流感病毒检验
流感病毒RNA荧光RT(PCR检测技术)-
流感病毒RNA荧光RT（PCR检测技术）-流感病毒核糖核酸荧光逆转录聚合酶链反应检测技术实时荧光定量聚合酶链反应是在常规聚合酶链反应基础上发展起来的定量聚合酶链反应技术。
通过在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累，对整个聚合酶链式反应过程进行实时监控。
最后，根据ct值和标准曲线对未知模板进行定量分析。
常用的实时荧光定量PCR可分为非特异性荧光标记的SYBR Green法、特异性荧光标记的TaqMan法和分子信标法。
1。
实时荧光定量聚合酶链反应原理:1。
SYBR Green方法:SYBR Green是一种双链DNA结合染料，在自由状态下不发光，当无意中掺入双链DNA时会发出荧光信号。
它的强度与双链DNA 的数量有关。
随着扩增产物数量的增加，检测到的荧光信号增加。
2，TaqMan方法:在扩增反应液中加入特异性探针，探针的5’端和3’端分别标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团，当探针完成时，两个基团的位置接近，5’端报告基团的荧光能量被3’端淬灭基团吸收，此时未检测到荧光信号，在扩增过程中，探针与模板结合形成5’→3’切除活性底物当Taq酶沿着模板向前延伸到探针连接处时，发生链置换。
Taq酶的5’→3’切除活性切割从探针上切割连接到探针5’端的报道基团。
5’末端报道基团的荧光能量与3’末端荧光淬灭基团的吸收分离，并且可以检测荧光信号。
在每个聚合酶链反应循环之后，荧光信号也有一个同步生长过程，就像扩增产物一样3.分子信标法:将探针设计成发夹形的茎环。
环的核苷酸序列与扩增产物的序列互补。
两端的核苷酸序列互补形成茎。
一端用报道基团标记，另一端用淬灭基团标记。
当探针不与模板结合时，报道基团和淬灭基团在空间上彼此靠近，报道基团的荧光能量被淬灭基团吸收。
此时，无法检测到荧光信号。
与模板结合后，探针的构象由发夹状变为链状，报道基团和淬灭基团分离，并呈荧光核酸检测是鉴定流感病毒基因组的一种强有力的方法，即使基因组含量很低或可以检测到死病毒。
实时荧光RT-PCR检测儿童流感病毒
速 可靠 的实 验 室 检 查 对 流 感 的 诊 断 和 治疗 十分 重 要 。本 研 究
采 用 实 时荧 光 反 转 录 Ｐ Ｒ（ Ｔ— Ｐ Ｒ） 法 同 时 对 儿 童 呼 吸 Ｃ Ｒ Ｃ 方 道 标本 中 流感 病 毒 进 行 检 测 ， 流 感 病 毒 感 染 的 早 期 诊 断 提 为 供 了新 的诊 断依 据 。
对 湛 江地 区 的 流感 病 毒 感 染情 况 进 行 调 查 ， 用 实 时 荧光 Ｒ 采 Ｔ— Ｐ Ｒ技 术 快 速 检 Ｃ
【 要】 目的 摘
测 流 感 病 毒 ， 于 流感 的诊 断 。方 法 收 集 湛 江 地 区 ２０ 用 ０ ９年 具 有 流 感 样 症 状 患 者 的 鼻 咽 拭 子 等 标 本
ｌ １ 病 毒 株 与 临 床 标 本 流 感 病 毒 Ａ Ｈｏ ｇ Ｋ ｎ／ ８株 、 ＿ ／ ｎ ｏ ｇ ６
流感 病 毒 Ｂ Ｌ ｅ４ ／ ｅ／ ０株 、 流 感 病 毒 Ｃ ５ 株 以 及 鼻 病 毒 副 ３
４ ４ ７ ｌ 株 均 为 ＡＴ Ｃ标 准 株 ， １ ６Ｇａ ｏ ｔ Ｃ 由本 实 验 室 传 代 保 存 。收 集 ２０ ０ ９年广 东 医学 院 附属 医 院 ３ １ 流 感 样 症 状 患 儿 鼻 咽 ５份 分 泌物 或 含 漱 液 等 标 本 （ 温 ≥ ３ 体 ８℃ ， 有 头 痛 、 寒 、 身 伴 畏 全 酸痛 等 症 状 的呼 吸 道 感 染 患 儿 标 本 ） 。并 以 同 期 健 康 体 检 儿
童 ４ ７名作 对 照 研 Ｒ 的 特 异 性 取 流 感 病 毒 标 准 Ａ Ｃ ／
甲流乙流病毒检测进展正式版资料
确性和可靠性。
外部质量评价
03
