6-帕金森病的神经保护治疗-王训
门德尔松保护法
门德尔松保护法吞咽障碍是严重影响帕金森病病人生活质量的并发症之一，因其导致的误吸及极度消瘦、免疫力差又是帕金森病病人高死亡率的直接原因，门德尔松手法可以增加食管上段括约肌及食管壁打开的幅度和时间，操作方法简单易行、安全可靠。
我科针对帕金森病合并吞咽困难的病人予以门德尔松手法配合康复训练治疗，取得较好的疗效。
现报道如下。
一般资料选择２０１２年１０月—２０１５年９月在湖北医药学院附属太和医院神经科及老年病科就诊的原发性帕金森病合并吞咽困难的病人共４４例，按照轻、中、重随机区组分配至治疗组及对照组，两组病人性别及年龄差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），具体见表１。
帕金森病诊断参照中国帕金森病的临床诊断标准，吞咽困难为Ⅱ级～Ⅳ级，因Ⅴ级病人呛咳、误吸发生率高，未纳入本研究。
排除脑卒中、咽喉恶性疾病、外伤等所导致的吞咽困难，排除合并严重认知障碍、严重运动障碍不能理解及配合康复训练的病人。
训练方法对照组遵循常规的针对吞咽障碍的康复训练，基础训练和摄食训练为常规康复训练的两个主要部分。
治疗组在运用康复训练的基础上联合门德尔松训练法。
1、吞咽障碍基础康复训练口腔周围肌肉的运动训练；颈部放松训练，主要包括：颈部的前屈、后伸，颈部的左、右旋转，颈部的侧屈和耸肩运动；寒冷刺激训练；构音训练，反复地训练发“ｋ”“ａ”“Ｙ”“ｅ”音；声带闭锁训练及其咳嗽训练；吞咽模式的训练，让病人参照治疗师动作，学习张口、闭嘴、鼓腮、吸吮等面肌训练。
每日训练３０ｍｉｎ，每周进行５次。
摄食训练：病人取高卧位，颈部前屈３０°，每次喂食５ｍＬ糊状食物，嘱咐病人多次进行吞咽，每日１次，每次１０ｍｉｎ，１个月为１个疗程。
2、门德尔松训练方法喉部可以活动的病人，治疗师将食指放在病人甲状软骨上，中指放在环状软骨上，感觉到喉结上抬在进行吞咽动作时，指导病人在上抬的位置保持数秒，或者指导病人将舌部顶住硬腭，然后让病人开始屏住呼吸，持续数秒；对喉结不能上抬的病人，治疗师上推病人的喉结，感觉喉结开始上抬时，将拇指和食指放在环状软骨下方，轻捏喉结并轻轻往上推，持续数秒。
帕金森的治疗方法
帕金森的治疗方法
帕金森病的治疗方法通常包括药物治疗、手术治疗和辅助疗法。
以下是常见的治疗方法：
1. 药物治疗：目前常用的药物包括多巴胺激动剂（如左旋多巴）、抗胆碱药物（如艾科考宁）、深脑刺激剂（如泛唑嗪）等。
这些药物可以减轻运动障碍和其他症状，如震颤、肌肉僵硬等。
2. 手术治疗：对于药物治疗无效或症状严重的患者，手术治疗可能是一个选择。
深脑刺激术是目前应用最广泛的手术方法，通过植入电极并通过外部刺激来改善症状。
其他一些手术方法包括脑成像引导下的高强度聚焦超声治疗和毁损术。
3. 辅助疗法：除了药物和手术治疗，一些辅助疗法可以帮助减轻帕金森病的症状。
例如，物理治疗、言语治疗和职业治疗可以帮助患者恢复肌肉控制和日常生活技能。
运动疗法和音乐疗法也被认为对改善运动功能和心理状态有积极影响。
心理支持和认知行为疗法也可以帮助患者应对情绪和认知问题。
总的来说，帕金森病的治疗方法因人而异，应根据患者的具体情况由医生进行指导和选择。
在治疗过程中，定期的随访和调整治疗方案也非常重要。
木犀草素联合芦丁抗6-羟多巴胺诱导的帕金森病大鼠震颤及神经保护作用
木犀草素联合芦丁抗6-羟多巴胺诱导的帕金森病大鼠震颤及神经保护作用何国荣;成银霞;穆鑫;李晓秀;于昕;王月华;方莲花;杜冠华【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2012(28)5【摘要】目的探讨木犀草素和芦丁组合物(mixture of luteolin and rutin,MLR)对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(parkinson′s disease,PD)模型大鼠减轻震颤和保护神经元的作用及机制.方法运用6-OHDA两点注射法,损毁大鼠左侧中脑多巴胺能神经元,复制PD模型.2周后,将造模成功大鼠随机分为模型组、美多芭给药组(50 mg·kg-1)、MLR给药组(125、250、375 mg·kg-1),另取手术并注射生理盐水、经检测无旋转运动的大鼠为假手术组.在给药后第3周记录大鼠后肢肌电(EMG),观察肌肉震颤.行为学检查完毕后采用免疫组化法检测大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运体(DAT)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数.结果EMG检测结果显示,MLR各给药组可明显降低大鼠的震颤频率和幅度,中、高剂量组的作用优于美多芭组.免疫组化结果显示,MLR高剂量组TH免疫阳性神经元的数目约为模型组的499.14%,MLR高剂量组GFAP免疫阳性星形胶质细胞的数目比模型组降低了43.68%.结论 MLR可剂量依赖性抑制PD模型大鼠震颤,减轻神经元受损程度,抑制星形胶质细胞激活和促炎因子释放,从而延缓DA能神经元进行性退变.【总页数】7页(P626-632)【作者】何国荣;成银霞;穆鑫;李晓秀;于昕;王月华;方莲花;杜冠华【作者单位】中国医学科学院,北京协和医学院,药物研究所,"药物靶点研究与新药筛选"北京市重点实验室,北京,100050;中国医学科学院,北京协和医学院,药物研究所,"药物靶点研究与新药筛选"北京市重点实验室,北京,100050;中国医学科学院,北京协和医学院,药物研究所,"药物靶点研究与新药筛选"北京市重点实验室,北京,100050;中国医学科学院,北京协和医学院,药物研究所,"药物靶点研究与新药筛选"北京市重点实验室,北京,100050;烟台大学药学院药理学教研室,山东,烟台,264005;中国医学科学院,北京协和医学院,药物研究所,"药物靶点研究与新药筛选"北京市重点实验室,北京,100050;中国医学科学院,北京协和医学院,药物研究所,"药物靶点研究与新药筛选"北京市重点实验室,北京,100050;中国医学科学院,北京协和医学院,药物研究所,"药物靶点研究与新药筛选"北京市重点实验室,北京,100050【正文语种】中文【中图分类】R-332;R284.1;R322.81;R745.702.2;R745.705.31【相关文献】1.