细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告辣椒
细胞生物学实验报告辣椒1.1 有机溶剂萃取法根据辣椒色素的理化性质,工业上多采取以下方法进行提取:将茄科植物辣椒的成熟干燥果实之果皮粉碎后,用乙醇、丙酮、异丙醇或正己烷等抽提。
考虑到天然红辣椒中含有辣椒红、辣椒素、辣椒油脂等成分,其中辣椒素即辣椒碱有辣味,高温下产生刺激性蒸气,因此在辣椒色素的精制过程中必须将其去除。
从结构上看辣椒素含有酰胺键,分子中含有一个羟基,是一个极性化合物,其晶体呈现为单斜棱柱体或矩形,熔点61℃,溶于稀乙醇、己醚、丙酮、乙酸乙酯等溶剂及碱性水溶液中。
考虑到辣椒红混合物和辣椒素在不同溶剂中溶解度不同,可以利用两者的溶解度差异进行脱辣处理。
贺文智等[5]基于此原理采用正己烷萃取法,利用辣椒红色素易于溶于正己烷而辣椒素较难溶于正己烷的性质将两者进行分离,操作步骤如下:称取经去蒂、去籽、粉碎处理后的红辣椒粉末,以丙酮为萃取剂进行常压萃取操作,提取液在温度为90℃、真空度为0.09MPa的条件下进行减压蒸馏浓缩,同时回收丙酮。
用丙酮提取辣椒红的过程实质上是液固之间通过相际接触表面进行的传质过程,传质速率的快慢决定着传质设备的尺寸及操作时间。
该方法为了提高传质速率,采用索氏提取器对粉末状的干红辣椒进行提取。
称取一定量的经浓缩的辣椒红粗产品用一定量的正己烷进行萃取脱辣,试验结果见表1。
色价定义为单位质量原料的提取物的吸光度。
该方法操作简单,色素回收率较大,产品得率高,但产品色价较小。
由于色价值与辣度呈负相关性,说明该方法脱辣不够彻底,对于以辣椒红为主要产品且对辣椒素含量要求不是十分苛刻的情况,可以采用此方法。
张宗恩等以丙酮为溶剂提取制备辣椒油树脂,油树脂得率高、色价大、辣素含量低,便于分离。
采用pH值大于10.37的丙酮(50%)溶液进行5次以上脱辣萃取可得到口尝无辣味的红色素。
该方法工艺简单、操作方便,所得色素的各项质量指标均符合FAO/WHO标准。
1.2 柱层析法据报道,辣椒中的辣椒素即使稀释1:100000仍能感觉到辣味,这在很大程度上限制了辣椒色素的应用。
细胞生物学实验报告[4]
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细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告线粒体的活体染色与观察【实验目的】⒈掌握线粒体活体染色原理及方法。
⒉观察和了解动物细胞内线粒体的形态、结构与分布特点。
【实验原理】⒈线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿B染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
⒉活体染色是指用染料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿B、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
细胞骨架实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解细胞骨架的基本概念及其在细胞生物学中的重要性。
2. 掌握使用荧光显微镜观察细胞骨架的方法和技巧。
3. 认识细胞骨架的主要组成成分，包括微丝、微管和中间纤维。
4. 分析细胞骨架在不同细胞类型和生理状态下的形态和分布。
二、实验原理细胞骨架是真核细胞内由微丝、微管和中间纤维组成的网状结构，负责维持细胞形态、细胞运动、物质运输、信号传导等重要功能。
微丝主要由肌动蛋白组成，微管主要由α-和β-微管蛋白组成，而中间纤维则由多种蛋白质组成。
细胞骨架的结构和动态变化对细胞的正常生理功能至关重要。
三、实验材料与仪器材料：1. 植物细胞样本（如洋葱鳞片叶表皮细胞）2. 动物细胞样本（如小鼠成纤维细胞）3. 荧光标记的细胞骨架蛋白抗体4. 抗荧光标记的抗体5. 胶体金标记的抗体6. 封片剂仪器：1. 荧光显微镜2. 激光共聚焦显微镜3. 冷冻切片机4. 液氮5. 恒温培养箱6. 电子显微镜四、实验步骤1. 样本制备：- 植物细胞样本：取洋葱鳞片叶表皮细胞，用2%的戊二醛固定，进行冷冻切片。
- 动物细胞样本：培养小鼠成纤维细胞，用2%的戊二醛固定，进行冷冻切片。
2. 荧光标记：- 将切片置于含有荧光标记的细胞骨架蛋白抗体的溶液中，室温孵育一段时间。
- 洗涤切片，去除未结合的抗体。
3. 抗荧光标记抗体：- 将切片置于含有抗荧光标记抗体的溶液中，室温孵育一段时间。
- 洗涤切片，去除未结合的抗体。
4. 胶体金标记抗体：- 将切片置于含有胶体金标记抗体的溶液中，室温孵育一段时间。
- 洗涤切片，去除未结合的抗体。
5. 封片：- 将切片置于封片剂中，覆盖玻片，封片。
