关于HPLC主成分自身对照法检查有关物质时检测波长确定的讨论
不同波长下测定药品有关物质的讨论
不同波长下测定药品有关物质的讨论某片剂，主药在220nm、254nm下均有较强吸收，254nm吸收值约比220nm大一倍，含量测定采用254 nm，现想对该药物进行有关物质检查，波长初步选择为254nm，经查国内外相关文献，并无该药品的有关物质检查报道，我们想在质量研究中增加在不同波长下考察有关物质的大小试验。
现分别采用220nm和254nm进行同一份样品进行有关物质检测，大致现象为:(1)220nm：杂质峰面积明显增大，主峰峰面积明显减小，故归一化法杂质明显增大，总杂质约1.5%，新增2个杂质，共5个杂质；(2)254nm：杂质峰面积小，主峰面积大，归一化法总杂质约0.3%，共3个杂质；试问，在这种情况下，该如何合理的对比杂质大小、个数？（丁香园版主，lyslinjiu）我资料中体现了粗品与强制降解产物的全波长扫描，当时考虑到各杂质的最大吸收均在280nm，因此就选择了280nm作为有关物质的检测波长，当时也比较了低波长处的归一化限度均小于280nm，但是没有写到资料里去，因此感觉比较冤。
这也体现出目前对杂质研究的重视，对于杂质来说在有较强吸收的地方，分别比较杂质的检出个数与总量，最终根据杂质的量与个数确定合适的波长，当然DAD检测器成为首选，以粗品与降解产物进行DAD测定是目前的基本要求，审核人员希望看到你为建立专属性强的方法做了全面的工作，所选波长基本能检出所有杂质，并且杂质量也是最多的。
曾经咨询过专家的意见，很多品种含量下降与有关物质增加不符合，甚至相差5～10倍，建立专属的有关物质方法是现在审核的中心。
基于上述理由严重建议做充分的工作，比较粗品与强制降解产物的杂质检出个数与数量（你新增的杂质不一定是新增，可能由于浓度低而未检出，采用强制降解一般不会出现上述问题，毕竟有关物质与样品的母体基本相同），最终确定有关物质波长，你的理论上应该选择220nm而非254nm。
最好以DAD检测器得到的结果来证明。
HPLC同时测定羟喜树碱注射液的有关物质及含量
HPLC同时测定羟喜树碱注射液的有关物质及含量【摘要】目的：通过高效液相色谱法来对羟喜树碱注射液药品中的有关物质与含量展开有效检测。
方法：设定甲醇-水为流动相，采用Ultimate XB-C 18柱实施检测，设置值为4.6×250mm，5μm，检测波长设置为370nm，流速数值是1.0mL·min-1，柱温设定为35℃，完成检测准备工作后，即可进行后续的检测。
结果：检测有关物质的结果如下：杂质与羟喜树碱物质之间的分离度达到相应标准，喜树碱为主要杂质，其与羟喜树碱的实际线性范围检测在0.2到1.0μg·mL-1间，相关系数大于0.9997，最低检测限0.3ng与0.2ng。
含量检测的结果如下：在4.0至36.3μg·mL-1的范围中，羟喜树碱呈现出现象相关系数是1.0000，针对3个厂家提供的处方工艺，实施了高中低三种围绕浓度的回收率检测实验，检测结果均未超过100%到102.0%的范围，RSD数值高于0.02%，低于0.7%。
结论：本次试验中使用的检测方法的准确率水平高，专属性相对较强，可帮助增强羟喜树碱注射液药品质量控制工作的系统化，实现全面的药品质量控制需求。
【关键词】HPLC；羟喜树碱；有关物质；含量羟喜树碱（HPTC）注射液药品属于抗肿瘤药，能够对胃癌、肝癌以及膀胱癌等形成良好的治疗效果，其内部存有喜树提取物质，其为生物碱类型的抗癌物质。
羟喜树碱系统中的DNA拓扑异构酶I抑制剂药品属于细胞特异性药品，可在细胞合成期阶段发挥其作用，将其与喜树碱相比，不仅毒性更为轻微，同时疗效也更强。
我国的HPTC主要有注射用粉针与注射液两种剂型，注射液的使用量比较高，相对应的生产厂家数量也更多，在加工生产注射液时，需要参考国家标准，按照标准的要求可考虑应用HPLC检测技术来对有关物质进行检查，在检测时，也可将含量与有关物质的测量工作相结合。
