固相萃取小柱的常见问题及C18小柱操作步骤
C18柱分离原理及操作指南
C18柱分离原理及操作指南C18柱分离原理及操作指南引言：在现代生物医药、环境科学、化学和其他相关领域中，柱层析技术广泛应用于样品的分离和纯化过程中。
C18柱作为最常用的反相固定相柱之一，具有良好的选择性和通用性，被广泛应用于各种分析和纯化应用中。
本文将深入探讨C18柱的分离原理、操作指南以及相关的观点和理解。
1. C18柱的分离原理：C18柱是一种反相层析柱，固定相为链烷基矽胶，表面上覆盖疏水的碳链分子。
其分离原理基于样品中的分离目标与固定相间的相互作用。
C18固定相具有疏水性，因此可以通过疏水作用和范德华力与样品分子发生相互作用，实现目标分离。
2. C18柱的操作指南：2.1 样品前处理：在操作C18柱之前，对样品进行适当的前处理是非常重要的。
这包括样品的净化和稀释，以确保样品的纯度和适当的浓度。
2.2 柱层析条件的选择：选择适当的柱层析条件对于获得准确、重现性高的分离结果至关重要。
柱层析条件包括流动相的组成、流速、洗脱梯度和检测方式等。
根据样品的特性和分离要求，需要根据实际情况进行优化。
2.3 柱的条件调试和平衡：在每次使用C18柱之前，需要进行条件调试和平衡。
这包括对柱床进行适当的平衡和校准，以确保柱层析的准确性和稳定性。
2.4 样品的进样和洗脱：在进样和洗脱过程中，需要注意样品的体积、浓度和流速等参数。
对于复杂的样品，可能需要使用洗脱梯度进行分离。
2.5 柱的维护和保养：使用完C18柱后，需要进行适当的维护和保养，以延长柱的使用寿命和保证下次使用的可靠性。
3. 对C18柱分离原理及操作的观点和理解：C18柱作为反相固定相柱的代表之一，具有良好的选择性和通用性。
其分离原理基于疏水作用和范德华力，对于许多疏水性化合物的分离具有良好的效果。
然而，C18柱在分离过程中往往面临样品负荷量大、溶剂消耗多和柱效等问题，在实际应用中需要根据具体情况进行优化和调整。
结论：C18柱是一种常用的反相层析柱，具有良好的选择性和通用性。
固相萃取使用过程中的一些常见问题及解决办法
演讲人
2021-01-08
01
以下是固相萃取操作中常见的问题：
以下是固相萃取操作中常见 的问题：
02
回收率低；
回收率低；
03
萃取重现性差；
萃取重现性差；
04
净化效果不理想；
净化效果不理想；
05
SPE柱流速过低。
SPE柱流速过低。
06
回收率低
净化效果不理想
淋洗液和洗脱液的优化
净化效果不理想
对SPE柱进行合理的处理
SPE柱中的吸附剂可能存在少量干扰物，有效地活 化可以避免这些干扰物进入洗脱液，活化溶液应选择 整个操作中洗脱强度最强的溶剂体系；在反相模式中， 从样品溶液到洗脱液主要涉及0%-100%甲醇水溶液， 所以活化溶液应选纯甲醇，当目标化合物需要用甲醇 -甲基叔丁基醚混合液洗脱时，活化溶液应选甲基叔 丁基醚；在正相模式中，从样品溶液到洗脱液主要涉 及0%-100%正己烷-甲基叔丁基醚溶液，所以活化溶 液应选纯甲基叔丁基醚。
如果目标化合物在洗脱液中正常出现，那么回收率不足的问题应该来自样 品前处理的其他环节。
07
萃取重现性差
萃取重现性差
在使用固相萃取小柱进行样品前 处理时，若出现萃取效果重现性 差，可能的原因及改进办法如下：
08
净化效果不理想
净化效果不理想
净化模式的改进 通常而言采用保留目标化合物的模式比保留杂质的模式净化效果好，果正在分析
