吉西他滨耐药的胰腺癌SW1990细胞株的建立及相关特性检测
姜黄素对胰腺癌SW1990细胞耐吉西他滨的逆转作用及机制研究
姜黄素对胰腺癌SW1990细胞耐吉西他滨的逆转作用及机制研究作者：彭梦媛邱峰黄丹秦霞张渊来源：《中国药房》2019年第09期摘要目的：研究姜黃素对胰腺癌SW1990细胞耐吉西他滨（GEM）的逆转作用及机制。
方法：采用CCK8法检测不同浓度（50、100、150、200、250 μmol/L）GEM对SW1990细胞和耐GEM SW1990细胞（SW1990/GEM耐药细胞）存活率的影响，计算半数抑制浓度（IC50）和耐药倍数；采用CCK8法检测不同浓度（1、5、10、20、40 μmol/L）姜黄素对SW1990/GEM耐药细胞存活率的影响，计算IC50；采用CCK8法检测2.41 μmol/L姜黄素与不同浓度（25、50、75、100、125 μmol/L）GEM联用对SW1990细胞和SW1990/GEM耐药细胞存活率的影响，计算GEM的IC50和耐药逆转倍数。
采用流式细胞仪检测以GEM的IC50为给药浓度，GEM单用、姜黄素（2.41 μmol/L）与GEM联用处理SW1990细胞和SW1990/GEM耐药细胞后的细胞凋亡率和细胞周期分布，并采用Western blot法检测细胞中脂肪酸合成酶（FAS）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、磷脂酰肌醇激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、胱天蛋白酶3（Caspase-3）、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）及其相关X蛋白（Bax）的蛋白表达，反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测mRNA表达。
结果：GEM对SW1990细胞的IC50为92 μmol/L，对SW1990/GEM耐药细胞的IC50为216μmol/L，SW1990细胞对GEM的耐药倍数为2.35；姜黄素对SW1990/GEM耐药细胞的IC50为9.2 μmol/L；2.41 μmol/L姜黄素下，GEM对SW1990细胞的IC50为75 μmol/L，对SW1990/GEM耐药细胞的IC50为98 μmol/L，SW1990/GEM耐药细胞对GEM的耐药逆转倍数为2.2。
姜黄素对胰腺癌SW1990细胞耐吉西他滨的逆转作用及机制研究
姜黄素对胰腺癌SW1990细胞耐吉西他滨的逆转作用及机制研究我们使用不同浓度的吉西他滨处理SW1990细胞，观察细胞的存活率，并确定其半数抑制浓度（IC50）。
结果显示，SW1990细胞对吉西他滨表现出一定的耐药性，IC50显著高于对照组。
接着，我们将姜黄素与吉西他滨联合处理SW1990细胞，发现姜黄素能够显著降低SW1990细胞对吉西他滨的耐药性，使得细胞对吉西他滨的敏感性增加，IC50显著降低。
这表明姜黄素具有逆转SW1990细胞对吉西他滨耐药性的作用。
为了进一步探究逆转作用的可能机制，我们进行了一系列的实验。
我们检测了细胞凋亡情况，发现联合处理组中的凋亡率显著高于吉西他滨单药处理组，说明姜黄素能够增加SW1990细胞对吉西他滨诱导的凋亡作用。
我们检测了几个凋亡相关蛋白的表达情况，发现联合处理组中凋亡蛋白Bax表达增加，而凋亡抑制蛋白Bcl-2表达减少，说明姜黄素可能通过调节凋亡相关蛋白的表达来增强细胞对吉西他滨的凋亡作用。
我们还发现联合处理组中细胞周期G0/G1期的比例增加，S期和G2/M期的比例减少，说明姜黄素可能还通过调节细胞周期来增加细胞对吉西他滨的敏感性。
我们还对姜黄素可能的信号通路进行了探究。
结果显示，联合处理组中p-AKT和p-ERK的表达水平较吉西他滨单药处理组有所下调，而p-p38的表达水平较吉西他滨单药处理组有所上调。
这表明姜黄素可能通过抑制AKT和ERK信号通路的激活，同时增强p38信号通路的激活，来增加细胞对吉西他滨的敏感性。
本研究证实了姜黄素能够逆转SW1990细胞对吉西他滨的耐药性，并初步揭示了其可能的机制。
这为姜黄素作为辅助药物用于胰腺癌治疗提供了实验依据，并为进一步探究姜黄素的抗肿瘤机制提供了新的思路。
姜黄素的临床应用还需要进一步的研究和验证，希望未来能够为临床治疗带来新的突破。
姜黄素对胰腺癌SW1990细胞耐吉西他滨的逆转作用及机制研究
