园艺植物遗传学部分实验指导
植物遗传育种实验指导书
植物遗传育种实验指导书园林植物遗传育种学实验指导书实验一根尖细胞有丝分裂涂抹制片法一、实验目的与建议学习植物细胞涂抹制片技术；观察有丝分裂过程中染色体行为。
二、实验原理各种旺盛生长的植物组织，包括：茎尖、根尖、孢原组织等分生组织、愈伤组织及分化的小孢子、萌发的花粉管，经常进行着细胞分裂。
经过适当的取材处理，制片后可进行有丝分裂中染色体动态的观察，这是遗传学上通过细胞分裂观察染色体行为、形态结构、数目，从而进行组织分析，鉴别杂种等常用的制片方法。
三、实验材料与设备实验材料：中国水仙、风信子、柴万年青、郁金香(sx)。
用具和试剂：镊子、解剖学针、盖片、载片、滤纸、单刃刀片对氯苯饱和溶液、1nhcl、醋酸地衣红、中性树胶，卡诺紧固液。
四、实验步骤1.交予处置：实验前将鳞茎水培，等待根短出来长1～1.5cm时，穗序0.5cm短的食道，立即放进对二氯苯饱和状态水溶液中，在室温下处置2小时左右，予处置的促进作用主要就是铀色体，并使之集中，同时遏制纺纱缍丝构成。
在制片过程中，例如辨认出染色体后期的对立二者较多时，表明予处置时间比较。
2.固定：倒掉对氯二苯溶液，用水冲洗两遍，用新配的卡诺固定液固定24h后，可放入冰箱中备用。
如果要长期保存则要将根尖转入70%的酒精中。
3.离解：先将紧固后的食道用蒸馏水被褥3～4次，再用1nhcl在60℃(特别注意必须严格控制不少于±5℃)的恒温水浴锅中处置10～20min，然后用蒸馏水被褥3～4次。
此步主要就是并使细胞之间集中上开，并软化细胞壁，易于压片，同时也有利于染色。
4.染色制片(1)切片：剔除根冠，在生长锥处切下一小块组织。
(2)染色压片：在切开的非政府上几滴一滴醋酸地衣红，炖煮，除去大块的渣滓，砌上擦干净的盖玻片，覆以一层吸水纸，用食指在上面施予少量压力，勿并使砌片移动，用解剖学针柄颤动，可以并使细胞舒展，染色体变细。
不好的片子置放显微镜下检查，看见存有典型的对立图像时，可以把载玻片在酒精灯上往往抵蒸煮。
园林遗传育种学的实验教案
园林遗传育种学的实验教案实验一植物细胞的有丝分裂一、试验目的学习对植物组织，细胞的固定、离析和压片方法，借以观察有丝分裂过程和染色体动态变化。
二、实验原理各种生长旺盛的植物组织，包括饱原组织、根尖、茎尖等分生组织，愈伤组织及分化的小孢子。
萌发时的花粉粒常进行有丝分裂。
经过适当的取材处理，加以固定、离析、染色、涂抹、压片方法，可以迅速地将细胞分散附着在载片和盖片之间，进行有丝分裂和染色体动态的观察。
这是遗传学上通过细胞分裂，观察研究染色体形态，结构和计数，从而进行核型分析，鉴别杂种最常用的基本方法。
三、试验用具和试剂显微镜、解剖器、载片、盖片、培养皿、量筒、皮头吸管，小滴瓶，烧杯，吸水纸，固定液，水解分离液，改良品红染液四、实验方法和步骤1、材料准备挑选饱满的大蒜去掉外面老皮及老根，置于盛水的烧杯中使其底部接触水，待长根2cm备用。
2、固定借助物理方法或化学试剂的作用，迅速透入组织和细胞，将之杀死。
并将其结构和内含物如蛋白质，脂肪，糖类以及核物质与细胞器等，在形态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态。
同时更易于染色，可以较清楚地显现细胞在生活时不易看清的结构。
固定时，在指管内放入卡诺氏固定液5ml，用刀片或小剪刀切取长约0.5～1cm的根尖10～20条，直接放入指管，用塞塞紧，室温下固定2～24小时。
