实验需要的抗体如何选择一抗或二抗
一抗选择：
（1）确定抗体的名字，注意中英文名字、别名、亚型等信息。
（2）确定您的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，或者是FACS。的每种抗体说明书都会列
出抗体经验证过适用的实验类型，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体
不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种实验验证。
（3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，Rat等。我们的抗体说明书都列出该抗体验证
过的适用物种，可根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验需要的抗体。
（4）样本抗原蛋白的结构性质。了解样本抗原蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，
待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性，蛋白空间构象的改变，会影
响抗体的免疫亲和反应。
（5）单多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度
相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染
色（可以通过封闭等避免）。
二抗选择：
（1）种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买
抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。免疫组化，WB二抗主要选择HRP，Biotin标记的二抗，而免疫荧光染色可按实验需要选择不同荧光素标记的二抗，如FITC、
Cy3、PE等。
教你如何选择二抗
*教你如何正确选择二抗 通常情况下，某一特定的实验中可能同时有几种二抗可供选择，如何能选择到最适合该实验的二抗，需要综合以下几个方面进行考虑： ●一抗的物种来源 一抗是在什么物种来源的，相应的二抗也要是抗该物种的抗体。例如，如果一抗是在小鼠体内制备的，那么你就应当选择抗小鼠的二抗，如果一抗是在兔体内制备的，那么二抗就应当是抗兔的抗体。至于二抗本身是在什么动物中制备的对二抗的质量并无明显的影响。 ●一抗是属于哪个类或亚类 二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体. 单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品列表中列出，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM，或是抗小鼠IgG抗体。 如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。 如果你不知道一抗是哪一类别或亚类，那么抗小鼠IgG是一个不错的选择，因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免疫球蛋白。
二抗的特异性 下面总结了几种具有不同特异性的二抗：针对整个抗体分子（H＋L）具有特异性：如抗IgG(H+L)，此类抗体既可以与抗体的重链结合也可以与轻链结合，即与抗体分子的Fc，F(ab’)2/Fab部分（见图5）均可反应，抗IgG(H+L)也可以与其他免疫球蛋白家族反应（如IgM和IgA），因为所有的免疫球蛋白都具有相同的轻链（kappa链或lambda 链）。 针对Fab片段具有特异性：这类抗体与重链轻链均可以结合，由于它们可以与轻链反应，它们同时也已和具有相同轻链的其他种类的免疫球蛋白反应。 这对Fc片段或重链具有特异性：这类抗体和重链的Fc部分反应，一次它们是类别特异性的（即gamma链特异性抗体只与IgG反应，mu链特异性抗体只识别IgM，依此类推）。 轻链（kappa，labmda）特异性：与所有类别的抗体反应，因为所有类别的抗体均具有相同的lambda链或kappa链。 经过吸附处理的二抗（cross-absorbed）：不同来源的免疫球蛋白含有相似的结构，抗一个物种的抗体可能与其他物种发生交叉反应，一次有些二抗经过了动物或人类IgG吸附处理，以减少非特异性背景。例如，如果是小
抗体纯化的方法有哪些
抗体纯化的方法有哪些？ 抗体制备出来之后，需要进一步纯化得到纯的多抗或单抗，既有利于保存也有利于排除杂蛋白对结果的影响。常规用于纯化的材料是腹水和细胞培养上清，而通常经过免疫制备的 硫酸铵沉淀法： 基本原理：高浓度的硫酸铵通过与球蛋白竞争水分子破坏蛋白表明的水化膜，降低球蛋白的溶解性，是分离免疫球蛋白的常用方法，而且不同的免疫球蛋白适宜的硫酸铵浓度也稍有差别，一般用来分离抗体的硫酸铵饱和度在33~50%。 适用于：鼠抗所有亚类、其他种属抗体、任何种属的IgM、IgG、IgA 基本操作： 1.过滤、离心腹水或者培养上清得上清； 2.加入饱和硫酸铵至终浓度45%，静置沉淀蛋白； 3.沉淀蛋白用最小体积PBS或硼酸盐缓冲液溶解，用PBS或硼酸盐缓冲液透析除盐； 4.过聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶柱，PBS或硼酸盐（含0.02%叠氮钠）缓冲液洗脱； 5.电泳检测分子量大小，分光光度法测定抗体浓度； 6.抗体保存浓度在0.1-30 mg/mL适宜，-20℃保存不超过一个月，避免反复冻融。 亲和层析法 基本原理：基因工程改造的protein A和protein G能特异性结合哺乳动物IgG的Fc区段，将protein A和protein G结合到柱料上，通过亲和层析的方式，可将IgG及其亚类与片段纯化出来。 成员介绍：protein A分离自Staphylococcus aureus的细胞壁，分子量42 kDa，由spa 基因编码，具有五个同型的免疫球蛋白结合结构域，每个结构域由三个α螺旋构成。 protein A的B结构域