参与外部质量评价项目，与其他实验室进行比较和评估，提高
检测结果的准确性和可比性。
检测结果影响因素分析
样本质量
讨论样本采集、保存和运输过程中可能对检 测结果产生影响的因素及应对措施。
实验操作
分析实验操作过程中可能出现的误差来源，如加样 、温育、洗涤等步骤，提出改进措施。
干扰物质
探讨可能干扰甲流乙流病毒检测的物质，如 抑制剂、交叉反应物质等，以及如何消除其 影响。
检测结果解读与建议
结果判读标准
明确甲流乙流病毒检测结果的判读标准，包括阳性、阴性 和灰区等结果的解读。
01
临床意义
阐述甲流乙流病毒检测在临床诊断和治 疗中的应用价值，为医生提供参考依据 。
02
03
预防措施
通过甲流乙流病毒检测技术，对疑似患者进行 早期筛查，提高诊断准确率。
鉴别诊断
利用病毒检测技术，对甲流和乙流进行鉴别诊 断，避免误诊误治。
疗效评估
通过动态监测病毒载量，评估抗病毒治疗效果，指导临床用药。
疫情防控应用
01
疫情监测
利用甲流乙流病毒检测技术，对疫情进行实时监测，掌 握疫情动态。
02
溯源追踪
02 甲流乙流病毒检测方法
分子生物学方法
RT-PCR
反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）是一种常用的分子生物学 检测方法，具有高灵敏度和特异性，能够检测甲流乙流病毒 的RNA，是目前最常用的检测方法之一。
实时荧光定量PCR
实时荧光定量PCR是一种在PCR反应中加入荧光探针，通过 荧光信号的实时监测来定量检测病毒RNA的方法。该方法具 有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，已广泛应用于甲 流乙流病毒的检测。
甲流乙流病毒检测进展
contents •甲流乙流病毒概述•甲流乙流病毒检测方法•甲流乙流病毒检测技术进展•甲流乙流病毒检测应用进展•甲流乙流病毒检测未来发展趋势•结论与展望目录甲流乙流病毒概述是一种正交型甲型流感病毒，具有抗原性，可引起人类季节性流感。
甲流病毒传播速度快，易引起大流行，可引起急性呼吸道感染。
特点乙流病毒是一种正交型乙型流感病毒，具有抗原性，可引起人类季节性流感。
特点传播速度较慢，流行范围较局限，可引起急性呼吸道感染。
感染后可出现高热、咳嗽、呼吸困难等严重的呼吸系统症状。
严重的呼吸系统症状可引起继发性细菌性肺炎、支气管炎等并发症。
继发感染传播速度快，易引起社会恐慌，对社会经济造成一定影响。
社会影响病毒变异快，疫苗接种效果有限，防控难度较大。
防控难度大甲流乙流病毒的危害性甲流乙流病毒检测方法抗原检测方法具有快速、方便的优势，可以在短时间内提供结果。
快速检测灵敏度高适用范围广随着技术的进步，抗原检测方法的灵敏度不断提高，能够更准确地检测出病毒。
抗原检测方法适用于疑似病例的快速排查，也可以用于大规模筛查。
030201核酸检测方法具有高精准度，可以更准确地检测出病毒。
精准度高核酸检测方法适用于疑似病例的确诊，也可以用于病毒基因分型和变异研究。
适用范围广随着技术的进步，核酸检测方法的灵敏度不断提高，能够更早地检测出病毒。
灵敏度高1 2 3抗体检测方法可以反映个体的免疫力水平，对于评估疫苗接种效果和免疫系统功能具有重要意义。
反映免疫力抗体检测方法可以检测出长期免疫反应，对于评估疫苗接种后的持久性和群体免疫水平具有重要意义。
长期有效随着技术的进步，抗体检测方法的灵敏度不断提高，能够更准确地检测出抗体水平。
灵敏度高进展03自动化的病毒抗原检测利用抗体捕获法和免疫荧光法等免疫学技术，实现病毒抗原的快速检测，提供快速的诊断结果。
01自动化的病毒分离和鉴定系统利用先进的自动化仪器和分子生物学技术，实现病毒的快速分离和鉴定，提高检测准确性和效率。
甲流检测指标
甲流检测指标甲流（H1N1流感）是一种由H1N1甲型流感病毒引起的呼吸道传染病。
该病可引起轻重不同的症状，包括发热、咳嗽、喉咙痛、流鼻涕、肌肉疼痛、头痛、乏力、恶心和呕吐等。
如果患者出现以上症状，需要进行甲流检测。