的项目为某一种或某一类化合物分析，最好是采用保留目标化合物的净化模式；举一 个简单的例子，同样是分析蔬菜中的多菌灵和噻菌灵(一类碱性农药)，使用阳离子交 换柱可以专一性地保留这些农药，使它们基本与干扰物完全分离，而使用正相吸附剂 或石墨化炭黑进行保留干扰物的操作仅能把主要的干扰物除去，仍有较多干扰物存留。 另外，如果不止一种SPE柱可用于目标化合物的净化时，应挑选选择性好的吸附剂； 选择性方面，离子交换＞正相＞反相。
玻璃固相萃取小柱
玻璃固相萃取小柱玻璃固相萃取小柱是一种常用的化学分离技术，它在分析化学和生物化学领域中得到广泛应用。
本文将介绍玻璃固相萃取小柱的原理、操作步骤以及其在实验室中的应用。
一、原理玻璃固相萃取小柱是一种基于固相萃取原理的分离方法。
固相萃取是指通过固定相材料对混合物中的目标物质进行吸附，再通过洗脱、干燥等步骤将目标物质从固定相上脱附出来。
玻璃固相萃取小柱的固定相一般是一种多孔玻璃或硅胶材料，具有较大的比表面积和吸附能力。
二、操作步骤1. 准备工作：将玻璃固相萃取小柱装入萃取柱座，用洗净的试管或烧杯将固相填充至柱座中，并用适当的填充物压实，使固相均匀分布。
2. 样品处理：将待分析的样品进行预处理，如固相萃取前的前处理、溶解、稀释等。
3. 萃取操作：将处理好的样品滴入玻璃固相萃取小柱中，让样品与固相接触，使目标物质被固相吸附。
4. 洗脱操作：选择适当的洗脱剂，将洗脱剂滴入玻璃固相萃取小柱中，将目标物质从固相上洗脱出来。
5. 收集和分析：将洗脱液收集起来，进行进一步的分析，如色谱分析、质谱分析等。
三、应用实例1. 环境监测：玻璃固相萃取小柱可以用于水体、土壤、大气等环境样品中有机污染物的富集与分离，如挥发性有机物、多环芳烃等的分析。
2. 食品安全：玻璃固相萃取小柱可用于食品中农药、兽药、重金属等有害物质的富集与分离，以及食品中添加剂、香精香料等的分析。
3. 药物检测：玻璃固相萃取小柱可用于药物代谢产物的富集与分离，对于药物代谢动力学研究具有重要意义。
4. 生物样品前处理：玻璃固相萃取小柱可用于生物样品中目标物质的富集与分离，如生物体内的代谢产物、药物残留物等的分析。
总结：玻璃固相萃取小柱作为一种常用的化学分离技术，具有操作简便、富集效果好、分离效率高等优点，广泛应用于分析化学和生物化学领域。
通过合理选择固定相材料和操作条件，可以实现对不同样品中目标物质的高效富集和分离，为后续分析提供了可靠的样品前处理方法。
反相固相萃取柱操作方法
反相固相萃取柱操作方法反相固相萃取（Reversed-phase solid-phase extraction，RP-SPE）是一种常用的样品前处理方法，它通过选择性吸附和洗脱来净化和浓缩目标化合物。
下面是反相固相萃取柱的操作方法。
实验材料准备：1.反相固相萃取柱：选择适当的固相材料，如C18、C8等。
2.萃取柱连接设备：可使用固相萃取柱连接器或大流量接头连接。
3.进样设备：选择适当的进样方式，如手动或自动。
4.洗脱溶剂：选择适合的洗脱溶剂，如甲醇、乙腈等。
5.稀释溶剂：选择适合的稀释溶剂，如水、甲醇水混合溶剂等。
操作步骤：1.研磨样品：将待测样品进行研磨，使其颗粒均匀细小，利于固相吸附和洗脱。
2.固相萃取柱预处理：按照试剂盒说明书中的方法，对所使用的反相固相萃取柱进行必要的处理，如洗脱、活化等。
3.准备样品：将研磨后的样品取出适量，加入适当的稀释溶剂中，制备样品溶液。
4.样品前处理：如果样品中存在大量的杂质，可通过过滤或离心等方法进行前处理，以去除杂质。
5.柱洗脱：将适量的样品溶液取出，通过手动或自动进样装置将样品加入到反相固相萃取柱中。
