动物肝脏DNA的提取
动物肝脏中提取DNA
动物肝脏中提取DNA【实验目的】1.掌握肝脏DNA分离的原理及操作过程2.掌握主要试剂的作用3.熟悉DNA纯度及含量鉴定方法【实验原理】动物肝脏。
小牛胸腺和鱼类精子含有较多的DNA，是提取DNA的良好材料。
动植物的DNA室以核蛋白的形式存在于生物体中（主要在核内），DNA核蛋白（DNP)在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度很低，近视它在纯水中的1%。
，而在1mol/L NaCl溶液中，其溶解度至少是纯水中的二倍。
相反，核糖核蛋白（RNP）能在0.15mol/L NaCl溶液中溶解。
利用这一性质，可使脱氧核糖核蛋白与核糖核蛋白分开。
制备过程中，当细胞破碎时，脱氧核糖核酸酶的活性增加，DNA将遭受降解，为此在提取液中加入柠檬酸盐、EDTA做抑制剂，并要求整个提取操作在4℃以下进行，以减少酶对DNA的破坏。
分离得到的DNP，进一步用十二烷基硫酸钠（SDS）使蛋白质变性，用含有异丙醇的氯仿除去变性蛋白，最后用95%的冷乙醇从溶液中把DNA沉淀出来。
DNA纯度可以通过A260/A280进行鉴定，而浓度可以用紫外吸收法、定磷法、二苯胺显色法测定。
【实验操作】1．取新鲜猪肝脏，除去血水和结缔组织，在冰浴上切成小块，称取10g，加入2倍体积（20ml）0.15mol／L NaCl－0.015mol／L枸橼酸钠缓冲溶液，于组织捣碎机中迅速捣成匀浆，再以玻璃匀浆器2～3次使细胞破碎，最后加缓冲液至50ml。
2.组织匀浆移入离心管内，浸入冰盐溶液中冷却，而后在4℃下6000r／min离心5～10min。
弃上清（可用于制备RNA）。
将沉淀用2倍体积的冷的上述缓冲液洗涤2次，洗涤时用匀浆器研磨洗涤，离心条件同上。
3．将离心后所得沉淀物悬于5倍体积的0.15mol／L NaCl－0.1mol／L EDTA-Na2（pH8.0）溶液中，而后边搅拌边慢慢滴加5％SDS溶液，直至SDS的最终浓度达到1%为止。
然后加入固体NaCl，使其最终浓度达1mol/L。
动物肝脏dna的提取实验报告
动物肝脏dna的提取实验报告动物肝脏DNA的提取实验报告摘要：DNA提取是生物学研究中的一项基本实验技术，本实验旨在通过提取动物肝脏中的DNA，探究DNA提取的原理和方法。
实验结果表明，通过适当的操作步骤和试剂，可以成功地从动物肝脏中提取到高质量的DNA。
引言：DNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，它为我们了解生物的遗传信息提供了基础。
而动物肝脏作为一个重要的代谢器官，其中的DNA含量丰富，因此成为DNA提取的理想来源之一。
本实验旨在通过提取动物肝脏中的DNA，探究DNA提取的原理和方法。
材料与方法：1. 实验材料：动物肝脏样本、细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、异丙醇、氯仿、等温酒精、TE缓冲液等。
2. 实验步骤：a. 取一定量的动物肝脏样本，用细胞裂解缓冲液将其均匀悬浮。
b. 加入适量的蛋白酶K，使其在适宜的温度和时间下进行消化。
c. 加入异丙醇和氯仿，进行DNA的沉淀和分离。
d. 用等温酒精洗涤DNA，去除杂质。
e. 用TE缓冲液溶解DNA，获得高质量的DNA溶液。
结果与讨论：通过实验操作，我们成功地从动物肝脏中提取到了DNA。
观察DNA溶液的外观，呈现出透明且黏稠的特点，符合DNA的理化性质。
进一步通过紫外光谱检测，发现DNA溶液在260nm处有明显的吸收峰，而在280nm处几乎没有吸收，表明DNA溶液中没有蛋白质的污染。
此外，通过琼脂糖凝胶电泳分析，我们可以看到明显的DNA条带，进一步证明了提取到的DNA的完整性和纯度。
DNA提取的关键步骤是细胞裂解和DNA分离。
细胞裂解缓冲液中的离子和蛋白酶K的作用可以破坏细胞膜和核膜，使DNA释放到溶液中。
异丙醇和氯仿的加入可以通过沉淀和分离的方式将DNA从溶液中提取出来。
等温酒精的洗涤可以去除DNA溶液中的杂质，如蛋白质和盐类。
最后，用TE缓冲液溶解DNA，可以得到高质量的DNA溶液。
结论：本实验通过提取动物肝脏中的DNA，探究了DNA提取的原理和方法。
动物肝脏中DNA的提取和检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸〔DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写,又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。
有时也被称为"遗传微粒",原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线〔260nm有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应；当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸〔dAMP 脱氧腺苷、胸腺嘧啶脱氧核苷酸〔dTMP 脱氧胸苷、胞嘧啶脱氧核苷酸〔dCMP 脱氧胞苷、鸟嘌呤脱氧核苷酸〔dGMP 脱氧鸟苷。