甲流的检测指标可以帮助医生快速、准确地进行诊断。
1. 症状检查甲流检测的第一步是进行症状检查。
医生会询问患者是否出现发热、咳嗽、喉咙痛、流鼻涕、肌肉疼痛、头痛、乏力、恶心和呕吐等症状。
这些症状在甲流患者中比较常见，但这些症状也可能与其他疾病有关。
2. 病毒检测病毒检测是诊断甲流的关键指标之一。
医生会采集咽喉部分泌物或鼻腔拭子样本，送往实验室进行病毒检测。
病毒检测分为两种方法：分子生物学和细胞培养。
（1）分子生物学检测：采用实时荧光定量PCR技术，检测甲型H1N1流感病毒核酸，可以在病情发生之前或病情恢复后及病程中的任何时期拿到结果。
此方法的灵敏度最高，可以很快地确定患者是否感染甲流病毒。
（2）细胞培养：细胞培养方法可以培养出病毒，但需要较长时间（1-2周），且检测结果可能会受到细胞株、采样时间和操作难度等因素的影响。
3. 血液检测血液检测是甲流检测的另一个指标。
血液检测可以检测出患者血中的甲流病毒抗体。
甲流病毒抗体的产生需要时间，通常在感染后一到三周才能检测到。
因此，在感染初期进行血液检测可能会得到错误的结果。
4. 影像检查影像检查是用于排除其他呼吸道疾病的一种方法。
例如，肺炎、支气管炎等疾病的症状与甲流类似。
采用X线、CT等影像检查可以帮助医生确认患者的病因。
总之，甲流检测指标包括症状检查、病毒检测、血液检测和影像检查。
医生可以根据患者的症状和检测结果进行综合判断和诊断，从而制定合理的治疗方案和预防措施。
如果患者出现发热、咳嗽、喉咙痛、流鼻涕、肌肉疼痛、头痛、乏力、恶心和呕吐等症状，应及时就医并接受甲流检测。
流感诊断方案
流感诊断方案流感，是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，具有较强的传染性和季节性特点。
为了准确迅速地进行流感的诊断，以下是一份流感诊断方案，供临床医生参考。
一、病史询问在进行流感的诊断前，医生首先应该详细询问患者的病史，包括以下内容：1. 症状的起始时间：了解患者的起病时间，对于判断是否是流感以及流感的阶段具有重要意义。
2. 症状的具体表现：询问患者出现的症状，如发热、咳嗽、咽痛、头痛、肌肉酸痛等，并记录下症状的持续时间和严重程度。
3. 是否有接触流感患者的史：尤其关注患者是否有与确诊的流感患者或疑似流感患者有密切接触的史。
二、体格检查在病史询问之后，医生需要进行一系列的体格检查，包括以下方面：1. 测量体温：流感的主要临床表现之一是发热，因此医生应使用准确的体温计对患者进行体温测量。
2. 观察呼吸道症状：医生应仔细观察患者的呼吸状态，了解有无咳嗽、咽部炎症等症状。
3. 检查淋巴结：医生可以通过触诊患者的淋巴结，了解有无肿大。
三、辅助检查为了进一步明确诊断，医生可以进行以下辅助检查：1. 实验室检查：a. 呼吸道样本检测：通过采集患者的咽拭子或鼻拭子等样本，利用PCR技术检测流感病毒的核酸，以确认流感的诊断。
b. 血液检查：包括白细胞计数、C-反应蛋白（CRP）等指标的检测，有助于评估炎症的情况。
四、临床诊断标准在病史询问、体格检查和辅助检查等综合分析的基础上，医生可以根据以下临床诊断标准进行判断：1. 流感样病例：患者具有流感的典型症状（如发热、咳嗽等）且有流感病毒感染的流行病学史。
2. 确认病例：患者的病原学实验室检测结果为流感病毒核酸阳性。
五、鉴别诊断在流感的诊断过程中，医生还需要进行鉴别诊断，以排除其他与流感具有相似症状的疾病，如普通感冒、鼻咽癌等。
此时，医生可根据患者的具体表现和实验室检查结果，综合判断来进行鉴别诊断。
六、治疗建议对于被诊断为流感的患者，医生应根据患者的具体情况提出相应的治疗建议，包括以下内容：1. 给予症状缓解治疗：根据患者的临床症状，可以考虑给予发热、咳嗽等症状的缓解药物。
荧光定量RT-PCR检测流感病毒的应用
荧光定量RT-PCR检测流感病毒的应用摘要：随着时代的进步，社会的发展，大多数疾病已经可以得到很好的治愈，但是大规模的流感病毒的爆发，仍然困扰着我们，特别是甲型H1N1流感。
