遗传学实验

实验目录2目录遗传学实验实验五、果蝇唾腺染色体制片与染色体畸变观察实验六、果蝇的饲养与杂交实验七、果蝇伴性遗传实验实验八、果蝇的三点测交和基因定位实验九、链孢霉有性杂交的四分子分析遗传学基础实验课程2果蝇唾腺染色体制片与观察一、实验目的二、实验原理三、实验材料四、实验器具和药品五、实验过程六、注意事项七、思考题一、实验目的1 练习解剖果蝇幼虫和分离果蝇唾腺的方法。

2 掌握唾腺染色体的制片技术。

3 了解唾腺染色体的结构及其变异特点。

二、实验原理果蝇唾腺染色体是永久性间期染色体，由于间期染色体不螺旋化，而且DNA不断地进行复制，细胞并不进行分裂，这样就使唾腺染色体变成了巨大染色体(多线染色体)。

唾腺染色体可以比果蝇其它细胞染色体大几百倍。

果蝇唾腺染色体能进行体细胞配对(拟联会)，配对时所有染色体的着丝点聚集在一起形成染色中心，同源染色体的两条臂紧密配合自由伸展。

因此，在唾腺细胞里，查不出2n的染色体数目，只能观察到从染色中心向空间伸展的染色体臂。

与其它细胞染色体相比的另一个特点是，唾腺染色体上有深浅不同、宽窄不一的带纹。

这些带纹的数目和位置是恒定的，代表着种的特征和一些基因的位置。

由于这些带纹的存在，染色体上发生缺失、重复、倒位、易位等很容易在唾腺染色体上识别出来。

三、实验材料果蝇(Drosophila virili s 2n=12) 三龄幼虫。

这种果蝇幼虫比黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)幼虫个体大，唾腺大脂肪少，便于操作。

四、实验器具和药品1试剂乙醚、丙酸、酵母粉、绵白糖、琼脂条、玉米粉、1mo1／L HCl、0. 85％NaCl、石炭酸品红、蒸馏水。

2 器材恒温培养箱、高压灭菌锅、显微镜、天平、培养瓶、棉花塞、滤纸片、载片、盖片、镊子、解剖针。

五、实验过程1 三龄幼虫培养2 解剖幼虫3 解离4 水洗5 染色压片6 显微镜观察五、实验过程2 解剖幼虫3 解离4 水洗5 染色压片6 显微镜观察1 三龄幼虫培养实验前将果蝇（D ．virilis ），转接到新配制的培养基中，放在23～25℃的条件下饲养约10天左右。

为了让果蝇幼虫长得肥大更便于操作，在实验前一天，将溶解好的酵母液添加在培养基里，添加前要先把培养瓶中的成虫转移掉。

添加的数量因培养基的情况而定，一般约0. 5～l mL 。

五、实验过程2 解剖幼虫取一洁净的载片，滴上2滴生理盐水。

挑选肥大，行动迟缓的三龄幼虫放在带有生理盐水的载片上。

唾腺位于幼虫头部两侧，长度约占身体总长1／3～1／4左右。

解剖时要用解剖针压住头部，压住的地方越小越好。

用镊子夹住幼虫身体后2／3部分，将幼虫在身体前端拉开。

唾腺是半透明的囊状物，飘在生理盐水里，无沦怎样触动都不发生形状改变。

在显微镜下观察，唾腺仍呈透明状态，由单层细胞构成，细胞形状不规则，细胞轮廓清晰，细胞大，细胞核也大，甚至可以看清楚细胞核是由染色体卷缩在一起形成的，一个唾腺约几十个细胞构成。

唾腺找到以后，用解剖针将唾腺与其它组织分开，只留唾腺在载片上。

五、实验过程3 解离用滤纸条吸净唾腺周围的其它物质，然后在唾腺上滴上1mol／L HCl 解离2～3min，以松软组织利于细胞破裂，染色体散开。

五、实验过程4 水洗解离后的唾腺用蒸馏水洗3~4次，水洗时要注意不要把唾腺弄丢，水洗要彻底，否则影响染色效果。

另外，水洗过程也是细胞低渗过程。

五、实验过程5 染色压片水洗后的唾腺周围要用滤纸条清理干净，然后在唾腺上滴上一滴石炭酸品红，染色5min后盖上盖片，先用滤纸吸去盖片周围溢出的染液，之后在材料位点上用力压实。