固定液应为材料体积的15倍以上。
经固定的材料若不及时使用，可经90％酒精～80％酒精中各半小时，再加入70％酒精中保存（0～4℃冰箱可存半年）。
经常时间保存的材料进行观察前，可用固定液再处理一次效果较好。
大蒜根尖的固定时间是上午11点。
洋葱根尖固定时间：中午12：00～13：00，晚上24：00～1：00，下午16：00～17：00洋葱根尖在固定前不要离开水，否则细胞失水。
3、水解分离水解的作用是去除未固定下来的蛋白质，同时使细胞间的果胶类物质解体，细胞壁软化，细胞分散，便于观察。
方法是取材料放入小烧杯中，用蒸馏水洗2～3次，加入水解分离液2～3ml，10～15分钟后用皮头吸管吸出，加蒸馏水冲洗2-3次，存放于蒸馏水中。
遗传学实验指导
遗传学实验指导实验1 细胞有丝分裂与减数分裂实验1.1 植物根尖细胞有丝分裂过程的制片与观察目的要求学习和掌握植物细胞有丝分裂制片技术；观察植物细胞有丝分裂过程中染色体的形态特征及染色体的动态行为变化。
实验原理有丝分裂是植物体细胞进行的一种主要分裂方式。
有丝分裂的目的是增加细胞的数量而使植物有机体不断生长。
在有丝分裂过程中，细胞核内的遗传物质能准确地进行复制，然后能有规律地均匀地分配到两个子细胞中去。
植物有丝分裂主要在根尖、节间、茎的生长点、芽及其它分生组织里进行。
将生长旺盛的植物分生组织经取材、固定、解离、染色、压片等处理即可以观察到细胞内的有丝分裂图象。
如若需要进行染色体计数，则需进行前处理，即取材之后采用物理的或化学的方法，阻止细胞分裂过程中纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期。
这时，染色体不排到赤道板上，而是散在整个细胞质中。
这十分便于对染色体的形态、数目进行观察。
试剂和器材1材料均可以大蒜(Allium sativum 染色体数目2n=16)、玉米(Zea mays 染色体数目2n=20)、洋葱(Allium cepa染色体数目2n=16)或蚕豆(V icla faba染色体数目2n=12) 等根尖为实验材料。
2试剂95％乙醇、冰乙酸、石炭酸品红、l mol／L HCl。
3器材恒温培养箱、显微镜、水浴锅、载玻片、盖玻片、单面刀片、镊子、培养皿、量筒、吸水纸。
操作方法1生根植物根尖是植物的分生组织，取材容易，操作方便。
植物根尖细胞分裂旺盛，因此，它是细胞有丝分裂相制备与观察的理想选取部位。
大蒜、洋葱易于在水培、沙培、土培条件下生根。
采用水培时要注意在暗处培养，以满足根生长条件，使根系生长旺盛。
玉米和蚕豆种子可先用温水浸泡1天之后，再转入铺有多层吸水纸或纱布的培养皿中，上面盖双层湿纱布置于24～26℃温箱中培养，每天换水二次。
2取材待根长至l.5~2.0 cm时，将根取下。
若实验只需观察细胞有丝分裂的过程和各时期的特征，可将根尖直接放入Carnoy固定液(95％乙醇：冰乙酸=3：1)中固定；如果要观察染色体形态和数目，则必须对根尖进行前处理后才能固定。
植物遗传育种学实验指导
园林植物遗传育种学实验指导实验一植物细胞的有丝分裂实验二植物细胞的减数分裂实验三染色体组型分析实验四基因分离实验一植物细胞的有丝分裂一、实验目的观察树木、花卉细胞有丝分裂各时期染色体的变化和特征，掌握根尖压片技术。