姜黄素对胰腺癌SW1990细胞耐吉西他滨的逆转作用及机制研究1. 引言1.1 胰腺癌的危害胰腺癌是一种恶性肿瘤，起源于胰腺组织，常常在早期没有明显症状，导致很多患者在确诊时已处于晚期。
胰腺癌的危害主要体现在以下几个方面：1. 高死亡率：胰腺癌的五年生存率非常低，仅为不到5%，这是由于胰腺癌通常在早期没有明显症状，导致晚期诊断，使得治疗效果大打折扣。
2. 弥散性转移：胰腺癌常常向周围器官和淋巴结转移，使得手术切除困难，并且容易导致术后复发和转移，降低患者的生存率。
3. 低免疫原性：胰腺癌细胞对免疫系统的攻击能力较弱，很难被免疫系统清除，这使得免疫治疗在胰腺癌治疗中效果有限。
4. 药物耐受性：胰腺癌对常规化疗药物如吉西他滨等存在耐药性，使得治疗效果不理想，增加了患者的痛苦和治疗成本。
1.2 吉西他滨在胰腺癌治疗中的作用吉西他滨是一种嘌呤类的抗肿瘤药物，通过干扰DNA的合成和修复来抑制癌细胞的生长和增殖，从而发挥抗肿瘤作用。
临床研究表明，吉西他滨在治疗胰腺癌的过程中可以显著改善患者的生存期和生活质量。
尤其是对于晚期胰腺癌患者而言，吉西他滨可以帮助控制肿瘤的生长，减缓疾病的进展，并在一定程度上延长患者的生存时间。
虽然吉西他滨在胰腺癌治疗中表现出一定的疗效，但也存在一些限制和不足。
患者在使用吉西他滨后常常会出现耐药性，使得药物的疗效逐渐减弱，甚至失效。
吉西他滨的毒副作用也给患者带来一定的不适和痛苦。
寻找一种能够提高吉西他滨疗效、减轻其毒副作用的方法势在必行。
1.3 姜黄素在癌症治疗中的潜在价值姜黄素是一种来自姜黄根茎的化合物，被广泛研究和认可为具有潜在的抗癌活性。
它被认为是一种天然的抗氧化剂，可以帮助减轻体内的氧化应激，防止DNA损伤和细胞突变，从而减少癌症的发生风险。
姜黄素还被发现具有调节免疫系统功能、抑制肿瘤细胞增殖和转移、诱导肿瘤细胞凋亡等多种抗癌机制。
研究表明，姜黄素可以影响多种信号通路，包括NF-κB、PI3K/Akt和MAPK等，从而调控肿瘤细胞的生长和存活。
大黄素联合吉西他滨抑制体内外胰腺癌生长及其机制研究
大黄素联合吉西他滨抑制体内外胰腺癌生长及其机制研究刘岸;罗江;张坚红;林胜璋【期刊名称】《中国中西医结合杂志》【年(卷),期】2012(32)5【摘要】目的探讨大黄素联合吉西他滨对体内外胰腺癌生长的影响及其机制。
方法采用吉西他滨(20μmol/L)、大黄素(40μmol/L)单独及联合作用胰腺癌细胞株SW1990后,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Westernblot检测Bax及Bcl-2蛋白表达。
建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予大黄素、吉西他滨单独及联合用药,监测移植瘤体积变化;免疫组化法检测移植瘤组织中Ki-67、Bax及Bcl-2表达。
结果与吉西他滨组及大黄素组比较,联合用药组显著降低SW1990细胞存活率,提高细胞凋亡率(P<0.05);与对照组比较,大黄素组及联合用药组明显上调SW1990细胞中Bax蛋白表达水平,抑制Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。
与对照组比较,大黄素组及联合用药组可显著抑制裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长,提高Bax在肿瘤组织中阳性表达,明显降低Ki-67和Bcl-2的阳性表达(P<0.05),以联合用药组作用最佳(P<0.05)。
结论大黄素可能通过上调Bax表达和下调Bcl-2表达增强吉西他滨对体内外胰腺癌的抑制作用。
【总页数】5页(P652-656)【关键词】胰腺肿瘤;吉西他滨;大黄素;Bax;Bcl-2【作者】刘岸;罗江;张坚红;林胜璋【作者单位】温州医学院附属第二医院外科;湖南省岳阳市第一人民医院【正文语种】中文【中图分类】R735.9【相关文献】1.大黄素联合吉西他滨抑制胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖能力的研究 [J], 王婧;赵磊;车娟娟;李卉惠;庞歆桥;吴军;马妮娜2.大黄素联合吉西他滨对胰腺癌细胞生长的影响 [J], 谢丽微;刘岸;赵志光;王兆洪;林胜璋3.生长抑素联合吉西他滨对人胰腺癌BxPC-3细胞增殖抑制作用的研究 [J], 刘力;王文婷4.吉西他滨联合免疫效应细胞对胰腺癌细胞BxPC-3生长的抑制 [J], 余少培;杨静5.大黄素联合吉西他滨对体外人胰腺癌细胞株BxPC-3生长及凋亡的影响 [J], 曾勇;刘岸;童洪飞;邱麦轩;林胜璋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人胰腺癌干细胞对吉西他滨的敏感性及其分子机制研究