6. 显微镜观察：- 使用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态和分布。
五、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶表皮细胞：- 在荧光显微镜下观察到洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架主要由微丝和微管组成。
- 微丝呈网状分布，主要位于细胞质膜内侧。
- 微管呈束状分布，主要位于细胞核周围。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告动物细胞融合【实验目的】⒈了解动物细胞融合的常用方法。
⒉学习化学融合的基本操作过程。
⒊观察动物细胞融合过程中细胞的行为和变化。
【实验原理】细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。
目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括病毒诱导融合、化学诱导融合和电激诱导融合。
⒈病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融合。
这类病毒的被膜中含有融合蛋白，可介导病毒和宿主细胞融合，同时也可介导细胞与细胞的融合。
用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。
⒉化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。
这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。
PEG是被广泛使用的化学融合剂。
⒊电激诱导融合包括电诱导、激光诱导等。
其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。
电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。
【实验用品】⒈材料鸡血红细胞。
⒉试剂50%PEG、Hank’s溶液(pH7.4)、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。
⒊器材正置显微镜、离心机、离心管、载玻片、盖玻片、滴管、注射器等。
【实验步骤】⒈鸡血红细胞的制备和保存用无菌注射器先吸入Alsevers溶液1ml，再从鸡翼下静脉取血0.5~1ml，取出后放入刻度离心管中，再加入2~3mlAlsevers溶液，使总量为4~5ml，混匀并封口，置于4℃冰箱内。
细胞生物学研究实验报告
细胞生物学研究实验报告1. 引言在细胞生物学领域，研究细胞的结构和功能对于理解生命的基本原理至关重要。
本实验旨在利用细胞培养技术，观察并探究不同条件下细胞的生长和变化，以及细胞代谢的影响因素。
2. 实验材料与方法2.1 细胞培养物准备：选择合适的培养基，并根据说明书的指导进行配制，确保培养基的pH值及其他参数的准确性。
2.2 细胞处理：将细胞培养物均匀接种于含有培养基的培养皿中，根据实验设计设置不同的处理组和对照组。
2.3 细胞观察：在指定时间点，使用显微镜观察细胞的形态和数量，并记录相关数据。
2.4 细胞计数：利用细胞计数板或自动细胞计数器，对处理组和对照组的细胞数量进行计数，并进行统计学分析。
3. 实验结果在本实验中，我们观察了不同培养条件对细胞生长的影响以及细胞数量的变化。
3.1 培养基成分对细胞生长的影响：将细胞分别培养于不同成分的培养基中，并观察其生长情况。
结果显示，不同成分的培养基对细胞生长产生了明显的影响。
例如，在含有特定营养因子的培养基中，细胞的生长速率显著提高。
3.2 不同培养温度对细胞生长的影响：将细胞在不同的温度条件下培养，并在一定时间内观察其生长情况。
实验结果显示，细胞的生长速率在适宜温度范围内最高，而过低或过高的温度均对细胞生长产生了抑制作用。
3.3 细胞代谢产物对细胞生长的影响：添加不同浓度的代谢产物（如乙醛、乙酸等）到培养基中，观察其对细胞生长的影响。
实验结果显示，过高或过低的代谢产物浓度均对细胞生长产生了不利影响，而适宜浓度范围内则促进了细胞的繁殖能力。
4. 讨论与结论本实验结果表明，细胞的生长和变化受到多种因素的影响，包括培养基成分、培养温度以及代谢产物浓度等。
细胞在适宜的培养条件下能够更好地进行增殖和发育，而不利因素则会抑制细胞的生长。
因此，在细胞生物学研究中，合理控制和优化培养条件对于获得准确可靠的实验结果至关重要。
总结：通过本次实验，我们深入了解了细胞生物学领域中的相关实验技术和细胞生长的条件调控。
细胞生物学实验报告-鸡红细胞的融合
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四、实验步骤
