SD 大鼠脓毒血症
神经调节蛋白-1对脓毒症大鼠心肌损伤的作用研究
神经调节蛋白-1对脓毒症大鼠心肌损伤的作用研究徐超;黄荣;赵鸿雁;曹静【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2024(53)2【摘要】目的研究神经调节蛋白-1(NRG-1)抑制脓毒症大鼠心肌损伤及其作用机制。
方法采用盲肠结扎穿刺(CLP)法建立大鼠脓毒症模型,将SD大鼠分为假手术组、脓毒症组、脓毒症+NRG组[重组人NRG(rhNRG)10μg/kg]。
成功造模12、24 h 后,取各组存活大鼠心脏及外周血清。
苏木素-伊红(HE)染色观察心脏组织形态结构变化,ELISA方法检测血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超敏肌钙蛋白(cTnⅠ)表达水平及心脏组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平,Western blot检测大鼠心肌组织磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK3β)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白、Bax蛋白表达水平。
结果造模12、24 h后,与假手术组比较,脓毒血症组血清中CK、CK-MB、cTnⅠ表达水平及心肌组织中TNF-α、IL-6及Bax蛋白表达水平均明显升高,心肌组织中p-Akt、p-GSK3β表达水平明显降低(P<0.05);造模12、24 h后,与脓毒症组比较,脓毒症+NRG组血清中CK、CK-MB、cTnⅠ表达水平及心肌组织中TNF-α、IL-6表达水平均明显降低;造模24 h后,与脓毒症组比较,脓毒症+NRG组心肌组织中Bax蛋白表达水平明显降低,p-Akt、p-GSK3β表达水平明显升高(P<0.05);病理结果显示,与假手术组比较,脓毒症组产生明显病变;与脓毒症组比较,脓毒症+NRG组病变减轻。
结论脓毒症心肌损伤时相关生物标志物表达水平发生改变,NRG-1可以通过通路Akt/GSK3β改善心功能,抑制相关促炎因子,减轻心肌损伤。
【总页数】6页(P165-170)【作者】徐超;黄荣;赵鸿雁;曹静【作者单位】新疆医科大学第一附属医院昌吉分院重症医学科;新疆医科大学第一附属医院昌吉分院心理医学科【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.Toll样受体4抑制剂对脓毒症大鼠模型心肌损伤和肺损伤的保护作用研究2.脓毒症大鼠早期ET-1、NO、E-选择素的表达及米力农对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用3.神经调节蛋白-1对脓毒症大鼠心肌组织炎症和心肌细胞凋亡的影响4.神经调节蛋白-1对脓毒症大鼠心肌血管内皮和心脏功能的影响5.神经调节蛋白-1/ErbBs系统对脓毒症心肌损伤的保护作用及相关机制因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
地塞米松对抗大鼠急性肺损伤的作用及其机制
地塞米松对抗大鼠急性肺损伤的作用及其机制符榕【摘要】目的：观察地塞米松（Dex）对脂多糖（LPS）、抗盐酸（HCl）、LPS ＋HCl所致大鼠急性肺损伤的作用，并探讨其机制。
方法将64只雄性 SD 大鼠随机分为 NS 组、LPS 组、HCl 组、LPS ＋HCl 组、NS ＋Dex 组、LPS ＋Dex 组、HCl ＋Dex 组、LPS ＋HCl ＋Dex 组，每组8只。
NS 组大鼠尾静脉注射生理盐水0．6 mL。
