茚三酮鉴定氨基酸概述

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蛋白质和茚三铜

蛋白质和茚三铜

三,蛋白质的转化含蛋白质较多的豆类种子萌发时,蛋白质在蛋白酶的作用下水解产生氨基酸.氨基酸与水合茚三酮共热时,能产生紫色化合物.因此可根据紫色的深浅来确定蛋白质转化成氨基酸的量.本实验所需要的材料和用具包括:发芽和未发芽的大豆种子,台天平,研钵,试管,试管架,滤纸,滴管,80%酒精,1%水合茚三酮.脯氨酸含量测定测定方法采用茚三酮染色法[氨基酸与茚三酮反应氨基酸与茚三酮(ninhydrin)的反应是一个检测和定量氨基酸和蛋白质的重要反应。

茚三酮在弱酸性溶液中与氨基酸共热,具有游离氨基的氨基酸都生成紫色化合物(470),而亚氨基酸,则生成黄色化合物(440)。

在一定的反应条件下,产生的颜色的强度(溶液中的光吸收)与氨基酸浓度成比例,根据溶液的吸光度,可以算出相应的氨基酸和蛋白质的浓度。

茚三酮反应(ninhydrin reaction):在加热条件下,氨基酸或肽与茚三酮反应生成紫色(与脯氨酸反应生成黄色)化合物的反应。

有关电泳基本知识: 8分钟(一)电泳:带电颗粒在电场的作用下向着其电性相反的电极移动,称为电泳。

( electrophoresis)(二)电泳迁移率:同一电场条件下,各种带电粒子在单位时间内移动的距离。

蛋白质的等电点 (pI) :在一定的介质中,某一蛋白质解离成阴、阳离子的趋势相等,成为两性离子 (净电荷为零),此时介质的pH称为蛋白质的等电点。

不同的蛋白质因所含酸性或碱性氨基酸的比例不同,等电点亦不相同。

根据蛋白质等电点的不同可通过电泳进行分离蛋白质。

免疫电泳可测蛋白质浓度、蛋白质的鉴定。

;免疫电泳技术是将琼脂电泳与免疫扩散相结合的 - 种常用的免疫学实验方法,此项技术有抗原抗体反应的高度特异性,电泳分离技术的快速,灵敏和高分辨力,以及实验设备和操作简便等优点,是免疫学的一种基本技术,目前,该技术衍生出了对流免疫电泳、火箭电泳、交叉免疫电泳及免疫固定电极等许多新技术和新方法,用于科学研究和临床实验诊断根据电泳的分离特点及工作方式,电泳可分为三大类:(l)自由界面电泳:在二根U形管里的溶液中,同种分子的构型及荷电情况基本一致,在电场影响下,它们逐渐密集而与其他电泳迁移率不同的物质之间形成明显的界面。

茚三酮呈色反应实验报告

茚三酮呈色反应实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除茚三酮呈色反应实验报告篇一:实验三蛋白质及氨基酸的呈色反应实验三蛋白质及氨基酸的呈色反应一、实验目的1、了解蛋白质和某些氨基酸的特殊颜色反应及其原理2、掌握几种常用鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、实验内容对蛋白质及氨基酸的双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应、乙醛酸反应、偶氮反应、醋酸铅反应等颜色及沉淀反应进行定性确定。

三、实验操作(一)双缩脲反应1、实验原理当尿素加热到180℃左右时,两个分子的尿素缩合可放出一个分子氨后形成双缩脲,双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的红色配合物,此呈色反应称为双缩脲反应。

由于蛋白质分子中含有多个肽键,其结构与双缩脲相似,故能呈此反应,而形成紫红色或蓝紫色的配合物。

此反应常用作蛋白质的定性或定量的测定。

2、试剂(1)尿素(2)10%naoh溶液(3)1%cuso4溶液(4)蛋白质溶液:将鸡蛋清用蒸馏水稀释10~20倍,3层纱布过滤,滤液冷藏备用。

3、操作(1)取少许结晶尿素放在干燥试管,微火加热,则尿素开始熔化,并形成双缩脲,释放的氨可用湿润的红色石蕊试纸鉴定。

待熔融的尿素开始硬化,试管内有白色固体出现,停止加热,让试管缓慢冷却。

然后加10%naoh溶液1ml和1%cuso42~3滴,混匀后观察颜色的变化。

(2)另取一试管,加蛋白质溶液1ml、10%naoh溶液2ml 及1%cuso42~3滴,振荡后将出现的紫红色与双缩脲反应所产生的颜色相对比。

(二)茚三酮反应1、实验原理除脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮作用生成黄色物质外,所有α-氨基酸与茚三酮发生反应生成紫红色物质,最终形成蓝紫色化合物。

