肿瘤干细胞与自我更新
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简述干细胞的形态特征及其研究进展
简述干细胞的形态特征及其研究进展 干细胞是一类具有自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类各组织器官的原始的多潜能的细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。干细胞在形态上具有共性，通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，并具有较高的端粒酶活性。根据它所处的发育阶段可以分为胚胎干细胞和成体干细胞。 胚胎干细胞的发育等级较高，是全能干细胞，而成体干细胞的发育等级较低，是多能干细胞或单能干细胞。干细胞的发育受多种内在机制和微环境因素的影响。目前人类胚胎干细胞已可成功地在体外培养。 干细胞的形态特征： 干细胞具有自我更新复制的能力，能够产生高度分化的功能细胞。 1 胚胎干细胞：胚胎干细胞当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团的 细胞即为胚胎干细胞。具有全能性，可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。进一步说，胚胎干细胞是一种高度未分化细胞。它具有发育的全能性，能分化出成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。 2 成体干细胞：成年动物的许多组织和器官，比如表皮和造血系统，具 有修复和再生的能力。成体干细胞在其中起着关键的作用。在特定条件下，成体干细胞或者产生新的干细胞，或者按一定的程序分化，形成新的功能细胞，从而使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。 3 造血干细胞：造血干细胞是体内各种血细胞的唯一来源，它主要存在 于骨髓、外周血、脐带血中。造血干细胞的移植是治疗血液系统疾病、先天性遗传疾病以及多发性和转移性恶性肿瘤疾病的最有效方法。 4 神经干细胞:理论上讲，任何一种中枢神经系统疾病都可归结为神经 干细胞功能的紊乱。脑和脊髓由于血脑屏障的存在使之在干细胞移植到中枢神经系统后不会产生免疫排斥反应。除此之外，神经干细胞的功能还可延伸到药物检测方面，对判断药物有效性、毒性有一定的作用。 5 肌肉干细胞:可发育分化为成肌细胞，可互相融合成为多核的肌纤维，形成骨骼肌最基本的结构。
肿瘤干细胞与EMT
肿瘤干细胞与EMT 肿瘤干细胞（cancer stem cell，CSC）学说认为,肿瘤实际上是由一小群具有无限增殖潜能和自我更新能力的干细胞样细胞及其产生的分化程度不均一的细胞团组成，其中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞被称为肿瘤干细胞。肿瘤干细胞的两个重要特性:一是具有自我更新驱动肿瘤发生的能力，二是具有多向分化形成肿瘤的异质性的潜能1。 上皮间质转化（epithelial-to-mesenchymal transition，EMT）是具有极性的上皮细胞转化为具有移行能力的间质细胞，并获得侵袭和迁移能力的过程。EMT是一个多步骤的动态变化过程，上皮细胞间相互作用消失，组织结构松散，立方上皮细胞转变为纺锤形纤维细胞形态，并表现出侵袭性。实体肿瘤中央的细胞为上皮细胞表型，周围的细胞常常会呈间质细胞表型，其较强的运动能力使肿瘤细胞在局部产生浸润，并侵入血和淋巴管而转移至靶器官。到达靶器官后，癌细胞可发生间质上皮转化（MET）来重建细胞间连接及细胞骨架从而形成转移灶2。EMT与肿瘤转移密切相关，而且也可以作为得到肿瘤干细胞的方法3。 近年来，肿瘤干细胞与EMT之间的关联性逐渐受到研究者的关注，二者在肿瘤的复发、转移和耐药性上面有很多相似点4。肿瘤干细胞模型和EMT的概念试图从不同的角度来揭示肿瘤的发展，但两者都不能独立地解释所有生物学事件。诱导EMT能促使肿瘤细胞获得干细胞特性，通过诱导分化的肿瘤细胞最终形成肿瘤干细胞并维持干性，而肿瘤干细胞同样具有EMT特征。然而，EMT是通过何种分子机制转化干细胞样细胞的，目前尚不清楚。下面向大家介绍目前已知的关于EMT和肿瘤干细胞间分子机制上的关联性。 连接EMT与肿瘤干细胞的信号通路：
细胞生物学常用研究方法
Southern杂交: 是体外分析特异DNA序列的方法，操作时先用限制性内切酶将核DNA或线粒体DNA切成DNA片段，经凝胶电泳分离后，转移到醋酸纤维薄膜上，再用探针杂交，通过放射自显影，即可辨认出与探针互补的特殊核苷序列。 将RNA转移到薄膜上，用探针杂交，则称为Northern杂交。 RNAi技术: 是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。可以利用siRNA或siRNA表达载体快速、经济、简便的以序列特异方式剔除目的基因表达，所以现在已经成为探索基因功能的重要研究手段。 Southern杂交一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量]。 扫描电镜技术：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与样品表面结构有关，次级电子由探测器收集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。 细胞显微分光光度计：用来描述薄膜、涂层厚度超过1微米的物件的光学性能的显微技术。 免疫荧光技术：将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。 电镜超薄切片技术：超薄切片是为电镜观察提供极薄的切片样品的专门技术。用当代较好的超薄切片机，大多数生物材料，如果固定、包埋处理得合适，可以切成50-100微米的超薄切片。 Northern印迹杂交（Northern blot）。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。 放射自显影技术：放射自显影技术是利用放射性同位素的电离辐射对乳胶（含AgBr或AgCl）的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究的一种细胞化学技术。放射自显影技术（radioautography；autoradiography）用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。其原理是将放射性同位素（如14C和3H）标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间的放射性曝光，组织中的放射性即可使乳胶感光。 核磁共振技术：可以直接研究溶液和活细胞中相对分子质量较小(20，000 道尔顿以下)的蛋白质、核酸以及其它分子的结构，而不损伤细胞。 DNA序列分析：在获得一个基因序列后，需要对其进行生物信息学分析，从中尽量发掘信
精原干细胞的分离.