流感病毒传染性强，变异性强传播速度快，爆发后难以控制，极大的危害了社会的安定和谐，，影响了人们的生活质量。
所以及早点了检测发现流感病毒是抑制病毒传播，控制流感病毒爆发程度的最为关键的步骤。
现在国内外常用的检测流感病毒的方法主要有：血清学检测、核酸扩增法检测、细胞培养法、流感病毒抗原检测法等。
但是这些常用的方法耗费大量时间和精力，不适用于流感病毒的快速检查。
相反，荧光定量RT-PCR是各种检测方法中最灵敏、最有效、最准确的。
所以对于荧光定量RT-PCR检测流感病毒的应用的研究是有很大医学价值。
关键词：荧光定量RT-PCR、检测、流感病毒、应用1.引言为了使荧光定量RT-PCR对于流感病毒的检测结果更为准确，我们需要运用两组探针同时对流感病毒进行检测，优化PCR检测系统，实现双重保障。
在流感病毒爆发时可大量使用来快速检测流感病毒，控制其传播。
同时为了方便使用，已经将荧光PCR技术做成了可以方便快速检测流感病毒的试剂盒，经大量实验研究证实，此试剂盒效果优良，适合社会的多种需求。
2.概述2.1流感及流感病毒概述流感病毒是流行性感冒病毒的简称。
近几年，流感病毒主要被分为甲、乙、丙、丁（A、B、C、D）四型，其中丁型流感病毒主要指的是牛流感病毒。
流感病毒的致病范围广，致病性强，可导致人、鸡、鸭、鹅、狗、猪、牛、羊等多种动物及人类的发病，是各种人流感、猪流感、禽流感、牛流感的致病原。
人类的流感主要是甲型流感病毒和乙型流感病毒，其中甲型流感病毒的变异型强，且变异快，已经变异出了H1N1、H7N9、H3N2、H5N1等多种病毒亚型，流感病毒的变异仍未停止。
主要临床症状为全身肌肉酸痛、全身高人乏力、急性呼吸系统疾病等。
传染源为鸡、鸭、鹅等禽类，猪、牛、羊等畜类和人与人之间的相互传染。
高致病性禽流感病毒实验室检测分析
高致病性禽流感病毒实验室检测分析摘要：禽流感即禽流行性感冒，属于甲型流感病毒所致禽类传染性疾病，可在鸡、鸟类中大范围传播。
禽流感包括非致病性、低致病性及高致病性等类型，其中高致病性禽流感具有传播速度快、病死率高及危害性大等特点，并可感染人类，因此国家将其列为一类动物疫病。
为有效防控高致病性禽流感，需采取有效实验室检测方案。
本文分析研究高致病性禽流感病毒实验室检测方法及检查过程中的风险防控措施，希望为相关人员提供参考。
关键词：高致病性禽流感病毒；实验室检测；检测方法高致病性禽流感属于禽类急性传染性疾病，致病菌为甲型流感病毒，其主要特点是传播速度快，病死率较高，可对禽养殖行业造成严重不良影响。
近年来，我国部分地区开展家禽检疫过程中多次检出高致病性禽流感病毒，为此需不断加强实验室检测分析工作，并在检测中采取有效的风险防控措施，以实现对高致病性禽流感的有效防控。
一、高致病性禽流感概述高致病性禽流感属于世界范围多发常见禽类疫病，可对公共卫生安全构成严重威胁。
高致病性禽流感病毒致病性较强，可寄生于多种宿主体内，人类及哺乳动物均可感染，不同禽流感感染病原亚型临床表现存在差异，H7N9亚型感染症状较为严重，可导致呼吸系统病变及多器官功能衰竭，致死率较高，H7亚型感染可导致呼吸道相关症状，H9N2亚型感染症状与普通流感近似[1]。
高致病性禽流感危害性较强，为此需及早确诊，并采取有效的防控措施，以避免其持续蔓延。
二、高致病性禽流感病毒实验室检测方法（一）病毒培养分离病毒培养分离是诊断高致病性禽流感病毒的常规方法，具有较高的灵敏度、特异度及准确度。
实验室检测人员利用临床标本获取毒株，通过培养分离操作技术可确定毒株的生物学特性与抗原基因，进而为疫苗的选用提供参考。
同时，病毒培养分离操作相对复杂，样品运输条件、采用时间及采样方式等均可影响检测结果，不适合应用于普查中。
另外，开展病毒培养分离过程中，高致病性H5N1毒株需在生物安全级别达到BSL-3的实验室中完成[2]。
甲流检测步骤
甲流检测步骤一、症状观察甲流检测的第一步是观察患者的症状。