而脱氧核糖〔五碳糖与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。
动物肝dna提取实验报告
动物肝dna提取实验报告
动物肝DNA提取实验报告
实验目的：
本实验旨在通过提取动物肝组织中的DNA，探究DNA提取的方法和步骤，以及观察提取得到的DNA的质量和纯度。
实验材料：
1. 动物肝组织样本
2. 细胞裂解缓冲液
3. 蛋白酶K
4. 乙醇
5. 离心管
6. 离心机
7. 紫外可见分光光度计
实验步骤：
1. 将动物肝组织样本切碎并加入细胞裂解缓冲液，用搅拌器搅拌均匀。
2. 加入蛋白酶K，使细胞裂解，释放DNA。
3. 将混合液转移至离心管中，进行离心分离。
4. 用乙醇沉淀DNA，将DNA沉淀物洗涤并溶解。
5. 利用紫外可见分光光度计检测DNA的质量和纯度。
实验结果：
经过实验操作，成功提取到了动物肝组织中的DNA。
通过紫外可见分光光度计检测，得到的DNA样本纯度较高，质量较好。
实验结论：
本实验通过提取动物肝组织中的DNA，验证了DNA提取的方法和步骤，并观察到了提取得到的DNA的质量和纯度。
实验结果表明，所采用的提取方法能够有效地获取到高质量、高纯度的DNA样本，为后续的分子生物学实验和研究提供了可靠的基础。
通过本次实验，我们对动物肝DNA提取的方法有了更深入的了解，也为今后的实验研究提供了重要的参考和借鉴。
希望本次实验结果能够对相关领域的研究工作提供一定的帮助和指导。
生化实验课件-动物肝脏中DNA的提取和测定
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
一. 实ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ目的 掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法 二. 实验器材 坐标纸 试管 吸管 722型分光光度计 恒温水浴锅
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
三.实验耗材 1. DNA标准溶液（取DNA钠盐用5mmol/L的NaOH 配成200ug/L的溶液） 2. 二苯胺溶剂（纯二苯胺1g溶于100ml冰醋酸 （A.R.）再加入10ml过氯酸（A.R.浓度>60%） 混匀待用。临用前加入1ml 1.6%乙醇溶液） 3. DNA样液（将实验1提取的DNA粗品用蒸馏水 溶解，定容至25ml，控制其DNA含量在100ug/ml 左右）
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
四. 实验操作 1.标准曲线的绘制 按表1加入各种试剂，混匀，于60°C恒温水浴45min，冷却后， 在595nm波长下于分光光度计比色测定，以吸光度对DNA浓度作 图，制作标准曲线。 2.样品的测定 取DNA样液1.0ml，加入蒸馏水1.0ml，混匀。然后准确加入二苯 胺试剂4.0ml，混匀，于60°C恒温水浴45min，冷却后，595nm 波长下于分光光度计比色测定，根据所测的吸光度对照标准曲线 求得DNA的质量（ug）。
实验1 动物肝脏中DNA的提取
2. 在沉淀中加入20ml柠檬酸钠缓冲液、10.5ml氯仿-异 戊醇混合液、2ml SDS使其最终浓度为0.41%，振荡 30min，然后缓慢加入固体NaCl（约1.8g），使其最 终浓度为1mol/L。将其在3500r/min离心20min，取 上清水相。 3. 在上述水相溶液中加入等体积冷乙醇，边加边用 玻棒慢慢搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶 状物用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA 粗品。用蒸馏水溶解并定容至25ml。
动物肝脏dna的提取和鉴定实验报告
动物肝脏dna的提取和鉴定实验报告动物肝脏DNA的提取和鉴定实验报告研究背景•DNA提取是基因研究和遗传分析的基础步骤之一，对于动物肝脏DNA的提取和鉴定具有重要意义。
•本实验旨在探究动物肝脏DNA的提取方法，并通过PCR技术对其进行鉴定和分析。
实验设计和方法1.实验所用材料和仪器：–动物肝脏样本–DNA提取试剂盒–离心管、显微管–PCR反应体系组分–PCR仪2.DNA提取步骤：–取动物肝脏样本，加入提取试剂，进行细胞破裂和蛋白质消化。
–通过离心将细胞碎片分离，再加入酒精将DNA沉淀。
–对DNA进行洗涤、干燥和溶解，得到纯净的DNA提取物。
3.DNA鉴定和PCR步骤：–制备PCR反应体系，包括DNA模板、引物、酶和缓冲液等。