注意控制进样速度，以保证样品能均匀地与固相材料接触。
6.洗脱：使用适当的洗脱溶剂以适当的流速进行洗脱。
洗脱溶剂的选择应根据目标化合物的特性和萃取柱的固相材料来选择。
洗脱过程中需要控制洗脱流速和洗脱溶剂的用量，以保证目标化合物可以完全洗脱，同时避免固相材料脱落。
7.洗脱收集：将洗脱液收集起来，可以选择使用阻流器或收集瓶来收集。
为了提高样品的浓缩度，可以多次洗脱，将洗脱液集中在同一个收集瓶中。
8.洗脱溶剂回收：如果洗脱溶剂是可以回收利用的，可以通过蒸发或其他方法将洗脱液中的溶剂去除，并将溶剂回收，减少成本和污染。
9.萃取物的后处理：收集到的洗脱液需要进一步进行后处理，如浓缩、进一步纯化等。
10.结果分析：对洗脱液进行分析，如GC、HPLC等方法进行分析和检测。
总结：。
固相萃取柱使用方法
固相萃取柱使用方法引言：固相萃取柱是一种常用的样品前处理技术，广泛应用于分离和富集复杂样品中的目标化合物。
本文将介绍固相萃取柱的使用方法，包括准备工作、操作步骤和注意事项。
一、准备工作1. 选择合适的固相萃取柱：根据待测样品的特性和目标化合物的亲水性或疏水性选择合适的固相材料，如正相、反相、离子交换、亲和等。
2. 萃取柱的条件调试：根据目标化合物的性质和样品矩阵的影响，确定最适合的样品预处理方法和固相萃取柱的条件。
3. 样品预处理：根据样品类型和目标化合物的特性，选择适当的预处理方法，如样品提取、溶解、过滤等。
二、操作步骤1. 准备样品：根据实验要求，准备待测样品，并进行必要的预处理。
2. 洗涤固相萃取柱：将固相萃取柱连接到适当的装置上，用适量的洗涤溶剂（如纯水、有机溶剂）进行初步洗涤，以去除残留的杂质和溶剂。
3. 负荷样品：将准备好的样品通过固相萃取柱，控制样品的进样速度，避免样品溢出或失去目标化合物。
4. 清洗固相萃取柱：用洗涤溶剂进行适当次数的冲洗，以去除样品中的干扰物质和未吸附的杂质。
5. 萃取目标化合物：选择适当的洗脱溶剂，将其通过固相萃取柱，洗脱目标化合物。
6. 收集洗脱液：使用收集瓶或进样管收集洗脱溶液，注意避免交叉污染。
7. 浓缩洗脱液：根据需要，对洗脱液进行浓缩处理，如使用氮气吹扫或旋转浓缩仪等。
8. 重溶洗脱液：根据分析方法的要求，选择适当的溶剂将洗脱液重溶，使其适合后续分析。
三、注意事项1. 严格控制操作条件：操作过程中应注意保持固相萃取柱的湿润状态，避免柱干燥。
2. 避免交叉污染：在操作过程中，避免不同样品之间的交叉污染，尽量使用一次性装置或充分清洗重复使用的装置。
3. 样品进样控制：控制样品的进样速度和量，避免样品溢出或失去目标化合物。
4. 洗涤和洗脱溶剂的选择：根据目标化合物的性质和样品矩阵的影响，选择合适的洗涤和洗脱溶剂，以获得较好的分离效果。
5. 合理使用固相萃取柱：根据实验要求，合理选择固相萃取柱的尺寸和型号，避免浪费和不必要的成本。
固相萃取小柱操作方法
固相萃取小柱操作方法固相萃取（Solid-Phase Extraction，SPE）是一种用于样品前处理和分离的常见技术。
固相萃取小柱（SPE小柱）是固相萃取的一种形式，它通常由液相进样和固相填料组成。
本文将详细介绍SPE小柱的操作方法。
1. 选择适当的固相填料在使用SPE小柱进行分离前，需要先选择适合特定应用的固相填料。
固相填料的选择应该考虑到样品的性质、目标分析物的特性以及所需的分离效果。
根据目标分析物的特性和样品基质的复杂性，可以选择不同类型的固相填料，如正相、反相、离子交换、固相反萃取等。
2. 准备固相小柱首先，选择适合样品量的SPE小柱，并装入固相填料。