LPS 组尾静脉注射 LPS 8 mg／kg。
HCl 组气管内缓慢滴注 pH 为1．8的盐酸2 mL／kg。
LPS ＋HCl 组先尾静脉注射 LPS 4 mg／kg，4 h 后气管内缓慢滴注 pH 为1．8的盐酸0．5 mL／kg。
NS ＋Dex 组、LPS ＋Dex 组、HCl ＋Dex 组、LPS ＋HCl ＋Dex 组先分别按照 NS组、LPS 组、HCl 组、LPS ＋HCl 组方法给药，然后腹腔注射 Dex 2 mg／kg。
4 h 后处死大鼠。
取血采用ELISA 法检测血清 TNF-α、IL-4。
取支气管肺泡灌洗液（BALF）离心，计数细胞沉淀中白细胞总数，取上清液用考马斯亮兰法检测蛋白总量，用 ELISA 法检测TNF-α、IL-4水平。
取肺组织行病理学观察，并计算肺湿／干重比（W／D），用RT-PCR 检测肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）mRNA。
结果与 NS 组相比，LPS 组、HCl 组、LPS ＋HCl 组大鼠肺组织病理改变较重，肺 W／D、BALF 中白细胞总数及总蛋白含量升高，血清和 BALF 中 TNF-α、IL-4升高，肺组织 NE mRNA 表达升高（P 均＜0．05）。
上述指标 LPS ＋Dex 组低于 LPS 组，LPS ＋HCl ＋Dex 组低于 LPS ＋HCl 组（P 均＜0．05），HCl＋Dex 组和 HCl 组差异无统计学意义。
结论Dex 可对抗 LPS、HCl、LPS ＋HCl 所致大鼠急性肺损伤，其机制与降低 NE 有关。
脓毒血症概念(一)
脓毒血症概念(一)脓毒血症：概念及相关内容脓毒血症是一种严重的感染性疾病，它常常是由于细菌或其他微生物进入血液循环系统引起的。
这种感染在全球范围内都很常见，且在医院环境中尤为普遍。
脓毒血症可以导致严重的器官功能衰竭，甚至危及患者的生命。
脓毒血症的原因脓毒血症通常是由于机体免疫系统对细菌或其他病原体的感染做出的过度反应导致的。
当细菌进入血液循环系统后，机体的免疫细胞会释放一些化学物质，如细胞因子和白细胞介素等，来对抗感染。
然而，当机体的免疫系统过度激活时，这些化学物质会引发炎症反应，并损伤正常的组织和器官。
脓毒血症的症状脓毒血症的症状多样，但常见的包括高热、寒战、心率加快、呼吸急促、乏力等。
患者可能还会出现低血压、皮肤瘀点或瘀斑、少尿等症状。
在严重的情况下，患者可能会出现意识模糊、器官功能衰竭甚至休克。
如何诊断脓毒血症诊断脓毒血症通常需要进行一系列的实验室检查。
这些检查包括血液培养、白细胞计数、炎症指标的测量等。
医生还可能会进行影像学检查，如X射线、CT扫描等，来评估脓毒血症对器官的影响程度。
脓毒血症的治疗方法脓毒血症的治疗通常包括以下几个方面：1.抗生素治疗：早期使用广谱抗生素是治疗脓毒血症的关键。
具体的抗生素选择应根据病原菌的敏感性测试结果来确定。
2.液体复苏：在低血压或休克的患者中，静脉输液是非常重要的治疗手段。
这可以通过补充液体来维持血容量，提高器官灌注。
3.支持性治疗：脓毒血症患者通常需要密切监测，包括监测血氧饱和度、心率、呼吸等生命体征。
患者可能还需要接受呼吸机支持、肾脏替代治疗等。
4.手术治疗：在某些情况下，如脓肿形成，手术可能是必要的。
手术可以清除感染源，减轻病灶压力。
脓毒血症的预防措施预防脓毒血症的关键在于控制感染的扩散。
以下是几项重要的预防措施：•严格执行手卫生措施，包括经常洗手、正确使用消毒剂等。
•对于有感染风险的患者，及时识别和处理感染灶。
•合理使用抗生素，避免滥用引发细菌耐药性。
脓毒血症治疗指南
03
脓毒血症的并发症处理
急性呼吸窘迫综合征
总结词
