杀菌剂联合毒力测定演示文稿
7种杀菌剂对寄生疫霉菌的毒力测定试验
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｇｒ ｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ
７种杀菌剂对寄 生疫霉菌 的毒 力测定试 验
王 芳 ，王 莹 ，岑 宗泽 ，陈文胜 ，何 丽烂
（佛 山科学技术学 院，广东佛 山 ５２８０００）
摘 要 ：旨在鉴 定 出潺菜病叶病原 菌和 筛选 出防治寄生疫霉（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ Ｄａｓｔｕｒ）的最佳 药
它 含 有 大量 维 生 素和 矿 物 质 ，有清 热 解 暑 ，滋 补 强 身 ， 抑 制 疾 病 等 功 效 ［１］。 因此 ，潺 菜 近 年 来 的产 量 逐 渐 增 加 ，潺 菜 的 主 要 病 害 之 一 寄 生 疫 霉 （Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｍｓｉｔｉｃａ）的危 害 也 随之 加重 ，严重 影 响 了潺 菜 的产 量 和 经 济效 益 。寄 生疫 霉 寄生 范 围广泛 ，包 括 番茄 、茄
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ａｉｍ ｏｆ ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒ ｉｍｅｎｔ ｉｓ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｇｙｎｕｒａ ｃｕｓｉｍｂｕａ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎ ｏｕｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄｅ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｅａ Ｄａｓｔｕｒ．Ｔｈｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆＧｙｎｕｒａ ｃｕｓｉｍｂｕａ ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒ ｉｆ ｉｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆ ｉｅｄ ａｓＰｈｙｔｏｐｈｔｂｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ Ｄａｓｔｕｒ． Ｓｅｖｅｎ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｉｈｅ ｓｅｖｅｎ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ ｏｎ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ Ｄａｓｔｕｒ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ｔｏｘｉｃ ｍｅｄｉｕｍ ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ：ａｆｔｅｒ ４８ ｈ， ０ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｔｈａｌｏｎｉｌ ｗａｓ １３．６０ ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｉｎｄｅｘ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｙ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｖｅｒｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ； ｜５０ ｏｆ ｓａｎｄｏｆａｎ ａｎｄ ｍａｎｃｏｚｅｂ ｗａｓ １ ６．