protein A的各个结构域 protein A可结合多数免疫球蛋白的Fc段（尤其是人的IgG1、IgG2、IgG4，豚鼠，猕猴，鼠类IgG2a、兔）以及人VH3家族的Fab段。基因工程改造的protein A通常使用大肠杆菌作为表达宿主，表达产物仍含有五个Fc结合结构域。对其结构上的改造主要是为了增加与多孔性材料的偶联性能，也有的改造protein A含有四个或六个同型Fc结合结构域，另外结构域数目较少的protein A能得到更好的抗体纯化效果。 protein G分离自G Streptococcus的细胞壁，分子量65 kDa，由spg基因编码，可结合抗体的Fc段、Fab段以及血清中的白蛋白。基因工程改造的protein G去掉了与白蛋白的结合位点仅仅保留Fc结合结构域，其结合力较protein A更强。 protein G的B结构域 protein G的各个结构域 还有一种protein A/G蛋白，是基因工程改造产物，是将protein A的4个Fc结合结构域与protein G的2个Fc结合结构域融合表达得到的。protein A/G结合了二者的特性，能结合人和鼠的IgG所有亚型，不结合鼠的IgA、IgM。 ①proteinA亲和层析 适用于：人（IgG3除外）、兔、豚鼠、猪的抗体； 基本操作： 1.过滤、离心腹水或者培养上清得上清； 2.调节pH到8.0：腹水以10倍体积pH8.0 PBS稀释、培养上清用pH8.0 PBS透析或强氧化钠调节； 3.过proteinA琼脂糖凝胶柱，pH8.0 PBS洗杂； 4.柠檬酸缓冲液洗脱抗体（小鼠IgG1用pH6.5，IgG2a用pH4.5，IgG2b和IgG3用pH3.0），并注意收集管内需加入Tris缓冲液中和滴下的抗体溶液； 5.用PBS透析；
实验3-组合逻辑电路数据选择器实验
南通大学计算机科学与技术学院计算机数字逻辑设计 实验报告书 实验名组合逻辑电路数据选择器实验 班级_____计嵌151_______________ 姓名_____张耀_____________________ 指导教师顾晖 日期 2016-11-03
目录 实验一组合逻辑电路数据选择器实验 (1) 1.实验目的 (1) 2.实验用器件和仪表 (1) 3.实验内容 (1) 4.电路原理图 (1) 5.实验过程及数据记录 (2) 6.实验数据分析与小结 (9) 7.实验心得体会 (9)
实验三组合逻辑电路数据选择器实验 1 实验目的 1. 熟悉集成数据选择器的逻辑功能及测试方法。 2. 学会用集成数据选择器进行逻辑设计。 2 实验用器件和仪表 1、8 选 1 数据选择器 74HC251 1 片 3 实验内容 1、基本组合逻辑电路的搭建与测量 2、数据选择器的使用 3、利用两个 74HC251 芯片（或 74HC151 芯片）和其他辅助元件，设计搭建 16 路选 1 的电路。 4 电路原理图 1、基本组合逻辑电路的搭建与测量 2、数据选择器的使用
3、利用两个 74HC251 芯片（或 74HC151 芯片）和其他辅助元件，设计搭建 16 路选 1 的 电路。 5 实验过程及数据记录 1、基本组合逻辑电路的搭建与测量 用 2 片 74LS00 组成图 3.1 所示逻辑电路。为便于接线和检查，在图中要注明芯片编号及各引脚对应的编号。
图 3.1 组合逻辑电路 （2）先按图 3.1 写出 Y1、Y2 的逻辑表达式并化简。 Y1==A·B ·A =A + A·B=A + B Y2=B·C ·B·A = A · B+ B ·C （3）图中 A、B、C 接逻辑开关，Y1，Y2 接发光管或逻辑终端电平显示。（4）改变 A、B、C 输入的状态，观测并填表写出 Y1，Y2 的输出状态。 表 3.1 组合电路记录
实验三数据表的创建与管理
实验三数据表的创建与管理 一、实验题目 数据表的创建与管理 二、实验目的 要求学生熟练掌握使用SQL Server Management Studio和利用T-SQL语句进行数据表的创建和删除，并对数据表和表中的数据进行有效的管理。 三、实验内容 1、使用SQL Server Management Studio创建和删除数据表、修改表结构、更新数据。 2、使用T-SQL语句创建和删除数据表、修改表结构、更新数据。 四、实验项目 （一）表的创建 1、使用SQL Server Management Studio创建表 实验3.1在JXGL数据库中，使用SQL Server Management Studio建立S、C和SC三个表，其结构如下3-1~3-3所示。 表3-1 学生表S的结构
表3-3 选课表SC的结构 步骤如下： ①在“对象资源管理器”中单击“JXGL”前面的“+”号，选择“表”并右键单击，在弹出的快捷菜单中选择“新建表”命令，打开设计表字段对话框，如图3-1所示。 图3-1 设计表字段对话框 ②在设计表对话框中分别输入“列名”、“数据类型”和“允许NUll值”3个参数的值。 ③设计完表的字段后，单击“保存”按钮，弹出保存对话框，如图3-2所示，在输入表名称中更改表名；或者单击“关闭”按钮，弹出是否要保存更改的提示对话框，如图3-3所