（1）鸡血与Alsever溶液按1:4混匀，4℃冰箱中 保存
（2）取1ml细胞悬液，加Alsever溶液稀释20~25 倍
（3）取上稀释悬液1ml，加5ml0.85%生理盐水混 匀
（4）1000rpm离心上述溶液5min，去上清液， 重复操作3次
4混匀4冰箱中保存2取1ml细胞悬液加alsever溶液稀释2025wwwthemegallerycom20211241000rpm离心上述溶液5min去上清液重复操作3次5第三次离心去上清液后加gkn05ml制成10悬液放在37水浴箱预热23min6逐滴025ml的50的peg溶液边加边摇匀37恒温静置15min7取上述液一滴盖上盖玻片镜检wwwthemegallerycom202112五数据记录及处理观察四个视野中的细胞记录鸡血细胞融合情况如下表所视野细胞核总数视野内融合细胞核数2核细胞3核细胞所有细胞核总数所有融合细胞核总数10512wwwthemegallerycom2021122数据处理
2核细胞 3核细胞
视野细胞核 总数
视野内融合 细胞核数
所有细胞核 总数
所有融合细 胞核总数
1 2
30 26
4 3
2 0
0 1
3
4
28
31
2
3
1
0
0
1
105
12
2、数据处理：由上表原始数据得视野内发生融合 的细胞核数为12个，视野内所有细胞核总数为 105个，由公式： 融合率=视野内发生融合的细胞核数/视野内所有细 胞核数× 100%
（5）第三次离心去上清液后，加GKN 0.5ml 制成10%悬液，放在37℃水浴箱预热2~3min
细胞生物学实验报告_2
细胞生物学实验报告细胞凝集反应【实验目的】⒈了解细胞膜的表面结构。
⒉掌握凝集素促使细胞凝集的原理。
⒊学习研究细胞凝集反应的方法。
【实验原理】⒈细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构, 脂和蛋白质又能和糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。
目前认为: 细胞间的联系, 细胞的生长和分化, 免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖外被有关。
⒉凝集素（lectin）是一类含糖（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质, 它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。
凝集素使细胞凝集是由于它与细胞外被中的糖分子连接, 在细胞间形成“桥”的结果, 加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
【实验用品】⒈材料土豆块茎、家兔。
⒉试剂⑴PBS缓冲液称取NaCl 7.2g、Na2HPO4 1.48g、KH2PO4 0.43g, 加蒸馏水, 定容至1L, 调pH至7.2。
⑵1％肝素溶液0.1g肝素溶解于10mL0.9％氯化钠溶液中。
⒊器材5mL注射器、酒精棉球、双凹片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管。
【实验程序】⒈以无菌方法抽取兔耳缘静脉血液（5mL注射器先吸取3mL1％肝素溶液）1mL, 用0.9％氯化钠溶液洗5次, 每次3000r/min离心5min, 最后按沉淀的红细胞体积用0.9％氯化钠溶液配成1％红细胞悬液。
⒉称取去皮土豆块茎2g, 切成薄片, 加10mLPBS缓冲溶液, 浸泡2h, 浸出的粗提取液中含有可溶性土豆凝集素。
⒊用滴管吸取土豆凝集素和PBS缓冲液各一滴, 置于双凹片的左右两孔内, 再分别滴入一滴1％红细胞悬液, 振荡10min。
4.待红细胞液发生明显凝集反应后, 将双凹片置于显微镜下观察。
【实验结果】⒈结果细胞凝集反应实验现象⒉图像加土豆凝集素加PBS缓冲液【分析与讨论】⒈结果分析实验过程中可以观察到: 在双凹片上, 加有土豆凝集素的一侧, 震荡过程中, 红细胞液先变浑浊, 随后又变澄清, 同时发生凝集反应, 且凝集后的块状物聚集在液滴中央；而加有PBS缓冲液的一侧, 震荡过程中, 红细胞不发生明显变化, 静置后, 后细胞逐渐集中于液滴中间部位, 而四周表现为澄清。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告叶绿体的分离、纯化与荧光观察【实验目的】⒈通过植物细胞叶绿体的分离与纯化，了解细胞器分离与纯化的原理和方法。
⒉熟悉荧光显微镜的使用方法，观察叶绿体的自发荧光和间接荧光。
【实验原理】⒈叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行。
由于具有这一重要功能，所以它一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。