人胰腺癌干细胞对吉西他滨的敏感性及其分子机制研究朱峰;王敏;秦仁义;申铭;王欣;田锐;张志发;石程剑【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(039)003【摘要】目的检测人胰腺癌干细胞对吉西他滨的敏感性,分析其差异性基因的表达,初步阐明其耐药分子机制.方法运用流式技术从人原代胰腺癌和细胞系SW1990中分选CD24+CD44+ESA+细胞,行NOD/SCID鼠移植瘤实验验证其肿瘤干细胞特性;运用吉西他滨进行体内、外干预,检测胰腺癌干细胞凋亡和表达率变化情况.采用人类全基因组表达谱Affymetrix U133 plus2.0芯片对胰腺癌干细胞和非干细胞进行差异基因筛选.结果人原代胰腺癌和细胞系SW1990中分选到CD24+CD44+ESA+(0.8%)和CD24+CD44+(3.6%)细胞,移植瘤实验证实其为胰腺癌干细胞.肿瘤干细胞凋亡率及表达率检测提示胰腺癌干细胞对吉西他滨显著耐药.与胰腺癌非干细胞比对,基因表达谱芯片筛查到胰腺癌干细胞820条差异基因,其中上调表达281个,下调表达539个.结论胰腺癌干细胞对吉西他滨耐药,具有特征性基因表达谱,为阐明胰腺癌多药耐药机制及靶向治疗奠定基础.【总页数】7页(P281-287)【作者】朱峰;王敏;秦仁义;申铭;王欣;田锐;张志发;石程剑【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院胆胰外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院胆胰外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院胆胰外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院胆胰外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院胆胰外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院胆胰外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院胆胰外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院胆胰外科,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R735.9【相关文献】1.干扰c-myc基因表达增强人胰腺癌细胞对吉西他滨和卡铂的敏感性 [J], 翁克贵;蒋勇;王颖;冀晓辉;梁冠中2.小分子干扰RNA沉默Notch1后增加胰腺癌细胞凋亡活性而提高吉西他滨化疗敏感性 [J], 杜潇;王以涵;王自强;程中;李旸;胡建昆;陈志新;周总光3.siRNA沉默BRM增强胰腺癌细胞对吉西他滨敏感性的作用机制研究 [J], 屈涛; 张弘刚; 汤海舰; 刘伟4.SOX2在胰腺癌干细胞干性维持及对化疗敏感性的作用及机制研究 [J], 陶洪;吴福道;张小静;胡芳5.下调AFAP-1L2表达对人胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响 [J], 刘博;戚诚;赵爽;赵晓东;刘学臣;张立超;石畅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
放疗联合吉西他滨化疗对胰腺癌细胞株细胞抑制率及凋亡率的测定
放疗联合吉西他滨化疗对胰腺癌细胞株细胞抑制率及凋亡率的测定摘要目的探讨放疗联合吉西他滨化疗对胰腺癌细胞株细胞抑制率及凋亡率的测定。
方法选择100株人胰腺癌细胞株CFPAC-1体外培养，分为四组，每组25株、第一组为空白对照组，第二组为予以不同浓度吉西他滨作用72 h后；第三组为医用直线加速器常温照射；第四组为不同吉西他滨联合不同直线加速器照射剂作用72 h后，四唑盐比色法（MTT法）检测胰腺癌细胞抑制率，绘制不同放射剂量条件下药物-细胞抑制率曲线；第一组为空白对照组；第二组予以含吉西他滨1 μg/ml培养液培养72 h；第三组予放疗剂量4 Gy 照射后72 h采集细胞；第四组予以含吉西他滨1 μg/ml+放射剂量4 Gy照射培养72 h，加入Annexin VFITC/PI溶液染色后，流式细胞仪检测细胞周期变化及凋亡情况。
