兔基质金属蛋白酶-9(MMP-9)ELISA试剂盒使用说明书
联科生物 Human MMP-2 ELISA Kit 说明书
Catalog Number EK1M02-48EK1M02-96定量检测血清、血浆和细胞培养上清中的人基质金属蛋白酶2(MMP-2)浓度。
本产品仅用于科学研究，非诊断试剂，不能用于临床诊断。
1.背景介绍基质金属蛋白酶2(MMP-2)，又名72kDa 的IV 型胶原酶和明胶酶A ，在人类中由MMP2基因编码。
激活MMP-2需要蛋白水解加工。
MMP-2在子宫内膜破裂、调节血管形成和炎症应答中起作用。
MMP-2参与许多事件，如癌症进程、癌细胞浸润、细胞信号转导、新血管形成和淋巴管生成。
MMP2基因突变与Torg-Winchester 综合征、多发性骨溶解、关节炎综合征有关，可能与瘢痕疙瘩有关。
非囊性纤维化支气管扩张中，相比于呼吸道感染铜绿假单胞菌的患者，感染流感嗜血杆菌患者的MMP-2浓度是升高的。
2.检测原理本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。
特异性抗人MMP-2抗体预包被在高亲和力的酶标板上。
酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的MMP-2与固相抗体和检测抗体结合。
洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。
洗涤后，加入显色底物TMB ，避光显色。
颜色反应的深浅与样本中MMP-2的浓度成正比。
加入终止液终止反应，在450nm 波长(参考波长570-630nm)测定吸光度值。
3.试剂盒检测的局限1)请在本试剂盒标示的有效期内使用。
2)试剂盒的试剂不能与其他批号的试剂或其他来源的试剂混合使用。
3)任何标准品稀释、操作人员、移液技术、洗涤技术、孵育温度、试剂盒保存时间的改变，都将影响结合反应。
4)本试剂盒在设计上去除或降低了生物学样本中的一些内源性干扰因素，并非所有可能的影响因素都已经去除。
Human MMP-2ELISA Kit 检测试剂盒（酶联免疫吸附法）EK1M02-01二、基本信息1.2.未提供的材料设备1)能够检测450nm吸光度的酶标仪，参考波长570nm或630nm2)移液器及枪头、加样槽3)准备试剂用的试管、离心管、量筒等4)蒸馏水或去离子水5)涡旋振荡器、微孔板振荡器3.贮存试剂盒保存于2-8℃，有效期标注于标签上。
MMP-2、MMP-9在子宫内膜增生症和腺癌中的表达
子宫内膜癌是发达国家女性生殖道中最常见的恶性肿瘤，多见于绝经后妇女。
子宫内膜增生具有一定的癌变倾向，故被称为癌前病变，绝大多数子宫内膜增生是一种可逆性病变，仅有少数病例在较长时间间隔后可能发展为癌。
多数研究表明基质金属蛋白酶，，尤其是和的高表达与子宫内膜癌的侵袭转移密切相关。
我们应用免疫组织化学的方法对正常子宫内膜，不同类型子宫内膜增生症组织及子宫内膜癌组织中、蛋白表达研究，探讨、的高表达在由子宫内膜增生症进展为子宫内膜癌的过程中是否发挥了一定作用。
选择中山大学附属中山市人民医院年月至年月期间入院手术治疗，术后病理诊断为子宫内膜腺癌的例为研究对象。
患者年龄～岁，平均岁；所有患者术前均未化疗、放疗及内分泌治疗。
取同时期子宫内膜增生症患者标本例为子宫内膜增生症组，其中单纯性增生例复杂性增生例，不典型增生例，患者年龄～岁，平均岁。
并取同时期因其他原因行全子宫切除术获得的正常子宫内膜标本例作为对照组，其中正常增生期例，分泌早期例，分泌中晚期例，年龄～岁，平均岁。
免疫组织化学染色采用法。
一抗、，试剂盒及显色剂均购自北京中杉生物技术有限公司。