叶绿体是植物细胞中较大的一种的细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。
叶绿体结构模式图组织细胞的破碎方法很多，包括机械法（研磨法、匀浆法、胶体磨法）和非机械法（超声波法、有机溶法、溶胀法、酶解法）。
除了某些细胞外的多肽激素和某些蛋白质与酶以外，对于细胞内或多细胞生物组织中的各种生物大分子的分离纯化，都需要事先将细胞和组织破碎，使生物大分子充分释放到溶液中，并不丢失生物活性。
不同的生物体或同一生物体的不同部位的组织，其细胞破碎的难易不一，使用的方法也不相同。
⒉细胞器分离的过程包括两个主要阶段：碎细胞和细胞组分的分离。
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行离心，差速离心和密度梯度离心是分离亚细胞组分的常用方法。
⑴差速离心①原理：一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。
在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。
依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。
②事例：叶绿体的分离应在等渗溶液（0.35mol/L 氯化钠或 0.4mol/L 蔗糖溶液）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。
将匀浆液在1000r/min 的条件下离心 2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。
然后，在 3000r/min 的条件下离心 5min，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。
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1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微构造；2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有向来观认识。
小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片；普通光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片；盖玻片。
(一)细胞形态观察l、动物细胞的观察〔1〕人肝细胞切片：在显微镜下子细观察肝细胞的形态构造。
〔2〕鸡血细胞涂片的观察：观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察〔1〕取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的根本构造。
〔二〕细胞的大小和测量1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。
2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。
调焦至能看清镜台测微尺的分度。
3、小心挪移镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度含糊，可转动目镜上透镜发展调焦)，使两尺左边的向来线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。
4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。
按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：1、目镜校正： 40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数2、细胞大小的测量：1、血细胞按含量上下，主要含有：红细胞，白细胞，血小板。
白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。
红细胞：主要的功能是运送氧。
白细胞：主要扮演了免疫的角色， 当病菌侵入人体时， 白细胞能穿过毛细血管壁， 集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。
血小板：止血过程中起着重要作用。
细胞形态见以下图。
2、植物细胞普通比动物细胞大一些。
形态图见下。
3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小根本一致，但有一些偏差。
放大倍数越大，在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大，而更容易测量准确。