硫辛酸对6-羟多巴胺诱导的帕金森模型大鼠的保护作用 [J], 李成朋;韩飞;杨梅;魏操;周波;张春林;焦玲;官志忠;禹文峰;2.硫辛酸对6-羟多巴胺诱导的帕金森模型大鼠的保护作用 [J], 李成朋;韩飞;杨梅;魏操;周波;张春林;焦玲;官志忠;禹文峰3.6-羟多巴胺诱导帕金森病大鼠模型行为学评价方法的探讨 [J], 杨谦谦;孙芳龄;艾厚喜;张丽;王文4.6-羟多巴胺诱导帕金森病大鼠模型行为学评价方法的探讨 [J], 杨谦谦;孙芳龄;艾厚喜;张丽;王文;5.Synphilin-1寡核苷酸对6-羟多巴胺诱导帕金森病大鼠黑质Caspase-3表达影响 [J], 张鲲鹏;于永鹏;谢安木因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
针刺百会和大椎穴对帕金森病小鼠多巴胺能神经元的保护作用
针刺百会和大椎穴对帕金森病小鼠多巴胺能神经元的保护作用王媛媛;孙红梅;和欣;吴海霞;许红;高誉珊;王志永;白丽敏【期刊名称】《解剖科学进展》【年(卷),期】2010()1【摘要】目的探讨针刺百会和大椎穴对帕金森病(PD)小鼠多巴胺能神经元的保护作用及可能机制。
方法C57BL/6雄性小鼠随机分为5组:正常组、模型组、针刺组、美多巴组、针刺结合美多巴组(针美组)。
后4组首先腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)建立PD动物模型,后3组造模后采取不同的治疗措施,造模后动物存活14d。
采用爬杆法测量小鼠行为学改变,应用高效液相电化学内标法测定前脑单胺类神经递质含量,用免疫组织化学技术检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目。
结果针刺、针美组小鼠爬杆时间较模型组短(P<0.05)。
与正常组比较,各组动物前脑内多巴胺及其代谢产物3,4-二羟基苯乙酸含量明显降低,3个治疗组与模型组比较虽然无明显差异,但从数值上看降低的程度较模型组低。
造模后14d,模型组TH阳性神经元数目较正常组减少(P<0.01),3个治疗组也较正常组减少(P<0.01),但较模型组增多(P<0.05)。
结论针刺百会、大椎穴或针刺结合美多巴可改善PD小鼠的行为障碍,这种作用可能与减少多巴胺能神经元的丢失有关。
【总页数】5页(P16-20)【关键词】帕金森病;MPTP;百会;大椎;多巴胺能神经元【作者】王媛媛;孙红梅;和欣;吴海霞;许红;高誉珊;王志永;白丽敏【作者单位】北京中医药大学解剖学教研室【正文语种】中文【中图分类】R742.5【相关文献】1.迷迭香酸甲酯对帕金森病小鼠多巴胺能神经元损伤的保护作用 [J], 王小洪;曹桂云;王晴;徐瑾业;李颖;王继军;郁多男2.针刺百会、大椎穴对帕金森病小鼠脑线粒体复合物活性的影响 [J], 孙红梅;和欣;王媛媛;王志永;许红;高誉珊;吴海霞;白丽敏3.针刺督脉穴对帕金森病小鼠多巴胺能神经元保护及超微结构的影响 [J], 孙红梅;黄启福;吴海霞;许红;高誉珊;葛桂玲;王媛媛;和欣;王志永;白丽敏4.低分子量硫酸软骨素对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用[J], 高钦;丁红光;孙福生;杨志宏;王井;丁慧婷;高华;鞠传霞5.栀子醇提物对MPTP致帕金森病小鼠多巴胺能神经元的保护作用 [J], 张奇昌;汪泽;陈阳;王雅溶因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
帕金森的最佳治疗方法
帕金森的最佳治疗方法
针对帕金森病的治疗方法通常是根据病情的严重程度和症状的表现来确定的。
以下是一些主要的治疗方法：
1. 药物治疗：药物是帕金森病的首要治疗方法之一。
药物可帮助控制病情，减轻症状并提高患者的生活质量。
常用的药物包括多巴胺类药物（如左旋多巴、多巴胺受体激动剂）、抗胆碱药物（如安坦）、COMT抑制剂等。
2. 脑深部刺激（DBS）：对于症状难以控制的患者，脑深部刺激可能是一种有效的治疗选择。
DBS通过植入脑深部电极，产生电刺激来改善病情，减轻运动障碍的症状。
3. 物理治疗与康复训练：这些方法可以通过肌肉训练、平衡训练和灵活性训练来改善患者的运动功能和日常生活能力。
4. 手术治疗：手术治疗对于特定病例可能是一种有效的选择，如深部脑刺激术、毁损术（如丘脑切除术、苦瓜胺丘脑部切除术）等。
5. 个体化治疗：帕金森病的治疗需要根据每个患者的情况进行个体化调整。
治疗计划可能根据病情的不同而变化，患者和医生需要进行密切合作，根据症状的演变及时调整治疗方案。
最佳的治疗方法应该根据个体情况来确定，因此建议患者与医疗专业人员合作，制定个性化的治疗计划。
及早诊断和治疗对于帕金森病的管理和病情的控制至关重要。
治疗帕金森病,要“三驾马车”齐拉
治疗帕金森病,要“三驾马车”齐拉
凌雪辉
【期刊名称】《家庭医药（快乐养生）》
【年(卷),期】2024()3
【摘要】帕金森病(Parkinson's Disease,PD)是全球第二常见的神经退行性疾病,调查显示,我国60岁以上人群中帕金森患病率约为1.37%,已经成为继肿瘤、心脑血管病后,中老年的“第三大健康杀手”,也被称为“不死的癌症”。
帕金森病主要是由于多巴胺神经元受损,导致的运动和非运动功能障碍。
运动症状包括震颤、僵硬、小字症(笔迹变小或字母大小不一,字词挤在一起)和运动迟缓。
非运动症状则包括睡眠障碍、嗅觉减退、吞咽或咀嚼困难、唾液过多、低血压、便秘、膀胱问题、疲劳、疼痛、刺痛、头晕、认知障碍、注意力不集中、幻觉、焦虑和抑郁等。
这些非运动症状可能在运动症状出现前就存在,并随病情进展而加剧。