1︰1500000浓度的氨基酸水溶液即能发生反应而显色。

反应的适宜ph为5~7。

此反应目前广泛地应用于氨基酸定量测定。

2、试剂蛋白质溶液(同前);0.5%甘氨酸;0.5%茚三酮水溶液3、操作取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液各1ml,再各加0.5ml0.1%茚三酮水溶液,混匀,在沸水浴加热2~3分钟,观察颜色变化。

茚三酮检测蛋白质原理

茚三酮检测蛋白质原理

茚三酮检测蛋白质原理
茚三酮检测蛋白质原理,是指利用茚三酮荧光探针与蛋白质分子的特定结合作用,实现对蛋白质分子的定量检测的一种方法。

茚三酮荧光探针具有较高的灵敏度和选择性,能够在低浓度范围内对蛋白质进行检测。

其原理基于茚三酮荧光探针与氨基酸残基中的羰基进行共价键结合,形成新的蛋白质-探针复合物,从而使荧光强度产生变化,实现蛋白质的定量测定。

该方法广泛应用于生物医学研究领域,可用于蛋白质含量定量、蛋白质分子间相互作用研究等方面。

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氨基酸的测定

氨基酸的测定

甲醛滴定法 (以测定氨杞精口服液中的氨基酸含量为例)
计算: 氨基酸态氮=〔 c×(V2-V1)
×0.014×100) 〕/W×100 V1——用中性红为指示剂
时,碱液所消耗的体积 V2——用百里酚酞乙醇液
为指示剂时标液消耗量
应用: 氨杞精口服液是由天然原料提
取的氨基酸粉(含20多种氨基酸), 加上构祀子、黄精煎煮液配制而 成的口服液。其中氨基酸为主要 有效成份, 采用甲醛滴定法测定 氨基酸的总量做为质量控制方法, 操作简便 。
仪器 附磁力搅拌器的酸度计;25mL酸式 滴定管; 10mL胖肚吸管。
双语例句
电位滴定法 (以测定酱油中的氨基酸含量为例)
操作方法:
(1)样品处理:先测出待测酱油的比重,然后吸取酱油5.00mL于
100mL容量瓶中,加水定容。吸取定容液20.00mL于250mL烧杯中,
加水60mL,放入磁力转子,开动磁力搅拌器使转速适当。用
个别氨基酸的定量测定
a)赖氨酸 b)色氨酸 c)苯丙氨酸 d)酪氨酸 e)脯氨酸 f)羟脯氨酸 g)胱氨酸 h)谷氨酸
氨基酸的分离及测定
a)薄层色谱法 b)氨基酸自动分析仪法 c)气相色谱法 d)高效液相色谱法
茚三酮法 (以测定蜂蜜及果葡糖浆中的氨基酸含量为例)
反应原理
氨基酸在一定pH条件下与茚三酮起反应,生成蓝紫色化合物,可 比色(570nm)定量。 注意:茚三酮受阳光、温度、湿度、空气等影响易被氧化呈淡红或深 红色,使用前要进行纯化,方法如下:
结论
1)采用茚三酮显色法测定的 蜂蜜及果葡糖浆的氨基酸含 量在0~150 μg/mL范围,该 法具有线性好、准确性及精 密度高等特点。
2)蜂蜜与果葡糖浆混合物中 的氨基酸含量和果葡糖浆掺 入量呈良好的负线性关系。 采用茚三酮显色法测定蜂蜜 样品的氨基酸含量,可以快 速判断蜂蜜中是否掺入了果 葡糖浆。