每例标本经常规福尔马林固定，石蜡包埋，连续组织切片成μ厚，分别进行苏木素伊红染色、.(Matrix metalloProteinases MMPs)MMP-2MMP-9MMP-2MMP-9MMP-2MMP-91.1200510200931002981(53.17.4)3010,10102861(52.98.0)30128103555(52.17.6)1.2Envision MMP-2MMP-9EnVision DAB 1.34m [1]１资料和方法研究对象主要试剂实验方法±±±MMP-2MMP-9、在子宫内膜增生症和腺癌中的表达黄 瑾，阳丽君，苏园园，李远明，何惠嫦（广东省中山市人民医院妇产科，广东中山５２８４００）ＭＭＰ－２ａｎｄＭＭＰ－９ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａａｎｄａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａHUANG Jin,YANG Li-jun,SU Yuan-yuan,LI Y uan-ming,HE Hui-chang (Department of Gynecology andObstetrics,Zhongshan People s Hospital,Zhongshan 528403,China)’收稿日期：修订日期：作者简介：2010-11-202011-01-19(1969)；黄 瑾－，女，硕士，副主任医师。
MPO、MMP-2和MMP-9在兔房颤模型心房肌中的表达变化
MPO、MMP-2和MMP-9在兔房颤模型心房肌中的表达变化∗杨倩;容春莉;王立立;宋学莲;齐晓勇【摘要】目的：：观察兔房颤模型心房肌组织髓过氧化物酶( MPO)、基质金属蛋白酶( MMP)-2和MMP-9的表达,并探讨三者与房颤时心房结构重构的关系。
方法：20只新西兰大白兔,开胸后于左心房植入起搏电极,随机分为2组：快速心房起搏组( RAP组)以600 min-1的频率快速起搏心房3周；假手术组( sham组)不予起搏。
起搏前、后行超声心动图检查评价心房和心室的结构和功能,行心房burst 刺激检测房颤诱发率；起搏后采用Masson染色评价心房的间质纤维化程度,采用RT-qPCR和Western blot检测心房MPO、MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白的表达水平。
结果：起搏3周后,与sham组相比,RAP组兔左心房明显扩张伴收缩功能障碍,左心室的结构和功能变化不明显；RAP组房颤诱发率和间质纤维化百分比均明显增加,且心房MPO、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的表达明显增加。
结论：持续快速心房起搏兔房颤模型会出现明显心房结构重构,心房MPO、MMP-2和MMP-9表达上调可能是其潜在的分子机制。
%AIM:To investigate the expression of myeloperoxidase ( MPO) , matrix metalloproteinase ( MMP)-2 and MMP-9 in the atrial myocardium, and their potential effects on atrial structural remodeling in a rabbit atrial fibrilla-tion ( AF) model. METHODS: The sternotomy was performed and the pacing electrode was fixed to the left atria of 20 New Zealand white rabbits. The animals were randomly divided into 2 groups:rapid atrial pacing ( RAP) group and sham group. The rabbits in RAP group were subjected to RAP for 3 weeks. The structure and function of the atria and ventricle were analyzed by echocardiography.Atrial burst stimulation was performed to test AF inducibility. The atrial fibrosis was e-valuated by Masson trichrome-staining. The mRNA and protein levels of MPO, MMP-2 and MMP-9 were detected by RT-qPCR and Western blot. RESULTS: After 3 weeks