【总页数】2页(P48-49)
【作者】凌雪辉
【作者单位】上海中医药大学附属第七人民医院神经内科
【正文语种】中文
【中图分类】R74
【相关文献】
1.走出“三驾马车”认识误区——重庆市“三驾马车”与相关统计指标关系研究
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3.天
津软件园"三驾马车"齐驱缘何难以并驾4.三驾马车三驾齐驱5.拉动中国经济:旧三驾马车到新三驾马车
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帕金森病运动障碍康复的研究现状
—182 —国际老年医学杂志 2021年5月 第42卷第3期 IntJGeriatr, May 2021, Vol. 42 No. 3 © 2021 国际老年医学杂志编辑部 © 2021 by the Editorial Office of International Journal of Geriatrics帕金森病运动障碍康复的研究现状朱书月叶小青彭娟娟…王磊南京中医药大学第二临床医学院，南京210029［摘要］ 帕金森病是一种临床常见的神经退行性疾病，以进展性运动障碍为主要特征，可影响患者的日常活动和生活自理能力，导致多种并发症，严重者甚至危及生命，因此探究帕金森病运动障碍的 康复手段至关重要。
本文整理了帕金森病运动障碍最新的康复治疗方法，分析其有效性和局限性，旨在让 康复从业人员更好地掌握多种疗法，从而有效地改善帕金森病患者的运动功能，预防并发症。
［关键词］ 帕金森病；运动障碍；康复治疗；有效性doi ： 10. 3969/j. issn. 1674 -7593. 2021.03.014Current Research on Rehabilitation of Parkinson ，s disease with DyskinesiaZhu Shuyue , Ye Xiaoqing , Peng Juanjuan * * , Wang Lei*国家自然科学基金项目(81772444)* *通讯作者：彭娟娟，电子邮箱pjuan0508@ 163. comThe Second Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine , Nanjing 210029* * Corresponding author : Peng Juanjuan , E -mail ： mailpjuan0508@ 163. com[Abstract] Parkinson 會 disease is a common neurodegenerative disease , characterized by progressive dyskinesia , which canaffect the daily activities and self - care ability of patients , lead to a variety of complications , even life - threatening. So it is very im portant to explore the rehabilitation methods of dyskinesia in Parkinsons disease. This paper summarizes the latest rehabilitation treat ment methods of dyskinesia in Parkinson^ disease , analyzes its effectiveness and limitations. The aim is to make the rehabilitation practitioners better master a variety of therapies , so as to effectively improve the motor function of patients with Parkinson^ disease andprevent complications.[Key words ] Parkinson 色 disease ； Dyskinesia ； Rehabilitation therapy ； Effectiveness帕金森病(Parkinson diseases , PD),又称震颤 麻痹(paralysis agitans),是一种常见的神经退行性疾病，主要是由于中脑黑质的多巴胺(DA)神经元 变性，导致纹状体多巴胺含量减少，胆碱能活性相对亢进，主要临床特点为进展缓慢，可导致运动功能受损，伴有缓慢运动、震颤冻结步态和平衡障W ［1-2］o 药物治疗是目前最主要的治疗手段，但其 存在各种并发症,手术治疗虽可有效改善运动障碍,但价格比较昂贵，且有明确的适应证。
中医药治疗帕金森病实验性研究进展
中医药治疗帕金森病实验性研究进展
帕金森病是一种常见的神经系统退行性疾病，其主要特征是肌张力障碍、震颤和运动
缓慢。
目前，西药治疗是常用的方法，但长期使用会产生多种副作用。
中医药治疗帕金森
病的研究也得到了越来越多的关注。
本文就中医药治疗帕金森病的实验性研究进展进行综述。
1. 中药治疗
中药治疗帕金森病主要采用补肾益气、疏风理气、活血化淤等方剂，如肾气丸、回旋散、活血止痛片等。
近年来研究证实，催眠香附丸、复方异丙肝素锉等中药方剂对帕金森
病患者具有显著的临床疗效，能显著改善患者的运动功能和生活质量。
2. 针灸治疗
针灸治疗是一种传统的中医疗法，可以刺激人体经络和穴位，调节神经和内分泌系统
的功能，以达到预防和治疗疾病的目的。
研究表明，针灸治疗可以明显改善帕金森病患者
的震颤、僵硬和运动能力，同时还能改善睡眠质量和心理状态。
3. 拔罐疗法
总之，中医药治疗帕金森病是一种很有前途的治疗方法，可以有效改善帕金森病患者
的运动和生活功能。
但由于中医药治疗需要针对个体化的情况进行综合治疗，因此需要结