结果第四组（放疗联合吉西他滨化疗法）的胰腺癌细胞株细胞抑制情况显著优于其他三组，差异有统计学意义（P＜0.01）；第四组放疗联合吉西他滨化疗组的G0/G1期比例升高，各组间CFPAC-1细胞周期变化水平比较差异有统计学意义（P＜0.01）；第四组放疗联合吉西他滨化疗组的CFPAC-1细胞凋亡情况显著优于其他各组，差异有统计学意义（P＜0.01）。
结论流式细胞术观察细胞周期及凋亡变化为临床提高放疗、化疗药物具有抗癌细胞作用的实验室依据。
关键词实验研究；细胞凋亡；胰腺癌细胞株；吉西他滨随着生活水平的提高，胰腺癌的发病率逐渐呈上升趋势[1]。
且胰腺癌发病隐匿，早期临床症状不典型，临床诊断明确时，肿瘤往往已为疾病晚期，不能进行手术切除，因此胰腺癌的预后很差，病死率接近100%，总体5年生存率低于5%。
虽然胰腺癌以手术为主的综合治疗为其治疗原则，但因多数胰腺癌就诊时已处于中晚期，无法手术切除，术后生存时间短。
有研究指出，放疗联合吉西他滨化疗可抑制胰腺癌细胞株，促进癌细胞的凋亡[2]。
本研究探析放疗联合吉西他滨化疗对CFPAC-1细胞生长的抑制及凋亡情况，效果满意，现报告如下。
沉默乳腺癌耐药蛋白基因影响胰腺癌SW1990细胞对吉西他滨的化疗敏感性的研究论文
Ｗｕ ＭＣ，ｗｕ ｚＤ，ｗｕ ＺＨ．Ｓｕｒｇｅｒｙ［Ｍ］．Ｅｉｇｈｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｂｅｉｊｉｎｇ：
Ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｈｏｕｓｅ．２０１３：４８９．
与ＮＣ组和ＢＩ。ＡＮＫ组两两比较，差异有统计学意义，ｍＲＮＡ水平 （Ｆ＝８５．４１４，Ｐ＜０．０１）、蛋白水平（Ｆ＝１４１８．７３７，Ｐ＜０．０１）； ｓｉＲＮＡ一１组分别与ｓｉＲＮＡ一２组和ｓｉＲＮＡ一３组两两比较，差异有统 计学意义（Ｐ＜０．０５）；ｓｉＲＮＡ一２组与ｓｉＲＮＡ一３组ｍＲＮＡ和蛋白比 较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。以ｓｉＲＮＡ一１组抑制效果最佳。 ２．ＣＣＫ一８结果：根据前期实验结果。２ １选取半数抑制浓度
３．９０
ｇ／Ｌ为实验浓度。经两因素方差分析可知，不同时间点增
殖抑制效果差异有统计学意义（Ｆ＝４．５６２，Ｐ＜０．０５）；不同组别 之间增殖抑制效果差异有统计学意义（Ｆ＝１５．６４６，Ｐ＜０．０１）。 相同浓度ＧＥＭ作用下，随时间延长，ＧＥＭ对ＡＢＣＧ２一ｓｉＲＮＡ一１ 组细胞的增殖抑制组间比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）； ＧＥＭ对ＮＣ组和ＢＬＡＮＫ组的细胞增殖抑制效应逐渐减低，组 问两两比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。 三、讨论 本研究结果显示，ＲＮＡ干扰后，胰腺癌ＳＷｌ９９０细胞ｍＲＮＡ 及蛋白的表达下降，差异有统计学意义，说明ＡＢＣＧ２基因被成 功抑制，并筛选出抑制效果最好的ｓｉＲＮＡ片段（ｓｉＲＮＡ。１）进行 后续实验。ＣＣＫ一８结果显示：相同浓度ＧＥＭ作用下，随时间两两比较差异无统计学意义；ＧＥＭ对ＮＣ组和ＢＬＡＮＫ组
［２］周兵，王飞通，刘小云，等．吉西他滨诱导胰腺癌细胞ＳＷｌ９９０中乳 腺癌耐药蛋白基因表达的研究［Ｊ］．中华实验外科杂志，２０１４，３１
姜黄素对胰腺癌SW1990细胞耐吉西他滨的逆转作用及机制研究
姜黄素对胰腺癌SW1990细胞耐吉西他滨的逆转作用及机制研究通过对SW1990细胞系进行细胞实验，研究发现姜黄素能够显著增加细胞对吉西他滨的敏感性，降低细胞的IC50值，减弱细胞的耐药性。
进一步的机制研究表明，姜黄素能够抑制P-glycoprotein (P-gp)、多药耐药相关蛋白1 (MRP1)和肿瘤相关蛋白(Bcl-2) 的表达，减少肿瘤细胞的耐药性。
姜黄素还能够诱导细胞的凋亡，抑制细胞增殖及转移，并提高细胞的自噬活性，从而加强细胞对吉西他滨的敏感性。
姜黄素能够逆转SW1990细胞对吉西他滨的耐药性，其机制可能通过抑制耐药蛋白的表达、诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖及转移等多个途径来实现。
姜黄素有望成为胰腺癌治疗的新型药物。
