关于荧光染料(资料集合)
流式细胞术中应用的荧光染料介绍
流式细胞术中应用的荧光染料介绍流式细胞术（Flow Cytometry）是一种用于分析和计数细胞的技术。
在流式细胞术中，荧光染料起着至关重要的作用，可以标记细胞的不同成分，使其能够通过流式细胞仪进行检测和分析。
荧光染料通过特定的荧光光谱来发出荧光信号，这些信号被流式细胞仪采集和分析，从而提供有关细胞类型、数量和功能的信息。
以下是几种常见的流式细胞术中应用的荧光染料的介绍。
1. FITC（Fluorescein Isothiocyanate）：FITC是最常用的荧光染料之一，通过与免疫球蛋白G（IgG）结合，可用于免疫细胞表面分子的检测。
FITC在波长为488 nm的激光下激发，发射的荧光信号在525 nm 左右。
它可以与其他荧光染料（如PE或APC）结合使用，以实现多参数流式细胞分析。
2. PE（Phycoerythrin）：PE是一种从红藻中提取的荧光染料，其发射的荧光信号在575 nm左右。
PE通常用于检测细胞表面的抗原或细胞内的蛋白质，如细胞因子。
PE也可以与其他染料结合使用，以实现多参数分析。
3. APC（Allophycocyanin）：APC是一种类似于PE的荧光染料，通过独特的发射波长（约于660 nm附近）和长的荧光寿命来区分。
APC适用于检测多种细胞表面分子和蛋白质，在深色的区域提供了可靠的信号。
5. PE-Cy7：PE-Cy7是PE染料与Cyanine 7（Cy7）结合形成的荧光染料。
它适用于多参数流式细胞术，利用其较长的荧光寿命和波长（激发于488 nm，发射于780 nm左右），可以与其他染料一起使用，以实现更多的细胞表面和内部分子的检测。
除了上述染料外，还有很多其他的荧光染料可以用于流式细胞术。
例如，Alexa Fluor系列、eFluor系列、Brilliant Violet系列等。
这些染料具有不同的光谱特性和荧光强度，可以根据实验需要选择合适的染料。
需要注意的是，在选择荧光染料时，需考虑染料的互相干扰问题和流式仪的激发和检测系统。
常见细胞核荧光染料
细胞核常用荧光染料有：吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB）和碘化丙啶（Propidium Iodide，PI），DAPI、Hoechst染料、EthD III、7-AAD、RedDot1、2 等等。
透膜的染料如下：AO：具有膜通透性，能透过细胞膜，将核DNA和RNA分别染成绿色和红色，因此使细胞核呈绿色或黄绿色荧光。
EB：一种高度灵敏的荧光染色剂，在标准302nm处激发出橙红色信号。
DAPI：蓝色一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，其与DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，而与单链DNA结合无荧光的增强。
DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI，荧光强度比Hoechst低，但光稳定性高于Hoechst。
Hoechst染料：蓝色一类在显微观察中标记DNA的荧光染料，最常见的两种是Hoechst33342和Hoechst33258。
这两种染料都在紫外350nm处被激发，在461nm处最大发射光附近发射青/蓝色荧光。
与DAPI相比，Hoechst33342加有乙基，具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，并且细胞毒性更小。
RedDot 1染料：红色，超强的细胞核选择性，其光谱相似于Draq?5 和Draq?7。
RedDot?染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。
RedDot? 的红色近红外荧光有效的与其他常用荧光探针区分开来。
不透膜的染料，如下：PI：不同通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。
PI作为红色荧光复染剂首选，PI经常与Calcein-AM或者FDA等荧光探针合用，区分死/活细胞。
EthD III、7-AAD、RedDot 2：不能透过细胞膜，但能将坏死细胞区分开来；更适合凋亡坏死实验的检测；细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）细胞核荧光染料PI碘化丙啶（简称PI）是一种常用的细胞核荧光染色剂。
