法分级标准：
0 级 （ 不 发 病 ） ； 1 级 （ ＜ 剩 余 叶 面 1/4 ） ； 2 级 （ 剩 余 叶 面 1/4-1/2）；3级（＞剩余叶面1/2）；4级（全部发病）。
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离体测定能反映化合物毒力的本质和程度，方法简便，为研 制新农药不可缺少，但它存在有一点缺点，应该和温室活体的 盆栽试验结合起来。
3
1.毒力测定的方法
室内离体平板法： （1）孢子萌发测定法 （2）抑菌圈法 （3）生长速率测定法
4
（1）孢子萌发测定法
有载玻片萌发法及平板培养基培养法。 即将不同的药液喷布于玻片表面或平板上，定量 滴加孢子悬浮液，药液与悬浮液接触后，经一定培育 时间，镜检孢子萌发的百分率，载玻片法适合于水溶 性较好的保护剂，能计算单位面积药液的沉积量及药 液浓度，接近实际条件，但对萌发时需氧较多的病原 菌不适用。 平板萌发适用于不易分解的保护剂，根据测定对象 生长需要的配方来制备合适的培养基，由于孢子在培 养基的表面能得到较充足的空气，萌发时不致因缺少 氧而受影响。
6种杀菌剂及其混配剂对香栓孔菌的室内毒力测定
Ｔｏｘ ｃｔ ｓ ｆＳｉ ｎ ｃｄ ｓ ａ ｅ ｒＭ ｉ ｔ ｒ ｓ ｔ ａ ｔ ｓｓ ａ ｅ ｌ ｎ ｎ Ｌａ ｏ ａ ｏ ｙ ｉｉｙ Ｔｅ ｔｏ ｘ Ｆｕ ｇｉｉ ｅ ｎｄ Ｔｈ ｉ ｘ ｕ ｅ ｏ Ｔｒ ｍｅ ｅ ｕ ｖ ｏ ｅ ｓ ｉ ｂ ｒ ｔ ｒ
ＣＨＥＮ Ｊ ｎ ，ＧＡＯ ｏｐ ｎ 孙 ，ＺＨＡＮＧ Ｗ ｅ ｕ Ｇｕ — ｉｇ ｉ～，ＱＩ ｉ— ｕ ，ＷＡＮＧ Ｙｕ 。 ｎｙ 。 Ｊ ｅ，
Ｗ Ｕ Ｂａ －ｕ 。 ｏｊ ｎ 。ＷＥＩＸｉｎ －Ｉ 。 ａ ｇｊｌ ，ＺＨＡＮ Ｈｕ ｉｌ ｎ ａ—ｉ 。
（ ．Ｆｅ ｇ ｈｅ ｇ Ｆｏ ｅｔＰｅｔＣｏ ｔｏ ｎ ａ ａ ｔｎ ｒａ １ ｎ ｃ ｎ ｒｓ ｓ ｎｒ ｌａ ｄ Ｑｕ ｒ ｎ ｉｅ Ｂｕ ｅ ｕ，Ｆｅ ｇｃ ｅ ｇ，Ｌｉｏ ｉ ｇ １ １ ０，Ｃｈ ｎ ｎ ｈｎ ａ ｎ ｎ ８ ０ １ ｉａ
退菌特 、 石硫合 剂、 可杀 得 、 多菌 灵和 百 菌 清 的 Ｅ 分别 为 １． １ ２ ． ３ １８ ４ 、６ ． ８ ４ ２ ２ 和 ６ ９ 、６ ８ 、 １． ９ ３ ５ ３ 、 １ ． ９
１５ ６ ７ ｇ・ ； 菌特和代 森锰 锌按 １： 、 ３和 ３： ５ ． ６ｍ Ｉ 退 ｌ１： １比例 混配都表现 出一 定的增效作 用， 中 其 按 １： ３比例 混配增效作 用非常 明显 ， 共毒 系数 高达 ４ ５ ９ ， Ｃ。 为 ４ ４ １． ０ Ｅ ５ 仅 ． ８ｍｇ・ 。 Ｉ 。 ＿ 关 键词 ： 木腐 朽病 害； 栓孔 茵 ； 菌剂 ； 力 测定 林 香 杀 毒
五种杀菌剂对草坪弯孢霉菌毒力测定
五种杀菌剂对草坪弯孢霉菌毒力测定摘要：通过室内毒力测定，研究了5种杀菌剂对草坪弯孢霉菌菌丝的抑制作用，结果为25%三唑酮wp毒力回归方程为y=8.7589-0.0372x，50%福美双wp 毒力回归方程为y=8.9247-0.028x，25%敌力脱ec毒力回归方程为y=9.3337-0.0380x，70%代森锰锌wp毒力回归方程为y=9.6948-0.0361x，5%速保利wp毒力回归方程为y=10.1063-0.0331x。
表明5种杀菌剂浓度与菌丝生长抵制率间具有高度的相关性；5%速保利wp抑制效果高于25%敌力脱ec、70%代森锰锌wp抑制效果；在防治草坪弯孢霉叶枯病时首先选用的药剂为5%速保利wp，其次为25%敌力脱ec、70%代森锰锌wp。