急性呼吸窘迫综合征是脓毒血症常见的并发症之一，主要表现为呼吸急促、发 绀、血氧饱和度下降等。
详细描述
急性呼吸窘迫综合征的处理主要包括机械通气支持、保持呼吸道通畅、控制感 染等措施，以改善患者的呼吸功能，提高氧合能力。
急性肾损伤
总结词
急性肾损伤是脓毒血症的常见并发症，可能导致肾功能不全或肾衰竭。
个体化治疗与精准医学
个体化治疗
随着精准医学的发展，个体化治疗已成为脓 毒血症治疗的重要方向。这种治疗方式考虑 患者的基因、环境和生活习惯等因素，为患 者提供定制化的治疗方案。
精准医学研究
科研人员正在研究如何将精准医学应用于脓 毒血症的治疗。这包括开发能够预测患者对 不同治疗方案反应的工具和模型，以及探索 如何根据患者的基因和生物标志物来选择最 佳的治疗方法。
诊断标准
根据临床表现和实验室检查，如血白细胞计数升高、血培养 阳性等，可对脓毒血症进行诊断。此外，病情严重度评分系 统如APACHE II也可用于评估病情严重程度。
02
脓毒血症的治疗原则
早期目标导向治疗
01
02
03
04
早期识别度。
快速稳定生命体征
迅速控制感染源，维持呼吸、 循环功能稳定。
详细描述
急性肾损伤的处理包括维持水、电解质平衡，控制氮质血症，必要时进行肾脏替 代治疗，如血液透析或连续性肾脏替代治疗等。
肝功能不全与凝血功能障碍
总结词
肝功能不全与凝血功能障碍也是脓毒 血症的常见并发症，可能导致出血、 血栓形成等症状。
详细描述
处理肝功能不全与凝血功能障碍的方 法包括补充凝血因子、保肝治疗、预 防出血等措施，以维持患者的凝血功 能和肝功能。
脓毒血症诊断标准
脓毒血症诊断标准脓毒血症，又称败血症，是一种严重的感染性疾病，常见于严重感染或创伤后的患者。
脓毒血症的发病率在近年来逐渐增加，并且其死亡率也相对较高。
为了及时准确地诊断和治疗脓毒血症，医学界制定了一系列临床标准，即脓毒血症诊断标准。
脓毒血症诊断标准是根据患者的临床表现和实验室检查结果来确定的。
其中，最常用的脓毒血症诊断标准是“SIRS标准”（Systemic Inflammatory Response Syndrome）。
根据SIRS标准，脓毒血症的诊断需要同时满足以下四项临床表现中的两项或更多：体温＞38℃或＜36℃；心率＞90次/分；呼吸频率＞20次/分或动脉二氧化碳分压＜32mmHg；白细胞计数＞12×10^9/L或＜4×10^9/L。
这些指标反映了机体对感染的炎症反应是否激活，有助于判断是否出现脓毒血症。
除了SIRS标准外，脓毒血症的诊断还需要借助一些实验室检查。
例如，血培养是诊断脓毒血症的关键检查之一。
通过血液培养，可以检测到血液中是否存在细菌，并确定感染的种类。
血培养通常能在24小时内得到结果，具有较高的准确性。
此外，还可以通过血肌酐和肝功能指标等生化检查来评估患者的器官功能，有助于判断脓毒血症的严重程度。
脓毒血症诊断标准的制定，旨在提高对脓毒血症的早期诊断和治疗水平。
及时准确地诊断脓毒血症对于制定合理的治疗方案至关重要。
对于已确诊为脓毒血症的患者，早期的抗生素治疗是至关重要的，可以有效消灭感染源，减少炎症反应，避免感染进一步扩散。
此外，还可以针对患者的具体情况给予液体支持、炎症控制和免疫增强等辅助治疗措施。
总的来说，脓毒血症诊断标准是指导临床医生识别和治疗脓毒血症的重要参考依据。
通过准确判断患者的临床表现和实验室检查结果，可以及时确定是否出现脓毒血症，并采取相应的治疗措施。
未来，随着医学技术的不断进步，脓毒血症诊断标准也将不断完善，为脓毒血症的治疗提供更加科学、精准的指导。
脓毒血症诊断标准
脓毒血症诊断标准
脓毒血症（sepsis）是一种严重的感染性疾病，常常导致多器
官功能障碍甚至危及生命。
脓毒血症的诊断对于及时采取有效的治
疗非常关键。