关于荧光染(资料集合)
关于荧光染料（资料集合）●人肉眼对光源波长的颜色感觉红色770-622 nm橙色622~597 nm黄色597~577 nm绿色577~492 nm蓝靛色492～455nm紫色455～350nm●理想的荧光染料一般具有以下几个特点：1.具有高的光子产量，信号强度高；2.对激发光有较强的吸收，降低背景信号；3.激发光谱与发射光谱之间距离较大，减少背景信号的干扰；4.易与被标记的抗原、抗体或其他生物物质结合而不影响被标记物的特异性；5.稳定性好，不易受光、温度、PH、标本抗凝剂和固定剂的影响。
●染料在生物化学中最早的应用是直接对切片进行染色，然后进行观察。
随着生物技术、计算机技术以及荧光光谱测定技术的不断发展，许多染料尤其是荧光染料在细胞检测、肿瘤基因蛋白分析、毒物分析、临床医疗诊断等方面得到了广泛的应用。
荧光染料泛指吸收某一波长的光波后能发射出另一大于吸收光波长的光波的物质。
利用荧光染料进行抗体标记分析在现代生物免疫学领域中应用广泛，并逐步显示出明显的优越性。
下面简要介绍应用于标记抗体的荧光染料及其种类：1.荧光素类染料，包括异硫氰酸荧光素(FITC)、羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TET)等及其类似物。
这是一类具有较多苯环的化合物。
应用最广泛的是FITC(如图为FITC标记的组织荧光图)，在488nm 处由氩离子激光激发，发射525nm的蓝绿色荧光。
FITC能够与各种抗体蛋白结合，并在碱性溶液中稳定呈现蓝绿色荧光。
2.罗丹明类染料，包括红色罗丹明（RBITC）、四甲基罗丹明（TAMRA）、罗丹明B（TRITC）等。
TRITC在550nm处被激发可发射出570nm的黄色荧光。
3.Cy系列菁染料，菁染料通常有两个杂环体系组成，包括Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7及其类似物。
4.Alexa系列染料，它是由MolecularProbes开发的系列荧光染料。
其激发光和发射光光谱覆盖大部分可见光和部分红外线光谱区域，应用广泛。
荧光染料波长查询
荧光染料波长查询
荧光染料是一种能够吸收光能并发射出更长波长的荧光的染料。
每种荧光染料都有其特定的吸收和发射波长。
以下是一些常见的荧光染料及其对应的吸收和发射波长：
1. 荧光素（Fluorescein）：
- 吸收波长：494-495 nm
- 发射波长：518-520 nm
2. 罗丹明B（Rhodamine B）：
- 吸收波长：540-550 nm
- 发射波长：565-580 nm
3. 二甲基琼脂绿（Ethidium Bromide）：
- 吸收波长：518-530 nm
- 发射波长：605-625 nm
4. 亚甲基蓝（Methylene Blue）：
- 吸收波长：600-660 nm
- 发射波长：660-740 nm
需要注意的是，荧光染料的波长可能因厂商和实验条件而略有差异。
因此，在具
体实验中，最好参考相关荧光染料的技术说明书或与供应商联系以获取准确的波长信息。
荧光染料
AlexaFluor 荧光素是市场上效果最好的荧光素，比较传统荧光素，它具有以下优点：·多色彩选择的灵活性- 染料颜色区广，从蓝色到远红外；·更亮- 荧光强度明显高于近似波长的对应染料，可高达20 倍，镜下可持续3 分钟；·更不容易光淬灭；·对PH 变化极不敏感，可耐受PH2.5-10 广泛的PH 环境；·仪器适配性佳- 荧光显微镜、流式细胞仪等。
AlexaFluor 488 和FITC 的荧光强度对比AlexaFluor488 的荧光强度随时间降低的速度要远小于FITCAlexaFluor 488 的荧光强度几乎不随pH 变化，而FITC 变化显著麦生物™ AlexaFluor 荧光标记抗体实验推荐稀释浓度：使用前先离心，只使用上清，这样能避免保存过程中可能出现的任何微小的蛋白沉淀带来的背景染色。
染色步骤根据应用不同而有差异，所以抗体稀释精确倍数也需要摸索。
一般来说，可使用下表的荧光二抗浓度来进行初始实验：流式细胞术0.06-1.0 ug/106细胞免疫荧光1-10 ug/ml您需根据不同实验需要滴定抗体的最适稀释比例，即最佳工作浓度。
用PBS 进行稀释。