本文对来自不同的药品生产厂家的多批样品展开测定，并对含量以及有关物质的测量结果进行对比，试验研究过程如下：1 材料与方法1.1 一般材料Agilent 1100 高效液相色谱仪(包括自动进样器、二极管阵列检测器和ChemStation 数据处理系统，美国 Agilent 公司)；HPTC 注射液共 9 个批次(批号分别为 A 厂：070301；B 厂：20070116，20070206；C 厂：20060102，20060820，20070525，20060103，20060418，20060711)；HPTC 对照品(中国药品生物制品检定所标定，批号：100526－200301，纯度：100.0%)；喜树碱对照品(中国药品生物制品检定所标定，批号：100532-200401，纯度：100.0%)；甲醇为色谱纯。
有关物质分析方法开发考量
有关物质分析方法开发考量检测波长的选择有关物质分析方法研究的目的是科学合理的检测出相关杂质，所以选择的波长要保证杂质检测有足够的灵敏度，而且应尽量选择波峰或波谷处，才能减小因为检测仪器的变动导致检测结果不准确。
一般有关物质分析方法开发时，应使用DAD检测器进行杂质和主成分的紫外光谱全扫，然后选择主成分和杂质吸收较相近的波长，如果不能保证波长的选择在主成分的最大吸收波长，应选择波长使杂质灵敏度高，后引入校正因子。
主成分及控制杂质（12个）紫外光谱图（190nm-400nm）分析：优选波峰或波谷，因为波峰与波谷处，波长小范围的变化对主成分与杂质的响应影响较小，提高波长的耐用性，减小因仪器等原因造成检测结果的偏离。
图中可以看出主成分与12个控制杂质在222nm与254nm附近有最大吸收，考虑到低波长基线波动较大，主成分与杂质在254nm处光谱曲线均较平缓，且实验过程中发现254nm条件下各杂质灵敏度符合要求，故可选择254nm,计算方法引入校正因子；可能有人会想为什么不选择29Onm附近，我们从图中可以看出，在该波长条件下，部分杂质响应较低，如果选择该波长就必须得为了提高杂质的响应而提高样品浓度或者提高进样量，这样做对方法的开发也是一个挑战。
色谱条件的选择2.1专属性系指在其他成份可能存在的条件下，采用分析方法能正确测定被测物质的能力。
因方法开发过程中一般按照杂质限度配制加标供试品溶液,保证主成分与其相邻杂质峰分离度大于1.5,同时各已知杂质与相邻杂质分离度大于1.5即可，考虑到因为主成分进样浓度较大，如果后期因柱效降低等因素造成主峰拖尾影响样品检测，建议方法开发时主成分与其的相邻杂质分离度越大越好。
当然，空白溶液（稀释剂）也要关注，空白不能干扰杂质检测，如果有干扰要考虑更换溶剂厂家、级别等，更甚者要加捕集柱改善。
2.2破坏试验也称强制降解试验，是在人为设定的特殊条件下，如酸、碱、氧化、高温与光照等，引起目标化合物的降解，进而验证分析方法的适用性。
HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量
HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量1. 引言1.1 研究背景高效液相色谱（HPLC）是一种高效、精确的分析方法，已广泛应用于药物分析领域。
在HPLC分析过程中，由于色谱柱的运用、温度变化等因素，可能会导致色谱峰的漂移，造成定量分析的误差。
为了解决这一问题，加入校正因子及主成分自身对照法成为一种常用的校正方法。
本研究旨在利用HPLC加校正因子的主成分自身对照法，对盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量进行准确测定，以提高药物质量的控制水平，保证药物的安全有效使用。
通过本研究，将为药物检测方法的改进与发展提供参考，并推动相关领域的研究进展。