1、熟悉PAS 法原理及操作步骤；2、观察PAS 反响的染色结果，并观察多糖在组织细胞中的分布。
多糖是由多个单糖份子缩合脱水而生成的化合物。
一些不溶性的多糖构成植物和动物的 骨架， 如植物的纤维素和动物的甲壳素， 普通称为构造多糖。
另一些多糖在生物体作为能量测量次数 细胞种类人肝细胞〔10×40〕 血红细胞〔10×40〕 血白细胞〔10×40〕 血小板〔10×10〕 栅栏组织〔10×40〕一/um19.44×21.367.209.12 1.449.12×79.20 二/um18.00×18.967.689.60 1.4410.08×81.12 平均/um17.92×20.007.52 9.52 1.449.92×80.32三/um16.32×19.687.68 9.84 1.4410.56×80.64贮存，如淀粉〔植物〕和糖元〔动物〕，在需要时可以通过生物体酶系统的作用分解，释放出单糖。
过碘酸酒精溶液、 Schiff试剂、亚硫酸水溶液、木精溶液、二甲苯、 100%乙醇+二甲苯〔1：1〕。
梯度乙醇溶液： 100％， 95％， 90％， 80％， 70％， 50％各两份，一份用于脱腊复水，一份用于脱水。
载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜、小烧杯、胶头滴管、镊子、刀片、土豆；小鼠肝细胞石蜡切片。
〔一〕土豆切片的观察制作土豆徒手切片→过碘酸处理15~30min→70%乙醇1min→ schiff 试剂15min → 亚硫酸水漂洗2~3次→ 蒸馏水漂洗→ 镜检〔二〕小鼠肝细胞切片的观察取鼠肝石蜡切片→ 二甲苯脱蜡约 10min → 二甲苯+100%乙醇〔3 min〕→梯度乙醇脱二甲苯，在各浓度乙醇〔100％， 95％， 90％， 80％， 70％， 50％〕中约 2~3min → 过碘酸氧化 15~30min → 蒸馏水漂洗→ Schiff 试剂 15~30min →亚硫酸水漂洗 2~3 次→ 蒸馏水漂洗→ 木精染色 10 min → 流水冲洗→梯度乙醇脱水〔50％，70％，80％，90％， 95％， 100％〕，在各乙醇浓度中约 2~3min →100%乙醇+二甲苯 2~3 min→二甲苯适度透明→ 指甲油封片→ 镜检1、描述土豆切片和鼠肝切片中糖原分布特点。
土豆切片中，多糖多在细胞质液泡中。
鼠肝切片中，多糖多在挨近核的区域。
2、影响 PAS 反响染色效果的关键步骤是什么？Camey固定液固定； Schiff 染色液染色；对分色的控制。
3、如何制作徒手切片？应注意什么才干得到薄而均匀的切片？应注意需要连续快速地切下多片薄片，并从中选出较好的切片。
1、通过植物细胞叶绿体的别离 , 了解细胞器别离的普通原理和方法。
2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光,并熟悉荧光显微镜的使用方法。
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中发展差速离心，是别离细胞器的常用方法。
将匀浆液1000r/min的条件下离心2min, 以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。
然后，在3000r/min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有局部细胞核)。
*些物质在一定短波长的光〔如紫外光〕的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间放射出比照射光波长更长的光，这种光就称为荧光。
假设停顿供能，荧光现象即将停顿。
有些生物体的物质受激发光照射后，可直接发出荧光〔称为自发荧光〕。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光〔称为间接荧光〕。
普通离心机,粗天平, 荧光显微镜，剪刀，研钵，移液管，漏斗，滴管, 10ml刻度离心管, 纱布假设干, 无荧光载玻片和盖玻片，新鲜菠菜， 0.35mol/L氯化钠溶液,0.01%吖啶橙(acridine orange)、1、叶绿体的别离〔1 〕选取新鲜的菠菜嫩叶，洗净擦干后，去除叶梗及粗脉并剪碎，称取2g摆布，置于预冷的研钵；〔2 〕加10ml的0.35mol•L-1 NaCl溶液研磨匀浆；〔3〕用6层纱布过滤，滤液盛于烧杯中；〔4〕取滤液4ml于1000rpm离心2min，弃去沉淀；〔5〕将上清液3000rpm离心5min，弃去上清液，沉淀即为叶绿体〔混有局部细胞核〕；〔6〕沉淀用0.35molL-1NaCl溶液悬浮。
2、叶绿体的观察〔1〕滴叶绿体悬浮液一滴于载片上，加盖片；在普通光镜下观察，注意观察所别离的叶绿体的形态以及其是否完整。