９９ ａｎｄ ２８．６２ ｍｇ／Ｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ， ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｓｉｇｎｉｆ ｉｃａｎｔ；ＥＣｓ０ ｏｆ ｍｅｔａｌａｘｙｌ ｍａｎｃｏｚｅｂ，ｐｒｏｐａｍｏｃａｒｂ ａｎｄ ｄｉｍｅｔｈｏｍｏｒｐｈ ｗａｓ ５６．２３，５７．１６ ａｎｄ ６０．７１ ｍｇ／Ｌ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ， ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｍｏｎ； ０ ｏｆ ｓｏｄｉｕｍ ｄｉｃｈｌｏｒｏｉｓｏｃｙａｎｕｒａｔｅ ｗａｓ ３ １９．２１ ｍ Ｌ，ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｙ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｐｏｏｒ．Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｙ ｅｆｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｂｅｔｗｅｅｎ ２４ ｈ ａｎｄ ４８ ｈ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ．ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｔｈａｌｏｎｉｌ ｏｎ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ Ｄａｓｔｕｒ ｉｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｓｅｖｅｎ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｇｙｎｕｒａ ｅｕｓｉｍｂｕａ；Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｐａｒａｓｉｔｉｃａ；ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｄｅｔｅｒ ｍ ｉｎａｔｉｏｎ
实验5 除草剂与杀菌剂毒力测定
×100%
注：菌饼直径为5mm
抑制率 机率值 80.1 5.8452 55.9 5.1484 53.7 5.0929 38.7 4.7129 30.1 4.4785 19.4 4.1367
剂量 400 200 100 50 25 12.5
剂量对数 2.6 2.3 2 1.7 1.4 1.1
机率值
毒力回归方程1
缺点： ① 对供试菌种要求较严格，病菌要易于培养，生长较快且边缘 整齐、产孢子缓慢，而且是农业生产上重要的病原菌； ② 对供试药剂要求，有一定的耐热性，遇热不易分解。
多菌灵（carbendazim）对小麦赤霉病菌的毒力测定
试验目的：掌握生长速率法测定杀菌剂毒力。 • 供试菌株：
小麦赤霉病菌（Fusarium graminerarum）敏感 菌株2021和抗性菌株JT04。
➢ 利用有害生物（靶标生物，如昆虫、螨类、病菌、线虫、杂 草等）对作用物的反应评价化合物生物活性的基本方法 ---陈年春“农药生测技术”
生物测定已成为研究 作用物、靶标生物 和反应强度三者关系 的一项专门技术
生理活性 物质
靶标生物 虫、草、菌等
反应程度
杀菌剂的毒力测定
杀菌剂生物测定流程
药剂毒力测定； 定性定量分析； 防治效果测定；
除草剂的毒力测定
几个概念
1. 抑制中浓度：指抑制50%测定指标时除草剂的浓度， 需采用毒力回归方程的方法计算；
2. 最高无影响计量：不影响作物生长发育的最高剂量， 是除草剂对作物是否有影响的剂量分界线；
3. 相对毒力指数：除草剂A的相对毒力指数=标准除草 剂的IC50/除草剂A的IC50；