示。 图3-2 保存对话框 图3-3 是否要保存更改的提示对话框 1、使用T-SQL语句创建数据库 实验3.2在学生管理数据库EDUC中，利用T-SQL语句创建数据表。表结构如下表3-4~3-10所示。 表3-4学生信息表Student_info的结构
数字电路实验报告——数据选择器
第八次实验报告 实验六 数据选择器 一、实验目的要求 1、 熟悉中规模集成电路数据选择器的工作原理与逻辑功能 2、 掌握数据选择器的应用 二、实验仪器、设备 直流稳压电源、电子电路调试器、T4153、CC4011 三、实验线路、原理框图 (一)数据选择器的基本原理 数据选择器是常用的组合逻辑部件之一，它有若干个输入端，若干个控制输入端及一个输出端。 数据选择器的地址变量一般的选择方式是： （1） 选用逻辑表达式各乘积项中出现次数最多的变量（包括原变量与反变量），以简 化数据输入端的附加电路。 （2） 选择一组具有一定物理意义的量。 （二）T4153的逻辑符号、逻辑功能及管脚排列图 （1）T4153是一个双4选1数据选择器，其逻辑符号如图1： 图1 （2） T4153的功能表如下表 其中D0、D1、D2、D3为4个数据输入端；Y 为输出端；S 是使能端，在S 是使能端，在 原SJ 符号
S =0时使能，在S =1时Y=0；A1、A0是器件中两个选择器公用的地址输入端。该器件的 逻辑表达式为： Y=S （1A 0A 0D +101D A A +201D A A +301A A A ） （3） T4153的管脚排列图如图2 图2 （三）利用T4153四选一数据选择器设计一个一位二进制全减器的实验原理和实验线路 （1）一位二进制全减器的逻辑功能表见下表： n D =n A n B 1-n C +n A n B 1-n C +n A n B 1-n C +n A n B 1-n C n C =n A n B 1-n C +n A n B 1-n C +n A n B 1-n C +n A n B 1-n C =n A n B 1-n C +n A n B +n A n B 1-n C （3）根据全减器的逻辑功能表设计出的实验线路图为图3： S 11D 3 1D 2 1D 1 1D 0 1Y
实验一数据库及基本表的建立
实验一数据库及基本表的建立 一、实验目的 1、掌握SQL SERVER的查询分析器和企业管理器的使用； 2、掌握创建数据库和表的操作； 二、实验内容和要求 1、练习使用SQL语句、企业管理器（Enterprise Manager）创建数据库； 2、练习使用SQL语句、企业管理器（Enterprise Manager）创建数据库表； 三、实验主要仪器设备和材料 1．计算机及操作系统：PC机，Windows 2000/xp； 2．数据库管理系统：SQL sever 2005； 四、实验方法、步骤及结果测试 题目1、创建数据库“学生情况”： 实现代码及截图： SQL语句 Create database 学生情况 查询分析器执行情况 ：SQL语句及执行结果截图显示 找到主数据文件和日志文件，观察大小，并给出截图。
题目2、将数据库“学生情况”改名为“student” SQL语句 EXEC sp_renamedb学生情况, student 查询分析器执行情况： SQL语句及执行结果截图显示 题目3、创建基本表 S表 含义字段名字段类型字段 宽度 说明学号Sno Char10主键，不允许为空姓名Sname char10不允许为空 性别Ssex char2取值为男或女
C表 Sc表： 创建各表的实现代码及截图：
查询分析器执行情况： SQL语句及执行结果截图显示
题目4*、用sql语句将C表中的ccredit改为整型，同样约束为0-20之间 题目5、用sql语句在S表中添加一格“备注”字段remark，变长字符型，长度30，并保存结果
Westernblot一抗和二抗的选择讲解学习
W e s t e r n b l o t一抗和二抗的选择
精品文档 Westernblot一抗和二抗的选择 抗体分类：根据重链恒定区的血清学类型，可将抗体分为IgM，IgG，IgA，IgD，IgE 五类，它们的重链分别为mu, gamma, alpha, delta, epsilon链。在上述每一类别中，按重链构造上的变异又可分为几个亚类，例如人的IgG可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4四个亚类。轻链分为两种类型，kappa链和lambda链，但每种抗体中只存在一种类型的轻 链。二抗：二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛，如western blot（通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质），ELISA（以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质，尤其是相应的抗原或抗体），免疫组织化学（检测组织中的特异性抗原），免疫细胞化学（通过免疫学方法检测细胞的抗原组成），流式细胞术（通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞）及免疫沉淀（通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原）。