引言胰腺癌是一种高度恶性的肿瘤，常常在诊断时已经处于晚期，因此其治疗难度极大。
目前，化疗被认为是胰腺癌的主要治疗手段之一。
胰腺癌常常具有多药耐药性，使得传统的化疗药物治疗效果有限。
寻找新的治疗方法成为当前研究的重点之一。
姜黄素是一种天然的抗氧化剂，被广泛用于调理身体、预防疾病。
近年来的研究表明，姜黄素具有抗肿瘤作用，并且对多种癌症具有抑制作用。
关于姜黄素对胰腺癌细胞的作用及机制研究相对较少。
本研究旨在探究姜黄素对胰腺癌SW1990细胞对吉西他滨耐药性的逆转作用及机制。
材料与方法1. 实验材料SW1990细胞系，吉西他滨，姜黄素2. 细胞培养将SW1990细胞接种于DMEM培养基中，添加10% FBS（胎牛血清），37℃、5% CO2条件下培养至细胞密度达到80%时进行实验。
将细胞均匀分为对照组、吉西他滨组、姜黄素组、姜黄素+吉西他滨组，每组设立多重平行样本。
3. 细胞计数及细胞活力检测采用Countess自动细胞计数仪检测细胞数目，采用MTT法检测细胞活力，计算IC50值。
4. Western blot分析采用Western blot法检测P-gp、MRP1、Bcl-2的表达情况。
热疗增强盐酸吉西他滨对人胰腺癌细胞株SW1990增殖抑制作用的实验研究
《中国癌症杂志》2014年第24卷第11期CHINA ONCOLOGY 2014 Vol.24 No.11871热疗增强盐酸吉西他滨对人胰腺癌细胞株SW1990增殖抑制作用的实验研究李小平1,2 郑磊贞1 王雅杰21.上海交通大学附属新华医院肿瘤科，上海 200092；2.第二军医大学附属长海医院肿瘤科，上海 200096 ［关键词］ 吉西他滨；热疗；细胞活性；凋亡 DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2014.11.013 中图分类号：R735.9 文献标志码：A 文章编号：1007-3639(2014)11-0871-03 胰腺癌是一种恶性程度高，预后极差的肿瘤，手术切除率低，术后容易复发和转移，并且对放、化疗不敏感。
以吉西他滨为基础的化疗在胰腺癌治疗中占有重要的地位，但其远期疗效较差，如何提高化疗的疗效是目前困扰临床的一个难题。
近年来，高热作为一种新的治癌方法引起医学界的关注和重视，尤其是热疗与化疗联合应用取得了意想不到的效果，表明热疗可以提高某些化疗药物的敏感性［1-2］。
本研究旨在探讨热疗对化疗药盐酸吉西他滨增敏的规律及机制，从而为临床治疗提供实验依据。
1 材料和方法1.1 药品与试剂 RPMI-1640培养液、胎牛血清购自美国Gibco公司，二甲基亚砜(DMSO)和MTT购自美国Sigma公司，盐酸吉西他滨(GEM)购自美国礼来公司，MDM2抗体、p53抗体、c-myc抗体、caspase-8抗体购自美国Santa Cruz公司，β-actin抗体购自美国Sigma公司。
1.2 主要设备 细胞培养箱购自美国Thermo公司，96孔板购自美国Corning公司，酶标仪购自美国Bio-Tek公司，水浴箱、电泳及转膜仪购自上海天能科技有限公司，PVDF膜购自美国Millipore公司，摇床购自海门市其林贝尔仪器制造有限公司，蛋白质印迹法(Western blot)成像仪购自美国Bio-Rad 公司。
冬凌草甲素联合吉西他滨对胰腺癌SW1990细胞抑制作用的研究
冬凌草甲素联合吉西他滨对胰腺癌SW1990细胞抑制作用的研究周黎明;卜贺启;刘殿雷;金海敏;周蒙滔【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2014(000)009【摘要】Objective To investigate the inhibitory effects of oridonin combined with gemcitabine on pancreatic cancer SW1990 cells in vitro, and the potential mechanisms thereof. Methods The pancreatic cancer SW1990 cells were treated with vehicle alone and various concentrations (10,20,40,80 and160μmol/L) of oridonin, followed by 24, 48 and 72 h cell culture. Effects of oridonin on cell