二、实验原理有丝分裂是植物细胞数目增加的主要方式，常见于根尖、茎尖分生区的细胞，细胞经有丝分裂正确地把染色体分配给子细胞，形成两个染色体数目、内容一致的子细胞。
有丝分裂是一个连续过程，根据染色体的形态特征可人为地将分裂期分为前期、中期、后期、末期等四个时期。
三、实验材料发芽的杉木种子根尖；洋葱的幼根。
四、实验用具及药品显微镜、载玻片、盖玻片、解剖针、刀片、镊子、吸水纸、小烧杯、大培养皿、冰箱、恒温水浴锅、量筒、天平。
醋酸、铁矾、苏木精、8－羟基喹啉、秋水仙素、二甲苯、盐酸、叔丁醇、无水乙醇、95%乙醇。
五、实验步骤1．取材⑴杉木种子根尖将杉木种子在自来水中浸泡24h，然后置培养皿中，在25℃下发芽，5～7天后胚根长达10～15㎜时将发芽种子取出。
⑵洋葱根尖培养将洋葱的鳞茎放在盛清水的培养皿内，在室温（20～25℃）下培养使其发根，待根长约10～15㎜时将根取出备用。
2．预处理为了阻止纺缍体的活动，获得更多的中期分裂相，同时使染色体相对缩短，便于染色体分散和计数，可对根尖进行预处理。
可用于预处理的化学药物有生物碱、苷类、酚类及其他物质，常用药物的浓度及处理时间如下:（1）秋水仙碱:浓度为0. 04%～0.2%，处理2～5 h;（2）a-溴代萘:饱和水溶液处理0.5～4 h;（3）对二氯苯:饱和水溶液处理2～4 h;（4）8-羟基喹啉:浓度为0. 002M，处理2～4 h;上述各处理在室温下进行，若低温处理则用蒸馏水在1～4℃下处理24 h。
3．固定经过预处理的材料冲洗干净后，用卡诺氏固定液固定12～24 h，目的是将细胞迅速杀死，使染色体保持固定的形态。
经固定的材料若不立即使用，可换到70%酒精中置于4℃下保存。
园林植物遗传实验指导
园林植物遗传实验指导东北农业大学园艺学院目录目录实验一观赏植物生物学性状调查 (1)实验三花粉贮藏及花粉生活力的测定 (5)实验五植物根尖细胞染色体制片技术与观察 (8)实验六花粉母细胞减数分裂制片法 (11)实验七花粉管生殖细胞的有丝分裂 (12)实验八园林植物多倍体的诱导与鉴定 (14)实验九植物总DNA 的提取 (17)实验十植物总RNA的提取 (20)实验十一PCR扩增技术 (22)实验十二植物RAPD分析技术 (24)实验13植物染色体标本制备及核型分析 (27)实验14植物染色体分带技术 (49)实验15植物诱导染色体结构变异 (54)实验16荧光原位杂交实验 (55)附录 (57)I实验一实验一观赏植物生物学性状调查一、目的要求掌握观赏植物生物学性状调查的目的、内容和方法，通过调查填写调查表，根据调查表比较同种观赏植物不同品种间观赏性状的差异，并学会利用花卉品种分类检索表为调查到的花卉进行品种鉴定。
二、材料用具1、材料各类观赏植物（草花、灌木、乔木、藤本）。
2、用具钢卷尺、游标卡尺、皮尺、标杆、记号笔、铅笔、小卡片、细线、统计表等。
三、实验内容观测不同植物品种的观赏与经济性状，包括株型、花、果实、抗性等特征，对其进行比较和评价。
数量性状一般按三级记载。
具体观测性状如下：1、株型：包括株高、枝下高、冠长、冠幅（株幅）、冠形、分枝角度、分枝数、枝叶的特征、植株生长情况等。
2、花的特征：包括花期、花型、花朵大小、花色、花香、开花数量等。
3、结实情况：包括果实的形状、大小、多少等。
4、抗性：包括抗寒性、抗热性、抗旱性、抗病性、抗虫性、耐阴性等。
5、特殊的经济价值或观赏价值。