4. 生长抑制率和抑制指数
注意事项： 应先加药液再加 培养基（1:9）； 对一些受热易 分解的药剂则要 待培养基冷却到 50度左右时再加入。
杀菌剂的毒力测定和
第十页，编辑于星期二：三点 五分。
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杀菌剂的毒力测定和
但近代随着新型内吸杀菌剂的发展，对杀菌剂的生物筛选
逐渐由经典的离体筛选趋向活体筛选。 因为它不仅模拟田间实际，同时可以防止那些在离体平板 上无效，而必须在植物活体上方显示活性的化合物漏筛。 但活体筛选涉及的因素较多，对寄主植物、试验条件要求
较高，如光照、湿度、温度，为控制病原菌与寄主相互作用的
条件，必须有适合的温室，费工耗资都较大。 离体测定能反映化合物毒力的本质和程度，方法简便，为 研制新农药不可缺少，但它存在有一点缺点，应该和温室活体 的盆栽试验结合起来。
过试验确定其药效的好坏，经济效益的高低，
也就是说，田间试验是确定一种药剂在生产 上有无实用价值的主要方法。 田间实验的具体方法可参考《农药药效 试验的设计与分析》一书，防治效果可用以 下公式计算。
一，活性效应显现较快，缺点是有时与活体测
定结果不一致，有时会漏筛或误筛，如用粉锈
宁处理大麦白粉病菌，离体测定不仅分生孢子
能萌发且能形成吸器，但此药在活体上却表现
高效。所以初筛手段不采用平板法，采用盆栽
法，即病原---寄主植物组合法。
2．盆栽方法
在温室内进行的，具体方法随各种不同病害
而异，例：小麦赤霉病采用分生孢子 --- 幼苗
抑制百分率=50%，机率值=5
将 5 代入回归方程，然后求其反对数，即
LD-P-Line（剂量对数---机率值直线）。
ED50 可以作为多种药剂对同一病菌等效剂 量的毒力比较，在一定的范围内可以用它来 衡量一种药剂对病原菌毒力的大小，但不能 做为田间防治的实际指标。
三、田间试验
室内筛选的药剂必须进行田间试验，通
（3）生长速率测定法
即在琼脂培养基中加入药液，冷凝后接
菌的方法，用木塞钻孔器切取正常培养基上
实验十五杀菌剂混合毒力测定
三、操作步骤 (一) 孢子悬浮液配制
(二) 带菌培养板制作
水浴加热融化 44-45℃
加孢子悬浮液 混匀,迅速倒入培养皿中
带菌培养板
(三) 带药滤纸条放置
将4 条滤纸条放入药液（单剂或混剂）中浸泡一定时间后沥去多 余的药液，垂直交叉放入带菌平板，置于一定温度下培养，观察 菌落抑制区域的生长形状，并测定大小。
实验十五 杀菌剂混合毒力测定
一、试验目的 学习滤纸条交叉放药法判定杀菌剂混用对生物的影响 了解杀菌剂混合后的生物效应
二、试验原理相加源自药剂 A + 药剂 B
增效
拮抗
本实验通过滤纸条交叉放药法，来简易地判别任何 两种不同药剂混合对病菌生长的影响。
相加
增效
滤纸条交叉放药法对生物的影响
拮抗 互不干扰
七种杀菌剂对番茄早疫病病原菌室内毒力测定
七种杀菌剂对番茄早疫病病原菌室内毒力测定方案，为番茄早疫病的防治提供科学依据，制定出切实可行的防治措施。
1 材料与方法1.1材料1.1.1供试菌株番茄早疫病病原菌株采集于豫北地区番茄种植大棚中的病果，经组织分离、纯化获得病原菌［10］。
1.1.2试验药剂50%异菌脲（病可丹）可湿性粉剂为山东鑫星农药有限公司生产，50%氯溴异氰尿酸（比秀）可湿性粉剂为以色列海法作用保护有限公司生产，80%丙森锌（好锌泰）水分散粒剂为陕西美邦农药有限公司生产，10%苯醚甲环唑（病可丹）水分散粒剂为山东鑫星农药有限公司生产，50%醚菌酯（信赖）可湿性粉剂为陕西美邦农药有限公司生产，32.8%烷基腈氧基醌（凯银）水分散粒剂、35%腐霉利悬浮剂为宜宾川安高科农药有限责任公司生产。
1.2方法1.2.1杀菌剂单剂毒力测定将7种杀菌剂单剂与PDA培养基充分混匀，配制成0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00mg/L系列浓度的平板。
采用菌丝生长速率法测定，用5mm打孔器在培养6d后的番茄早疫病菌平板上打孔，用镊子取菌丝面向下接种在含药PDA培养基上，每皿1个菌碟，28℃倒置培养，以去离子水作为对照组，每个处理设3次重复，于接种后第3天检查菌丝生长情况并用十字交叉法测量菌落生长直径，通过菌丝生长抑制率值和各药剂浓度对数值间的线性回归性进行分析，求出各菌株EC50并计算相对抑菌率。