proliferation were determined by using a CCK-8 kit. SW1990 cells were treated with oridonin (40μmol/L) and gemcitabine (20μmol/L) alone or together for 48 h, and the untreated cells were used as the con-trol. The cell survival rate was detected by CCK-8 assay. Apoptosis induction was assessed by using Annexin V-FITC kit. Semi-quantitative RT-PCR was used to examine the changes of NF-κB mRNA and XIAP mRNA expressions. Results Oridonin inhibited the growth of pancreatic cancer SW1990 cells in a dose-and time-dependent manner. Compared with the other groups, the cell survival rate was significantly lower in the combination group (P<0.05). Oridonin combined with gemcitabine induced a higher percentage of apoptosis in pancreatic cancer cells than that of oridonin or gemcitabine alone (P<0.05). Moreover,the expressions of NF-κB and XIAP mRNA in pancreatic carcinoma cells were obviously down-regu-lated in combination group (P<0.05). Conclusion Oridonin can enhance the antitumor effect of gemcitabine on pancreatic cancer in vitro, which may be related to through the down-regulation of NF-κB and its downstream of XIAP, and then induc-ing cell apoptosis in pancreatic cancer.%目的：探讨冬凌草甲素在体外联合吉西他滨对胰腺癌细胞株SW1990抑制作用及其可能机制。
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吉西他滨耐药的胰腺癌SW1990细胞株的建立及相关特性检测贾一夫;丁飞;余跃;高萌;杨显珠;王均【摘要】Objective To investigate how to induce the resistant cell lineSW1990/gemcitabine( GEM) for further clarify the resistant mechanisms of pancreatic cancer , and compare the characteristics between SW1990 and SW1990-GZ. Methods SW1990-GZ was derived from the human pancreatic cancer cell lines SW1990 by exposing the cells to intermittently increasing concentrations of GEM. The IC50 ,resistance index( R) , and growth difference was observed by MTT assay. Cellular intake of SW1990 andSW1990-GZ was detection by HPLC. Results The IC50 of SW1990 andSW1990-GZ were respectively (0. 07 ± 0. 002 1)μg/ml,(87. 