〔2〕滴叶绿体悬浮液一滴于无荧光载片上，加无荧光盖片；在荧光显微镜下观察叶绿体有无自发荧光，其颜色如何。
〔3〕滴叶绿体悬浮液一滴在无荧光载片上，再滴加一滴0.01％吖啶橙荧光染料，加无荧光盖片后即可在荧光显微镜下观察其次生荧光。
3、完整细胞中的叶绿体观察〔1〕用镊子撕取一片菠菜叶子表皮，平铺于载玻片上，滴加一滴提取缓冲液，加盖片后轻压，备用。
〔2〕用镊子撕去菠菜叶子的表皮，用刀片刮下一些叶肉细胞，放于载玻片上，滴加一滴提取缓冲液，加盖片后轻压，备用。
〔3〕将以上两种制片发展一下三种方式的观察：a、通光镜下观察。
b、光显微镜下观察。
c、加一滴0.01％吖啶橙荧光染料，加无荧光盖片后，在荧光显微镜下观察。
1、描述你现象，自发荧光和次生荧光的区自发荧光：有些生物体的物质受激发光照射后，直接发出的荧光称为自发荧光，如叶绿素的火红色荧光。
间接荧光：有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，则称为间接荧光，如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。
2、叶绿体别离的原理是什么？操作过程中应注意什么？通过研磨绿色植物叶片使叶肉细胞破损，叶绿体被释放到提取液中，再通过等渗介质中差速离心去除杂质，再次离心，则可别离出叶绿体沉淀。
应注意须在低温下迅速提取，且须注意等渗液溶度，离心速度和时间的把握，防止叶绿体破裂。
1、熟悉荧光显微镜的原理及使用方法。
2、观察荧光染料染色后结合物发出的荧光。
吖啶橙荧光染料可与细胞DNA和RNA结合。
其吸收光谱405nm，发射的荧光光谱是530~ 640nm，因此，吖啶橙和不同的细胞成份结合后，可发射红橙黄绿蓝各色荧光。
荧光显徽镜、载玻片、盖玻片、染色缸、牙签；口腔黏膜上皮细胞暂时制片；0.1mol/L pH7、0 PBS液。
0.1％吖啶橙原液、 95％乙醇1、用牙签刮取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上；2、95％乙醇溶液固定5min；3、滴加0.01％吖啶橙染液染色5min；4、用PBS缓冲液缓慢冲洗；5、加盖玻片镜检。
掌握植物细胞骨架的制备方法，并用光镜观察洋葱皮细胞的骨架网络构造。
细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞以蛋白质纤维为主要成份的网络构造，根据蛋白质纤维的直径、组成成份和组装构造的不同可分为微丝、微管和中等纤维。
本实验采用去垢剂Triton*-100的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜构造和大局部蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250染色，在光学显微镜下可见一种网状构造。
1、器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、擦镜纸、 50ml烧杯；2、实验材料：洋葱鳞茎；3、试剂： pH6.8的磷酸缓冲液、 M-缓冲液、 1%Triton*-100、3%戊二醛、 0.2%考马斯亮蓝R250 染液、 50％， 70％， 95％乙醇、〕叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶。
1、取材：撕取洋葱鳞茎表皮0.5~1cm2，浸入装有磷酸缓冲液〔PH6.8〕的小烧杯中，处理5~10分钟。
2、去垢处理：弃去PBS缓冲液，用吸水纸吸净剩余的PBS，加适量1%Triton *-100，使液体充分浸泡材料，并即将放入37℃恒温箱或者水浴锅中处理30分钟。
3、冲洗：吸去1%Triton *-100，即将参加M缓冲液轻轻冲洗3次，每次3~5分钟。
4、固定：用吸管将M缓冲液吸尽，参加3%戊二醛，固定10~20分钟。
5、冲洗：吸去3%戊二醛固定液，用磷酸缓冲液〔pH6.8〕冲洗3次，每次3~5分钟。
6、染色：吸去PBS缓冲液，参加适量0.2%考马斯亮蓝R250染料，染色10~20分钟。
7、制片：吸去染料，用水冲洗〔注意不要将材料丧失〕。
将洋葱表皮伸展铺平于载玻片上，加盖盖玻片。
8、镜检1、绘出洋葱细胞的骨架网络分布。
2、根据 M-缓冲液的成份，分析其作用。
咪唑：稳定 PH 值，缓冲作用；KCL：提供离子，对骨架起聚合作用；MgCl2：提供离子，对骨架起聚合作用；EGTA：螯合Ca离子， Ca离子对聚合不利；EDTA：螯合Ca离子， Ca离子对聚合不利；巯基乙醇：起复原作用，稳定骨架构造。
3、通过实验过程，猜测你所观察到的细胞骨架属于胞质骨架中的哪种类型，为什么？猜测为所观察到的蓝色纤维属于细胞骨架中的微丝构造。
因为微管的构造较不稳定，局部纤维太细，光镜下难以分辨；而中间丝不是植物细胞的必须构造，在植物细胞中并不普遍存在，且中间丝更为纤细，光镜下更难以观察。