of RAP, obvious left atrial enlargement and dysfunction were ob-served, but almost no change of left ventricular diameter and function was found in RAP group compared with sham group. AF inducibility, atrial interstitial fibrosis and the mRNA and protein levels of MPO, MMP-2 and MMP-9 were all signifi-cantly increased in RAP group compared with sham group. CONCLUSION:Obvious atrial structural remodeling is found in the rabbit AF model induced by sustained RAP, and the up-regulation of MPO, MMP-2 and MMP-9 may be the potential molecular mechanism of atrial structural remodeling.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2016(032)011【总页数】5页(P1934-1938)【关键词】快速心房起搏;心房颤动;髓过氧化物酶;基质金属蛋白酶【作者】杨倩;容春莉;王立立;宋学莲;齐晓勇【作者单位】河北省人民医院心内科，河北石家庄050051;河北省人民医院心内科，河北石家庄050051;河北省人民医院心内科，河北石家庄050051;河北省人民医院心内科，河北石家庄050051;河北省人民医院心内科，河北石家庄050051【正文语种】中文【中图分类】R363心房颤动(atrial fibrillation，AF)，简称房颤，是临床上最常见的心律失常之一[1]。
基础学习实验4-酶谱法检测血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性
NGAL的三级结构
由N 端的310螺旋、C 端的α螺旋和中间的和中间的八段反平行的β折叠所构成，这
八段反平行式β折叠构成了一个β折叠桶结构。
此β折叠桶结构一端是开放的，为与配体结合提供了进口；而另一端则被短的N 端 310螺旋所封闭。在β折叠桶底部内侧排列着疏水的芳香族和脂肪族氨基酸残基， 形成了一个疏水核或疏水内部，为结合亲脂性配体提供了位点。
实验设计
1. 查阅相关资料，讨论MMP-2与MMP-9在食管癌各发展阶段的活性检 测能否作为监控癌症发展的一个指标，应该注意什么问题，其临床意 义如何？ 2. 若发现MMP-2与MMP-9在癌症病人中出现异常，谈谈你可能采取的
含有2个锌离子和5个钙离子
右图可见一个小分子化合物位于酶活性中心，并与一个锌离子结合
NGAL能与MMP-9以二硫键的方式结合，能起到保护和调节MMP-9功能的作用，所以NGAL
与肿瘤的侵袭移动有密切的联系。
汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室李恩民教授课题组以转染有pcDNA3 空白质粒 载体的SHEEC 细胞为对照，酶谱法检测结果表明，转染有pcDNA-NGAL (-) 的SHEEC 细胞 分泌的MMP-9 和MMP-2的活性均明显降低；而与此同时，转染有pcDNA-NGAL (＋) 的 SHEEC 细胞分泌的MMP-9 和MMP-2的活性均明显升高。表明通过有义、反义技术使NGAL 基因表达发生改变可以对SHEEC 细胞分泌的MMP-9 和MMP-2 的活性产生明显影响。
（2）明胶酶，包括MMP-2和MMP-9,其作用底物主要是Ⅳ型胶原和明胶，还可降解Ⅶ、
Ⅸ、Ⅹ型胶原,但不能降解间质胶原； （3）间充质溶解素，包括MMP-3、MMP-7、MMP-10和MMP-11，其作用底物主要是
伴刀豆球蛋白A(ConA)ELISA试剂盒说明书