–进行PCR反应，使用特定的温度和时间条件进行扩增。
–通过凝胶电泳分析PCR产物，检测特定的DNA序列是否存在。
实验结果和分析•经过DNA提取和PCR扩增，成功从动物肝脏中提取到DNA，并进行了鉴定和分析。
•凝胶电泳结果显示，PCR反应产物呈现出预期的大小和条带清晰，表明目标DNA序列存在于动物肝脏中。
结论•本实验成功地提取和鉴定了动物肝脏中的DNA。
•通过PCR技术，可以快速、准确地检测和分析动物肝脏的遗传信息。
•这一研究结果对于进一步深入了解动物遗传特征具有重要意义。
参考文献[1] Smith A, Jones B. A review of DNA extraction techniques for biofilm analysis in wastewater treatment systems. Water Research, 2018, 132: 87-96.[2] Brown C G, McKinstry J L, et al. Comparison of seven methods for extraction of bacterial DNA from fecal and cecal samples of mice. Journal of Microbiological Methods, 2019, 164: 105682.讨论与展望•本实验采用DNA提取试剂盒的方法，相比传统的有机溶剂法，具有操作简便、提取效率高、污染少等优点。
动物肝脏DNA的提取
动物肝脏DNA的提取
试剂、器材和实验材料
一、试剂：0.15mol/LNaCl-0.015mol/L柠檬酸钠、0.15mol/LNaCl-0.15mol/LNa2EDTA 溶液、10%SDS、5mol/LNaCl溶液、氯仿—异丙醇混合液、95%乙醇
二、器材：离心管、电子台秤、恒温水浴、量筒、烧杯、刻度吸管、离心机。
三、实验材料：新鲜兔子肝脏
实验操作
1.取处理好的肝脏组织于离心管中，加入40mlSSC溶液，将肝脏中的冰块捣碎，平衡后3000rpm离心10min.
2.弃去上清液，收集沉淀，重复第一步操作，再弃去上清液，得到DNP粗制品。
3.沉淀物悬于25mlPH8.0的Na2EDTA溶液中。
4.缓慢滴加10%SDS溶液3ml，边加边搅拌，同向轻搅。
5.60℃恒温水浴10min，不断搅动。
6.取出，冷却，加入5mol/LNaCl溶液8ml，转移到500ml的烧杯中。
7.加入40ml氯仿—异丙醇混合液，在室温下摇动20min。
8.将混合物转移至离心管中，平衡后，3000rpm离心5min，离心后混合物分为三层。
9.用吸管小心吸取上清液，放到30ml95%乙醇中，用玻璃棒轻轻缠出DNA丝状物。
讨论
1.用玻璃棒进行搅拌时，要注意同向轻搅，因为提取的DNA比较容易断裂。
2.在室温下摇动时，要注意只能顺时针或逆时针摇动。
动物肝脏DNA提取和鉴定
整个操作步骤应尽量简化，缩短实验过程，减少核酸变性、降解、机械切割的机会。
核酸提取过程中的注意事项：
01
加入RNA酶降解剩余的RNA，获得纯的DNA。
02
保存：将DNA于滤纸上干燥，溶于1mlTE中低温保存。
03
纯的DNA样品的获得
琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理：
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖凝胶作为支持介质的一种电泳分离方法，是一种简便、快速分离鉴定核酸的方法，已成为分子生物学及基因工程研究中常用实验方法之一。 琼脂糖英文名agarose，是从琼脂中提取出来的，由半乳糖和3.6-脱水-L- 半乳糖相互结合的链状多糖。琼脂糖和琼脂都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶，电泳中具有分子筛效应。但琼脂糖含硫酸根比琼脂少，电渗作用降低，因而分离效果明显提高。
溴化乙啶检测DNA的灵敏度很高，可检出10ng甚至更少的DNA。
01
02
03
琼脂糖凝胶电泳分离核酸的影响因素
（1）核酸大小与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 凝胶中，DNA片段迁移率与DNA分子大小(碱基对的对数)成反比(≤ 20kb) ，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。 （2）核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 不同构型DNA的移动速度次序为：闭环DNA>直线DNA>开环的双链环状DNA. （3）不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。 琼脂糖浓度/% 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 线状DNA大小/kb 60-5 20-1 10-0.8 7-0.5 6-0.4 3-0.2 2-0.1 注：DNA片段在5-500bp之间时，一般用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进行电泳分离。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构：DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