甲流是一种由甲型H1N1流感病毒引起的呼吸道传染病，其症状与普通感冒相似。
常见症状包括发热、咳嗽、喉咙痛、流鼻涕、乏力等。
如果发现患者出现这些症状，就需要进一步进行甲流检测。
二、医生诊断甲流检测的第二步是由医生进行诊断。
医生会根据患者的症状和体征，结合流行病学调查，进行初步判断是否可能是甲流感。
医生会询问患者的旅行史、接触史等信息，以帮助确定诊断。
三、采样检测如果医生怀疑患者可能患有甲流，就需要进行采样检测。
采样通常是通过鼻咽拭子或者咽拭子进行。
医生会使用专用的拭子在患者的喉咙或鼻腔内部轻轻刮取样本，然后将样本放入试管中进行检测。
四、实验室检测采样完成后，样本将送往实验室进行检测。
实验室检测通常采用聚合酶链反应（PCR）技术，该技术可以检测出甲型H1N1流感病毒的核酸。
PCR技术的特异性和敏感性较高，可以准确判断患者是否感染了甲流。
五、结果分析实验室检测完成后，医生会对结果进行分析。
如果检测结果显示患者的样本中存在甲型H1N1流感病毒的核酸，那么就可以确定患者感染了甲流。
如果检测结果为阴性，那么可以排除甲流感的可能性。
六、治疗和隔离确认患者感染了甲流后，医生会根据患者的病情进行相应的治疗和隔离措施。
甲流的治疗主要是对症治疗，例如退烧、止咳、补充液体等。
同时，患者需要进行隔离，以避免传染给他人。
在甲流流行期间，及时进行甲流检测对于控制疫情的传播至关重要。
通过以上的步骤，可以快速、准确地判断患者是否感染了甲流，以便采取相应的治疗和防控措施。
希望每个人都能保持健康，远离甲流的困扰。
(完整版)甲流及其检测方法检验科
CHAPTER 05
检验科甲流检测的生物安全及伦理 规范
生物安全级别及防护措施
生物安全级别
根据操作对象的危害程度，将生物安全级别 分为四级，分别为BSL-1、BSL-2、BSL-3 、BSL-4。在甲流检测中，一般涉及BSL-2 级实验室，即二级生物安全实验室。
防护措施
在BSL-2级实验室中，操作人员需佩戴一次 性手套、口罩、实验服等防护用品，同时需 使用一次性实验器材，如离心管、针头等。
病毒分离鉴定可以用于研究病毒的生物学特性和病毒株的鉴定，同时也可以用于疫苗制备和抗病毒药物 筛选等。
病毒分离鉴定的缺点是操作繁琐、周期长、需要使用活体细胞或鸡胚等，对实验条件和技术要求较高。
抗体检测方法
01
抗体检测方法是通过检测人体内的特异性抗体水平，判断 是否感染过甲型流感病毒。常用的抗体检测方法包括酶联 免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光法（IFA）等。
实验室内审与外审制度
内审制度
实验室需建立内审制度，定期对实验室的运行情况进 行自查和评估。内审人员需具备相应的资质和经验， 并按照规定的程序和要求进行内审。
外审制度
实验室还需接受外部审核机构的审核和评估。外部审 核机构需具备相应的资质和能力，并按照规定的程序 和要求进行审核和评估。外审结果将作为实验室持续 改进的重要依据。
未来甲流检测的趋势和展望
趋势
随着科技的不断进步，甲流检测技术也在不断发展和改进。未来，甲流检测将更加快速、敏感、准确和便捷。新 型检测技术如分子诊断、免疫诊断等将得到更广泛的应用，为甲流防控提供更加可靠的技术支持。
展望
未来，随着人工智能、大数据等技术的应用，甲流检测将实现智能化、自动化和信息化。通过建立智能化检测系 统，可以实现病毒的快速识别和溯源，为防控措施的制定提供更加科学和及时的依据。同时，通过信息化技术的 应用，可以实现检测结果的实时监测和分析，为疫情控制提供更加全面的数据支持。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
流感病毒检验
发表时间：2009-08-10T09:20:24.920Z 来源：《中外健康文摘》2009年第20期供稿 作者： 谭耀武 (黑龙江省宝清县八五三农场疾控中心
黑龙江宝清
[导读] 流行性感冒病毒（influenza virus）简称流感病毒