（一）木本花卉生物学性状调查1、试验材料的选择根据实验的时间地点选择正值花期的木本花卉，春季可选木兰、樱花、榆叶梅、梅花、碧桃等，夏秋季可选紫薇、石榴、黄花槐、夹竹桃、桂花、洋紫荆、大叶醉鱼草、木芙蓉等，要求该木本花卉有2个以上品种的成年植株，通过品种性状调查，比较品种间观赏性状的差异。
园艺植物遗传育种 实验教案
园艺植物遗传育种实验教案一、教学目标1. 理解园艺植物遗传育种的基本概念和原理。
2. 掌握园艺植物遗传育种的基本方法和技术。
3. 能够进行园艺植物遗传育种的实验设计和实施。
二、教学内容1. 园艺植物遗传育种的基本概念和原理。
2. 园艺植物遗传育种的基本方法和技术。
3. 园艺植物遗传育种的实验设计和实施。
三、教学重点1. 园艺植物遗传育种的基本概念和原理。
2. 园艺植物遗传育种的实验设计和实施。
四、教学方法1. 讲授法：通过课堂讲解，介绍园艺植物遗传育种的基本概念、原理、方法和技术。
2. 实验指导法：指导学生进行园艺植物遗传育种实验的设计和实施。
五、教学过程1. 理论学习(1) 通过课堂讲解，介绍园艺植物遗传育种的基本概念、原理、方法和技术。
(2) 通过示意图、实例等方式，加深学生对园艺植物遗传育种的理解。
2. 实验设计(1) 分组讨论，学生根据已学知识和实验目的，设计园艺植物遗传育种实验的具体方案。
(2) 学生按照所设计的实验方案，进行实验准备和材料准备。
3. 实验实施(1) 指导学生按照实验方案，进行实验的操作和记录。
(2) 组织学生进行观察和数据统计，分析实验结果。
4. 实验总结(1) 学生进行实验结果的总结和讨论。
(2) 教师进行总结和点评，回答学生的问题。
六、实验设备和材料1. 实验设备：显微镜、移液枪等。
2. 实验材料：园艺植物种子或幼苗、培养基、营养液等。
七、教学评价1. 学生的实验设计和实施是否准确、规范。
2. 学生对园艺植物遗传育种的理解和运用能力。
遗传学实验指导书.docx
实验1植物染色体减数分裂观察1、实验目的通过对植物花粉的形成过程中减数分裂的观察，了解植物生殖细胞形成的-•般过程以及染色体在这一过程中的动态变化，从而深刻理解减数分裂的遗传学意义，为研究遗传学基木规律奠定细胞学基础。
2、实验原理减数分裂是一种特殊方式的细胞分裂，仅在配子形成过程屮发卞。
这一过程的特点是：细胞连续两次进行核分裂，而染色体只复制一次，结果形成四个核，每个核只含单倍数的染色体。
即染色体数减少一半, 所以称为减数分裂。
另一个特点是前期特別长。
而11变化复杂，包括同源染色体的配对和非姊妹染色单体的交换与分离等。
3、实验材料高粱（2”20）、玉米（2n=20）或小麦（2n=42）等雄蕊幼穗及其永久制片和照片。
4、实验器具和药品（1）用具：显微镜、载玻片、盖玻片、刀片、接种针、蹑子、酒精灯、吸水纸、擦镜纸、烧杯、量筒、带橡皮头的铅笔。
（2）药品：纯洒精、95%酒精、冰醋酸、7（）%酒精、卡诺固定液（Carnoy）液、醋酸洋红（醋酸地衣红）。
5、实验说明在被子植物中，由分牛细胞进行儿次有丝分裂，形成小胞子母细胞（花粉母细胞），简称PMC,每个PMC 进行两次连续的细胞分裂，即减数分裂，产生四个子细胞，每个子细胞就是一个小他子，每个小抱子内的染色体的数II是PMC的一半（n）o整个减数分裂过程可分为下列各个时期：第一次分裂：前期I：乂可分为以下五个时期：细线期：核内岀现染色体细长如线，数目成双，核仁明显，但一般看不到双线结构。
偶线期：同源染色体配对，即联会。