茚三酮比色法测定牛肉中游离氨基酸的试验研究

茚三酮比色法测定牛肉中游离氨基酸的试验研究
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生物化学实验一蛋白质和氨基酸的呈色反应

生物化学实验一蛋白质和氨基酸的呈色反应

实验一蛋白质和氨基酸的呈色反应一、目的要求验证蛋白质特性;学习和掌握蛋白质呈色反应的原理和方法;学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

二、实验原理蛋白质中的某些化学键或氨基酸残基中的某些化学基团可以与某些特殊试剂形成特定的有色物质。

这些反应称为蛋白质的呈色反应。

各种蛋白质的氨基酸残基不完全相同。

因此,呈色反应产物的颜色也不完全一样。

呈色反应不是蛋白质所特有,一些非蛋白物质也能呈现类似的呈色反应。

因此,不能仅以呈色反应结果来判别被测物质是否为蛋白质。

三、呈色反应双缩脲反应1.原理两分子尿素经加热至180°C后可以缩合成一分子双缩脲,并放出一分子氨。

双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成紫红色络合物,此反应称为双缩脲反应。

多肽及所有蛋白质均具有肽键,与双缩脲分子中亚酰胺键结构相同,也能发生此反应,因此,蛋白质在碱性溶液中与铜离子也能呈现出类似于双缩脲的颜色反应。

2.器材与试剂1)器材试管、药匙、电炉、试管夹、滴管。

2)试剂〈1〉蛋白质溶液(10%卵清蛋白溶液):吸取鸡蛋清溶液10ml,加蒸馏水稀释,定容至100ml。

〈2〉10%氢氧化钠溶液。

〈3〉1%硫酸铜(CuSO4)溶液。

〈4〉0.1%甘氨酸(Gly)溶液:称0.1g甘氨酸溶于蒸馏水中,稀释至100ml。

〈5〉结晶尿素。

3.实验步骤双缩脲反应实验(1)制备双缩脲:取结晶尿素少许(约火柴头大小),放入干燥的小试管中。

微火加热至尿素熔解至硬化,刚硬化时立即停止加热,尿素放出氨,此时双缩脲即已形成。

冷却后作为双缩脲样品(1号管)。

(2)另取3支试管,与1号管一起按表加样,混匀,观察各管颜色变化,记录结果并解释现象。

茚三酮反应1.原理蛋白质或氨基酸在弱碱性条件下,其上的氨基与茚三酮共热可产生蓝紫色缩合物。

此反应为一切蛋白质和α-氨基酸所共有,具有亚氨基的脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生特征性的黄色化合物,含有氨基的其他化合物也能呈此反应。