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2009)20-0277-01
流行性感冒病毒（influenza virus）简称流感病毒。流感病毒属正粘病毒科，可分为甲（A）、乙（B）、丙（C）3型。甲、乙、丙不
仅反映了病毒被发现的前后顺序，更重要的是反映了对人危害程度的顺序，甲型常以流行的形式出现，可造成世界性的大流行，乙型常以
局部流行的形式出现，丙型主要是侵犯婴幼儿。
1 样本采集
1.1采样液 Hank平衡盐、细胞培养液、牛肉浸液（小牛肉浸膏l0g、牛血清白蛋白2g，加蒸馏水至400ml、庆大霉素40mg、多粘菌素
B 0. 8mg，过滤除菌）等均可作采样液。
1.2采集鼻咽腔拭子标本 （1）咽拭子：用棉签擦拭双侧扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸人2～3ml采样液中。（2）鼻咽抽取物：用与
负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插人鼻腔、接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样
液刷洗收集器3次。（3）含漱液：用8～10以采样液漱口。
1.3收集血清标本 血清标本应包括急性期和恢复期双份血清。急性期应在发病7天内采集，恢复期则在发病后2～4周采集。血液标本
以2500r/min离心l5min，收集血清，弃血凝块。
1.4标本运送 病毒分离标本采集后应立即低温保存，应尽快送至实验室。24～48h内样品可置4℃保存，如48h内未能进行接种，应置
－70℃或以下保存。血清标本可在4汇存放一周，在－20℃长期保存。
1.5标本处理 咽拭子标本，收集管于混合器充分震荡，用无菌镊子取出棉拭子并在管壁上反复挤压棉拭子后弃拭子，标本加入双抗
（青霉素、链霉素）终浓度为l000IU/ml，混匀置4℃2h方可接种或低温保存；含漱液标本，混匀后自然沉淀，取上清液3ml，加双抗；鼻咽
抽取物标本，取无菌毛细吸管将洗液反复吹打，把粘液打散，而后按上述方法进行处理；器官组织标本，先用无菌的乳钵磨碎，用生理盐
水配成20％悬液，2000r/min离心l0min，取上清液3ml按上述方法进行抗菌处理。
2 检验方法
2.1材料和方法
2.1.1器材孵卵箱（38℃、33～35℃：各一个）、照卵器、卵盘、注射器、消毒剂、镊子、无菌生理盐水、毛细吸管、试管、液体石蜡
和封口胶等。
2.1.2方法 当今国内外常用狗肾传代细胞（MDCK）。将已长成单层的细胞管弃生长液，用含有l00IU/ml双抗HanK's液洗2遍，用0.2
～0.4ml处理过的标本液接种于细胞管，每份标本接种4管，置35T吸附1～2h后弃标本液，加入病毒培养液，其量为生长液的2倍。如标本
液清亮和进行病毒传代时，可不必吸附，直接加入。置33～35℃孵育7d。从第3d开始观察细胞病变（CPE），如细胞出现颗粒增多、变
圆、脱落达+++～++++时进行收获。如果7d还不出现CPE，可收集病毒培养液做血细胞凝集试验，在做试验前将细胞管冻融1～2次，以提
高病毒滴度。阳性者可测定其血凝滴度并鉴定之，阴性者混合4管细胞液盲传2代，仍为阴性则弃去。
2.3病毒鉴定 新分离的病毒可用血细胞凝集抑制试验、补体结合试验和中和试验等方法进行鉴定。最常用和简单的方法是血细胞凝集
抑制试验，必要时采用补体结合试验。
2.4快速诊断 流感病毒的主要感染部位是呼吸道上皮细胞，在病人呼吸道标本的脱落细胞中含有流感病毒抗原，通过直接检查脱落上
皮细胞内抗原即可诊断。标本最好采用负压抽吸法收集呼吸道分泌物。
2.5血清学诊断 病毒分离是诊断流感最常用的方法之一，如因各方面因素未分离出病毒，血清学亦可作为一种代替手段，但必须收集
急性期和恢复期双份血清，如恢复期血清特异性抗体较急性期增高4倍或以上，即可诊断。本章介绍两种常用的方法：血凝抑制试验和中和
试验。