呈二价状态（此期很短暂，不易找到）。
粗线期：二价体变粗变短，由于各染色体由已复制成两条的染色单体组成。
故此时配对的染色体含冇四条染色单体，叫做四合体。
双线期：各同源染色体开始分开，由于在粗线期非姊妹染色体之间发牛局部的交换，因而同源染色体在一定区段出现交叉结。
终变期：染色体长度更为粗短，交叉结向端部移动，核仁的核膜开始消失，此吋观察染色体最清楚，故可计算数目。
园艺植物育种学实验指导
园艺植物育种学实验指导前言一、实验课的性质与任务本课程是高校园艺专业本科生的专业基础课。
本课程从加强基础、培养能力。
提高素质的教学目标出发，建立一个科学、合理的园艺植物遗传育种学实验教学课程体系。
使学生通过本课程实验教学，不只是加深理解和巩固所学理论知识。
而是更能切实掌握园艺植物遗传育种学基本实验技能，正确使用常规仪器，学会正确记录，分析讨论实验结果，初步综合运用已学实验技术方法设计简单实验。
在实验教学中，同时加强对学生进行科学素质和良好的实验室工作习惯的训练。
为继续培养具有创新精神和实践能力的高素质人才奠定良好的基础。
二、实验课程目的与要求1.实验目的（1）以园艺植物遗传育种学实验的基本操作、基本技能和基本理论为基础。
精选重组验证性实验，增加综合性实验及知识范围，操作难度适宜的自选实验的比例，引导、指导学生初步设计实验。
建立一个既与理论课有一定互补作用，又具有相对独立性的科学、合理、实用性强的实验教学课程体系。
综合分析、推理判断的能力，科学思维能力和创新意识，以及科学求实的态度。
相互协作的团队精神。
2.实验要求（1）实验内容的安排循序渐进，由简单到综合，由基本到提高到开放实验，激发学生的学习兴趣，调动学生的学习主动性。
（2）强调学生课前预习，教师课堂讲授简明扼要，重点讲授实验原理，操作要点和实验方法的应用及意义，演示关键操作方法。
（3）切实指导学生进行操作与观察，启发学生手脑并用，培养学生通过实验独立获取知识和技能的能力，严格要求和指导学生如实进行原始记录和分析实验结果，强调科学求实精神；重视随堂考查，讲评学生实验和实验报告，提高学生的实践能力。
三、考核方式、方法及实验成绩评定方法1.考核内容应包括两个主要方面：⑴实验记录、实验报告、实验课程总结记录书写情况；⑵平时作业（实验过程）的认真程度；仪器设备操作使用情况；遵守实验室工作规章制度情况等。
2.成绩考核采用百分制记分制。
实验一园艺植物开花习性调查一、实验目的通过各种园艺植物开花习性的调查，了解园艺植物开花习性的主要特点，熟悉园艺植物开花习性调查的主要观察项目和观察方法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
植物基因组DNA的提取（CTAB法）
一、原理
植物组织中绝大部分是核DNA，它和组蛋白、非组蛋白结合在一起，以核蛋白（即染色质或染色体）的形式存在于细胞核内。
CTAB是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。
二、实验材料、仪器及试剂
1、仪器
水浴锅；混匀器；高速冷冻离心机；移液器；754紫外分光光度计；液氮罐；水平电泳槽；电泳仪；一次性手套；吸头；1.5 mL离心管。
2、材料与药品
植物材料，以幼苗、嫩叶含DNA高。
液氮；氢氧化钠；CTAB；Tris；氯仿；乙醇；RNA酶；硼酸；溴酚蓝；异戊醇；β-巯基乙醇；盐酸；异丙醇；EDTA；GoldView核酸染料；琼脂糖；甘油；DNA分子量标记（DNA marker）。