合实际疾病情况，分析治疗方案，准确用药。
此外，中医药治疗应在专业医生指导下进行，以保证疗效和安全。
4.4抗帕金森病药
3.L－dopa容易通过血脑屏障进入脑组织，在 脱羧酶的作用下生成DA，发挥其药理作用。
临床应用
L-dopa用于治疗各类型PD病人: 1.首先改善运动障碍和肌肉强直，然后改善震颤； 2.对步态不协调，面部无表情和流涎者也有效， 但对痴呆症状不易改善。 3.对吩噻嗪类抗精神病药引起的锥体外系症状无 效，因吩噻嗪类药物阻断中枢DA受体，使DA无 法发挥作用。
•ACh
PD时：
•DA •ACh
药物治疗与疗效评价
目前药物治疗并不能完全治愈该病，但 若正确使用可显著改善患者的生活质量。 根据药理作用机制，将抗PD药分为拟DA 药和抗胆碱药两类，两类药物合用可增强 疗效。两类药物的治疗作用目标都在于恢 复DA能和ACh能神经系统功能的平衡状态 。
治疗PD药物
二 、中枢抗胆碱药
作用与应用 1、多用于轻症患者 2、用于不能耐受或禁用左旋多巴患者 3、与左旋多巴合用，可使50%患者症状 进一步改善 4、对抗精神病药（如氯丙嗪）引起的锥 体外系（帕金森综合征）有效！
二 、中枢抗胆碱药
苯海索(Benzhexol，安坦)
对震颤效果好 多用于轻症患者 用于不能耐受或禁用左旋多巴患者 与左旋多巴合用，可使50%患者症状进一
机理：由于DA刺激延髓催吐化学感受区所致。 2. 心血管反应：
直立性低血压，患者通常无症状，但有些患 者可感到头晕，偶见晕厥。此外，由于DA可兴 奋 受体，故可引起心律失常 。
不良反应
3.运动过多症：长期用药可引起头、面部、舌、 上肢和身体上部的不自主异常运动，
4.异常不随意运动：
“开一关”现象，即患者突然多动不安（开）， 而后又出现肌强直运动不能（关），两种现象 可交替出现，严重妨碍患者的日常活动。一旦 发生应减量或停用，
肌苷对帕金森病小鼠模型的神经保护作用
#研究原著#文章编号:100022790(2005)022*******肌苷对帕金森病小鼠模型的神经保护作用姚庆和,高国栋 (第四军医大学唐都医院神经外科,陕西西安710038)收稿日期:2004203210; 修回日期:2004206216作者简介:姚庆和(19732),男(汉族),河南省洛阳市人.硕士生(导师高国栋)1Tel 1(029)83377735 Em ail 1nsurgerx @f m mu 1edu 1cnInosi ne is neuroprective aga i nst MPTP 2i nduced Park i nson p s d isease i n C 57BL m iceY A O Q ing 2H e ,G A O Guo 2DongDepart m ent of Neurosurgery ,Tangdu H ospita ,l F o urth M ilita ry M ed i ca lUn i versity ,X i p an 710038,China=Ab stra ct >A I M:To s t udy the ne urop ro te c ti ve e ff e c ts o f i n 2os i n e on 12m e thyl 242phe nyl 21,2,3,62te tra hydrop yr i di ne (MP TP )2i nduce d P a rk i nson p s d i se a se (P D)i n C 57BL m i c e.M ETHOD S :The PD m ode l s w e re for m e d w it h i n tra pe r i to 2ne a l i n j e c ti ons o fMP TP.I nos i ne wa s a dm i n i s te re d i n tra pe r 2itone a ll y to m i ce 30m i n p ri o r to MP TP.The e ff e c t s o f i no 2s i ne a nd MP TP on the be ha v i o ra l e xh i b iti on ,the nu m be r o f dopam i ne (DA)ne urons i n the s ubs ta n ti a ni g ra and t he de ns ity o f t yros i n e hydroxyl a se 2m i m uno re a c ti ve (TH 2ir )ne rve fi be rs i n t he s tr i a tum,a nd t he l e ve lo f DA i n the s tri a 2tu m we re s tudi e d by be ha v i ora l t e s ,t m i m unoh i s tochem i ca l a na l ys i s a nd fl u o rospe c tropho t om e try .RE SULT S :The sco re s o f l ocom o ti on ,R o t a rod a nd sw m i t e s t de c re a se d by a bou t 45%a nd 43%a nd 22%,re spe c ti ve l y .The num be r o f DA ne urons i n the subs tan ti a ni g ra de c li ne d b y a bout 58%,the de ns it y o f TH 2ir ne rve fi be rs a l so de c re a se d ,a nd t he l e ve l o f DA i n t he s tri a tum de c li ned by abou t 88%.I nos i ne,g i ve n p ri or t o MP TP,a tt e