一般情况下，固相填料的用量应为小柱的2-4倍。
将填料固定在小柱内，可以使用以填料为基础的底部阀门或其他装置来固定填料。
3. 洗涤固相小柱在进行样品固相萃取之前，需要对小柱进行洗涤以去除残留物。
首先，将洗涤溶液通过小柱底部加入小柱中，对填料进行膨胀和湿润。
然后，开启小柱底部的阀门，通过引力或气压将洗涤溶液迅速从小柱中排出，以去除可能存在的杂质。
通常情况下，常用的洗涤溶液包括甲醇、乙醇、醋酸、水和酸碱溶液。
4. 进样操作样品的进样量应该根据分析物的浓度和样品基质的复杂程度进行确定。
进样时，可以使用注射器或其他适当的装置将样品溶液缓慢地加入小柱中。
进样完成后，关闭小柱底部的阀门，使样品停留在填料上。
5. 洗脱分离物洗脱是SPE小柱中最关键的步骤之一，其目的是从样品基质中分离出目标分析物。
根据目标分析物的特性，选择合适的洗脱溶液。
如果是正相SPE小柱，一般使用有机溶剂（如甲醇、乙醇）作为洗脱溶液；如果是反相SPE小柱，则通常使用水作为洗脱溶液。
洗脱溶液通过小柱时，目标分析物会与洗脱溶液中的溶剂相互作用，从而被洗脱出来。
为了保证洗脱效果，通常用2-3倍溶剂体积进行洗脱。
6. 干燥小柱洗脱完成后，需要将小柱中的溶剂蒸发掉。
这可以通过利用负压或氮气吹扫的方式进行。
c18固相萃取小柱的通用流程
c18固相萃取小柱的通用流程一、准备工作。
这就像是要出门旅行，得先把东西都收拾好一样。
咱得先把c18固相萃取小柱拿出来，然后看看它是不是完好无损的。
要是小柱有裂缝或者其他毛病，那可就像破了个洞的袋子，装东西就不灵光啦。
再就是要准备好咱们需要萃取的样品，这个样品得处理得合适才行呢。
比如说，如果样品里有一些大颗粒杂质，就像沙子混在米里，得先过滤一下，不然小柱的孔被堵住了，那就麻烦咯。
还有哦，溶剂也不能少，就像做菜得有油盐酱醋一样，不同的溶剂在这个萃取过程里可有大作用啦。
二、活化小柱。
这一步可重要啦。
把小柱当成一个小房子，咱们得先打扫打扫，再欢迎客人（样品）进来。
通常呢，我们会先用一种溶剂来冲洗小柱，这个溶剂就像是小扫帚，把小柱里面可能存在的一些脏东西或者残留的东西给扫出去。
然后再用另一种溶剂，这就像是给小房子洒上一点清新剂，让小柱的环境变得更适合接纳样品。
这一步一定要仔细哦，如果活化没做好，后面的萃取效果可能就大打折扣啦。
就像你想把地扫干净，但是扫帚都没选对，那肯定扫不干净呀。
三、上样。
好啦，小柱准备好啦，现在就可以把样品放进去啦。
这个过程要慢慢地来，就像给小宝宝喂饭一样，不能太急。
要是一下子倒太多样品进去，小柱可能就处理不过来，就像宝宝吃太多会噎着一样。
而且在上样的时候，要注意样品的流速，流速太快的话，小柱可能还没来得及好好和样品里的目标物质“交朋友”，目标物质就跑掉啦。
流速太慢呢，又会浪费咱们好多时间，就像走路太慢，会错过好多好玩的地方一样。
四、淋洗。
样品进到小柱里之后呢，里面可能还混着一些我们不想要的杂质。
这时候就需要淋洗啦。
淋洗就像是给小柱和样品洗个澡，把那些杂质给冲走。
但是呢，我们得选对淋洗的溶剂，就像选对合适的沐浴露一样。
如果溶剂选得不好，可能把我们想要的目标物质也一起冲走了，那就得不偿失啦。
这一步得小心翼翼的，要在保证目标物质留在小柱里的前提下，把杂质尽可能地去掉。
五、洗脱。
终于到了最激动人心的洗脱环节啦。
固相萃取小柱安全操作及保养规程
固相萃取小柱安全操作及保养规程固相萃取小柱是化学实验室中广泛使用的一种化学分离和纯化工具。
为了确保实验室的安全和小柱的长期使用，本文将介绍固相萃取小柱的安全操作和保养规程。