三、操作方法
（1）按1 g样品3 ml DNA提取液的比例，取相应的园艺植物叶片，加入DNA提取液后，在研钵中充分磨碎；取3ml左右研磨后的液样于5 mL离心管中，65℃水浴35分钟以上，其间颠倒混匀一次。
（2）加等体积的氯仿：异戊醇（24：1）溶液，上下颠倒摇匀后，10000 rpm下离心10分钟，取吸上清液于一新的离心管中。
（3）再加两倍体积的预冷异丙醇，上下颠倒混匀后，10000 rpm下离心10分钟，弃上清。
（4）用3 mL 70%乙醇洗涤沉淀，重复一次，在室温下倒置晾干。
（5）沉淀用100 uL TE溶液溶解，用TE（pH8.0）作空白对照，于紫外分光光度计上测定260nm、280nm和230nm吸收值，计算A260/A230和A260/A280的比值，并换算出核酸的含量。
（6）琼脂糖凝胶板的制备
（7）加样：将样品与溴酚蓝按4：1的比例混合，用移液器缓慢加入凝胶样品孔中，点样量为每孔5 μgDNA。
（8）电泳：点样端接负极，电泳开始时，可用较高的电压，如100伏特，这样可使样品很快进入胶内，而减少样品扩散，待样品进入胶内即可保持每厘米5伏特左右的电压，DNA 在电泳中向正极移动。
当溴酚蓝的区带移至距凝胶底部1-2cm，停止电泳，当胶板为10-15cm的长度时，电泳时间一般为2小时左右。
（9）观察与鉴定
电泳结束后，取出凝胶板，在波长为254nm的凝胶成像系统下，观察电泳图谱，如果电泳条带清晰（如果EB染色看到桔黄色荧光条带，GV染色则看到绿色荧光条带），将凝胶照相。
根据标准DNA的电泳图谱，可以得知样品DNA的分子大小。
园艺植物转座元件的分子标记分析
一、原理
IRAP 标记技术是根据大麦反转录转座子BARE-1 的LTR 外侧保守序列设计引物，从而可以扩增出相邻两个同一家族的反转录转座子成员间的片段，这两个相邻的反转录转座子可以是同向排列，也可以是反向排列。
其扩增谱带在琼脂糖凝胶上能有效分离。
REMAP 标记技术是用以检测反转录转座子与相邻微卫星之间DNA 多态性。
进行REMAP 分析需要两个引物，一个是与反转录转座子外侧保守序列互补的引物，另一个是与微卫星重复序列互补的引物（SSR引物）。
其扩增谱带在琼脂糖凝胶上能有效分离。
二、设备和试剂
1、设备
PCR仪，电泳仪、电泳槽，一次性手套，吸头，PCR管等。
2、试剂
需要合成引物；dNTPs，Taq DNA聚合酶。
三、操作步骤
1、引物来源：菠萝、菠萝蜜
2、PCR反应体系
反应体系为20μL。
其中包括，1×PCR缓冲液；2.5 mmol/L MgCl2，0.2 mmol/L dNTPs，6 pmol引物，1 U Taq DNA聚合酶，模板DNA 30 ng。
PCR扩增反应程序设定为，94 ℃预变性4 min；94 ℃变性30 s，退火温度根据不同引物设定，时间为30 s，72 ℃延伸2 min，40个循环；循环结束后72 ℃延伸10 min，4 ℃终止反应。
3、PCR产物检测
1.5% 琼脂糖凝胶电泳，上样量10μL (1μL负载缓冲液和9μL PCR产物)。
6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，上样量3μL (2μL PCR产物和1μL负载缓冲液) ，银染检测。
Bio2Rad GelDocTM XR凝胶成像系统采集图像。