1.2 研究目的研究目的是为了建立一种可靠、准确的方法来测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量，以确保药品质量符合标准要求。
通过使用HPLC 加校正因子的主成分自身对照法，可以提高测定的准确性和精确度，为药物生产和质量控制工作提供有力支持。
本研究旨在探讨该方法在实际药品分析中的应用前景，为相关领域的研究和实践提供参考和借鉴，推动药品检验技术的不断创新与提高。
通过深入研究盐酸特拉唑嗪片中的有关物质含量测定方法，可以为进一步优化药品生产工艺、提高产品质量和安全性提供科学依据，促进药品行业的可持续发展和健康发展。
1.3 研究意义盐酸特拉唑嗪片是一种常用的药物，用于治疗胃酸过多引起的胃溃疡、十二指肠溃疡等消化系统疾病。
而在药品生产和质量控制中，准确测定药物中的活性成分含量是至关重要的。
研究如何准确、快速地测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的含量具有重要的意义。
HPLC加校正因子的主成分自身对照法是一种常用的药物含量测定方法，具有高灵敏度、高分辨率和高准确性的特点。
通过该方法可以有效地对药物中的活性成分进行定量分析，为药品的生产质量提供有力支持。
本研究拟通过HPLC加校正因子的主成分自身对照法，对盐酸特拉唑嗪片中的活性成分进行含量测定，旨在为药品质量控制提供更加可靠的分析方法，并为相关药物的生产和质量管理工作提供参考。
hplc 主成分自身对照法在药物杂质检查中的原理
hplc 主成分自身对照法在药物杂质检查中的原理下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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有关物质测定HPLC方法的建立
有关物质测定hplc方法的建立一、开始之前必须明白：1、有关物质来源的两种途径：1）合成过程中的中间体和副产物；2）储存过程中产生的降解产物；2、分析你的样品结构，熟悉样品的基本性质；3、样品中可能含有的中间体；4、样品的基本稳定性和可能产生的降解产物；二、准备工作1、查阅文献，看看是否同行已经做过类似的工作，有的话就简单了，直接奔主题了。
2、没有文献（苦！），那就很是麻烦了。
1）分析结构，看看有无紫外吸收，有就比较简单，选用紫外检测器就行了，没有的话那就麻烦，可以选用蒸发光散射检测器等；2）分析结构，看看选用何种色谱方式进行分离（正相或者反相色谱）；3）分析结构，看看流动相该如何选择，要不要选用一些离子对试剂。
4）分析结构。
5）与同类产品进行比较；三、开工（以紫外检测为例）1、流动相的选择（采用粗品进行选择）1）、有文献，按文献进行优化。
不过我得提醒一下，文献的方法参考是可以的，要想完全按照他的条件做出来是很难的。
2）、没有文献。
a、紫外扫描一下，看看哪里有最大吸收。
将能得到的中间体、副产物、分解产物、样品配成相同浓度，在紫外扫描分光光度计上扫描一下，选择所有物质具有相同的最大吸收处的波长作为测定波长。
要是有pda检测器就不需要这一步了。
b、还是得找一些资料，看看类似的样品的流动相，以它为起始流动相进行选择，如果没有，那就找专业书吧，看看它是怎么教你选择流动相的。
2、最低检测限3、系统适应性试验重复进样5次，记录色谱图，给出系统评价报告4、考察中间体及副产物和样品的分离度。
同时定出中间体在色谱图中的出峰位置，为定质量标准提供依据。
5、考察降解产物和样品的分离情况。
这个一般是通过破坏性试验来考察。
常用的一般是高温、强光、氧化、强酸、强碱五个因素进行考察，通过考察，应该可以知道色谱图中那些峰是由于什么因素产生，这个也可为定质量标准提供依据。
6、根据上面的试验，应该可以知道样品的一些大概情况了，样品中有哪些杂质应该比较明确了。