伴刀豆球蛋白A(ConA)ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：体液伴刀豆球蛋白A(ConA)ELISA试剂盒说明书试验原理：BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。
人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。
伴刀豆球蛋白A(ConA)ELISA试剂盒说明书自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
伴刀豆球蛋白A(ConA)ELISA试剂盒说明书操作注意事项1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
伴刀豆球蛋白A(ConA)ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
当归芍药散治疗脑梗死风痰瘀阻证及对MMP_9的干预作用_赵义纯
脑梗死是目前影响人类健康和生命的最主要疾 病，这已成为世界性的公共卫生问题。 因此，及时有效 的针对脑梗死的治疗可以降低脑梗死发病率、致残率、 复发率。本研究目的在于观察、评价在西医规范化治疗 的基础上， 加用当归芍药散原方治疗脑梗死的临床疗 效，探讨其干预治疗脑梗死的可能机制。
1 资料与方法 1.1 临 床 资 料 选 择 2011 年 4 月 至 2011 年 9 月 来 无锡市中医医院中风病科住院及门诊的脑梗死患者共 60 例， 中医辨证标准参照 1996 年国家中医药管理局 脑病急症协作组制定的 《中风病诊断与疗效评定标 准》［1］。 西医诊断标准参照 1995 年全国第 4 届脑血管 病学术会议制定的 《各类脑血管疾病诊断要点》［2］，并 经头颅 CT 及 MRI 检查明确诊断为脑梗死缺血性中风 病患者。 排除年龄在 40 岁以下，85 岁以上患者；脑外 伤、脑肿瘤、短暂性脑缺血发作、脑出血、无症状性腔隙 性脑梗死等患者；合并重度心肺功能不全、肝、肾、造血 系统等严重原发性疾病、精神疾病患者。采用随机数字 表法分为两组。 中药组 30 例，其中男性 22 例，女性 8 例；年龄 48～85 岁，平均（70.73±8.78）岁；病程 1～14 d。 常规组 30 例，其中男性 19 例，女性 11 例；年龄 40～85 岁，平均（69.27±11.81）岁；病程 1～14 d。 两组资料差异 无统计学意义（P > 0.05）。 1.2 治疗方法 两组患者入院后， 根据 2010 年中国 缺血性脑卒中防治指南给予西医规范化药物治疗，包 括脱水、抗血小板聚集或降纤、他汀类及必要的控制血 压、血糖，并根据合并症予对症治疗。 中药组在常规治
（收稿日期 2012-12-05）
当归芍药散治疗脑梗死风痰瘀阻证及 对 MMP-9 的干预作用
对下肢静脉曲张患者血清中MMP-9表达的研究
对下肢静脉曲张患者血清中MMP-9表达的研究摘要】目的观察下肢曲张静脉患者血清中基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达情况以及在曲张静脉形成中的作用。
方法选取下肢静脉曲张病例30例作为观察组，选取正常大隐静脉30例作为对照组，采用ELISA法检测血清中MMP-9的含量，分析其表达情况。
结果观察组患者的血清MMP-9含量在108.26-195.47ng/ml，均值为（144.22±4.32）ng/ml；对照组患者的血清中MMP-9的含量在45.47-90.31ng/ml，均值在（63.15±2.88）ng/ml。
MMP-9在正常大隐静脉及曲张患者大隐静脉中均有表达，在下肢静脉曲张观察组中的表达明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论 MMP-9可能参与了下肢曲张静脉的重塑过程。
【关键词】静脉曲张基质金属蛋白酶血管重塑【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）35-0199-02下肢静脉曲张是指下肢静脉系统在直立状态下出现静脉血液返流、血液淤滞，导致血管壁以异常膨胀和扭曲为主要特征的进行性血管重塑[1-2]。
静脉曲张血管重塑是发生在曲张静脉中以平滑肌细胞(SMC)和细胞外基质(ECM)等主要成分的结构改变，是静脉壁适应各种病理状态所发生的代偿的结果。