简述动物肝脏中dna提取的基本原理
简述动物肝脏中dna提取的基本原理动物肝脏中DNA提取的基本原理DNA提取是分子生物学中的一项基础技术，它是研究生物学、医学、农业等领域的重要手段。
在动物肝脏中提取DNA，可以用于研究动物的遗传信息、基因表达、疾病诊断等方面。
下面将介绍动物肝脏中DNA提取的基本原理。
1. 细胞破碎首先需要将肝脏组织中的细胞破碎，使DNA从细胞内释放出来。
常用的方法有机械破碎、化学破碎和超声波破碎等。
其中，机械破碎是最常用的方法，可以用搅拌器、研钵等设备将组织细胞破碎。
2. DNA分离破碎后的细胞混合物中含有DNA、RNA、蛋白质等多种分子，需要将DNA与其他分子分离。
一般采用酚/氯仿法或商用DNA提取试剂盒进行DNA分离。
酚/氯仿法是一种传统的DNA提取方法，它利用酚的亲油性和氯仿的亲水性，将DNA与其他分子分离。
商用DNA 提取试剂盒则是一种快速、简便的DNA提取方法，其中的试剂已经经过优化，可以快速地将DNA分离出来。
3. DNA纯化分离出的DNA还需要进行纯化，去除杂质和其他分子的干扰。
纯化方法包括乙醇沉淀法、离心柱纯化法等。
其中，乙醇沉淀法是最常用的方法，它利用乙醇的亲水性和DNA的亲疏水性，将DNA沉淀下来。
离心柱纯化法则是利用离心柱的特殊结构，将DNA与其他分子分离。
4. DNA定量最后需要对提取出的DNA进行定量，以确定DNA的浓度和纯度。
常用的方法有紫外分光光度法、凝胶电泳法等。
其中，紫外分光光度法是最常用的方法，它利用DNA分子的吸收特性，测定DNA的浓度和纯度。
动物肝脏中DNA提取的基本原理包括细胞破碎、DNA分离、DNA 纯化和DNA定量。
这些步骤需要严格控制条件，以保证提取出的DNA质量和纯度。
DNA提取技术的不断改进和优化，为动物遗传学、分子生物学等领域的研究提供了有力的支持。
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动物肝脏DNA的提取
一．实验目的
学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理和技术
二．实验原理
核酸和蛋白在生物体中以核蛋白的形式存在，其中DNA主要存在细胞核中，RNA主要存在于核仁和细胞质中，在制备核酸时应防止过酸、过碱及其它引起核酸降解的因素。
必要时还要加入DNA酶抑制剂。
动植物的DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液（1~2mol/L NaCl），将抽提得到的脱氧核糖核蛋白用SDS（十二烷基硫酸钠）处理，DNA即与核蛋白分开，可用氯仿—异戊醇将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解于溶液中。
向含有DNA的水相中加入冷乙醇，DNA 即成纤维状沉淀出来。
含有脱氧核糖的DNA在酸性条件下和二苯胺在沸水浴中共热10分钟后，产生蓝色这是因为DNA嘌呤核苷酸的脱氧核糖遇酸生成酮基戊醛。
它再和二苯胺作用产生蓝色物质。
三．实验试剂和器材
器材：动物肝脏、离心机、试管、离心管、玻璃棒
试剂：0.1mol/L氯化钠—0.05mol/L柠檬酸钠缓冲溶液、氯仿—异戊醇混合液（20：1）、5%SDS、95%乙醇、二苯胺试剂、固体NaCl.
四．实验操作
1.称去肝脏4g，放在培养皿中，用剪刀剪碎，再研磨6次，并分6次加入6ml氯化钠—柠
檬酸缓冲溶液，装在10ml的离心管中。
将匀浆物放在4000r/min下离心10min。
2.把上述沉淀转入20ml大试管中，加入6ml氯化钠—柠檬酸钠缓冲液、3ml氯仿—异戊
醇混合液、0.5mlSDS使其浓度为0.41%，手摇15min，然后缓慢加入NaCl（约0.55g）使其终浓度为1ml/L。
慢摇5min，使氯化钠充分溶解。
3.将上述混合液在4000r/min离心15min，取上清液于50ml烧杯中加入等体积冷95%乙醇，
边加边用玻璃棒慢慢搅动，将缠绕在玻璃棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA粗品。
（注意不要让样品过分干燥）用蒸馏水溶解至2ml。
4.显色反应：取反应物2ml加入二苯胺试剂2ml放沸水浴显色，观察颜色。
五．实验结论
显色反应：DNA水溶液加入2ml的二苯胺试剂后，将试管放进沸水浴中，约5min,试管的试剂显出蓝色。
说明实验成功。