因此，临床上对脓毒血症的诊断标准有着严格的要求。
脓毒血症诊断标准主要包括以下几个方面：
1.感染的证据，脓毒血症的诊断首先需要有感染的证据，包括
临床表现和实验室检查。
临床上常见的感染表现包括发热、寒战、
心率加快、呼吸急促等，实验室检查常常包括白细胞计数升高、C
反应蛋白和降钙素原水平升高等。
2.炎症反应，脓毒血症患者往往伴有明显的炎症反应，包括全
身炎症反应综合征（SIRS）的表现，如体温升高或降低、心率增快、呼吸急促、白细胞计数升高或降低等。
3.器官功能障碍，脓毒血症常常伴有多器官功能障碍综合征（MODS），包括心血管系统、呼吸系统、肾脏、肝脏等器官功能的
异常。
临床上需要密切监测患者的器官功能，及时发现并干预器官
功能的异常。
4.血培养阳性，脓毒血症的诊断需要有血液培养阳性的证据，即从患者的血液标本中分离出致病菌，并且对应的致病菌与患者的病情相符合。
5.炎症标志物的升高，脓毒血症患者的炎症标志物常常升高，如C反应蛋白、降钙素原、白细胞计数等，这些指标的升高可以反映出患者的炎症反应程度。
综上所述，脓毒血症的诊断标准包括感染的证据、炎症反应、器官功能障碍、血培养阳性和炎症标志物的升高。
临床医生在诊断脓毒血症时需要综合分析患者的临床表现、实验室检查和影像学检查等多方面的信息，确保诊断的准确性，从而及时采取有效的治疗措施，降低患者的病死率。
右美托嘧啶对脓毒血症大鼠生存率及IL-6、IL-1O的影响
定 相似 的咪唑结 构 。与可乐定 相 比 ，右美 托嘧 啶具有更 高 的 １ 材料 和方 法 受体选择性 ，其 肾上腺素能受体亲和力 高于可乐 定 ８倍。 １１ 实 验 试剂 ．
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脓毒血症动物模型具体步骤及说明
脓毒血症动物模型具体步骤及说明原型物种人来源盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症模式动物品系SPF级SD大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
实验周期2d建模方法1. 称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（350mg/kg）麻醉，腹部正中剃毛后用碘酒及酒精擦拭手术区域。
2. 沿腹白线切开腹腔约2cm，找出盲肠，用5-0 缝线结扎约1/3盲肠，以21G针头贯通穿刺结扎的盲肠2次。
轻轻挤压使少量肠内容物从穿刺孔溢出确保通畅；将处理好的盲肠回纳入腹腔，用5-0 缝线缝合内层，3-0缝线缝合外层，将大鼠置于加热垫维持肛温在37±0.5℃。
3. 待大鼠苏醒后自由饮水，正常饲养。
4. 2d后大鼠水合氯醛钠麻醉后，于腹主动脉取血5ml，室温静止2h，4℃离心机3000r/min离心10min，分离出上层血清，置-80℃冰箱保存备用。
处死大鼠，取出心脏、肝脏、肾脏、肺、小肠，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋切片(厚4um)，HE染色，观察病理改变，其余组织置于-80℃冰箱备用。
应用疾病模型1.一般情况观察脓毒症组术后苏醒延迟，醒后精神萎靡，身体蜷缩，基本不活动，进食进水减少，对外界反应迟钝，呼吸频率加快，被毛蓬松少光泽，大便稀软，不再扎堆取暖。
12h出现死亡大鼠，随着时间的延长大部分大鼠出现皮温低，肌力减弱，眼周血性分泌物，停止进食进水，排泄稀水样便，色黄，腥臭味。
进一步发展出现呼吸急促，对被动仰卧无反抗，排泄物呈黏液状，量多，最终死亡。
剖腹可见恶臭味血性渗液，肠管水肿黏连，盲肠坏死变黑。