五、实验过程6 显微镜观察先用低倍镜观察，找到分散好的染色体图像后转成高倍镜观察。

果蝇(D. virilis)的体细胞染色体数2n=12，全部为端部着丝点。

其中有5对染色体臂较长，一对染色体臂很小是点状染色体。

唾腺染色体是5条长臂，点状染色体附着在染色中心附近。

另外，在染色体臂上有明显深浅不同，宽窄不同，粗细也不同的带纹。

在染色体臂的不同部位有时会出现疏松区(胀泡)，这是转录活性区。

我们实验室饲养的果蝇(D. virilis)中，还可经常见到某一条染色体局部区域不联会，出现分叉或分枝，该区域的带纹彼此间也存在明显差异，这表明，这对同源染色体之间存在着遗传上的差异。

六、注意事项1 实验选材时，应尽量选择个体较大的幼虫。

2 剥离唾腺时注意把腺体周边的脂肪组织剔除干净。

七、思考题1 认识唾腺染色体的结构特点，绘制唾腺染色体变异结构图像。

2 有条件的情况下拍摄唾腺染色体显微照片，以便区分染色体臂。

果蝇饲养与杂交一、实验目的二、实验原理三、实验材料四、实验器具和药品五、实验过程六、注意事项七、思考题一、实验目的1 了解果蝇的生活史，学会饲养果蝇。

2 掌握区别雌雄果蝇的方法。

3 掌握遗传学实验常用果蝇品系的特征及常见突变类型。

二、实验原理黑腹果蝇(Drosophila melanogaster) 是遗传学实验的重要材料来源之一。

果蝇具有饲养方便、来源广泛、生活史短、性状便于观察等许多特点。

因此，在遗传学研究中，果蝇可广泛地用来完成遗传三大定律及连锁互换的验证性试验，以及唾腺染色体观察等。

三、实验材料野生型雌、雄性黑腹果蝇(Drosophila melanogaster) 及其常见的各种突变体。

四、实验器具和药品1 试剂乙醚、琼脂、绵白糖、丙酸、酵母粉、玉米粉、乙醇。

2 器材显微镜、放大镜、恒温培养箱、高压灭菌锅、培养瓶、麻醉瓶、白磁砖、毛笔、石棉网、棉花、纱布、口取纸、滤纸片、牛皮纸、小镊子。

五、实验过程1 果蝇饲养果蝇培养基：果蝇因经常在果园和水果上见到而得名。

果蝇以酵母菌为食，腐烂的水果上经常有酵母菌。

凡是能作为酵母菌发酵的基质都可以作为果蝇培养基。

目前，常用的果蝇培养基有香蕉培养基(多在南方使用)和米粉培养基(多在北方使用)。

五、实验过程1 果蝇饲养果蝇培养基：果蝇因经常在果园和水果上见到而得名。

果蝇以酵母菌为食，腐烂的水果上经常有酵母菌。

凡是能作为酵母菌发酵的基质都可以作为果蝇培养基。

目前，常用的果蝇培养基有香蕉培养基(多在南方使用)和米粉培养基(多在北方使用)。

五、实验过程1 果蝇饲养果蝇培养基：以l00 mL为单位介绍米粉培养基的成分配比(见表)。

五、实验过程1 果蝇饲养果蝇培养基：以l00 mL为单位介绍米粉培养基的成分配比(见表)。

成分数量单位作用O80mL溶剂H2玉米粉8.2g基本成分绵白糖 6.2g基本成分琼脂条0.62g固化剂丙酸0.5mL防腐剂酵母粉少量菌种五、实验过程1 以l00 mL 为单位介绍米粉培养基的成分配比(见表)。

成分数量单位作用H 2O 80mL 溶剂玉米粉8.2g 基本成分绵白糖 6.2g 基本成分琼脂条0.62g 固化剂丙酸0.5mL防腐剂酵母粉少量菌种果蝇饲养果蝇培养基：果蝇培养基的配制方法：配制时先将水分成两份，其中一份用于溶解琼脂和糖，另一份煮玉米粉，待两份分别溶解煮好后再混合到一起煮沸。