普通荧光素和Alexa Fluor® 替换对应表（括弧中为激发/ 发射波长最值）如果您使用... 那么您可以尝试...AMCA, coumarin (350/445) A lexa Fluor® 350 (346/442)Cascade Blue® (4000/423)Alexa Fluor® 405 (402/421) Alexa Fluor® 430 (434/539)Cy®2, FITC (488/519)Alexa Fluor® 488 (495/519) Alexa Fluor® 532 (531/554)PE, TRITC, TAMRA(547/572)Alexa Fluor® 546 (556/573) Cy®3 (550/570)Alexa Fluor® 555 (555/565) Rhodamine Red (570/576) Alexa Fluor® 568 (578/603)Texas Red® (589/615)Alexa Fluor® 594 (590/617) Alexa Fluor® 633 (632/647)Cy®5, APC (650/670,660)Alexa Fluor® 647 (650/668) Alexa Fluor® 660 (663/690)Cy®5.5 (675/694)Alexa Fluor® 680 (679/702) Alexa Fluor® 700 (696/719)Cy®7 (743/767) Alexa Fluor® 750 (752/779)。
荧光染料分类
荧光染料：猝不及防的五大种类荧光染料是一类可以在紫外光或蓝光激发下发出明亮的颜色或光的化学染料，被广泛地应用于生命科学、材料科学、医学与环境监测等领域。
相较于传统染料，荧光染料有更亮、更稳定的发光效果，使得研究者们可以在实验中获得更精准的结果。
然而，由于类型繁多，新手常常会被五花八门的荧光染料种类搞得晕头转向。
今天，让我们来剖析一下荧光染料的五大种类，帮助大家猝不及防地选出最适合自己实验的染料吧！一、荧光普通染料荧光普通染料是最常见的一种荧光染料，通常在化学与生命科学领域广泛使用。
其发射的荧光主要由它们的分子中的芳香环基团产生，因此常常被用于荧光免疫分析、免疫印迹和荧光染色等。
二、pH指示荧光染料pH指示荧光染料可以根据生物体液中的pH值发出不同颜色的荧光信号，因此在生物医学研究和医学诊断中得到广泛应用。
它们的收集窗口位于甲酰胺或亚胺键附近，pH的变化会导致该结构的变化，进而使荧光性质发生改变。
三、光动力学荧光染料光动力学荧光染料可以用于癌症治疗，这些染料在光照下能够被物质所激发，并且会发出特定的荧光信号。
在照射后，它们可以通过生物体的普通代谢途径排出体外。
四、DNA标记荧光染料DNA标记荧光染料可以和目标DNA结合，形成稳定的复合物，并且以稳定的荧光信号显示出来。
因此，用于 DNA 的荧光标记，是基因克隆、PCR体外扩增和原位杂交等领域的常用手段。
五、光谱比对荧光染料光谱比对荧光染料可以根据染料的反应性和化学性质发出多个波长的荧光信号，并且可以与其他荧光染料进行配对，以增加其特异性。
因此，在分析和鉴定复杂混合物的时候，经常会使用光谱比对荧光染料。
总之，在选择荧光染料的时候，需要根据实验需求、染色失真、照射条件、荧光信号等方面进行考虑。
希望以上五大种荧光染料的分类，能够帮助大家在实验中更好地选择染料，并取得更精准的实验结果。
常见荧光染料及用途
常见荧光染料及用途《常见荧光染料及用途》荧光染料是一种能够吸收可见光或紫外光，并在吸收能量的激发下发射可见光的化学物质。
它们的应用非常广泛，涵盖了许多领域，例如生物医学、材料科学、环境监测等。
以下介绍几种常见的荧光染料及其主要用途。
1. 墨水蓝(BR)：墨水蓝是一种具有强烈蓝色荧光的染料，常用于生物实验中的DNA染色。
它与DNA结合后能发出强烈的荧光信号，从而在实验中方便地观察和分析DNA的存在和定位。
2. 罗丹明B(RhB)：罗丹明B是一种红色荧光染料，广泛用于组织切片和细胞染色。
它能够与细胞核和胞浆中的核酸结合，以显示细胞和组织的结构，帮助科研人员研究细胞分裂和组织结构变化。
3. 草酸罗丹明G(OG)：草酸罗丹明G是一种绿色荧光染料，主要应用于蛋白质和核酸的定量分析。
在分光光度计中配合荧光检测器使用，可以精确测定溶液中蛋白质和核酸的浓度。
4. 罗丹明110(Rh110)：罗丹明110是一种黄绿色荧光染料，常用于细胞活性检测。
通过与细胞内的酶或细胞膜结合，罗丹明110可以用来评估细胞的活力和存活情况，特别适用于细胞毒性测试和细胞增殖研究。
5. 荧光素(FITC)：荧光素是一种与生物相容性极高的荧光染料，常用于免疫染色和分子生物学实验。