精原干细胞的分离、纯化和初步鉴定 薛振华1刘国世1，2史建民1王梁1田秀芝1王永彬1 侯保民3田见晖1，2曾申明1，2朱士恩1，2 （1. 中国农业大学动物科学技术学院，北京 100094； 2. 农业生物技术国家重点实验室，北京 100094； 3. 内蒙古兴安盟科右中旗草原工作站，内蒙古巴彦胡舒 029400） 摘要对达兰仔猪睾丸精原细胞及精原干细胞进行了体外分离、纯化和初步鉴定。对8 d达兰仔猪的睾丸实质组织，采用Ⅳ型胶原酶、透明质酸酶和胰酶组合消化法分离精细管细胞，制备单细胞悬液，用Percoll 不连续密度(11%、19%、27%、35%和43%)梯度法纯化精原细胞；对纯化后的细胞培养12 h ，细胞贴壁后进行碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定，初步确定精原干细胞及其比例。结果表明：所获精细管细胞悬液中活细胞和死细胞所占的比率分别为9265%和735%，平均每克睾丸可获得417×107个细胞；精原细胞主要分布于19%～27%的Percoll 梯度带中，经纯化后其纯度为4762%，精原干细胞占该带细胞的比例为552%。因此，采用组合酶消化，结合Percoll 不连续密度梯度离心法分离的达兰仔猪的精原细胞不但能够满足体外培养的需要，还可以做为精原干细胞移植的研究材料。 关键词达兰猪；精原干细胞；分离；纯化；精原细胞 DA-6对草莓叶绿体光化学反应和Rubisco活性的影响 单守明1刘国杰1李绍华2苗鹏飞1 （1农学与生物技术学院, 北京 100094； 2北京植物研究所, 北京 100093） 摘要以草莓为试材，研究叶面喷施二烷氨基乙醇羧酸酯（DA-6）对叶绿体光化学反应和Rubisco活性的影响。结果表明，处理14 d后，10和20 mg/L DA-6分别使草莓叶片净光合速率提高了7.6%和16.4%，同时还提高了叶绿素含量、叶绿体Hill反应、光合磷酸化活性和Mg2+ATPase活性，并使Rubisco活性各提高了7.9%和16.9%。40 mg/L的DA-6降低了叶片的光合作用速率、叶绿素含量、叶绿体光化学反应和Rubisco活性。试验结果表明，叶面喷施DA-6能调节草莓叶片叶绿体光化学反应和Rubisco活性，并同时
干细胞治疗工作流程图
干细胞治疗工作流程 脐带血临床采集流程 干细胞是一种未分化的细胞，具有自我更新、分化、发育再生各种组织器官和人体的潜在功能。 脐带血广泛的应用前景备受关注，脐带血本属于废弃物，但是医学技术的进步使得它的价值得到了空前的提升。1989年，法国的鲁克罗曼教授用HLA 相合的同胞脐带血干细胞进行移植，成功地治疗了一例遗传性疾病—可尼贫血症，之后短短的15年的时间，医学界利用脐带血干细胞已成功治愈和改善了多种疾病，包括:血液系统疾病、免疫系统疾病、神经和血管系统疾病、脑部疾病、肿瘤、糖尿病等。现在在儿童的干细胞移植方面，由于可以存在1-2个HLA位点的不配型，免疫排斥反应小等原因，脐带血干细胞已成为治疗一些重大疾病的有效手段。同时，干细胞的进一步开发，还可用于抗衰老、器官修复、美容等保健领域。干细胞技术和临床应用的飞速发展，给人类的健康带来了新的希望和保障。但是作为采集脐带血最主要的工作人员，我们所需要的操作是非常简单的，但是对于术中操作之外，我们还是会遇到以下的问题。解决这些问题，我们才能放心的采集，存储，备用。但是真正合法，安全，便捷的让脐带血的干细胞移植到有需要的患者体，需要按以下流程操作： 脐带血采集条件： 以初产妇、年龄在45岁以或35岁以经产妇，身体健康者为宜。 脐带血安全流程