因此细胞外基质更新在组织发展、形态发生和组织塑型中起重要的作用。
MMPs是一类锌离子和钙离子依赖的酶家族。
在正常的生理进程或病理状态下细胞外基质的吸除中起重要的作用[3]。
有学者认为静脉曲张血管壁与正常大隐静脉壁相比弹性蛋白和胶原是降低的，并且认为静脉曲张血管壁中MMPs的表达应是呈区域性变化的，本研究通过检测曲张静脉壁组织标本的 MMP-9的表达情况，讨论它们的变化对于静脉曲张发病的意义。
1 资料与方法1.1 一般资料：年龄35-70岁，平均年龄为52岁, 选取下肢静脉曲张病例30例作为观察组，选取正常大隐静脉30例作为对照组。
扶正益气抗癌汤治疗晚期非小细胞肺癌血清MMP-9VEGF变化研究
扶正益气抗癌汤治疗晚期非小细胞肺癌血清MMP-9VEGF变化研究【摘要】晚期非小细胞肺癌是一种常见的恶性肿瘤，治疗难度大，预后不佳。
本研究旨在探讨扶正益气抗癌汤对晚期非小细胞肺癌患者血清MMP-9和VEGF水平的影响。
通过实验结果显示，扶正益气抗癌汤能显著降低患者血清MMP-9和VEGF水平，具有抑制肿瘤生长和扩散的潜力。
这为扶正益气抗癌汤在肺癌治疗中的临床应用提供了实验依据，具有重要的临床意义并展望其在治疗肺癌方面的潜在作用。
【关键词】晚期非小细胞肺癌、扶正益气抗癌汤、MMP-9、VEGF、血清、研究、肿瘤、影响、临床意义、展望1. 引言1.1 背景介绍晚期非小细胞肺癌是一种高度致死率的恶性肿瘤，常常在晚期才被发现，治疗难度大。
在传统的肿瘤治疗方法中，化疗和放疗虽然能够一定程度上缓解患者的症状，但其毒副作用也不可忽视。
寻找一种更为安全有效的治疗方式是当前肺癌治疗领域的研究热点之一。
在肺癌的发生发展过程中，基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和血管内皮生长因子（VEGF）在调控肿瘤细胞增殖、浸润和转移中起着关键作用。
研究扶正益气抗癌汤对肺癌血清MMP-9和VEGF水平的影响，对于揭示其治疗机制，提供新的肿瘤治疗策略具有重要的意义。
1.2 研究目的研究目的主要是探讨扶正益气抗癌汤对晚期非小细胞肺癌患者血清MMP-9和VEGF水平的影响，验证其可能的治疗机制。
通过对肺癌患者进行临床观察，并结合实验室检测数据，分析扶正益气抗癌汤对肺癌相关蛋白的调节作用，揭示其抗肿瘤的分子机制，为进一步临床应用提供科学依据。
通过这项研究，也能够为晚期非小细胞肺癌的治疗提供新的思路和方法，为临床治疗疾病提供新的药物选择。
希望通过本研究，可以为肺癌患者带来更好的治疗效果，提高患者的生存质量和生存机会。
1.3 研究意义晚期非小细胞肺癌是一种较为常见且具有较高发病率和死亡率的恶性肿瘤，对患者的生存质量和预后造成了严重影响。
由于晚期非小细胞肺癌的治疗难度较大，传统的放化疗等治疗手段效果有限，因此寻找新的治疗方法迫在眉睫。
基质金属蛋白酶-9与妊娠期高血压疾病及胎盘早剥的关系
意义（Ｐ ＜ ．５ 。结论 ００ ）
病 的发 生和 发 展 。
与正常妊娠组比较 ， 妊娠期 高血压疾病 孕妇血清 中 ＭＭＰ９的表达 明显 减少， － 且
随病情加 重有减 少趋势 ， 致胎盘早剥时 ＭＭＰ９的表达进 一步减 少， 明 ＭＭＰ９可能参与妊娠期 高血压疾 － 表 －
【 关键词 】 基质金属蛋 白酶 ９ 高血压 ， ； 妊娠期 ； 胎盘早剥
ＭＭ ＿ １０例 ３ ３ Ｐ９在 ０ ０— ５周 定期 于我 院孕 检 的 孕妇 血 清 中 的表 达 ， 期 随访 ，９例 发 展 为妊 娠 期 高血 压 疾 定 １ 病 ， 中４例 发 生胎 盘 早 剥 ， 余 均 至 足 月 分娩 。结 果 其 其 发 生妊 娠 期 高血 压 疾 病组 孕妇 血 清 中 ＭＭＰ９表 达 － 明显低 于 正 常妊娠 组 （Ｐ ＜ ． １ ， ０ ０ ） 胎盘 早 剥 组 ＭＭＰ９的 表 达 又低 于妊 娠 期 高血 压 疾 病 组 ， ． 差异 有 统 计 学
３ 讨 论
中的作用 ， 并通过分析它们之间的相互 关系进一步探讨妊娠期
高 血 压 疾病 、 盘早 剥 的发 病 机 制 。 胎 ｌ 资 料 与 方 法
妊娠期高血压疾病的病 因及发病机制至今 尚未完全阐 明。