抑菌率计算方法为每个菌落使用十字交叉法测量2次，取其平均数作为菌落的大小。
计算7种杀菌剂对菌丝生长的抑制百分率，公式如下：菌落增长直径=菌落测量直径-菌盘直径抑菌率=（对照菌落增长直径-含药培养基上菌落增长直径）/对照增长菌落直径x100%[11]以浓度对数为横坐标（x）,相对抑制率几率值为纵坐标（丫），求出各药剂对供试菌株的毒力回归曲线方程y=a+bx、相关系数r与有效抑制浓度（EC50）。
根据EC50分析比较不同杀菌剂对供试病菌菌丝生长的影响[12]。
5种杀菌剂对桃炭疽病菌的毒力测定
中国园艺文摘 2018年第3期5种杀菌剂对桃炭疽病菌的毒力测定胡晓颖，赵 杰（上海市浦东新区农业技术推广中心，上海 201201）摘 要：以桃炭疽病菌为试验菌，采用生长速率法，测定5种杀菌剂对病菌的毒力，结果表明：咪鲜胺锰盐、氟啶胺、多菌灵、苯醚甲环唑和吡唑醚菌酯5种杀菌剂都具有较高的毒力。
咪鲜胺锰盐与氟啶胺的联合毒力测定结果表明：咪鲜胺锰盐和氟啶胺按3∶1和6∶1复配表现为增效作用，咪鲜胺锰盐和氟啶胺按1∶6、1∶3和1∶1复配表现为相加作用。
关键词：杀菌剂；桃炭疽病菌；毒力测定水蜜桃是我国的主要果品之一，也是上海市浦东新区的主要果树，常年种植面积0.2…万余hm2。
桃炭疽病是水蜜桃的主要病害，能侵染桃树枝梢、叶片和果实[1]，在上海市浦东新区以秋季叶片受害最重，造成叶片穿孔或枯焦，严重时导致大量叶片枯死和早落，影响花芽和结果枝充实，从而影响翌年结果产量。
科技工作者在桃树炭疽病菌生物学特性和防治方面开展大量工作[2-5]，但不同地区和寄主存在差异。
本文以当地桃炭疽病菌为试验材料，通过开展杀菌剂的毒力测定，筛选出高效低毒药剂，为防治该病害提供技术参考。
1 材料与方法1.1 供试病菌从浦东新区盛果期桃树病叶上分离获得桃炭疽病菌[Colletotrichum gloeosporioides…(Penz.)…Sacc.]，病菌于PDA培养基上25℃培养5…d后用于毒力测定。
1.2 供试药剂50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂(江苏辉丰农化股份有限公司)、50…g/L氟啶胺悬浮剂(浙江石原金牛农药有限公司)、50%多菌灵悬浮剂（江苏龙灯化学有限公司）、30%吡唑醚菌酯悬浮剂(深圳诺普信农化股份有限公司)、10%苯醚甲环唑水分散粒剂(江苏丰登农药有限公司)。
1.3 试验方法1.3.1 毒力测定方法…采用生长速率法[6]：将以上第一作者简介：胡晓颖(1979-)，女，农艺师；从事作物栽培研究。
通讯作者：赵 杰，硕士，高级农艺师。
5种杀菌剂对水稻恶苗病病菌的毒力测定
－ １２２ －上海农业科技 ２０１５－１５种杀菌剂对水稻恶苗病病菌的毒力测定李 斌 赵 杰（上海市浦东新区农业技术推广中心 ２０１２０１）黄玉人 （上海市浦东新区农业服务中心 ２０１２０１）水稻恶苗病（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ Ｓｈｅｌｄ）又名徒长病、白秆病，在水稻苗期至穗期均可发生，在全国稻区普遍发生。
由于浦东新区水稻栽培模式正处于人工插秧向机械插秧转变的过渡阶段，再加上主栽品种的抗病性不强，导致恶苗病急剧上升，并已成为浦东新区水稻上的主要病害，苗期自然发病率高达１５％～２０％，少数重病田块甚至毁耕重种。
为有效防治该病，笔者选用５种杀菌剂对水稻恶苗病病菌进行了抑菌试验，以期为水稻生产提供高效低毒的杀菌剂。
１ 材料与方法１．１ 供试病原菌水稻恶苗病病菌从浦东新区惠南镇发病的水稻田中采集，经室内组织分离、纯化，病原菌于ＰＤＡ培养基上培养５ｄ后备用。
１．２ 供试药剂供试药剂为９８％恶霉灵原药（吉林省延边绿州化工有限责任公司，简称恶霉灵）、８０％代森锰锌可湿性粉剂（江苏省南通市德斯益农化工有限公司，简称代森锰锌）、６５％代森锌可湿性粉剂（上海生农生化制品有限公司，简称代森锌）、５０％多菌灵可湿性粉剂（上海升联化工有限公司，简称多菌灵）、１０％二硫氰基甲烷乳油（广东植物龙生物技术有限公司，简称二硫氰基甲烷）。