二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。 二，如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗 广义上是指专门和进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，**捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。**捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。【一抗的类别亚型】 二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。**捷能为您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu） Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon） Antibody等。【二抗的种属来源】 一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而在一些特殊的实验里，如双标实验里，如果其中一个一抗是山羊来源的，一个是小鼠来源的，则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除
抗体工程重点总结
简答题 1.简述鼠源性单抗的改造原则及常见类型 a)改造原则：降低其免疫原性、尽量保持其亲合力 b)常见类型：人鼠嵌合抗体、CDR移植抗体、小分子抗体 2.噬菌体抗体库技术的主要流程及优点 a)噬菌体抗体库技术：借助噬菌体展示技术，将抗体V基因与噬菌体外壳蛋白基因 融合表达于噬菌体表面，从而构建噬菌体抗体库，然后通过筛选获得特异性抗体的 V区基因。 b)主要流程： i.扩增全套抗体基因 ii.构建合适的重组噬菌体表达载体 iii.转化大肠杆菌并保存 c)优点： i.省时省力 ii.筛选容量大 iii.直接得到抗体基因 iv.可制备人源抗体和其它难于制备的抗体 v.可原核表达 d)缺点： i.库容受转化效率限制：一般不超过1010 ii.一些抗体分子会抑制宿主菌生长 iii.具极高亲和力的抗体与抗原结合后，难以洗脱，造成丢失 3.简述基因工程抗体的各表达系统的优缺点 a)哺乳动物细胞表达系统： i.优点： ①. 具有完整的转录、翻译后加工及分泌机制，抗体能被准确子合成、加工和 分泌 ②. 具有完全糖基化功能和完善的重折叠机制，可表达形成良好活性的抗体分 子 ③. 可实现抗体的分泌表达 ④. 既可表达完整的抗体分子，也适合表达其它形式的小分子基因工程抗体 ii.缺点： ①. 构建周期长，操作繁琐 ②. 表达量相对低，成本较高 ③. 大规模生产受限 ④. 具潜在致癌性和病毒核酸的污染可能 iii.常用的宿主细胞 ①. 淋巴细胞：主要是小鼠骨髓瘤细胞SP2/0、NSO ②. 非淋巴细胞：常有的细胞有CHO、COS b)大肠杆菌表达系统： i.优点： ①. 遗传背景清楚 ②. 产量高：130—150mg／L
数字电路实验二
实验2 数据选择器功能测试及设计应用 王玉通信工程 2012117266 一、实验目的 1.掌握中规模集成数据选择器的逻辑功能及测试方法。 2.掌握数据选择器的工作原理及使用方法。 二、实验仪器设备与主要器件 试验箱一个；双踪示波器一台；稳压电源一台。 双4选1数据选择器74LS153；8选1数据选择器74LS151和75LS251. 三、实验原理 能够实现从多路数据中选择一路进行传输的电路叫做数据选择器。数据选择器又称多路选择器，是中规模集成电路中应用非常广泛的组合逻辑部件之一。它是一种与分配器过程相反的器件。它有若干个数据输入端，D0，D1，D2，……，若干个控制输入端A0，A1……和一个或两个输出端Q（或Q非）。当控制输入码A0，A1……具有不同数据组合时，将选择组合码所对应的二进制数Dx输出。由于控制输入端的作用是选择数据输入端的地址，故又称为地址码输入端。 目前常用的数据选择器有2选1、4选1、8选1等多种类型。本实验主要熟悉4选1和8选1数据选择器。 四、实验内容与结果 1.测试74LS153的逻辑功能。 电路如下图： 测试结果为： A0 A1 s1s2Q1 Q2 * * 1 1 0 0 0 0 0 0 1D0 2D0 0 1 0 0 1D1 2D1 1 0 0 0 1D 2 2D2 1 1 0 0 1D3 2D3 2.用多路选择器设计实现一个8421-CD非法码检测电路。使得当输入端为非法码组合时输出1，否则为0.二进制数与BCD码的对应关系如下。写出函数Y的表达式，并进行化简，然后画出电路图，接线调试电路，用发光二极管显示输出结果，观察是否与表2-2-5相符。设
如何选择二抗