安全操作规程1. 个人防护在操作固相萃取小柱前，必须穿戴必要的个人防护设备，包括实验室服、安全眼镜和手套等。
穿戴防护设备的目的是避免化学品对皮肤、眼睛和呼吸系统的伤害。
2. 工作环境在实验室中，应该保持工作环境的整洁和有条理。
使用固相萃取小柱前，应该确保工作区域清洁，避免干扰，确保实验的安全和准确性。
3. 实验前准备•操作固相萃取小柱前，应该仔细阅读使用说明书，并确保对该操作有充分的理解。
•按要求准备实验物质和化学品，遵循化学品储存和处理的规定。
•检查固相萃取小柱是否有裂缝或破损，并排除故障。
4. 操作规程•在操作固相萃取小柱前，必须学会正确的使用方法，遵循具体的操作步骤。
•操作过程中，应避免过度压缩和挤压固相萃取小柱，这可能会导致小柱破裂并造成溢出和污染。
•实验结束后，应采取正确的处理方式，如用盖子盖住固相萃取小柱，避免固相材料遗留在外部环境中。
保养规程1. 储存方式存放固相萃取小柱时应遵循以下规则：•避免长期存放在高温、太阳直射和潮湿的环境中；•按要求存放，避免碰撞，防止固相萃取小柱破裂和出现裂缝；•定期检查固相萃取小柱的状况，排除故障。
2. 清洗方式使用完固相萃取小柱后，应当立即清洗一遍，以确保清洁度和准确性，并避免固相材料的残留。
清洗固相萃取小柱的步骤：•用去离子水、丙酮或醚清洗小柱，并确保清洗完全；•晾干固相萃取小柱，并存放于干燥、无尘的地方。
3. 更换方式当固相萃取小柱出现损坏或老化时，需要更换新的小柱。
固相萃取小柱更换的步骤如下：•将固相萃取小柱从仪器上拆卸下来，避免过度用力导致小柱破损；•清洗新的固相萃取小柱，并按照使用说明连接到仪器上；•重新检查固相萃取小柱的胶体状况，并排除故障。
总结本文介绍了固相萃取小柱的安全操作和保养规程。
C18色谱柱通用使用方法
C18/C8色谱柱使用方法
一、新柱活化：新的色谱柱活化：采用100%甲醇1ml/min冲洗60min，
再换成流动相进行平衡；如果流动相中含有缓冲盐，在换成流动相前，请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡；
二、色谱柱保存溶液与评价报告一致。
三、在使用过程中如果流动相没有磷酸缓冲盐的存在，新柱子在使用
之前需用100%的甲醇（色谱纯）以0.5~1.0的流速平衡30min 左右，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。
做完实验再用100%的纯甲醇（色谱纯）以0.5~1.0的流速冲洗30min左右，最后用100%的纯甲醇（色谱纯）保存。
四、在使用过程中如果流动相有磷酸缓冲盐的存在，新柱在使用之前
需用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min 左右，将新柱高浓度甲醇溶液完全置换掉，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。
做完实验再用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min左右，将色谱柱中缓冲盐溶液完全置换掉，最后用100%的纯甲醇清洗色谱柱30min，最后用纯甲醇保存色谱柱。
C18柱使用指南(1)
C18柱使用指南
1、新柱在使用前需用纯有机试剂（如甲醇、乙腈）低流速冲洗，冲洗体积以20倍柱体积
为宜，以便固定相能充分润湿、碳链舒展彻底，使色谱柱的性能达到巅峰状态；