关键词：草坪弯孢霉菌；不同杀菌剂；抑制率；回归方程中图分类号：s481 文献标识码：a草坪弯孢霉叶枯病是由弯孢霉属（curvularia spp.）引起的真菌性病害[1-5]，是大连市绿化草坪上发生较严重的草坪病害之一，该病降低了草坪的实用价值及观赏价值等，致使禾草早衰和草坪毁坏，该病发生于高温高湿季节，病菌随风雨传播，容易流行[6-9]，为筛选高效的杀菌剂应用于生产中，笔者在室内进行了毒力测定，现将结果整理如下。
1 材料与方法1.1供试药剂25%三唑酮wp （河南省中原农药化工有限责任公司），50%福美双wp（山东利邦农化有限公司），25%敌力脱ec（先正达（中国）投资有限公司），70%代森锰锌wp（鹤壁陶英陶生物科技有限公司），5%速保利wp（日本住友化学工业株式会社）1.2试验方法在无菌条件下，扩繁草坪弯孢霉叶枯病病菌5盘，培养7d备用。
本试验设置26个处理，重复3次，以无菌水为对照。
在无菌条件下用无菌水将25%三唑酮wp稀释成100，400，800，1600，3200倍液；50%福美双wp、25%敌力脱ec、5%速保利wp分别释成250，500，1000，2000，4000倍液； 70%代森锰锌wp释成500，1000，2000，4000，8000倍液，待用。
杀菌剂的毒力测定和
但近代随着新型内吸杀菌剂的发展，对杀菌剂的生物筛选
逐渐由经典的离体筛选趋向活体筛选。 因为它不仅模拟田间实际，同时可以防止那些在离体平板 上无效，而必须在植物活体上方显示活性的化合物漏筛。 但活体筛选涉及的因素较多，对寄主植物、试验条件要求
较高，如光照、湿度、温度，为控制病原菌与寄主相互作用的
条件，必须有适合的温室，费工耗资都较大。 离体测定能反映化合物毒力的本质和程度，方法简便，为 研制新农药不可缺少，但它存在有一点缺点，应该和温室活体 的盆栽试验结合起来。
过试验确定其药效的好坏，经济效益的高低，
也就是说，田间试验是确定一种药剂在生产 上有无实用价值的主要方法。 田间实验的具体方法可参考《农药药效 试验的设计与分析》一书，防治效果可用以 下公式计算。
一，活性效应显现较快，缺点是有时与活体测
定结果不一致，有时会漏筛或误筛，如用粉锈
宁处理大麦白粉病菌，离体测定不仅分生孢子
能萌发且能形成吸器，但此药在活体上却表现
高效。所以初筛手段不采用平板法，采用盆栽
法，即病原---寄主植物组合法。
2．盆栽方法
在温室内进行的，具体方法随各种不同病害
而异，例：小麦赤霉病采用分生孢子 --- 幼苗
抑制百分率=50%，机率值=5
将 5 代入回归方程，然后求其反对数，即
LD-P-Line（剂量对数---机率值直线）。
ED50 可以作为多种药剂对同一病菌等效剂 量的毒力比较，在一定的范围内可以用它来 衡量一种药剂对病原菌毒力的大小，但不能 做为田间防治的实际指标。
三、田间试验
室内筛选的药剂必须进行田间试验，通
（3）生长速率测定法
即在琼脂培养基中加入药液，冷凝后接
菌的方法，用木塞钻孔器切取正常培养基上
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17
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 B、湿度：真菌孢子一般要求在水滴 中才能萌发，但也有少数真菌孢子， 如白粉病菌的分生孢子，在相对湿度 很低的情况下也能萌发。
1.4
18
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 C：光照：光照对多数真菌孢子萌发 的影响不大，但对某些真菌孢子有刺 激或抑制作用，如光照可刺激水稻黑 粉病菌厚垣孢子的萌发，抑制小麦秆 锈病菌夏孢子的萌发。
2.