如何选择二抗 抗体简介 抗体：是高等动物在抗原物质的刺激下由浆细胞产生的一类能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗体通常存在于血清合淋巴（组织液）中。 单克隆抗体及多克隆抗体：由单一克隆的细胞（通常是单一克隆的杂交瘤细胞）所产生的识别某一抗原表位的单一抗体；多克隆抗体是由多种细胞分别接触相应抗原而产生的多种抗体的总和，多克隆抗体抗原识别抗原的多个表位。 抗体结构：抗体是由四条肽链构成的“Y”形对称的分子，包括两条重链和两条轻链。在“Y”的尖端部位的氨基酸顺序在不同的抗体分子中差别很大，是负责与抗原进行特异性结合的区域，称为可变区，余下的区域则称为恒定区。 抗体分类 抗体分类：根据重链恒定区的血清学类型，可将抗体分为IgM，IgG，IgA，IgD，IgE五类，它们的重链分别为mu, gamma, alpha, delta, epsilon链。在上述每一类别中，按重链构造上的变异又可分为几个亚类，例如人的IgG可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4四个亚类。 轻链分为两种类型，kappa链和lambda链，但每种抗体中只存在一种类型的轻链。 二抗：二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛，如western blot（通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质），ELISA（以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质，尤其是相应的抗原或抗体），免疫组织化学（检测组织中的特异性抗原），免疫细胞化学（通过免疫学方法检测细胞的抗原组成），流式细胞术（通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞）及免疫沉淀（通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原）。二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。 二抗可以耦联有几种不同的标记，可以是酶，荧光素，或生物素。 抗体特异性产品 整个分子(H+L) 特 Affinity Purified Anti-BOVINE IgG (H&L) (GOAT) 异性抗体 Peroxidase Conjugated Anti-BOVINE IgG (H&L) (GOAT) Fluorescein Conjugated Affinity Purified Anti-BOVINE IgG (H&L) (GOAT) Fab 特异性抗体Peroxidase Conjugated Anti--HORSE IgG F(ab)2 (GOAT)
抗体保存知多少
抗体保存知多少 通常情况下，抗体经恰当保存和处理，大多数应能保持活性数月乃至数年。当然，不同类型抗体，其保存的方法也可能不一样，以下就抗体的保存，提供一些参考! 一、保存温度和条件 对于很多抗体而言，保存在-20℃是完全足够了，没有任何证据显示保存在-80℃会有更多的好处!分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤，以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次，如有剩余，可将剩余物保存于4oC. 在收到抗体时，在10,000 ×g 下离心20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液，并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10 μl; 等份越小，储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。 在大多数情况下，收到抗体时在4oC 下保存一至两周，然后再冷冻进行长期保存是可接受的，但也许腹水液是例外，它可能包含蛋白酶，因而应该尽快冻存。同样，遵照说明书上的建议是重要的。
大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1-2周的时间，所以是在4℃的条件下来完成的。 对于特殊的抗体，如酶、荧光素等偶联抗体、IgG3同型抗体等抗体的保存有其注意事项： 1、偶联抗体酶偶联抗体不应冻存，而应保存于4oC. 冻融不仅影响抗体结合能力，还会降低酶活性。无论偶联至荧光染料、酶还是生物素，偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹. 暴露于光线中将损害偶联物的活性。特别是荧光偶联物易受到光漂白影响，在实验的所有阶段都应避光。 2、IgG3的同型对照保存在4℃，避免冻起来。因为如果出现冻融过程，该抗体非常容易形成多聚体 二、用叠氮化钠防止污染 为了防止微生物污染，可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02% (w/v). 的终浓度。但是有时不能使用叠氮化钠，有以下两中情形：
实验二 数据选择器及其应用
实验二数据选择器及其应用 一、实验原理 数据选择器又叫“多路开关”。数据选择器在地址码（或叫选择控制）电位控制下，从几个数据输入中选择一个并将其送到一个公共的输出端。数据选择器又叫“多路开关”。数据选择器在地址码（或叫选择控制）电位的控制下，从几个数据输入中选择一个并将其送到一个公共的输出端。数据选择器的功能类似一个多掷开关，如图4－1所示，图中有四路数据D0～D3，通过选择控制信号A1、A0（地址码）从四路数据中选中某一路数据送至输出端Q。 图4－1 4选1数据选择器示意图图4－2 74LS151引脚排列 数据选择器为目前逻辑设计中应用十分广泛的逻辑部件，它有2选1、4选1、8选1、16选1等类别。 数据选择器的电路结构一般由与或门阵列组成，也有用传输门开关和门电路混合而成的。