2、使用时需在每日实验结束后冲洗色谱柱，尤其是流动相中含有酸或盐时，需将色谱柱中
的酸或盐冲洗干净，通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积；
3、长期保存前要将色谱柱彻底冲洗，建议冲洗3-4小时以上，最后保存在纯有机试剂或高
比例的有机试剂溶液（如90%甲醇水）中；
4、日常保存溶剂（即第二天需继续使用）尽量与3中相同；
5、由于C18柱（极性改性处理的除外）的固定相疏水性较强，在使用过程中尽量不要使用
高水相条件，若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的负面影响，Diamonsil（2）由于碳载量高，表现尤为明显，建议使用过程中水相比例不超过90%；
6、色谱柱压力升高、柱性能下降：通常为色谱柱被污染，对色谱柱进行再生处理可恢复部
分柱效；
7、色谱柱压力骤升：通常由盐析出或筛板堵塞引起，若是盐析出，用10%甲醇水低流速冲
洗至压力恢复即可；若判断并非盐析出，以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱（将色谱柱反接，不接检测器），若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效，需寻找其他原因。
色谱柱再生程序：
按照下列次序冲洗色谱柱，冲洗体积均为20倍柱体积：
10%甲醇水→甲醇→异丙醇（或氯仿）→甲醇→10%甲醇水
（步骤3选用异丙醇时，由于异丙醇粘度较大，需适当降低流速，建议流速设为0.2-0.3ml/min）
体积计算表：
迪马应用实验室。
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SPE常见问题解答
SPE常见问题解答
固相萃取（Solid Phase Extraction SPE ）是一种用途广泛而且越来越受欢迎的样品前处理技术。
大多数用来处理液体样品。
萃取、浓缩和净化其中的半挥发性和不挥发性化合物；也可用于固体样品，但必须先把固体样品处理成液体。
目前国内主要应用于食品安全领域，如各类抗生素、抗菌药的在各类食品种的残留分析；农产品中农药残留分析；各类食品中合法、非法添加剂分析等。
在
药物研究领域，广泛应用于药物药代、药动分析和中药分析。
在环保领域，应用于环境中多环芳烃（PAHs ） 、多氯联苯（PCBs ）、各类农药分析；饮用水、地下水和污水的有机物质分析。
根据应用原理可分为：反相萃取柱、正相萃取柱、离子交换柱、吸附柱四种；近年来，新开发的混合模式萃取小柱，由于其使用更方便，专属性更强，应用越来越广泛。
一、反相萃取柱
反相基本方法
反相基本方法Strata™
C18-E, C18-U, C18-T
•强疏水性选择性
•适用于从水性样本和生物样
本中保留大多数有机化合物 •增强碱性物质的保留*
Strata™ C18-E 是疏水性最强的硅胶基质端基封尾键合相；Strata™ C18-U 是非封尾疏水性键合相，不推荐用于碱性化合物；Strata™ C18-T 是大孔径端基封尾键合相。
Strata™ C8
•疏水选择性稍低于C18 •适用于中等极性化合物•提高对碱性化合物的选择性
Strata™ Phenyl
•强芳香性选择性
•适用于含有苯环或其他芳香环的化合物和碱性化合物
Strata™ SDB-L
•固定相：聚苯乙烯-二乙烯基苯聚合物•疏水选择性强于C18
•适用于大多数有机化合物
•pH范围更宽，无二级副反应存在。