26
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
药剂的配制 水溶性药剂直接用水溶解，其它药剂 选用合适的有机溶剂（甲醇、丙酮、 二甲基亚砜等）溶解，再用0.1%的吐 温80水溶液稀释，设置5~7个浓度， 有机溶剂最终含量不超过2%
4.
28
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
调查 当空白对照孢子萌发率达到90%以上 时，每重复了随机观察3个以上视野， 调查孢子总数不少于200个，分别记 录萌发数和孢子总数。
4
一、杀菌剂毒力测定方法
1、孢子萌发法
(spore germination method) 快速。广泛用于保护剂的测 定 此法适用于抑制病菌能量合 成系统，而使孢子不能萌发 的杀菌剂。
5
一、杀菌剂毒力测定方法
玻璃器皿的处理 清洁：以洗液浸泡数十分钟,用自来水 冲洗, 用蒸馏水清洗,防尘干燥. 载玻片保存于70%的酒精溶液内.
多菌灵对镰刀菌及由镰刀菌引起的赤
霉病、恶苗病的室内毒力测定和田间 药效比较一致。 但多菌灵在室内测定对由镰刀菌引起 的棉花枯萎病效果较好，而田间多菌 灵对棉花枯萎病效果较差。
3
第三章 杀菌剂毒力测定
三环唑（黑色素合成抑制剂）在室内测是 无效的。 嘧啶胺类杀菌剂（嘧菌胺）室内对灰霉病 孢子萌发没有抑制作用（300μL/ ml）， 但在植物上(1μL/ ml)，对灰霉病防效较好。 (该类药剂能抑制病菌甲硫氨酸的生物合成 和细胞壁降解酶的分泌，从而影响病菌侵 入寄主植物．)
2
35
一、杀菌剂毒力测定方法
2
.3结果检查及其表示方法 十字交叉测2个直径，以其平均值代 表菌落大小。
处理菌落直径 菌饼直径 抑制生长率 1 100 % 对照菌落直径 菌饼直径
36
一、杀菌剂毒力测定方法
3
滤纸片附着法(adsorption technique) 此法是将真菌孢子悬浮液用适当方法 附着在灭菌的滤纸片上，使其接触一 系列不同浓度的药剂，放在一定条件 下培养一定时间后，观察菌丝生长情 况。
2
33
一、杀菌剂毒力测定方法
.2 接种病原菌 菌饼接种法：Φ 0.4cm的打孔器打出 菌饼，用接种针或镊子放入含毒培养 基的中央。
2
34
一、杀菌剂毒力测定方法
.2 接种病原菌 划线接种法：用接种针沾取病菌孢子 液在培养基上划一直线进行接种，培 养一段时间后，测量菌丝伸向直线垂 直方向的长度。
1.1
6
一、杀菌剂毒力测定方法
液剂的附着 A、混合滴加 将供试药剂与孢子悬浮液混合滴加于 载玻片上。对水溶性药和稳定的悬浮 剂可得到正确的结果。对于非水溶性 药剂，因沉降快而不易获得正确结果。 简单迅速，适于大规模初筛。测得结 果一般偏高。
1.2
7
一、杀菌剂毒力测定方法
B、定量滴加药膜法
1.5
对照萌发率 处理萌发率 抑制萌发率 100 % 对照萌发率
24
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
试验靶标 易产生孢子,便于镜检,如稻瘟病菌,梨 黑星病菌等.在培养基上培养,或将病 组织保湿培养,待产生孢子后备用。
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子浓度可用计数器测定
纽鲍尔（Neubauer）血球计数器。
边长为0.05mm的小方格，深度为
0.1mm
16
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 A、温度：各种真菌孢子萌发的最适 温度不同。适于低温的孢子，如小麦 黑穗病菌的厚垣孢子，温度超过 21~22℃ 就不能萌发。
一、杀菌剂毒力测定方法
4
扩散法：农用抗菌素效价测定 B、重量单位，将纯净的抗菌素直接 作为抗菌素效能的衡量单位，即1µg 相当于于1个单位。例如，纯净的1mg 链霉素含有1000个单位。
43
一、杀菌剂毒力测定方法
4 扩散法： 滤纸片法：药剂加于一定大小的 圆形滤纸片上。 孔碟法：在培养基上打孔或留孔， 药液加于此孔内。 滴下法：利用注射器、毛细管、 移液管等将药液直接滴加于培养 基上。
3.