2.器材与试剂1)器材滤纸、试管、试管夹、药匙、电炉、滴管、吸管、水浴锅。

茚三酮和氨基酸反应式子

茚三酮和氨基酸反应式子

茚三酮和氨基酸反应式子
茚三酮是一种有机化合物,分子式为C9H6O。

氨基酸则是构成蛋白质的基本单元,包含有羧基和氨基,分子式为CnH2nO2N。

当茚三酮与氨基酸反应时,会发生加成反应,生成相应的酰胺衍生物。

具体反应式子如下:
茚三酮 + 氨基酸→ 酰胺衍生物 + 水
其中,酰胺衍生物通常由茚三酮和氨基酸中的羧基和氨基反应生成,形成酰胺键。

这种酰胺衍生物的形成是蛋白质折叠的重要组成部分,在生命体系中具有重要作用。

茚三酮和氨基酸反应是一种有机化学中的典型加成反应,它不仅具有理论意义,也具有广泛的应用价值。

例如,在有机合成领域中,酰胺键的构建是一种非常重要的合成策略。

通过合理设计反应条件,可以实现高效、高选择性的酰胺键构建,为新药物的合成提供了有力的支持。

总之,茚三酮和氨基酸反应是一种重要的有机合成反应,在生命体系
和有机合成领域具有广泛的应用。

对于化学学科的学生和从事相关领域的科研人员来说,了解它的反应机理和应用价值都是非常有益的。

茚三酮显色分光光度法测定食品中α-氨基酸含量的方法探讨

茚三酮显色分光光度法测定食品中α-氨基酸含量的方法探讨

茚三酮显色分光光度法测定食品中α-氨基酸含量的方法探讨丁永霞【摘要】采用茚三酮显色分光光度法测定食品中α-氨基酸的总含量,通过试验摸索,确定了以甘氨酸为标准品、茚三酮为显色剂的测定方法.试验结果表明,该方法的最佳反应条件为:pH值5.5,在沸水浴中加热显色20 min,常温条件下的最大吸收波长566 nm.用甘氨酸配制系列标准溶液,通过标准曲线法对待测溶液进行定量分析,其相关系数为0.999 5,回收率在95.5%~104.3%范围内,表明该方法具有操作简便、结果准确、重现性良好的特点.【期刊名称】《食品工程》【年(卷),期】2017(000)001【总页数】3页(P55-57)【关键词】茚三酮;分光光度法;α-氨基酸;甘氨酸【作者】丁永霞【作者单位】菏泽市疾病预防控制中心,山东菏泽274010【正文语种】中文【中图分类】TS207.4UV—2550紫外可见分光光度计,日本岛津公司;FA2004N电子分析天平,上海精密科学仪器公司;石英比色皿(1cm);玻璃比色皿;容量瓶;移液管;吸管;蒸馏烧瓶;加热套;pH试纸。

盐酸溶液,浓度6 mol/L,分析纯;甘氨酸,优级纯;茚三酮试剂,分析纯;乙酸,分析纯;乙酸钠,分析纯;NaOH溶液,浓度1 mol/L,分析纯;酚酞指示剂。

乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH=5.5):精确称取50 g乙酸钠(CH3COONa·3H20)于烧杯中,加入150mL蒸馏水,用移液管移取2.50mL冰醋酸,加热溶解,冷却后转移到250mL容量瓶中,用馏水定容至刻度。

茚三酮乙二醇溶液(质量浓度3%):精确称取3 g水合茚三酮,加入50mL乙二醇,低温加热溶解后,转移至100mL容量瓶中,用乙二醇定容至刻度,转移到试剂瓶后置于0℃~5℃冰箱中保存备用(临用时配)。

甘氨酸标准储备液:准确称取0.1000 g甘氨酸标准品,加馏水溶解定容到100mL容量瓶中,摇匀,转移到玻璃试剂瓶后置于0℃~5℃冰箱中备用,此溶液质量浓度为1000 μg/mL。

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茚三酮鉴定氨基酸概述
1.茚三酮简介
茚三酮(Ninhydrine),又称水合茚三酮,水合茚满三酮,为白色或浅黄色结晶性粉末。