nua t e d t he e ff e c ts o fMP TP.The sco re s o f l ocom o ti on ,R o t a rod and sw m i te s t de c li ned on l y by a bout 5%a nd 11%a nd 12%,re spe c ti ve l y ,t he num be r o f DA ne u rons i n the s ubs ta n ti a ni g ra de c l i ne d by on l y a bout 43%a nd t he l e ve l o f DA i n t he s tri a tum de c li ne d on l y by a 2bou t 71%.CONC LUS ION :Ino s i ne i s ne urop re c ti ve a ga i n s t MP TP 2i nd uce d l e s i o ns i n C 57B L m i ce.=K ey word s >i nos i ne;12Me t hy l 242phe ny 21,2,3,62te tra hyd ro 2pyr i d i ne;P a rki nson d i se a se;ne a ra p ro t e c ti ve a 2ge n ts ;m i ce =摘 要>目的:观察肌苷对MPTP 致帕金森病(PD)小鼠模型的神经保护作用.方法:用MPTP 建立C57BL 小鼠PD 模型,在MPTP 前给予肌苷,通过行为学检测(自主活动计数、R otarod 检测、游泳实验)、免疫组织化学和荧光分光光度法,观察肌苷对PD 小鼠模型的行为学表现、黑质多巴胺(DA)神经元和纹状体酪氨酸羟化酶免疫反应阳性(T H 2ir)神经纤维以及纹状体D A 水平的影响.结果:给予M PTP 后,小鼠行为学计数降低,自主活动计数、Rotaro d 检测、游泳实验分别降低约45%、43%和22%,黑质DA 神经元数目减少约58%,纹状体TH 2ir 神经纤维密度减低,纹状体DA 水平明显降低约88%,提前给予肌苷后降低程度减轻,自主活动计数、Rotarod 检测、游泳实验降低程度分别约为5%、11%和12%,黑质DA 神经元数目减少约43%,纹状体D A 水平降低约71%,两组相比有显著性差异(P <0101).结论:肌苷对M PTP 所致的C57BL 小鼠的神经损伤具有保护作用.=关键词>肌苷;12甲基242苯基21,2,3,62四氢吡啶;帕金森病;神经保护药;小鼠=中图号>R65111 =文献标识码>A0 引言帕金森病(Park i n son p s disease ,PD )是一种临床常见的神经系统退变性疾病,是中老年人常见的致残疾患之一.目前所知,其主要是由于黑质多巴胺(Dopa 2m i n e ,D A )能神经元坏死、凋亡,细胞数目减少,使黑质-纹状体通路DA 释放减少,出现多巴胺2乙酰胆碱失衡,患者出现静止性震颤、肌张力增高、运动减少等一系列症状,严重影响患者的生活质量.研究显示PD 的发病与遗传和环境等多种因素相关,12甲基242苯基21、2、3、62四氢吡啶(12m et h yl 242phenyl 21,2,3,62tetrahydropyri d i n e ,MPTP)可以导致人类及灵长类、小鼠等多种动物产生PD 样症状,为PD 研究提供了新的途径.肌苷(inosi n e ,I N O )是腺嘌呤核苷和核苷酸代谢的中间产物之一,临床上长期作为能量营养剂用于多种疾病如肝脏和心血管疾病的辅助治疗.近期研究发现,肌苷在神经系统的损伤与修复中也具有重要的营养和保护作用.本研究利用常用的MPTP 致C57BL 小鼠PD 模型,探讨肌苷在PD 中的神经保护作用.1 材料和方法111 动物和分组 8wk 龄雄性C57BL 小鼠(第四军医大学实验动物中心提供),体质量25~27g ,安静环境饲养,自由取食饮水,人工昼夜节律(12~12h).将动物随机分为3组:生理盐水组(Sa li n e 组);MPTP 组;肌苷+MPTP 组(I N O +MPTP 组),每组10只.第1~3日I NO+MPTP 组给予肌苷60mg /kg i p 1次/d ,Saline 组、MPTP 组给予等量生理盐水ip 1次/d ,第4~10日I N O +MPTP 组给予肌苷60mg /kg i p ,30m in 后MPTP 30mg /kg ip 1次/d ,MPTP 组给予等量生理盐水ip30m i n后MPTP30mg/kg i p1次/d,Sali n e组给予等量生理盐水ip1次/d.112试剂和仪器MPTP,I N O和DA标准品为Sig2 ma公司产品,小鼠抗酪氨酸羟化酶(T H)单克隆抗体,生物素化兔抗小鼠二抗,ABC试剂盒为Calbio2 che m公司产品,其余试剂为国产分析纯.用0101 mol/L盐酸将D A配制成100mg/L,保存于0~2e,使用前用0101mol/L盐酸稀释配制成标准应用液2 mg/L.酸化正丁醇:100mL正丁醇中加入01085mL 浓盐酸;1/15mol/L磷酸盐缓冲液(p H712): KH2PO40135g和N a2H PO4#12H2O1145g溶于9715mL去离子水中,用10mol/L N a O H或H3PO4调至p H712,最后定容到100mL;011mol/L碘试剂: K I1g溶于重蒸馏水后加入I20125g,再加重蒸馏水至20mL,贮于棕色瓶中,避光保存;碱性亚硫酸钠: 0125g亚硫酸钠(N a2S O3)溶于5mol/L Na OH9mL 中,再加水1mL混匀,临用前配制;011mol/L EDT A 溶液(pH710):EDT A22N a.2H2O01371g溶于915 mL乙酸钠(1mol/L)中,用10mol/L N a O H调p H 710,最后用乙酸钠(1mol/L)溶液加到10mL,贮存于冰箱备用.UGO BASI L E7750型Rotarod仪,岛津RF25000荧光分光光度仪.113行为学检测在停药后第3日,进行下述行为学检测.11311自主活动计数参照Ka wa iH[1]的测试方法,自制30c m@30c m@15c m的有机玻璃盒,底部刻出6c m@6c m的格子,在安静、光线较暗的环境中检测.