27
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
药剂处理 使药液与孢子悬浮液在小试管中等量 混合均匀。用微量加样器吸取上述混 合液滴到凹玻片上，然后架放于带有 浅层水的培养皿中，加盖保湿培养。 每处理不少于3次重复。
定量滴加药液（用水或有机溶剂均
可），形成均匀的药膜，再滴加孢子 液。 许多有机溶剂（丙酮、乙醚）表面张 力小，不易形成均匀的药膜，因此， 应采用凹玻片。防尘条件下干燥。
8
一、杀菌剂毒力测定方法
C、装置喷雾
利用精确喷雾装置将药液喷于载玻片
上，干燥后滴加孢子悬浮液。
9
一、杀菌剂毒力测定方法
1.4
21
一、杀菌剂毒力测定方法
有些病菌在蒸馏水中萌发不好，可加
入某些促进物质。许多病菌孢子，按 10毫升孢子液加入0.1%葡萄糖溶液 0.01毫升，可使孢子萌发整齐。 玉米小斑病菌孢子，适当加入一点玉 米苗的新鲜汁液，在26℃下2h，孢子 萌发率高，整齐。
22
一、杀菌剂毒力测定方法
调查方法 一般病菌培养20~24小时即可镜检。 一般在100~200倍下镜检，每处理随 机检查200个孢子。 孢子萌发标准：芽管大于孢子短半径 即算萌发。 或以孢子囊产生游动孢子为萌发标准， 如马铃薯晚疫病菌。
1.5
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一、杀菌剂毒力测定方法
调查方法 对照萌发率至少大于80%，低于80% 应重做。
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一、杀菌剂毒力测定方法
1.3孢子悬浮液的配制
D、病菌培养条件
高温、低温或高低温交替有时可促进
孢子的产生。一般半知菌在有光照的 条件下易产生孢子。但有的病菌在无 光下易产生孢子。
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一、杀菌剂毒力测定方法
1.3孢子悬浮液的配制
配制：一般将已培养好的菌种（斜面
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或三角瓶培养）加入无菌水，用接种 环在表面轻轻摩擦，使孢子悬浮于水 中，然后用双层纱布过滤，除去菌丝 体和培养基碎块。最好在1000r/min 的离心机上用无菌水洗涤三次。 一般规定孢子的浓度最好是5万/ml。 10*10观察时，每个视野约有35个。
1.
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Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
孢子悬浮液配制 将培养好的病原真菌孢子用去离子水 从培养基或病组织上洗脱、过滤、离 心（1000r/min）5min，倒去上清液， 加入去离子水，再离心。最后用去离 子水将孢子重悬浮至每毫升105~107 个孢子，并加入0.5%葡萄糖溶液。
2
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一、杀菌剂毒力测定方法
生长速率法 病菌易培养，菌丝生长快，不易产生 孢子。 棉花炭疽、红麻炭疽、小麦赤霉等病 菌具有生长快速、整齐、平伏的特点， 有利于此法测定。
2
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一、杀菌剂毒力测定方法
.1 含毒培养基的制备 一般以1ml药液加入 9ml培养为宜,这 样的比例不会影响培养基凝固. 对挥发性强、受热易分解的药剂应注 意培养基的温度，最好当培养基冷却 到50℃左右时再加入药剂。
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一、杀菌剂毒力测定方法
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扩散法 管碟法： 在试验平面上放4个牛津杯（外径8mm， 内径6mm，高10mm）。用移液管将已 知浓度的标准液和不同浓度的待测液 移圆筒内，在适温下培养，让其形成 抑菌圈。测其直径。
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一、杀菌剂毒力测定方法
4
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扩散法：农用抗菌素效价测定 抗菌素效价的衡量单位分两类： A、稀释单位，将1mg抗菌素配成溶液， 在一定条件下进行稀释，对某一细菌 能抑制其生长的最高稀释度，即为1mg 抗菌素所含的单位。如1mg青霉素，在 一定条件下稀释3600倍能抑制白色念 球菌的繁殖，则1mg青霉素含有3600单 位。
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一、杀菌剂毒力测定方法
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滤纸片附着法 定性滤纸灭菌（130℃，1h），7080%的酒精20-30分钟， 滴加孢子悬 浮液，无菌干燥，浸入药液中10分钟， 放入培养基上培养。
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一、杀菌剂毒力测定方法
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扩散法（抑菌圈法,detection of inhibition zone） 基本原理是在已接种的琼脂培养基上 加少量的抗菌物质，使其接触培养基 和病原菌，经一定时间的培养后，接 触部分的周围由于抗菌物质的扩散而 产生抑菌圈。 扩散法广泛用于医用和农用抗菌物质 的筛选和抗菌性物质有效成分的定量
1.4
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一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 D：空气：孢子萌发多需要空气，所 以水滴表面的孢子比沉在水滴中的萌 发好。但玉米黑粉病菌孢子萌发需要 15%的CO2。