高效液相分析报告方法开发2
有关物质测定hplc方法的建立液色迷人一、开始之前必须明白：1、有关物质来源的两种途径：1）合成过程中的中间体和副产物；2）储存过程中产生的降解产物；2、分析你的样品结构，熟悉样品的基本性质；3、样品中可能含有的中间体；4、样品的基本稳定性和可能产生的降解产物；二、准备工作1、查阅文献，看看是否同行已经做过类似的工作，有的话就简单了，直接奔主题了。
2、没有文献（苦！），那就很是麻烦了。
1）分析结构，看看有无紫外吸收，有就比较简单，选用紫外检测器就行了，没有的话那就麻烦，可以选用蒸发光散射检测器等；2）分析结构，看看选用何种色谱方式进行分离（正相或者反相色谱）；3）分析结构，看看流动相该如何选择，要不要选用一些离子对试剂。
4）分析结构。
5）与同类产品进行比较；三、开工（以紫外检测为例）1、流动相的选择（采用粗品进行选择）1）、有文献，按文献进行优化。
不过我得提醒一下，文献的方法参考是可以的，要想完全按照他的条件做出来是很难的。
2）、没有文献。
a、紫外扫描一下，看看哪里有最大吸收。
将能得到的中间体、副产物、分解产物、样品配成相同浓度，在紫外扫描分光光度计上扫描一下，选择所有物质具有相同的最大吸收处的波长作为测定波长。
要是有pda检测器就不需要这一步了。
b、还是得找一些资料，看看类似的样品的流动相，以它为起始流动相进行选择，如果没有，那就找专业书吧，看看它是怎么教你选择流动相的。
2、最低检测限3、系统适应性试验重复进样5次，记录色谱图，给出系统评价报告4、考察中间体及副产物和样品的分离度。
同时定出中间体在色谱图中的出峰位置，为定质量标准提供依据。
5、考察降解产物和样品的分离情况。
这个一般是通过破坏性试验来考察。
常用的一般是高温、强光、氧化、强酸、强碱五个因素进行考察，通过考察，应该可以知道色谱图中那些峰是由于什么因素产生，这个也可为定质量标准提供依据。
6、根据上面的试验，应该可以知道样品的一些大概情况了，样品中有哪些杂质应该比较明确了。
高效液相色谱法测定药品有关物质时的操作要点
高效液相色谱法测定药品有关物质时的操作要点发表时间：2017-06-22T11:18:36.573Z 来源：《医药前沿》2017年6月第16期作者：王磊刘远[导读] 本文对药品有关物质测定中HPLC操作要点进行探讨，为提高测定质量提供参考。
（天津科技大学天津 300222）【摘要】药品安全与人们的生命健康密切相关，因此，加强药品测定方法的研究，对确保药品安全意义重大。
药品测定中高效液相色谱法（HPLC）在测定药品有关物质时具有较高精准度，优点突出，被广泛应用在药品物质测定中。
本文对药品有关物质测定中HPLC操作要点进行探讨，为提高测定质量提供参考。
【关键词】高效液相色谱法；药品；有关物质；测定【中图分类号】R927 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）16-0322-01药品中的相关物质主要指药物生产、贮存环节引入的有机杂质，不仅给药物纯度造成较大影响，而且影响药物疗效的正常发挥，甚至引起不良反应。
HPLC在当前药品中有关物质测定中应用广泛，如何把握测定操作中的要点，提高测定结果准确性，受到越来越多业内人士的关注。
1.溶液配制及系统适用性试验1.1 配制溶液如使用自身对照法进行测定，应分别配制两份对照溶液、供试品溶液，均需进行两次进样。
当需进行复验、产生边缘数据或采用外标法时在分别配制两份的同时，至少各进行三次进样。
另外，使用外标法时，还需对其中一份溶液进行五次连续进样。
1.2 系统适用性试验系统适用性是否满足规范要求直接影响药品有关物质测定结果准确性，其中拖尾因子、重复性、分离度是系统适用性试验中的重要参数，应引起足够的重视。