二、实验目的 1、掌握中规模集成数据选择器的逻辑功能及使用方法； 2、学习用数据选择器构成组合逻辑电路的方法。 三、实验设备与器件 1、+5V直流电源 2、逻辑电平开关 3、逻辑电平显示器 4、74LS151(或CC4512) 74LS153(或CC4539) 四、实验内容 1、测试数据选择器74LS151的逻辑功能。 接图4－7接线，地址端A2、A1、A0、数据端D0～D7、使能端S接逻辑开关，输出端Q接逻辑电平显示器，按74LS151功能表逐项进行测试，记录测试结果。 图4－7 74LS151逻辑功能测试
2、测试74LS153的逻辑功能。 测试方法及步骤同上，记录之。 逻辑功能见下表： 3、用8选1数据选择器74LS151设计三输入多数表决电路。 1）写出设计过程 有三个人进行表决，当其中任意两个人赞同时，输出为真，否则输出为假。真值表如下:
WB检测抗体如何选择(下)
WB检测抗体如何选择 WB检测之二抗 二抗选择 二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。 二抗选择要考虑的问题有： ①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗 IgGF(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。 WB检测之内参抗体 Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。 WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。 内参使用方法 1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。 2.普通内参：当靶蛋白分子量与所选内参分子量相差不大时，可先对靶蛋白进行显色检测，然后用Strip缓冲液洗掉膜上抗体，重新对内参蛋白进行显色检测。当靶蛋白分子量与所选内参分子量相差较明显时，可对转膜预染，根据蛋白质分子量将膜剪为两部分并分开进行靶蛋白和内参蛋白的显色检测。 内参抗体选择 常用的蛋白内参有GAPDH和β-actin或β-tubulin，内参的选择原则是选择与靶蛋白分子量相差5KD以上的内参，对不同的样本则需要根据实际情况进行选择。 1.根据物种选择 哺乳动物来源的组织或细胞样本通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na+/K+-ATPase等。植物来源的样本常选择plant actin、Rubisco等。对于其他研究稀少的物种可参考报导的文献进行选择。以GAPDH为例，抗GAPDH单抗（ABGENT，clone 6C5）能够与非洲蟾蜍、猴、猪、羊、狗、猫、鱼、蛙、鸡、兔、小鼠、大鼠及人组织来源的GAPDH反应，但不能与酵母GAPDH反应。 2.根据组织类型选择
抗体选择指南 抗体保存指南 抗体说明书样本 - 物种选择较为重要
抗体选择指南 抗体保存指南 抗体说明书样本 一抗体选择指南 :检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素： 1. 分析或应用的类型 2. 样本蛋白的结构性质 3. 样本的种属 4. 抗体宿主的种类 5. 抗体的标记和检测 1分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。 2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑 (1)..待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。 (2)样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来 3 样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。 4 一抗宿主物种的选择一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的
一抗的选择
随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。 当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。 一、抗体选择总体原则 1. 关于特异性的选择 特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。 （1）蛋白特异性 针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。
（2）种属特异性 同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。需要参照说明书注明的可反应种属信息。一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。 （3）实验方法特异性 目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。同样，申请到免费的抗体样品是个很好的途径。 （4）标记物的特异性 一般基于实验操作的实验方法不会使用带有标记的一抗，比如WB、IHC 等，都是通过二抗类的试剂标记达到结果呈现的目的。但是基于仪器分析的一些实验，可能就会使用到直接标记的一抗，比如流式实验。那么需要了解到自己将要使用的仪器能检测到的荧光范围，针对不通的参数
如何购买抗体