它能与抗体特异性结合，在免疫组化和流式细胞术中用于检测蛋白质的表达以及细胞表面标记。
以上只是常见的荧光染料中的几种，它们的应用还远不止于此。
随着科学技术的不断进步，新型的荧光染料不断问世，为各个领域的研究提供了更多更有力的工具。
通过荧光染料的运用，科学家们能够更好地理解和研究生物、物质和环境，进一步推动科学的发展。
有机荧光染料分子
有机荧光染料分子
有机荧光染料分子是一类能够产生荧光的化学结构，其中最常见的有机荧光染料分子包括偶氮染料、螺环芘、芴、喹啉、苯并二氮杂苯、铝酞菁等。
它们通过吸收光子能量后发生激发态跃迁，从而产生荧光，荧光的颜色和强度取决于染料分子的化学结构和环境。
偶氮染料是一类含有偶氮化合物的大分子结构的有机染料，具有特殊的色谱和光学性质。
其中最常见的是罗丹明B和甲基红等。
螺环芘是一种含有螺环结构的多环芳香族化合物，具有较强的光稳定性和发光强度，常用于生物荧光标记和光致变性材料。
芴、喹啉和苯并二氮杂苯等也是常见的有机荧光染料分子，具有不同的化学结构和光学性质，被广泛应用于传感器、荧光染料、荧光探针等领域。
铝酞菁是一类含有铝离子的酞菁类荧光染料分子，具有较强的光稳定性和发光强度，被广泛应用于荧光显微镜、分析化学等领域。
此外，还有许多其他种类的有机荧光染料分子，如杜邦染料、染料颜料等。
总之，有机荧光染料分子是一类功能多样、应用广泛的化学物质，已经成为现代生物医学、环境监测、光电器件等领域的重要工具和材料。
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关于荧光染料（资料集合）
●人肉眼对光源波长的颜色感觉
红色770-622 nm
橙色622~597 nm
黄色597~577 nm
绿色577~492 nm
蓝靛色492～455nm
紫色455～350nm
●理想的荧光染料一般具有以下几个特点：
1.具有高的光子产量，信号强度高；
2.对激发光有较强的吸收，降低背景信号；
3.激发光谱与发射光谱之间距离较大，减少背景信号的干扰；
4.易与被标记的抗原、抗体或其他生物物质结合而不影响被标记物的特异性；
5.稳定性好，不易受光、温度、PH、标本抗凝剂和固定剂的影响。
●染料在生物化学中最早的应用是直接对切片进行染色，然后进行观察。
随着生物技术、计算机技术以及荧光光谱测定技术的不断发展，许多染料尤其是荧光染料在细胞检测、肿瘤基因蛋白分析、毒物分析、临床医疗诊断等方面得到了广泛的应用。
荧光染料泛指吸收某一波长的光波后能发射出另一大于吸收光波长的光波的物质。
利用荧光染料进行抗体标记分析在现代生物免疫学领域中应用广泛，并逐步显示出明显的优越性。
下面简要介绍应用于标记抗体的荧光染料及其种类：
1.荧光素类染料，包括异硫氰酸荧光素(FITC)、羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TET)等及其类似物。
这是一类具有较多苯环的化合物。
应用最广泛的是FITC(如图为FITC标记的组织荧光图)，在488nm 处由氩离子激光激发，发射525nm的蓝绿色荧光。
FITC能够与各种抗体蛋白结合，并在碱性溶液中稳定呈现蓝绿色荧光。
2.罗丹明类染料，包括红色罗丹明（RBITC）、四甲基罗丹明（TAMRA）、罗丹明B（TRITC）等。
TRITC在550nm处被激发可发射出570nm的黄色荧光。
3.Cy系列菁染料，菁染料通常有两个杂环体系组成，包括Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7及其类似物。
4.Alexa系列染料，它是由MolecularProbes开发的系列荧光染料。
其激发光和发射光光谱覆盖大部分可见光和部分红外线光谱区域，应用广泛。
以高亮度、稳定性、仪器兼容性、多种颜色、pH值不敏
感以及水溶性为主要特点。
包括AlexaFluor350、405、430、488、532、546、555、568、594、610、633、647、680、700、750。
目前市面上Alexa系列染料应用非常广泛，且逐渐替代传统的荧光染料，如AlexaFluor488可替代FITC、Cy2；AlexaFluor555可替代Cy3、TAMRA；AlexaFluor633可替代APC、Cy5等。
5.蛋白类的染料，包括藻红蛋白（PE）、藻蓝蛋白（PC）、别藻蓝蛋白（APC）、多甲藻黄素-叶绿素蛋白（preCP）等。
他们大多是在蓝藻中发现的蛋白。
这类荧光染料可以与Cy系列菁染料偶联形成复合染料用于抗体标记。