首先，使用反相高效液相色谱法测定药品中有关物质时，借助峰面积实现，通常对拖尾因子不做要求，而如果出现严重的拖尾现象，会给测量峰面积以及分离效果造成不利影响，甚至会包含杂质，严重影响测定结果准确性，因此，应注重对拖尾因子严加控制。
其次，重复性。
当杂质含量不足0.5%时，要求峰面积相对标准差不能达到10%；当含有0.5%～2%的杂质时峰面积相对标准差不能达到5%。
高效液相色谱法测定左旋多巴片的有关物质
高效液相色谱法测定左旋多巴片的有关物质目的：采用高效液相色谱法测定左旋多巴片的有关物质。
方法：采用依利特Spherisorb C18柱（5 μm，150×4.6 mm），以0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（含0.003 mol/L辛烷磺酸钠，pH3.0）-甲醇（84∶16）为流动相，检测波长280 nm，流速1.0 ml/min，柱温30℃。
结果：降解产物在该色谱条件下与左旋多巴分离良好。
结论：本方法用于测定左旋多巴片有关物质，方法简便，快速，结果准确。
[Abstract] Objective: To use an RP-HPLC method for determination of related substances in levodopa. Methods: The method was performed on Spherisorb column （5 μm，150×4.6 mm）, the mobile phase A was 0.01 mol/L KDP buffer (contain 0.003 mol/L Octane-1-sulfonic acid sodium salt, pH3.0), the mobile phase B was MeOH, the detection wavelength was 280 nm. The flow rate was 1.0 ml/min. Results: The related substances in levodopa were separated successfull. Conclusion: The Method is simple, accurate and good reproducibility.[Key words] Levodopa tablet; HPLC; Related substances左旋多巴是目前临床上治疗帕金森疾病最常用和最有效的药物之一，也是目前治疗大龄儿童弱视的主要药物[1]。
高效液相色谱法测定D-泛酸钠有关物质
高效液相色谱法测定Ｄ－泛酸钠有关物质目的：建立高效液相色谱法测定D-泛酸钠的有关物质。
方法：采用色谱柱C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，以甲醇-0.2%磷酸溶液（10∶90）为流动相，流速1 ml/min，进样量10 μl，检测波长214 nm。
结果：D-泛酸钠主峰与有关物质峰达到有效分离。
结论：高效液相色谱法准确、灵敏，重现性好，可用于D-泛酸钠有关物质的检查。
标签：泛酸钠；有关物质；HPLC泛酸钠（Sodium Pantothenate）是泛酸的钠盐。
泛酸是B族维生素的一种，为多种代谢环节中包括碳水化合物、蛋白质、脂肪及上皮功能维持正常所必需的辅酶A的组成部分，临床主要用于泛酸缺乏(如吸收不良综合征、热带口炎性腹泻、乳糜泄、局限性肠炎或泛酸拮抗药物应用)的预防和治疗，维生素B族物质缺乏时的辅助治疗以及一些其他疾病的辅助治疗（如链霉素中毒、术后肠梗阻、类风湿等）。
游离泛酸极不稳定，常以钠盐或钙盐的形式存在。
近年，对泛酸钠的研究日趋增多，已见有泛酸钠的制备、结构确证和药理方面的报道[1~5]，但在质量控制方面尚未见有关物质检查的研究报道。
本文采用自身对照，建立了HPLC法检测D-泛酸钠的有关物质，方法准确、简便、重现性好，可作为控制D-泛酸钠产品质量的方法。