心脏：光镜下结果比较，对照组大鼠心肌肌纤维结构排列紧密、无水肿、充血及渗出。
模型组心肌肌纤维结构排列疏松，带状空泡化，细胞核肿胀，间质水肿、充血。
肝脏：肝有大量空泡脂肪样变性，肝细胞肿胀并有炎性细胞浸润。
肺：模型组肺间隔增厚，部分肺泡组织结构被破坏，炎症细胞浸润。
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大鼠脓毒血症建立方法SD 大鼠, 体重190～270 g ,雌雄均有, 禁食24 h 后进行实验。
用2.5 %戊巴比妥钠按1 ml/ kg 体重, 腹腔注射麻醉大鼠, 随机分为实验组和对照组(假手术组) 。
常规消毒腹部, 在下腹部正中央切口, 长约2 cm , 打开腹腔寻找盲肠, 小心分离其远端与大肠的系膜, 盲肠内如有粪便, 则把粪便小心挤向相连的大肠, 实验组在盲肠远端1/ 2 处用无菌4 号丝线紧紧结扎, 并用无菌7 号针头在已结扎盲肠远段中央处贯通穿刺。
然后把盲肠推回腹腔, 关闭腹腔, 逐层缝合。
对照组仅做开腹分离盲肠远端与大肠的系膜及关腹手术。
术后按50 ml/ kg 体重皮下注射生理盐水, 补充手术中丢失的体液, 连续观察24h , 整个实验过程中在室温22～25 ℃环境进行并让大鼠自由饮水。
在盲肠结扎前、结扎后8 h、16h、和24h 在无菌条件下取大鼠尾血1 滴进行细胞培养, 实验组还在无菌条件下取腹腔渗出液少许进行细菌培养。
用结扎整个盲肠加穿刺的方法可复制出动物的理想败血症模型, 因为动物模型血液细菌培养阳性, 培养出来的细菌与感染灶细菌完全或部分相同, 动物表现与临床败血症类似, 重复性好, 模型复制后有一定的存活时间供研究之用。
有人把结扎整个盲肠改为结扎盲肠1/ 2 , 把穿刺盲肠2 次改为贯通穿刺盲肠, 操作更为简便, 效果也令人满意。
造成盲肠缺血坏死, 自身肠道的细菌进入腹腔造成感染。
血液培养显示, 在CL P 后16 h , 血液已有大肠杆菌及绿脓杆菌生成, 与腹腔渗出液细菌培养结果相同; 培养出的菌种与报道略有不同, 这可能是由于大鼠来源及实验室的条件不同造成的。
实验组动物术后24 h 活杀, 见盲肠结扎的远端已发生坏死, 穿刺的针孔明显, 腹腔感染, 有臭味的渗出液,但腹腔未见粪便, 这与人类阑尾穿刺并发腹膜炎等疾病过程相似。
大鼠盲肠结扎加穿刺引起的败血症存活情况与结扎盲肠部分的多少, 穿刺针孔的多少和大小有关。
针孔多, 针孔大, 死亡率高。
上述结扎整个盲肠并用9号针头刺孔2 个, 24 h 有75 %大鼠死亡。
有人结扎1/2 盲肠并用7 号贯通穿刺, 24 h 无大鼠死亡。
另外,饲养动物环境也是影响动物存活率的重要因素。
有人曾在室温30 ℃时, 饲养CL P 大鼠5 只, 结果在24 h内全部死亡。
大鼠脓毒症预后判断指标集及预测模型的初步研究脓毒症是感染导致的全身炎症反应综合征(SIRS),是各种严重创伤、烧伤、休克、再灌注损伤及外科大手术后常见的并发症,其死亡率高达30-50%。
脓毒症的发生机制极其复杂,其复杂性和非线性的特点导致了对其诊断、预测和治疗的不确定性。
这也是当前脓毒症死亡率居高不下的主要原因。
因此,研究脓毒症生物标志物,探讨脓毒症诊断、预测、疗效评估的新方法,以指导脓毒症的防治,降低其发病率和死亡率,具有重要的科学意义。
本课题采用盲肠结扎穿刺(CLP)制备大鼠脓毒症模型,观察大鼠CLP前后血清炎症介质TNF-α, IL-1β, IL-6,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF),高迁移率族蛋白 1 (HMGB1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及血尿素氮(BUN),肌酐(Cr),乳酸脱氢酶(LDH),谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),肌酸激酶(CK)和血常规的变化,探讨上述指标的改变及其与脓毒症大鼠预后的关系,试图筛选出有意义的指标建立指标集,并采用该指标集对脓毒症大鼠进行预后评估,以改善脓毒症大鼠预后评估的敏感性、特异性和准确度。