小鼠适应环境10m i n后,计数5m in内小鼠移动的格子数,连续测5次取平均值.11312Rotarod检测Rotarod实验需要动物在滚轴上保持平衡并连续运动,是广泛采用的检测运动协调性的实验.滚轴直径6c m,转速20r/m i n,连续测20次取平均值.11313游泳实验参照Donnan G A[2]的测试方法,将受试小鼠放入一个20c m@30c m@20c m规格的有机玻璃水箱中,水深10c m,水温为22~25e.评分标准如下:在1m i n内能连续不断游泳者记310分;大部分时间游泳仅偶尔漂浮者记215分;漂浮时间占整个受试时间50%以上者记210分;偶尔游泳者记115分;偶尔用后肢游动并漂浮在水箱一边者记110分.检测5次取平均值.114黑质及纹状体免疫组织化学检测行为学检测后,每组取5只小鼠行黑质及纹状体免疫组织化学检测.5g/L戊巴比妥钠1mL腹腔麻醉后,开胸经主动脉先以9g/L生理盐水15mL冲洗血液,再用含40 g/L多聚甲醛的011mol/L的磷酸缓冲液(PBS,p H 712)100mL先快后慢灌注固定1h1灌毕立即取脑,在含300g/L蔗糖的PBS内过夜(4e)至组织沉底.参考小鼠脑图谱,在恒冷箱(-22e)行中脑黑质和纹状体冠状切片,片厚30L m,收集于0101mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,p H712)内.免疫组织化学染色步骤如下:3mL/L过氧化氢甲醇溶液(300mL过氧化氢1mL+甲醇80mL+PBS19mL)30m in,3g/L T ri2 ton X2100的PBS30m i n,浸入小鼠抗T H单克隆抗体(1B3000)孵育48h(4e),浸入生物素化兔抗小鼠二抗(1B500)孵育2h(室温),浸入ABC复合物(1B500)孵育2h(室温),蒸馏水快速冲洗后硫酸镍胺加强D AB蓝色反应法显色20~30m in,当阳性产物呈深蓝色而背底清晰时蒸馏水冲洗3次终止显色.以上步骤每步后均需0101mol/L PBS清洗3次,每次10m i n.其中一抗用含10mL/L小牛血清和3g/L 的T riton X2100的PBS稀释,二抗和ABC复合物用PBS稀释.贴片,脱水,透明,中性树胶封片.每只小鼠黑质取头端、中部、尾端切片3张,取大脑脚中点上方区域,在200@高倍镜下计数T H免疫反应阳性(T H2 ir)神经元个数,取平均数.115纹状体DA水平检测在行为学检测后,每组取5只行纹状体D A水平荧光分光光度法检测.将小鼠迅速断头、取脑,放入预冷的生理盐水中,去除脑膜和血液,滤纸吸干水分,在冰皿上剥离纹状体,称质量后置于含有少量冰冷的酸化正丁醇的匀浆器中,在冰水浴中制成匀浆,转移至具塞刻度离心管内,并用酸化正丁醇补充至3mL,按以下步骤测D A浓度:匀浆液振荡1m i n,离心(2500r/m in)5m i n,上清液115 mL+1/15mol/L磷酸盐缓冲液(pH712)115mL,振荡1m i n,离心5m i n,水相015mL+EDT A溶液014 mL混合,加碘试剂012mL混合、静置,准确反应2 m i n,加碱性亚硫酸钠015mL混合、静置,准确反应2 m i n,加6mol/L乙酸016mL,沸水浴20m i n,冷却后检测荧光强度(波长:激发光320nm,发射光370 nm).每批实验均需空白管和标准管.空白管:取0101mol/L盐酸012mL,用酸化正丁醇补充至3mL,其余操作同样品管.标准管:取标准应用液012mL,用酸化正丁醇补充至3mL,其余操作同样品管.统计学处理:实验结果采用x?s表示,SPSS1010统计软件行单因素方差分析和S NK2q组间两两比较,P<0105为有统计学意义.2结果211小鼠给予M PTP后的一般表现小鼠在给予MPTP后3~5m in,出现震颤、运动减少、弓背、后肢张开、步态不稳、竖尾、竖毛等改变,个别出现癫痫样发作,约30~60m i n后上述症状逐渐减轻,24h后基本恢复正常,但随着给药次数的增加,急性反应表现反倒减轻,但24h后其运动减少、肢体僵硬、步态不稳、反应迟缓的表现越来越明显.212行为学检测结果见Tab1,MPTP组出现小鼠行为学计数降低,自主活动计数、Rotarod检测、游泳实验分别降低约45%、43%和22%,提前给予肌苷的I N O +MPTP 组降低程度减轻,自主活动计数、Rotarod 检测、游泳实验降低程度分别约为5%、11%和12%,与MPTP 组相比,自主活动计数和Rotarod 检测(P <0101)以及游泳实验(P <0105)具有显著性差异.表1 MPTP 和肌苷对小鼠行为学的影响Tab 1 Effect ofMPTP and i nosi ne on behavi ora l exhi b iti on of PD m i ce (n =10,x ?s )G roup Loco m otion Rotarod Swi m Saline135112?1511017189?21322118?0120M PTP 74104?15135b 10112?1165b 1169?0123b IN O+M P TP 128162?11162d15192?1182d1192?0122cbP <0101vs s ali ne ,cP <0105,dP <0101vs MPTP .Loco m otion :Th e numb er of areas that t he m i ce a mbu lated i n 5m i n;Rot arod:The ti m e t hat t he m i ce con ti nu ed on rod (S);S w i m :Th e score