１．３ 试验方法采用生长速率法，测定５种杀菌剂对水稻恶苗病病菌的毒力。
根据试验需要，先将各供试药剂配制成５～７个有效成分浓度梯度的药液；于灭菌好的４９ ｍＬ ＰＤＡ培养基内，加入１ ｍＬ配好的药液，充分摇匀，分装到３个直径为９ ｃｍ的培养皿中，冷却凝固；将直径为１ ｃｍ的菌丝块放在含药培养基中央，每皿１块，于２５ ℃培养箱内培养５ ｄ，测量菌落直径，计算抑制率，以各药剂有效成分在培养基中的浓度，为测试浓度计算回归方程和抑制中浓度ＥＣ５０。
２ 结果与分析试验结果表明，５种杀菌剂对水稻恶苗病菌菌丝生长的抑制作用差异较大，二硫氰基甲烷和多菌灵的抑制作用最高，ＥＣ５０分别为３．５１４８、６．８８１７ ｍｇ／Ｌ。
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示例：SCF1#对4种供试菌株的毒力测定
SCF5#对4种供试菌株的毒力测定
抑制几率值
福美双对4号菌毒力曲线
y = 1.3151x + 4.3449 R2 = 0.9694
6.0000
5.0000
4.0000 3.0000
2.0000 -1.000 0.000 1.000 浓度对数
2.000
多菌灵对4#菌的毒力测定
杀菌剂联合毒力测定演示文稿
优选杀菌剂联合毒力测定
混配的目的
扩大防治谱，兼治多种病害；
两种内吸性 杀菌剂能否
混配？
延缓抗药性的产生和发展；
混配的两种杀菌剂的选择：保护＋内吸；？
协同增效 降低成本
无交互抗药性的两种杀菌剂以 相互减少选择压来延缓抗药性
内吸性杀菌剂和保护剂混配 比例的根据
靶标真菌的性质特点； 两种药剂各自的药效持效期； 增效活性和防治成本
y = 2.943ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱx + 4.0438 7.0000 R2 = 0.9953
抑制几率值
6.0000
5.0000
4.0000
3.0000 0.000
0.500 浓度对数
1.000
SR＜0.5
颉抗
共毒系数法（1960年提出）
• 理论毒力指数A（Th)=Σ（某药剂的毒力指数×在 混剂中该药剂有效成分的百分率）
• 混剂的共毒系数C=（实际毒力指数A(OB)/理论毒 力指数A(TH) ）×100
• C大于120时为增效作用，小于80时为拮抗作用， Ｃ＝ 80～120为加和作用 。
混合协同增效作用
根据杀菌剂混合后的生物活性，可表现为： 加和作用；颉抗作用；协同增效作用 两种药剂各混配中力争增效，避免颉抗；同时能够 要求可延缓抗药性发展和扩大防治谱， 甲霜灵＋代森锰锌（加和） 噁唑烷酮＋代森锰锌（增效）＋霜脲氰（增效） EC50，并经过温室和田间试验验证。
Wadley 方法
返回
试验方法（采用孙云沛的共毒系数计算方法）
理论毒力指数A=Σ（某药剂的毒力指数×在种衣 剂中该药剂有效成分的百分率）
种衣剂的共毒系数C=（实际毒力指数/理论毒力 指数 ）×100
C大于120时为增效作用，小于80时为拮抗作用。 种衣剂的增效倍数=（混剂的实际毒力指数/混剂
理论毒力指数）-1
EC50(TH)为混剂的理论值 EC50(OB)为混剂的实际观测值 SR：为相互作用程度 A、B、C是三种不同杀菌剂在混剂中的比例
A+ B+C
EC50(TH)＝
A
B
C
+
+
EC50(A) EC50(B) EC50(C)
SR＝
EC50(TH) EC50(OB)
SR＝0.5～1.5 加和
SR＝＞1.5 增效
• 混剂的增效倍数=（混剂的实际毒力指数/混剂理 论毒力指数）-1= C/100-1
示例：联合毒力的计算
同一组试验数据，大家采用上述两种不同 的联合毒力测定方法，结果有差异吗？
算一算！！
示例：杀菌剂及其混剂对西洋参种 苗上寄藏真菌的联合毒力测定
材料与方法 供试药剂
95%福美双、95%恶霉灵、 97%多菌灵、 97%咪鲜胺、95%甲基立枯磷原粉 SCF 1#、SCF4#、SCF5#（西洋参专用） SCF1#（3%甲霜灵、6%甲基立枯磷、6%代森锰锌混配制成） SCF4#（2%咪鲜胺、9%多菌灵、7%福美双混配制成） SCF5#（3%恶霉灵、2%甲霜灵、10%福美双混配制成）