1、传染病检查：孕妇在产前要做好身体检查。这些检查包括:肝功能是否正常，有无梅毒螺旋体，艾滋病病毒(HIV )、乙型肝炎病毒(HBV )、丙型肝炎病毒(HCV)等病原体检测。如果其中有一样是阳性的话，就不要再进行采集了。 2、采集和储存的无菌观念：在自然分娩的情况下，一定要注意消毒。被厌氧菌和需氧菌污染，检测为阳性时都不能储存和使用。在脐血被采集后，应该尽快保存在2-8℃的恒温箱中，并远离辐射源，不要让X射线照到。这样的脐带血经科学实验证实，放置24小时或在-23℃以下48小时，其中的干细胞的活性是没有明显影响的，但最长不应该超过72小时。 采集流程 何种方法采集脐带血更好些呢？Solves[5]等证实了剖宫产情况下，以下两种采集方法体采集法对得到的脐带血除血细胞比容及血小板外，其他各项没有明显不同。 体采集法：产妇施行常规的子宫横切术，将胎儿取出后，立即用两把止血钳夹住脐带，将其与胎儿分离，然后用碘酒和70%酒精消毒脐带，做脐静脉穿刺后，脐带血通过重力的作用流人含抗凝剂的无菌采集袋，采集完将其放入4℃冰箱中保存。 体外采集法：同样对产妇行子宫横切术，待胎盘自然或人工剥离后，立即将其置于采集区，胎盘取出与进行采集之间时间尽可能缩短，将胎盘放在一个中间有孔的可供脐带自然垂下的采集台上，对脐带进行严格消毒后行脐静脉穿刺，血液在重力的作用下流人采集袋中，将其放人4℃冰箱保存。 脐带血贮存 因为脐血的采集、运输、储存和应用事实上有别于一般血液，国际上通行的管理法规都将血液和组织细胞分别管理，而我国目前的法规对脐血干细胞库
肿瘤干细胞的动态演进及干预研究
项目名称：肿瘤干细胞的动态演进及干预研究首席科学家：刘强中山大学 起止年限：2012.1至2016.8 依托部门：教育部
一、关键科学问题及研究内容 拟解决的关键科学问题： 肿瘤干细胞的动态演进及干预研究。本项目将围绕“肿瘤干细胞的动态演进及干预研究”这一关键科学问题，选择造血和消化系统恶性肿瘤为研究对象，以肿瘤干细胞动态演进过程为切入点，通过体内外功能实验及临床标本验证“干性”及转移潜能调控中的关键基因，明确肿瘤干细胞演进的分子机制、关键调控分子和信号通路，探索靶向肿瘤干细胞演进过程的干预方法和手段，阐明肿瘤干细胞的演进过程及靶向干预肿瘤细胞动态演进过程的干预新模式。本研究将为肿瘤干细胞的动态演进模型及创新性靶标药物的临床应用提供充实的理论和实验依据，为攻克肿瘤开创新的突破口。 围绕拟解决的关键科学问题，本项目的主要研究内容是： 1. 肿瘤干细胞的起始与动态演进机制：本课题组将运用TEL-AML1及PML-RARα白血病相关模型，探索白血病干细胞的动态演进过程（白血病起源细胞→白血病前癌干细胞→白血病干细胞）：（1）TEL-AML1 相关白血病起始和发展过程中起源细胞、Pre-LSC和LSC的鉴定，以及这些干细胞动态演进的遗传和表观遗传调控机制；（2）PML-RARα相关白血病起始和发展过程中不同阶段的干细胞鉴定和动态演进机制。另一方面，本课题组还将探讨肝癌干细胞在肝癌发生发展过程（原发、复发及转移）中的动态演进过程。 2. 肿瘤干细胞“干性”的分子调控及临床意义：（1）应用新一代高通量测序技术，系统分析全基因组、全外显子组、转录组、表观遗传组、代谢组等变化，绘制造血和消化系统肿瘤干细胞异质性相关基因序列谱、表达谱和表观遗传学图谱，分析肿瘤干细胞“干性”相关的调控分子及关键信号通路；（2）运用小鼠模型等体内外功能实验对候选分子在肿瘤干细胞动态演进过程中的功能进行鉴定，并通过临床标本检验肿瘤干细胞动态演进模型的临床意义；（3）结合本课题组已有工作基础，展开肿瘤干细胞细胞周期、非对称分裂等分子调控方面的细致研究。 3. 肿瘤干细胞转移潜能获得的分子机制：肿瘤干细胞的“干性”决定着其转移潜能，EMT作为肿瘤转移的重要机制，与肿瘤干细胞的动态演进过程紧密关联，剖析二者之间的相互作用，将为寻找肿瘤发生及转移的靶点提供有力的理论基础：（1）
精原干细胞研究进展