of s w i m m i ng m ove m ent.bP <0101vs s ali ne ;dP <0101vs MPTP .F i g 1 Nu mber of T H 2ir neuro ns i n the substanti a nigra of m i cetreated by sa li ne or MPTP or I NO +MPTP group(n =5,x ?s )图1 Sa line ,MPTP 和I NO +M PTP 组小鼠的黑质T H 2ir 神经元数目Sali n e :A ,B ;M P TP :C ,D ;I NO+MPTP :E ,F ;T H 2ir n euron s i n the s ub st anti a n i gra :A ,C ,E;TH 2i r nerve fi b ers i n t h e stri at um :B ,D ,F. ABC , @100F ig 2 T H 2i r neuro ns in the s ubstanti a n i gra and T H 2ir ne rve fi bers i n the striatu m of the m i ce treated by sa li ne orM PTP or I NO+M PTP 图2 Sali ne 组、M PTP 组和I NO+M PTP 组小鼠的黑质TH 2ir 神经元及纹状体T H 2ir 神经纤维213 黑质及纹状体免疫组织化学检测 结果见F i g1,2.MPTP 组与Sa li n e 组相比,黑质T H 2ir 神经元数目明显减少约58%,残留神经元皱缩,突起减少或消失,纹状体T H 2ir 神经纤维密度减低,提前给予肌苷后黑质T H 2ir 神经元数目减少约43%,与MPTP 组相比有显著性差异(P <0101).214 纹状体DA 水平检测 结果见Fig 3.MPTP 组与Sa li n e 组相比,纹状体D A 水平明显降低约88%,而I N O +MPTP 组提前给予肌苷后降低程度约为71%,与MPTP 组相比有显著性差异(P <0101).bP <0101vs sali ne ;dP <0101vs MPTP .F ig 3 Leve l of DA i n the striatu m of m ice treated by sali ne or M PTP or I NO+MPTP(n =5,x ?s)图3 Sali ne ,MPTP 和I NO+MPTP 组小鼠的纹状体DA 水平3 讨论MPTP 的神经毒性作用发现于20世纪80年代,它能导致人类及多种动物出现PD 样症状.MPTP 进入细胞内以后,被位于线粒体外膜的单胺氧化酶B 催化生成甲基-苯基吡啶离子(MPP +),释放到细胞外间隙,被临近的DA 能神经元轴突末梢通过突触前膜D A 转运体摄取,并逆向运输至神经元胞体,被线粒体主动摄取而浓集,特异性抑制氧化呼吸链复合体I 和电子传递,减少ATP 生成,造成D A 能神经元ATP 耗竭,并且通过促进反应氧族和过量一氧化氮的生成而发挥毒性作用,对D A 能神经元造成选择性的损伤而出现坏死和凋亡.MPTP 的神经毒性作用已在多种动物中得到证实,包括灵长类、小鼠、大鼠、猫、猪和金鱼等.在接受MPTP 的小鼠和灵长类脑内黑质D A 能神经元大量死亡,纹状体T H 阳性纤维大量丧失,纹状体D A 及其代谢产物D OPAC 、HVA 水平均明显降低,也有黑质纹状体小胶质细胞和星形细胞的增生和蓝斑、下丘脑等区的损伤,与PD 患者的改变基本相同.MPTP 对C57BL 小鼠作用明确,是目前最常用的PD 动物模型之一.肌苷是临床常用的能量营养剂,在体内肌苷的生成有两条途径:腺嘌呤核苷酸在腺苷酸酶的催化下生成腺苷,腺苷在腺苷脱氨酶作用下生成肌苷;或者腺嘌呤核苷酸在嘌呤脱氨酶催化下生成次黄嘌呤核苷酸,再经核苷酸酶去磷酸并加一分子水后生成肌苷.肌苷的分解则通过核苷磷酸化酶生成次黄嘌呤和1-磷酸核糖,次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶催化下经黄嘌呤生成代谢终产物尿酸.1-磷酸核糖在磷酸核糖变位酶的作用下转变为5-磷酸核糖,其在磷酸核糖焦磷酸合成酶催化下生成磷酸核糖焦磷酸(PRPP),PRPP 参加嘌呤核苷酸的从头合成途径;次黄嘌呤则与PRPP 生成次黄嘌呤核苷酸,参加嘌呤核苷酸的补救合成途径.生成52磷酸核糖后,还可以通过磷酸戊糖通路在无氧糖酵解时产生ATP(3分子肌苷可产生8个分子的ATP),由此肌苷可以参加ATP 的生成和其他腺嘌呤核苷酸的代谢过程.研究发现,肌苷不仅仅增加ATP 生成,参加能量代谢,而且在神经系统的损伤和修复中也具有重要的营养和调节作用.L itskyML 等使用鱼藤酮抑制呼吸链,对培养的鼠胚脊髓细胞进行损伤,当给予肌苷后发现明显提高神经元的存活率和正常形态细胞比例,并表现出浓度依赖性[3].肌苷对硫酸锌诱导的体外培养PC12细胞的损伤也可以增加细胞存活率,维持细胞正常形态,具有直接的保护作用[4].除了对神经元的直接保护作用之外,肌苷还可以促进神经突起的生长,恢复神经突触的功能.Beno w itz LI 等人发现肌苷可促进体外培养的金鱼和幼鼠视网膜神经节细胞轴突的生长,伴有促进轴突再生相关基因如生长相关蛋白G AP 243,E5872Ag ,Neurolin ,细胞黏附分子L1和T A 21的表达[5,6].在体内实验中,将成年大鼠锥体交叉平面以上的一侧皮质脊髓束切断,于对侧大脑皮质感觉运动区用微泵将肌苷持续注入,结果发现未损伤侧皮质锥体细胞的轴突侧支大量出芽,并生长到损伤侧已溃变的颈髓白质中,形成新的突触和神经通路,免疫组织化学证明损伤区有大量的G AP 243蛋白表达[7].同样,在阻断一侧大脑中动脉的大鼠半侧脑皮层缺血模型,通过微泵将肌苷持续注入枕大池或者侧脑室,结果发现与Sa li n e 组相比,虽然梗死区域大小无差别,但未损伤侧皮质红核束和皮质脊髓束均有明显的再生轴突侧支生长进入损伤侧,伴有高水平的G AP 243蛋白表达,同时观察到大鼠瘫痪侧上肢运动功能有明显恢复[8].