订抗体一定要提供至少以下五个方面的信息给你的供货商,在我们公司,这五个信息不全,是无法订货的,这也是为客户负责. - 1. Antigen,也就是抗原名称,最好是英文全称,许多客户只说简称,要知道不同的抗体其简称有可能会一样的.有中文最好也提供一下. - 2. Reactivity,即反应性,也就是实验用于什么特种,是人,大鼠还是小鼠等. - 3. Host,宿主,就是抗体来源,这个主要和二抗有关系,一抗必须要和二抗搭配,比如,二抗是羊抗小鼠,一抗就要选择小鼠来源的.不少客户常常是先有二抗,再买一抗,受限制得很,其实应该先订一抗,再买二抗,毕竟一抗贵,为了将就一个100元左右的二抗,而把几千元的一抗的订购弄得很复杂,真是不划算.所以,不要为了二抗伤脑筋.- 4. Conjugate,即缀合物或标记物,如是不是需要FITC标记,HRP标记等情况,也最好说明. - 5. Applications,就是应用. 你买这个抗体用于做什么实验,是IHC还是WB,这点一定要说,要知道,抗体开发出来,不是什么实验都能用或都会效果好,抗体公司说明上写着能做的实验是经过验证的,没有写的不是说一定不能做,也可能可以做,但没有验证,厂家不会乱说的,也是科学负责的态度.例如,你要是想做IHC-P,就是石蜡切处的免疫组化,如果买不到抗体明确说可以做,你要用就得冒风险,好在现在抗体厂家众多,一般都找得到了. - 1.该定制单抗还是多抗？ 首先应该考虑的就是定制的抗体是应用于什么实验，需要的量是多少？ 对于科研用户来说 1. 抗体常常应用于WesternBlotting、IP等实验中，对于抗体的特异性有一定的要求，但并不是特别的强调 2. 往往在研究很多新的蛋白时，并不确定新蛋白是否很重要，是否会是将来很长一段时间的研究重点，所以抗体用量也不大所以针对科研用户，在定制新的蛋白的抗体时，我们强烈建议首先制备多抗用于实验，当得到了理想的实验结果并需要长期的使用该抗体时再考虑制备单抗。当然，如果您对该抗体的特异性要求特别高（多抗的特异性已无法满足实验要求，比如应用于流式细胞术等）时，还是应该定制单抗
一抗的选择
一抗得选择 检测任何目得靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体得选择范围选中合适得抗体，需要考虑如下几种因素: 分析试验应用得类型ｌ 样本蛋白得结构性质l 样本得种属ｌ 抗体宿主得种类l 抗体得标记与检测ｌ 1、分析试验应用得类型 一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于ＷＢＩＨＣIＣC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及得应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅就是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验,则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。 ２、样本蛋白得结构性质 了解样本蛋白得结构性质有助于选择最合适得抗体，至少两方面因素需要考虑 待测样本蛋白得结构域：抗体就是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中得免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体说明书一般都有免疫原得描述,如果打算检测得就是蛋白片断或一种特殊得同型物或蛋白全长得某一区域,则必须选择用含此片段域得免疫原制备出得抗体.如果打算用FACＳ流式检测活细胞得表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白得胞外域来免疫制备得抗体。l 样本得提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如:许多抗体只识别还原与变性得、表位已暴露不受二级四级结构阻碍得蛋白样本,另一方面,某些抗体仅识别天然折叠状态得蛋白。当选择免疫组化得抗体时，应注意某些抗体只识别未固定得冷冻得组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚得甲醛固定石蜡包埋得组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来ｌ 3、样本得物种 应选择物种相同或有交叉反应得抗体，抗体可能与不同物种得同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高，如果样本得种类未列入抗体说明书上得交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种得蛋白,而只就是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对得方法来预测交叉反应，可应用Ｅxpasy 与ＮCＢI BＬＡＳT来进行不同物种蛋白同源性比对。 4、一抗宿主物种得选择 一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物得一抗时,一抗宿主动物得物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种得一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源得一抗,最好选兔源得一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等）得抗兔IgＧ。