50 ± 3. 2400)μg/ml,R=1 250;sensibility to GEM in SW1990-GZ were more lower than that in SW1990 cell in different concentration s of GEM. Growth rate ofSW1990-GZ was slower than that of SW1990 from the growth curve;GEM intake in SW1990-GZ was lower than that in SW1990 in different times. Conclusion Human resistant pancreatic cancer cell lines SW1990/GEM is successfully established,and its resistant characteristics are stable and clear. SW1990-GZ maybe decrease GEM intake by some unclear pathways.%目的：探讨对吉西他滨( GEM )耐药的胰腺癌SW1990细胞诱导方法,以期进一步认识胰腺癌耐药的发生机制,并对诱导的GEM耐药的胰腺癌细胞与其亲本细胞的生物学特性进行比较。
方法采用逐步浓度递增法诱导对GEM耐药的细胞株SW1990-GZ。
MTT 法检测 SW1990和SW1990-GZ 的半数致死量(IC50)、耐药系数(R),并观察其生长差异。
采用高效液相色谱法( HPLC)检测不同时间点SW1990和 SW1990-GZ 对 GEM 药物的摄取情况。
结果SW1990和SW1990-GZ的IC50为(0．07±0．0021)、(87．50±3．2400)μg/ml,R=1250；在不同浓度GEM作用下,诱导后耐药的SW1990-GZ对GEM的敏感性明显降低。
细胞生长曲线显示耐药细胞 SW1990-GZ相对于 SW1990生长缓慢。
不同时间点GEM孵育后,SW1990-GZ细胞对GEM药物的摄取较SW1990细胞降低。
结论成功诱导了耐GEM药物的SW1990-GZ细胞株,耐药性能稳定、明显。
SW1990-GZ细胞可能存在着一定的机制使得细胞摄取GEM降低。
【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】4页(P419-422)【关键词】人类胰腺癌细胞株;吉西他滨耐药;建立【作者】贾一夫;丁飞;余跃;高萌;杨显珠;王均【作者单位】安徽医科大学附属省立医院消化内科，合肥 230001;安徽医科大学附属省立医院消化内科，合肥 230001;安徽医科大学附属省立医院消化内科，合肥 230001;安徽医科大学附属省立医院消化内科，合肥 230001;中国科学技术大学生命科学学院合肥微尺度物质科学国家实验室，合肥 230027;中国科学技术大学生命科学学院合肥微尺度物质科学国家实验室，合肥 230027【正文语种】中文【中图分类】R735.92015－01－27接收作者单位：1安徽医科大学附属省立医院消化内科，合肥 2300012中国科学技术大学生命科学学院合肥微尺度物质科学国家实验室，合肥 230027 胰腺癌是预后最差的人类实体瘤之一，其5年生存率不足5%［1］。
大部分胰腺癌患者初诊时已错过手术切除机会，对放疗敏感性低，对化疗药物易产生耐药性。
吉西他滨（gemcitabine，GEM）是胰腺癌临床一线治疗用药，相对于传统化疗药物，其不仅提高了有效率，而且大大改善了患者的生活质量。
但随着临床上GEM耐药性的出现，使得其药效的发挥大打折扣［2］。
因此，构建耐GEM的胰腺癌细胞并研究耐药机制是当前胰腺癌防治最迫切的研究课题。
该实验以人胰腺癌SW1990细胞为研究对象，构建对GEM耐药的胰腺癌细胞株，并对耐药细胞与亲本细胞的一些特性进行检测与比较。
1．1 药物、试剂及细胞系株人胰腺癌细胞株SW1990（中科院上海细胞库）；GEM（法国Lilly公司）；RPMI-1640、胎牛血清（美国Gibco公司）；四氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）、二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）（美国Sigma公司）。
1．2 方法1．2．1 耐药细胞SW1990-GZ的建立耐药细胞株SW1990-GZ为SW1990细胞株由GEM经浓度递增法逐步诱导获得，简述如下。