如 免疫 机 制 ， 胎盘 浅 着 床 ， 管 内皮 细 胞 受 损 ， 传 因 素 ， 养 血 遗 营 缺乏 ， 岛素 抵 抗 等 。胎 盘浅 着 床 可 能 是 孕 早 期 母 体 和 胎 盘 问 胰
３０ ８
河北医药 ２ １ 年 ２月 第 ３ ０１ ３卷 第 ３期
Ｈ ｂ ｉ ｄ ａ Ｊｕ ａ。０ １ Ｆｂ Ｖ ｌ ３Ｎ ． ｅｅ Ｍｅｉ ｌ ｏｒ ｌ １ ，ｅ 。 ｏ ３ ． ｏ３ ｃ ｎ ２
MMP-9在骨肉瘤中的表达及意义
ＭＭＰ－９在骨肉瘤中的表达及意义【摘要】目的检测骨肉瘤中MMP-9的表达，探讨其在骨肉瘤发生、发展及转移中的作用。
方法应用免疫组织化学技术检测46例骨肉瘤标本中MMP-9的表达。
结果MMP-9在骨肉瘤组织中的表达量明显高于良性骨肿瘤组织，在有无软组织浸润及不同Ennecking分期的骨肉瘤之间比较，MMP-9表达差异有统计学意义(P<0.05)。
结论骨肉瘤组织中MMP-9高表达，MMP-9在骨肉瘤发展中起重要作用。
【关键词】肿瘤；骨肉瘤；MMP-9；免疫组织化学基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase，MMP-9)是基质金属蛋白酶家族中的重要成员，是92kDa的明胶酶B，主要由巨噬细胞、结缔组织细胞和某些肿瘤细胞合成分泌。
骨肉瘤是常见的肿瘤，其发病率呈上升趋势，本试验通过免疫组化方法检测MMP-9在骨肉瘤及良性骨肿瘤中的表达情况，探讨MMP-9与骨肉瘤临床病理特征的关系。
1 资料与方法1.1 材料收集我院骨肉瘤手术治疗后经病理确诊的病例46例，年龄为11-45岁，其中男25例，女21例，术前均未进行任何治疗，同时选取12例良性骨肿瘤作为对照(骨样骨瘤6例，骨母细胞瘤6例)。
1.2 免疫组织化学方法检测MMP-9的表达采用S-P法，MMP-9单克隆抗体购自北京中彬金桥生物技术有限公司，试验过程按照严格按照说明书进行，并设用PBS代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判定标准每张切片均由病理主治医师确诊，并分别观察具有代表性的10个高倍视野。
MMP-9阳性染色者在细胞膜和(或)细胞浆有棕黄色颗粒沉着，根据细胞膜或胞浆的染色程度及染色细胞百分率进行分析评分，基本不着色者为0分，着色淡者为1分，着色适中者2分，着色深者为3分。
着色细胞占计数细胞百分率≤5%为0分，6%-25%为1分，26%~50%为2分，≥51%为3分。
将每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得分各自相乘，为其最后得分。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
兔基质金属蛋白酶-9（MMP-9）ELISA试剂盒使用说明书
我司ELISA试剂盒现货供应，质量保证，价格优惠，试剂盒首选森贝伽。
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定兔血清，血浆及相关液体样本中兔基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平。
用纯化的兔基质金属蛋白酶-9（MMP-9）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入基质金属蛋白酶-9（MMP-9），再与HRP标记的MMP-9抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白酶-9（MMP-9）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中兔基质金属蛋白酶-9（MMP-9）浓度。
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备
用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60 μg/L，40 μg/L ，20 μg/L，10μg/L，5 μg/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
4μg/L -80 μg/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。