茚三酮是一种用于检测氨或者一级胺和二级胺的试剂。

当与这些游离胺反应时,能够产生深蓝色或者紫色的物质,叫做
Ruhemann紫。

茚三酮常用来检测指纹,这是由于指
纹表面所蜕落的蛋白质和肽中含有的赖氨酸残基,其
上的一级胺被茚三酮检测。

在室温条件下,它是一种
白色的固体物质,溶于乙醇和丙酮。

茚三酮可以看作
是是二氢茚-1,2,3-三酮的水合物。

1901 年,茚三
酮被成功研制出来以后主要用于生物医学领域,1954
年,瑞典科学家Oden 和Hofsten 将其应用于潜在汗
液手印的显现。

茚三酮与汗液中的氨基酸、多肽、蛋白质等发生反应, 生成蓝紫色的手印纹线。

茚三酮也可以用于蛋白质的氨基酸分析。

除去脯氨酸之外的大多数氨基酸,水解之后可与茚三酮反应。

水解中某些氨基酸的侧链也会被降解。

因此对于那些与茚三酮不反应或者发生其他反应的氨基酸需要另作分析。

其余的氨基酸经过色谱分离后可以比色定量。

在分析化学反应的薄层色谱(TLC)中,它可以用于检测所有的胺类,氨基甲酸酯类,在经过充分热处理后可以检测酰胺类物质。

2.实际运用
2.1指纹鉴别
汗液手印中的汗液成分绝大多数是水(约99%以上),其余是少量的无机物和有机物,有机物中包括了人体所含有的各种氨基酸。

茚三酮与手印汗液中的氨基酸发生显色反应而现出手印。

二氧化碳中的碳原子来源于氨基酸当茚三酮与氨基酸反应时可以释放CO
2
的羧基碳。

在考古研究中,这个反应用于释放古老骨骼中羧基碳用于稳定同位素分析,以帮助重现古代生物的食物结构。

用一种标记底物处理的土壤,随后利用茚三酮与氨基酸的反应释放羧基胺,可以证明这种底物是否被吸收进微生物蛋白质。

这种方法成功的发现了一些氨氧化细菌(也叫做硝化细菌)利用土壤中的尿素作为碳源。

法医常用茚三酮溶液分析诸如纸张等多孔表面上的潜指纹。

手指所分泌的细微汗液聚集于独特的手指纹路表面,也即含有氨基酸的指纹,经过茚三酮处理可以将氨基酸指尖纹路变为可见的紫色。

2.2测定茶叶中游离氨基酸总量
茶叶中游离氨基酸含量是用来描述茶叶鲜爽程度的一个重要品质指标, 还
是人体所必需的营养物质, 同时又对人体疾病的康复和预防起着极重要的保健作用。

测定茶叶中的游离氨基酸的含量对茶叶的开发利用具有一定指导意义。

以茶氨酸为标准品, 采用分光光度计为测定仪器, 探索一种适于茶叶游离氨基酸含量的分析方法。

采用比色法测定茶叶中游离氨基酸总量, 测定原理为:氨基酸与水合茚三酮
、氨和比氨基酸少一个碳原子的醛,此时茚三酮被共同加热被氧化分解产生CO
2
还原。

在弱酸性溶液中, 还原茚三酮与氨及另一分子茚三酮缩合成蓝紫色化合物茚二酮胺(DYDA)DYDA在570nm处有最大吸收。

采用茚三酮比色法测定茶汤中的游离氨基酸总量, 采用沸水萃取, 最佳的
试验条件为:pH8.0, 沸水浴加热15min, 冷却10min后在最大吸收波长570nm处测定。

方法的变异系数小于1.69%, 加标平均回收率为96.33%。

本法具有操作简单, 稳定性重现性较好等优点。

2.3 定性定量检测丝氨酸
随着人们对丝氨酸生理作用的深入认识和医药保健事业的不断发展,医药、食品、饲料等行业对丝氨酸的需求量正迅速扩大.虽然L-丝氨酸属于非必需氨基酸,但它却具有许多重要的生理功能及用途,在医药、食品、化妆品中均有较为广泛的应用.因此,测定混合氨基酸中丝氨酸的含量对丝氨酸的开发利用具有重要意义.α-氨基酸与茚三酮在弱酸性溶液中共热,反应后经失水脱羧生成氨基茚三酮,再与水合茚三酮反应生成紫红色或蓝色物质,如图1.脯氨酸等仲胺氨基酸与茚三酮反应生成黄色物质.丝氨酸和茚三酮在弱酸性条件下共热可以生成紫红色的缩合物质,且其颜色随着丝氨酸的含量变化而有所不同.
图1α-氨基酸与茚三酮的显色反应
上述反应生成的紫红色缩合物颜色的深浅还与反应的pH、显色剂的用量、反应的温度及时间有关。

首先,将茚三酮加入到展层剂中,再对氨基酸混合液进行层析.在一定条件下将层析后的茚三酮与氨基酸进行显色反应,根据不同颜色即可鉴别丝氨酸.然后,对不同剂量的丝氨酸标准液使用上述方法绘制丝氨酸标准液的吸光度-含量的标准曲线,用以计算氨基酸水解液丝氨酸的含量.结果表明:茚三酮法定性定量检测丝氨酸的最佳实验条件为溶液pH在4.5左右,显色剂用量为每10mL展层剂中加入2.5mL0.1%茚三酮,并在105℃下加热5min.
3.总结
氨基酸的鉴定对于人们日常生产生活十分重要。

茚三酮鉴定氨基酸,反应灵敏,是鉴定氨基酸的最简便方法。

其显色快,现象明显,已经广泛运用于刑侦、农林、化学、金属等各个行业。

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