如市面上常用的有PE-Cy3/Cy5/Cy7、APC-Cy7、PerCP-Cy5.5等。
【菁类染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5)】
Cy2耦联基团激发波长为492nm，发光为波长510nm的绿色可见光。
Cy2和FITC使用相同的滤波片。
由于Cy2比FITC在光下更稳定。
要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片剂，因为这种抗淬灭剂和Cy2反应，在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。
Cy3和Cy5比其他的荧光团探针要更亮，更稳定，背景更弱。
Cy3耦联基团激发光的最大波长为550nm，最强发射光为570nm。
因为激发光和发射光波长很接近TRITC, 在荧光显微镜中，可使用和TRITC一样的滤波片。
Cy3在氩光灯(514nm或528nm)下可以被激发出50％的光强，在氦氖灯(543nm)或者汞灯(546nm)下则约75％。
Cy3可以和荧光素一起作双标。
Cy3还可以和Cy5一起在共聚焦显微镜实验中作多标记。
Cy5耦联基团的激发波长最大650nm，发光波长最大670nm。
在氪氩灯(647nm)下它们可被激发出98％的荧光，在氦氖灯下(633nm)为63％。
Cy5可以和很多其他的荧光基团一起用在多标记的实验中。
由于它的最大发射波长在670nm，Cy5很难用裸眼观察，而且不能用汞灯作理想的激发。
通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的共聚焦显微镜。
在水相封片剂中应当加入抗淬灭剂。
使用传统的表面荧光显微镜时，不推荐使用Cy5。
【藻红蛋白或藻胆色素蛋白-Phycoerythrin(PE)荧光标记二抗】
存在于被称为藻红的多聚微粒中，位于叶绿素的反应中心，在自然结构中，藻红蛋白吸收光能，吸收后转化成能量，供其发育生长。
当藻红蛋白被分离和纯化后，其蛋白质变得具有很强的荧光，能吸收不同波长的光，发出亮红色的荧光，此时不再接受任何外来的光，也不能转移光能。
藻红蛋白PE的吸收波长范围较广，最大的吸收波长为566nm，最大的发射波长为574nm。
藻红蛋白作为荧光标记物具有以下优点：首先具有强的长波长激发和发射荧光，可避免来自其他生物材料荧光的干扰；并且具有极高的发射量子产率；另外PE具有非常高的水溶性而且与许多生物学或合成材料的多位点稳定交联。
【Aminomethylcoumarin Acetate (AMCA)】
耦联的AMCA吸收光波长最大为350nm，发荧光则为450nm。
对于荧光显微镜来说，AMCA可以用汞灯来激发，用紫外滤板来观察。
由于AMCA的信号相对较弱，单标实验中不推荐使用AMCA。
AMCA和荧光素的荧光波长只有很小的重叠范围，而和发出长波长荧光的荧光基团没有或者只有极少的重叠，因此它最常用于多标记实验中，比如免疫荧光显微镜和流式细胞仪。
由于人眼不能很好的检测蓝色荧光，在多标记的实验中，AMCA耦联的二抗应当被用于检测大量的抗原。
AMCA和荧光素一样很快淬灭，使用抗淬灭剂可以减轻。
且由于肉眼不能很好的检测AMCA所激发的蓝色荧光，因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大量存在的抗原。
如果使用在流式细胞仪中，AMCA 可以用汞灯或者水冷却的氩光灯激发，因为它们发出的光线是在光谱的紫外区。
注：由于观察荧光需要一定波长的激发光，必须根据实验室已有的仪器可发光的波段进行选择。
另外，多标记中对探针色彩区分程度的要求。
例如，若丹明红-X (RRX)和德克萨斯红(TR)荧光素的区别就比四甲基若丹明(TRITC)或者Cy3的区别明显。
如果对灵敏度有更高的要求，则Cy3和Cy5就比其他的荧光团探针要亮。
西美杰备有全面的二抗现货产品并能提供最完整的二抗产品线。
主要二抗品牌为全球最大的二抗和底物生产厂商KPL以及前沿抗体生产商ProteinTech。
针对荧光标记二抗，有FITC、TRITC、Rhodamine、PE、Cy3/5、AMCA、Dylight等多种荧光标记二抗；按照检测物种分，有抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛，以及多种细菌类二抗；另外，还有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、IgG(ab’)2等不同类型抗体。