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 精原干细胞研究进展 精原干细胞研究进展动物生殖生理学课程论文精原干细 胞移植的研究进展【摘要】 :精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs) 是精子发生的起始细胞。 SSCs 移植是近年发展起来的一项技术，是将供体动物的 SSCs 移植到受体动物的睾丸内，使其在受体睾丸内迁移、定居、增殖并 启动精子发生，产生有受精能力精子的过程。 该技术在雄性不育的治疗、精子发生机制的探讨、干细胞生物 学研究及优质动物或转基因动物繁育等方面具有广阔的应用前景。 本文就 SSCs 移植技术、移植研究的发展和 SSCs 移植应用作 一综述。 【关键词】 : 精原干细胞、移植、鉴别、分离、受体Progress on Spermatogonial Stem Cell Transplantation 【Abstract】 : Spermatogonial stem cells (spermatogonial stem cells, SSCs) are initiating cells of sperm production. SSCs transplantation is novel technique developed in recent years, in which the testicular cell suspension from donor animals is microinjected into seminiferous tubes at the surface of the host testis, and subsequently, the donor SSCs survive, migrate, proliferate, initiate the spermatogenesis and produce the sperms with normal fertilization ability in the host testis. 1/ 19
肿瘤治疗新目标-肿瘤干细胞
肿瘤治疗新目标——肿瘤干细胞【摘要】肿瘤干细胞是肿瘤细胞的祖细胞，是肿瘤的真正种子，它们虽然仅占肿瘤细胞中极少的一部分，但具有自我更新能力和不定分化潜能，是形成不同分化程度肿瘤和肿瘤不断生长的根源，是肿瘤发生、扩散、复发等过程中的“起始细胞”或“动力细胞”。传统的化疗药物不能有效靶向作用肿瘤干细胞，开发针对肿瘤干细胞的靶向治疗，能给肿瘤治疗模式带来全新的改变，有望彻底改善患者的预后。 【关键词】肿瘤干细胞 干细胞（stem cell）是一类具有自我更新能力和无限增殖分化潜能的原始细胞，这种细胞可分化为特定组织中一个或多个具有特定功能的细胞。随着对干细胞研究的深入，人们对肿瘤的发生、发展有了新的认识。有研究者提出恶性肿瘤是一种干细胞疾病，肿瘤来源于干细胞。这种干细胞，即肿瘤干细胞（cancer stem cell, CSC）在肿瘤组织中存在，虽为数不多，仅占肿瘤细胞的万分之一至百分之一左右，但具有自我更新能力和不定分化潜能，是形成不同分化程度肿瘤和肿瘤不断生长的根源，是肿瘤发生、扩散、复发等过程中的“起始细胞”或“动力细胞”。直接针对CSC的靶向治疗，可望带来肿瘤治疗模式的全新改变，彻底改善患者的预后。 1 肿瘤干细胞的发现 传统观念认为，所有肿瘤细胞均存在无限增殖的可能，每个发生转移的肿瘤细胞都具有再次形成肿瘤的能力。然而，1958 年Hewitt[1]把小鼠白血病细胞移植到同品系的小鼠体内,发现仅有1%～4%的移植