关掉火后再加入丙酸，这时培养基很粘稠，要充分搅拌之后再分装培养瓶内。

待培养基冷却之后，在培养基表面撒上一层酵母粉，插上一块经灭菌后的滤纸片作为幼虫化蛹的干燥场所。

五、实验过程成分数量单位作用H 2O 80mL 溶剂玉米粉8.2g 基本成分绵白糖 6.2g 基本成分琼脂条0.62g 固化剂丙酸0.5mL防腐剂酵母粉少量菌种1 果蝇饲养果蝇培养基：果蝇培养基的配制方法：培养瓶选择和灭菌：经常用来饲养果蝇用的容器是广口瓶和指管。

根据实验的特点和所需果蝇的数量来决定采用哪种容器。

实验室最常用的是125 mL 和60 mL 两种培养瓶。

不管是哪种培养瓶，在使用之前必须经过灭菌，包括瓶塞在内。

灭菌一般采用高压灭菌方法，灭菌温度121～125℃，恒温时间18~20 min 。

灭菌也可采用煮沸方法和干热灭菌的方法。

五、实验过程成分数量单位作用H 2O 80mL 溶剂玉米粉8.2g 基本成分绵白糖 6.2g 基本成分琼脂条0.62g 固化剂丙酸0.5mL防腐剂酵母粉少量菌种1 果蝇饲养果蝇培养基：果蝇培养基的配制方法：培养瓶选择和灭菌：选择亲本配组合：从刚羽化的果蝇中分别选择红眼雌蝇和白眼雌蝇，或者正常翅膀和小翅膀的成对果蝇放入培养瓶内。

通常雌雄比例为2：1或3：1。

为了保证雌果蝇是处女蝇，在选择的时候，羽化后的雌性果蝇不能超过l0h 。

果蝇全部放好以后，要在杂交瓶上贴上标签，标明实验题目、杂交组合、杂交日期、实验者姓名。

然后，把培养瓶放在果蝇生活的最适温度条件下恒温培养箱内饲养。

五、实验过程成分数量单位作用H 2O 80mL 溶剂玉米粉8.2g 基本成分绵白糖 6.2g 基本成分琼脂条0.62g 固化剂丙酸0.5mL防腐剂酵母粉少量菌种1 果蝇饲养果蝇培养基：果蝇培养基的配制方法：培养瓶选择和灭菌：选择亲本配组合：去亲本：果蝇饲养7~8天以后，培养瓶中出现了F1代的幼虫和蛹，这时可以将亲本移出，以防亲本与F1果蝇混杂，影响实验观察结果。

五、实验过程成分数量单位作用H 2O 80mL 溶剂玉米粉8.2g 基本成分绵白糖 6.2g 基本成分琼脂条0.62g 固化剂丙酸0.5mL防腐剂酵母粉少量菌种1 果蝇饲养2 F1代性状观察当F1代果蝇羽化、发育为成蝇后，即可对果蝇的性状进行观察和统计，并将结果添入表内，便于日后总结和分析。

观察结果统计日期各类果蝇的数目红眼♀（+）红眼♂（+）五、实验过程成分数量单位作用H 2O 80mL 溶剂玉米粉8.2g 基本成分绵白糖 6.2g 基本成分琼脂条0.62g 固化剂丙酸0.5mL防腐剂酵母粉少量菌种1 果蝇饲养2 F1代性状观察当F1代果蝇羽化、发育为成蝇后，即可对果蝇的性状进行观察和统计，并将结果添入表内，便于日后总结和分析。

观察结果统计日期各类果蝇的数目红眼♀（+）红眼♂（+）成分数量单位作用H 2O 80mL 溶剂玉米粉8.2g 基本成分绵白糖 6.2g 基本成分琼脂条0.62g 固化剂丙酸0.5mL防腐剂酵母粉少量菌种六、注意事项1 果蝇饲养的温度要严格控制，温度异常变化对于果蝇发育和性比都有直接的影响。

2 当培养瓶中出现了F1代的幼虫和蛹，要及时去除亲本，以防亲本与F1果蝇混杂，影响实验观察结果。

成分数量单位作用H 2O 80mL 溶剂玉米粉8.2g 基本成分绵白糖 6.2g 基本成分琼脂条0.62g 固化剂丙酸0.5mL防腐剂酵母粉少量菌种七、思考题1 把杂交实验结果填在实验结果统计表内。

2 用X 2 测定有关实验数据。

果蝇伴性遗传实验一、实验目的二、实验原理三、实验材料四、实验器具和药品五、实验过程六、注意事项七、思考题一、实验目的1. 进一步掌握伴性遗传的规律和特点。