如果选择有偶联物得一抗则不适用上述情况，除免疫组化外得其它对不含内源性免疫球蛋白样本得检测方法，则抗体宿主物种得影响不大，如对不含IｇG得细胞裂解物样本得weｓtｅrn bｌｏtt ｉｎg检测，尽管如此，含有血清得组织裂解物与组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgＧ，在ｗestｅｒn ｂloｔ检测中则结合出现IgG分子50 ａｎd ２5kDａ得重链与轻链条带. 如何选择二抗-—根据一抗种属及类型选择合适得二抗 广义上就是指专门与进行特异性反应与结合得抗体,在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同得二抗，艾美捷能为您得科研工作提供最适合与最全面得二抗产品。检测任何目得靶
关于博士德抗体和试剂的保存方法
试剂保存指南一、抗体的保存：抗体保存得当与否直接决定了抗体的活性和使用效果。如果抗 体保存得当，大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。 请按照说明书或者抗体标签上推荐的保存条件正确保存抗体！无论是保存还 是运输，绝对避免反复冻融抗体！ 1、收到抗体后请务必在1000-3000转离心1-2分钟后再打开管盖进行分装和保存！（由于运输过程中反复颠簸，管内微量抗体容易聚集在管盖处，一旦直接打开容易流失抗体。（请放心博士德抗体出厂时保证已装入足量） 2、对于Boster大部分抗体（纯化一抗），比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃冰箱。 ◇因为博士德的抗体（纯化一抗）出厂时抗体内已经加过防冻剂或抗体保护剂，即使在-20℃环境下也不会冻结成冰，反之，如果冻存过程中发现抗体能冻结成冰时请停止继续使用并及时与我们联系。 ◇分装可以最大程度降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了多次从同一管中吸取抗体造成污染的可能性。 ◇分装的量以一次实验用完为好，但建议最少不要少于10μL每份。分装体积越小，抗体浓度可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响，同时分装次数越多移液吸头吸附的抗体也越多，可能会误认为抗体没有足量装入。（最好用无菌的进口0.2ML离心管来分装抗体，国产的小管一般没有经过很好的硅化处理，容易吸附抗体蛋白，影响抗体活性。） ◇分装时请将无菌的微量移液器吸头先插入管底部反复吹打几次后再吸出抗体，以便抗体有效成分与抗体保护剂充分混匀。 ◇复融后的分装抗体如果一次用不完，请将剩余母液保存在4℃冰箱，避免再冻起来！ ◇绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱的冷藏室中。尽量将抗体保存在手动除霜冰箱里面，而不是在冰箱门上。 3、大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是基本没有影响的。如果抗体很快（1-2周内）就能使用完，推荐在4℃保存，避免反复冻融对抗体活性的损害。如果要长期保存则分装后-20℃保存。 4、即用型抗体请务必保存在4℃冰箱，一定不能冷冻保存。注意：即用型抗体有效期：自购买之日起1个月。
IHC实验如何选择合适的一抗
IHC实验中如何选择合适的一抗 免疫组化耗时长，步骤繁多，为了得到特异性染色，获得可靠结论，选择合适的一抗十分关键。基本原则是选择在较高稀释度时染色较佳而背景较低、结果稳定、重复再现性良好的抗体。目前市场上抗体种类繁多、品牌众多、技术参数不一，价格和质量也是相差甚大，如何选择购买合适的抗体，并准确的做出我们想要的实验结果，有以下诸多细节需要考虑。 一、特异性 在IHC实验中，抗体的特异性选择需要考虑蛋白特异性和种属特异性。 1、蛋白特异性 这里的蛋白是指研究者感兴趣的靶蛋白，首先要比较靶蛋白和抗体的免疫原。比如 抗体的免疫原是重组蛋白，如果不是全长表达，就需要注意其序列是否包含靶蛋白 对应的序列；如果免疫原是多肽，也要注意选取的多肽序列或者位置是否在需要检 测的组织内抗原有相关对应序列；对于内源性蛋白来说，要清楚其剪切和修饰的方 式；磷酸化的蛋白需要确定具体的位点，不同位点磷酸化可能存在不同机制，结合 的一抗会不同；家族成员众多的蛋白尤其需要查看交叉反应情况，根据自己的实验 需求是选择通用型抗体还是特异型抗体。 2、种属特异性 目前商品化的抗体大多采用人源蛋白序列进行重组蛋白表达或设计多肽抗原，在检 测非人源组织时需要了解一抗的可反应种属信息，确认存在和其它种属的交叉反应。 有些稀有种属难以找到抗体，可通过蛋白的序列比对，尝试同源序列的一抗并在实 验前进行预实验。 二、一抗种属来源的选择 在IHC实验中，一抗的种属会影响二抗的选配，因此建议所用一抗和实验样品的种属亲缘性越远越好，不宜同源。特别是在免疫荧光双标实验中，在在区别抗体与样本种属的基础上，还要注意两个指标的抗体种属来源，通常会选择不同种种属来源的抗体，如果为同种属，两次染色之间需要增加去除抗体的步骤以保证没有交叉。 三、应用的选择 建议选择明确标注了适用于IHC检测的抗体，同时厂家提供了验证图片并能清晰显示准确的组织和细胞定位。如果厂家无验证数据，但是有文献的确切验证，也可以进行尝试。 各个厂家对于适合IHC检测的抗体最常见有两种标注方式，IHC-P（适用石蜡切片的免