最近研究表明,在成年大鼠视神经横断以及移植自体外周神经,给予ip 肌苷,则轴突切断的视网膜神经节细胞存活数增加,以及在移植的外周神经内出现明显增加的视网膜神经节细胞再生轴突[9,10].本研究结果显示,肌苷对MPTP 致帕金森病小鼠模型也具有神经保护作用.肌苷的作用可能通过以下机制:¹增加ATP 的生成,减轻MPTP 抑制线粒体呼吸链后造成的能量耗竭,提高黑质DA 神经元存活率;º肌苷可能通过抑制核蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)从而减少受损细胞内ATP 的消耗,防止能量耗竭,同时PARP 的活性被肌苷抑制后还可阻止一氧化氮合酶的作用过程,减少一氧化氮合成,结果使过亚硝酸盐生成减少,保护细胞的膜性结构,减轻MPTP 的神经毒性[4];»肌苷可以升高神经元内Bc l 22水平,而Bc l 22可抑制MPTP 诱导的神经元凋亡,阻止细胞的坏死过程[4].¼肌苷降解形成尿酸,而尿酸可以保护神经元防止缺氧损伤,清除过亚硝酸盐和氧自由基[11,12];½肌苷可以通过细胞膜易化扩散进入神经元内,促进神经细胞突起的生长,恢复损伤的突触功能,可能的机制包括激活胞内的蛋白激酶N ;催化生成c A MP ,c A MP 作为第二信使参与神经突起的生长;抑制多种抑制性因子,如激动G i 蛋白的髓鞘相关糖蛋白等,从而促进细胞突起的生长,保留残存神经元的突触功能[4,5].本研究中提前给予肌苷后,MPTP 对C57BL 小鼠黑质DA 能神经元的损伤减轻,纹状体的T H 2ir 神经纤维得以保存,纹状体DA 浓度降低程度减轻,是行为学检测反映的PD 症状较轻的病理基础.通过本研究证实了肌苷对MPTP 致帕金森病小鼠模型的神经保护作用,为肌苷应用于帕金森病的预防提供了实验依据,为进一步深入研究神经组织保护机制和治疗帕金森病奠定了基础.=参考文献>[1]KawaiH,M ak i no Y,H i robeM,et al .Novel endogen ous 1,2,3,42tetrahyd rois oqu i noli ne deri vati ves :Up t ak e by dopa m i ne transporterand acti v i ty to i ndu ce park i nson is m [J ].N e u roche m,1998;70:745-751.[2]Donnan GA ,W illi s GL,Kacz m arcz yk SJ ,et al .M ot or f uncti on i n t he 12m ethyl 242pheny 21,2,3,62tetrahyd ropyri d i ne 2treated mou s e [J].J N eurol Sci ,1987;77(2-3):185-191.[3]LitskyML,Hoh lC M,Lu cas J H,et a l .Inosi ne and guanosi n e pre 2s erve neu ronal and glial cell vi ab ilit y i n m ou s e sp i nal cord c u ltures du ri ng che m ical hypox i a[J].Bra in Res ,1999;821:426-432.[4]Sh iM,You S W,M eng J H,et al .D irect protecti on of i nosi n e onPC12cell s agai n st zinc 2i nduced i n j u ry [J ].N e u rore port ,2002;13(4):477-479.[5]Ben o w i tz LI ,JingY,T ab i b i az ar R ,et al .Axon outgro wth is regu l a 2ted by an i ntracell u l ar pu ri 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示右额颞部硬膜外血肿、中线左移215c m.急诊开颅清除血肿及气管切开.术后意识障碍渐好转,但第10日开始持续高热,呼吸道分泌物多,痰培养见支气管败血杆菌生长.多次尿检均未见明显异常.血常规:W BC 1916@109/L ,中性0199,淋巴0101,核左移.反复动脉血培养均为阴性.按肺部感染给予抗炎及雾化吸入等治疗,肺部感染得到控制,但仍发热.术后28d 发现患者左腹部一压痛包块,B 超提示左肾体积增大,内有液性暗区.肾穿刺放出灰白色粘稠无臭味脓液约2500mL ,细菌培养为支气管败血杆菌.引流5d 后体温便恢复正常,后行左肾切开造瘘术并置造瘘管引流,2mo 后痊愈.2 讨论 支气管败血鲍特氏菌俗称支气管败血杆菌,为革兰氏阴性球杆菌,主要是动物的致病菌,能从动物的呼吸道中分离出来.经常与患病的兔、豚鼠、猫、狗接触的人,可引起呼吸道感染,但致泌尿系感染的病例尚未见报道.本患者肾脓肿病源菌是支气管败血杆菌,其寄生于支气管,因此推断病源菌是通过血源性感染这条途径到达肾脏,形成脓肿.其原因可能是吸痰时损伤了气管黏膜,细菌经破口进入血液,流经肾脏形成肾脓肿.通过救治该患者,我们有几点体会:¹昏迷患者的主要并发症有肺部感染、泌尿系感染、褥疮等,当出现持续高热,白细胞升高,核左移等中毒症状时,不能只满足于上述几条诊断,要全面体检,综合分析,明确发热原因,以免误诊、漏诊;º气管切开的患者要保持呼吸道畅通,加强气管切开护理及熟练掌握吸痰技巧.调整负压吸引压力在0102~0104kP a 以下,动作要轻柔,避免损伤气管黏膜而导致肺部致病菌血源性转移至其他器官;»尿检正常时不能完全排除肾积脓的可能.当有肾结石或输尿管结石致肾积水时,易并发肾积脓或肾盏积脓,由于发生了梗阻,脓细胞不能随尿液流入膀胱,故尿检是阴性的.编辑 王小仲。