结果如下：1.大鼠CLP模型复制：大鼠行CLP后,6h开始死亡,12-24h死亡最多,72小时死亡率为59%；血清炎症介质TNF-α, IL-1β, IL-6, GM-CSF及HMGB1水平显著升高；CLP术后12h处死大鼠,发现多个器官(心、肝、肺、脑及肾)发生组织形态学改变。
2.根据CLP术后72h是否死亡分为存活组和死亡组。
存活组大鼠CLP术后12小时ALT, AST, HMGB1, IL-6以及MCP-1水平高于术前(p<0.05或p<0.01)；白细胞计数、血小板计数、CK及IL-1β水平低于术前(p<0.05或p<0.01)。
死亡组大鼠CLP术后12小时体温、红细胞计数、红细胞比积、BUN,ALT,AST,HMGB1,IL6以及MCP1水平高于术前(p<0.05或p<0.01)；白细胞计数、血小板计数、血清肌酸激酶水平低于术前(p<0.05或p<0.01)。
3.死亡组CLP术后12小时BUN, Cr, ALT, LDH, CK, IL-6以及MCP-1水平高于存活组(p<0.05或p<0.01)；血小板计数、血清HMGB1及GM-CSF水平低于存活组(p<0.05或p<0.01)。
4.CLP术后12小时体温以及血清尿素氮、肌酐、谷丙转氨酶、肌酸激酶、IL-6和MCP-1水平与大鼠存活结局呈负相关,而血小板计数、血清HMGB1及GM-CSF与大鼠存活结局呈正相关。
5.为判断各指标在脓毒症预后预测中的价值及选择最优的指标集,采用Logistic回归对上述与脓毒症预后相关的指标进行了分析,发现将尿素氮、肌酐、IL-6.GM-CSF纳入方程,则预测的敏感性(86.2%)、特异性(83.3%)以及准确度(84.7%)均达最高,据此建立下述回归方程：Logit P=-8.367+1.124BUN+1.134Cr+0.003IL6-0.249GM-CSF其中P为死亡与存活概率之比,LogitP为死亡与存活概率之比的自然对数。
综上所述,本研究在成功复制了大鼠CLP脓毒症模型基础上,筛选出与大鼠脓毒症预后相关的指标,并选择最优指标集建立了脓毒症预后预测模型。
该预测模型显示,脓毒症大鼠血清BUN,Cr,IL-6水平升高及GM-CSF水平降低时预后不良。
上述结果为临床脓毒症的预后判断和疗效评估提供了新的实验证据和研究思路。
脓毒症模型大鼠肿瘤坏死因子α和肝细胞凋亡的关系摘要：目的：探讨脓毒症大鼠肿瘤坏死因子a（TNFa）与肝细胞凋亡的关系以及对肝功能的影响。
方法：大鼠随机分为正常对照组和实验组，实验组采用盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症大鼠模型，分别于术后30、60、120、180 min （CLP术后30、60、120、180 min组）处死动物，测定肝组织和血浆TNFa 水平，并检测肝细胞凋亡的情况，同时测定丙氨酸氨基转移酶（ACL）正常对照组相比，CLP术后30、60、120、180 min组肝细胞凋亡数、血清TNFα、ALT 水平均明显升高（P<0.01），有随着时间的延长增加的趋势；与正常对照组相比，CLP术后120、180 min组血清AST含量明显升高（P<0.01）；CLP术后大鼠肝组织、TNFα表达强度随时间延长而有增强的趋势。
结论：CLP后大鼠肝脏产生大量TNFα，与肝细胞凋亡有密切关系，肝功能受到损伤。