1 仪器与试药Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；HH-2数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）。
泛酸钠（浙江杭康海洋生物药业有限公司，批号040602，040606，040610）；盐酸（分析纯，杭州试剂总厂）；氢氧化钠（分析纯，青岛海智通科技有限公司）；过氧化氢（分析纯，河北健宁医药化工厂）；磷酸（分析纯，天津市益民化学试剂厂）；甲醇（色谱纯，天津四友生物医学技术有限公司）。
2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液（10∶90）；流速1 ml/min；进样量10 μl；检测波长214 nm。
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关于HPLC主成分自身对照法检查有关物质时检测波长确定的讨论审评二部张玉琥
有关物质检查，包括对产品中残留合成原料、中间体、副产物及可能的降解产物的检查，是控制药品质量的重要指标，目的是检查药品中所含的上述杂质是否符合安全性的要求,同时也是药品稳定性评价中需重点考察的项目。
有关物质检查常用的方法之一是HPLC主成分自身对照法（紫外检测器），即将HPLC色谱图中杂质峰面积与主成分自身对照液峰面积进行比较，以确定杂质限度是否合格。
采用此方法时确定的检测波长是否合理直接影响到方法的可行性，因此检测波长的选择是方法学研究的重要内容。
在审评中发现一些申报单位在采用HPLC主成分自身对照法检查有关物质时直接或间接地以主成分的最大吸收波长作为检测波长，由于有关物质检查的对象是杂质，若将主药的最大吸收波长确定为检测波长，则杂质在此波长下的吸收可能偏低，某些杂质甚至无吸收，这样会造成对杂质含量的低估甚至漏检，从而不能反映产品的真实质量，影响了对品种质量可控性及稳定性的评价。
在有关物质检测波长确定方面，申报资料中比较常见的做法有：
1．直接将主药的最大吸收波长选作检测波长。
2．简单地套用含量测定的色谱条件。
在HPLC法进行含量测定时，为提高方法的灵敏度，降低干扰，往往选用主成分的最大吸收波长作为检测波长。
若套用含量测定的色谱条件，实际仍是以主药的最大吸收波长作为有关物质检测波长。
3．以样品进行破坏性试验（酸、碱、热、光照、氧化等）后的溶液做紫外扫描，将扫描图谱中最大吸收波长确定为有关物质的检测波长。
因破坏性试验后溶液中存在尚未破坏的主药、降解产物、辅料等，此溶液的紫外吸收为各成分紫外吸收的加和，并不能反映降解产物的紫外吸收特性。
由于未破坏主药所占比例较大，故破坏性试验后溶液的最大吸收波长一般仍为主药的最大吸收波长。
采用HPLC主成分自身对照法检查有关物质，其前提之一是需检查的杂质与主成分在确定的检测波长下应有相近的紫外吸收（响应值接近），选择检测波长时需对产品中可能存在的杂质（合成原料、中间体、副产物以及降解产物）的紫外吸收特性进行研究。
已知杂质的紫外吸收特性可采用对其流动相溶液直接进行扫描
的方法考察，未知杂质（如未知降解产物等）可通过二极管阵列检测器考察其紫外吸收情况，根据各主要杂质及主成分的紫外吸收特性，选取响应值基本一致的波长作为有关物质的检测波长。
若对不同杂质难于找到均适宜的检测波长，可考虑选择在不同波长下分别测定，也可考虑采用加校正因子的主成分自身对照法。
只有经试验研究确认主成分的最大吸收波长符合有关物质检查对测定波长的要求时，为方便操作，可选作有关物质的检测波长，以与含量测定的色谱条件一致。
另外，HPLC主成分自身对照法检查有关物质比较适用于对微量杂质总量的控制，也可用于单个杂质的限度（一般不超过0.5%）控制。
对于具有明确归属的已知杂质，建议采用杂质对照品法进行检查。
对于有毒有害杂质，更应采用杂质对照品法单独测定，并制定严格的限度。