不同浓度的GEM培养SW1990细胞1周后，观察细胞死亡情况，筛选出SW1990细胞的半数致死量（median lethal dose，IC50）为0．07 μg／ml，加入GEM至终浓度为0.1μg／ml，在培养箱内共同培养48 h后，弃含药培养液。
此时，大部分细胞死亡，存活细胞缓慢生长；更换普通培养液继续培养，待存活细胞长满培养箱后，进入对数生长期后，传代2次，在重复同一剂量的药物培养；至较稳定后在0．4 μg／ml的GEM中继续培养，依此每次使药物浓度4倍递增，最终使药物浓度达到400 μg／ml；如此反复递增加药，筛选存活细胞继续培养后，直至其对高浓度的GEM产生稳定耐药性，并且在无药培养液中以及反复冻存后耐药性依然保持稳定，历时10个月获得对GEM药物稳定耐受的细胞株SW1990-GZ。
培养SW1990-GZ经历多代传代后可定期向培养基中加入4 μg／ml GEM以维持细胞耐药性。
1．2．2 MTT法检测SW1990和SW1990-GZ对GEM的敏感性取对数生长期SW1990及SW1990-GZ细胞经PBS清洗胰酶消化后进行计数。
取适当的细胞培养液接种于96孔板，细胞密度为5 000／孔，每孔液体量100 μl／孔；置于37℃、5%CO2恒温培养箱孵育培养24 h后，去除每孔中旧培养液，并向其中加入含不同浓度GEM的培养基继续温箱孵育72 h，弃去培养基；每孔加入以无血清RPMI-1640培养基稀释的0．5 mg／ml的MTT 100 μl，37℃孵育4 h，弃上清液；每孔加入DMSO 150 μl溶解，室温振荡15 min，于490 nm处应用自动酶标仪检测吸光度（optical delnsity，OD）值。
每个药物浓度设置4个复孔，以种细胞不加药孔为对照组及以无细胞不加药的孔为空白对照组。
不同浓度GEM作用下计算细胞存活率。
细胞存活率（%）＝（加药细胞OD值－空白对照OD值）／（对照细胞OD值－空白对照OD值）×100%。
计算耐药细胞系SW1990-GZ的耐药系数（R）。
R＝SW1990-GZ细胞的IC50／SW1990细胞的IC50。
绘制剂量－细胞存活率曲线，每项实验至少重复3次。
1．2．3 细胞生长曲线的绘制取对数生长期的SW1990及SW1990-GZ细胞经PBS清洗，胰酶消化后制成单细胞悬液后，经细胞计数器进行计数后分别接种于24孔板，细胞密度5 000／孔，液体量500 μl／孔。
置于37℃、5%CO2恒温培养箱孵育培养，于种板后第1天开始用MTT比色法进行细胞生长检测，即向每孔中加入MTT溶液500 μl孵育4 h后，向每孔加入DMSO，随后进行酶标仪下490 nm 的OD值检测。
每天1计，共计数8 d，每种细胞每次计数设3个复孔。
1．2．4 高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）检测细胞摄取情况取对数生长期细胞进行清洗消化后吹打成单细胞悬液，计数后取相应量进行24孔板接种，细胞密度1×105／孔，液体量0．5 ml／孔。
恒温培养箱孵育24 h后向每孔中加入含GEM的培养基0．5 ml，GEM浓度200 μg／ml。
从加药开始计时，分别设定2 h与4 h的细胞摄取时间，每个时间点2个复孔，以不加药的细胞孔为空白对照。
到时间后吸去含药培养基，并用PBS清洗3次，向每孔中加入1%SDS＋2%Triton的细胞裂解液进行常温下裂解以释放药物，该操作结束可进行冻融促进更进一步裂解细胞。
充分裂解后用0．5 ml甲醇萃取，涡旋震荡充分，混匀萃取除蛋白及碎片，10 000 r／min离心10 min。
取上清液弃沉淀，样品旋干除去有机萃取剂。
旋干后样品定容到100 μl后进行HPLC检测。
HPLC检测参数：柱温30℃，紫外检测波长268 nm，流动相如下：醋酸铵（pH＝5.5，0.05 mol／L）：甲醇溶液＝85∶15。
外标法建立标准曲线，计算SW1990-GZ及SW1990细胞的萃取效率。
1．3 统计学处理采用SPSS 16．0统计软件进行分析，数据均以±s表示；组间变量比较采用t检验。
2．1 SW1990-GZ细胞与亲本细胞生物学特性的比较2．1．1 检测SW1990-GZ及SW1990对GEM药物的敏感性经MTT试验显示，在各个浓度的GEM的作用下，SW1990-GZ细胞相较于诱导耐药前的SW1990细胞显现出显著GEM耐受性，即SW1990-GZ细胞对GEM的敏感性急剧下降，差异均有统计学意义（t＝6.562，P＜0.01）。