脓毒症是严重创伤、感染及大手术后常见的并发症，可引起脓毒症休克及多脏器功能障碍综合征（MODS）。
随着分子生物学和基因分析技术的发展和应用，人们对脓毒症发病机制的了解日益加深。
肝脏是脓毒症过程中最易受损的器官之一，肝细胞凋亡是造成肝脏损伤和肝脏疾病最基本的中心环节［1］,肿瘤坏死因子α(TNFα)是肝脏的一个主要炎症因子和效应分子，它与肝细胞凋亡的关系甚为密切［2］。
我室采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症大鼠模型，观察TNFα和肝细胞凋亡的关系以及脓毒症大鼠肝功能的变化，为临床防治脓毒症提供实验依据。
1材料与方法1.1实验动物及模型制备雄性Wistar大鼠30只，清洁级，体重180～220g，由新疆医科大学实验动物中心提供，实验前饲养1周，禁食过夜，自由饮水。
30只大鼠分为2组，实验组24只，参照文献［3］的方法行CLP，建立脓毒症大鼠模型。
20％乌拉坦腹腔注射麻醉后固定，沿腹正中线作1.5 cm切口，结扎盲肠根部，避免结扎回肠及盲肠系膜血管，用18号针穿刺盲肠4次，将盲肠还纳腹腔，逐层缝合腹壁切口，分别于CLP术后30、60、120和180 min （CLP 术后30、60、120、180 min组）断头取血，分离血清，并留取肝组织标本，48～72 h内行石蜡包埋，切片4.5 μm厚，脱蜡后常规HE染色。
正常对照组6只，麻醉后不进行盲肠结扎穿孔，其余同CLP组。
1.2观察指标和方法1.2.1肝细胞凋亡原位末端标记检测(TUNEL)［4］采用ＴＵＮＥＬ法进行检测肝细胞凋亡，计算5个高倍视野（400）下的凋亡细胞数，凋亡指数以每百个细胞中的凋亡数表示。
1.2.2肝组织TN Fα的免疫组化检测及结果判定常规石蜡切片脱蜡，3％H2O2处理10 min消除内源性过氧化物酶，PBS冲洗3 min×3，加枸橼酸修复液放入微波炉（70°C）8 min，自然降温至室温，PBS冲洗3 min×3。
湿盒中滴加小牛血清，室温放置25 min，加入TNFα抗体Ⅰ室温放置2 ｈ，再滴加ＴＮＦα抗体Ⅱ室温放置20 min后，滴加抗体Ⅲ，20 min后室温显色15 min。
PBS 冲洗3 min×3，苏木素复染，常规封片，镜下观察。
结果判定：阴性：细胞及间质内着色（－）；弱阳性：细胞内见淡黄色颗粒（±）；阳性: 细胞及间质内见棕黄色颗粒（+）；中等阳性：细胞及间质内见较深棕黄色颗粒（++）；强阳性：细胞及间质内见大量深棕黄色颗粒（+++）。
1.2.3血清TNFα、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平的测定采用放射免疫法测定血清ＴＮＦα水平，试剂盒购自北京东亚免疫所。
采用CX7自动生化分析仪（美国Beckman公司）检测ALT、AST水平。
1.3统计学处理所得数据以±s表示，计量资料采用t检验、方差分析进行统计学处理，检验水准α=0.05。
2结果2.1肝脏病理组织学观察正常对照组肝小叶结构完整清晰，肝细胞形态结构正常，肝窦清晰，窦内皮细胞、枯否氏细胞均未见明显变化。
汇管区小叶间动静脉、小叶间胆管结构清晰，未见炎细胞。
CLP组肝细胞明显肿胀，胞浆疏松，肝小叶结构紊乱，肝窦变窄，窦腔内有胆汁聚集，门脉区有较多炎细胞浸润。
CLP术后3 h,可见肝窦间隙变宽,偶见点状坏死。
2.2各组大鼠肝细胞凋亡及变化TUNEL染色阳性细胞以肝细胞为主，很少见枯否氏细胞。
CLP术后30 min时肝组织即出现细胞凋亡，随着时间的延长细胞凋亡数逐渐增加,CLP术后30、60、120、180 min组肝细胞凋亡与正常对照组相比差异均有统计学意义（P<0.01）(表1)。