细胞能够形成脾脏内克隆。随后陆续有实验报道在白血病[2~5]、乳腺癌[6,7]、脑肿瘤[8,9]、胃肠肿瘤[10,11]等多种实体瘤中发现具有干细胞特性的一小部分肿瘤细胞，而且只有这些肿瘤细胞（而不是全部肿瘤细胞）具有致瘤性。于是，学者们提出了肿瘤来源于肿瘤干细胞（CSC）的学说。CSC学说认为肿瘤组织中都存在有CSC，这些CSC是肿瘤细胞的祖细胞，是肿瘤的真正种子，它们虽然仅占肿瘤细胞中极少的一部分，但在肿瘤的发生、发展、侵袭过程中发挥着重要的作用。 1.1 血液肿瘤干细胞 早在20 世纪 60年代，Bruce等[2]就发现鼠白血病细胞的一小部分亚群和正常造血干细胞及祖细胞一样，在体内外均能形成克隆。随后Park等[3]发现从大鼠腹水中获取的白血病细胞中仅有1‰～1%能在体外形成克隆细胞株；而且白血病细胞被输注入体内，也仅有1%～4%的细胞能形成脾克隆，这说明只有少数白血病细胞能在体内、外增生。Park据此推测可以形成克隆的白血病细胞是白血病干细胞，并由此提出了白血病干细胞（leukemic stem cell，LSC）的概念。Lapidot等[4]将一个与正常造血干细胞具有相同CD34+CD38-表型的白血病细胞亚群移植给NOD/SCID小鼠，发现此亚群细胞表现出干细胞样的自我更新和增殖能力，于是将此亚群细胞定义为SL-IC（SCID leukemia-initiating cell）。1997年，Bonnet等[5]用实验证实了大多数白血病细胞不能持续增殖，只有少数LSC能形成白血病细胞集落；人类急性髓细胞性白血病（acute myelocytic leukemia, AML）干细胞约占全部AML细胞的0.2%~1%，表达CD34+CD38-；这一细胞亚群具
干细胞临床试验研究项目管理办法试行实施细则
干细胞临床研究管理办法（试行） 第一章总则 第一条为规范和促进干细胞临床研究，依照《中华人民共和国药品管理法》、《医疗机构管理条例》等法律法规，制定本办法。 第二条本办法适用于在医疗机构开展的干细胞临床研究。 干细胞临床研究指应用人自体或异体来源的干细胞经体外操作后输入（或植入）人体，用于疾病预防或治疗的临床研究。体外操作包括干细胞在体外的分离、纯化、培养、扩增、诱导分化、冻存及复苏等，不包括基因水平的操作。 第三条干细胞临床研究必须遵循科学、规范、公开、符合伦理、充分保护受试者权益的原则。 第四条开展干细胞临床研究的医疗机构（以下简称机构）是干细胞制剂和临床研究质量管理的责任主体。机构应当对干细胞临床研究项目进行立项审查、登记备案和过程监管，并对干细胞制剂制备和临床研究全过程进行质量管理和风险管控。 第五条国家卫生计生委与国家食品药品监管总局负责干细胞临床研究政策制定和宏观管理，组织制定和发布干
细胞临床研究相关规定、技术指南和规范，协调督导、检查机构干细胞制剂和临床研究管理体制机制建设和风险管控措施，促进干细胞临床研究健康、有序发展;共同组建干细胞临床研究专家委员会和伦理专家委员会，为干细胞临床研究规范管理提供技术支撑和伦理指导。 省级卫生计生行政部门与省级食品药品监管部门负责行政区域内干细胞临床研究的日常监督管理，对机构干细胞制剂和临床研究质量以及风险管控情况进行检查，发现问题和存在风险时及时督促机构采取有效处理措施;根据工作需要共同组建干细胞临床研究专家委员会和伦理专家委员会。 第六条机构不得向受试者收取干细胞临床研究相关费用，不得发布或变相发布干细胞临床研究广告。 第二章机构的条件与职责 第七条干细胞临床研究机构应当具备以下条件： （一）三级甲等医院，具有与所开展干细胞临床研究相应的诊疗科目。 （二）依法获得相关专业的药物临床试验机构资格。 （三）具有较强的医疗、教学和科研综合能力，承担干细胞研究领域重大研究项目，且具有相对稳定、充分的项目研究经费支持。 （四）具备完整的干细胞质量控制条件、全面的干细胞临床研究质量管理体系和独立的干细胞临床研究质量保证
成体神经干细胞分化及自我更新的调控机制
成体神经干细胞分化及自我更新的调控机制 研究小组成员：陈静雯、蒋显、林珑、欧阳川、王朝、杨怡 指导教师：袭荣文博士 介绍 已有证据表明，成体哺乳动物大脑中的神经发生贯穿整个生命周期。神经干细胞的分化及自我更新是这一过程的基础并对神经组织的修复和维持起着重要作用。许多神经退行性疾病也与其功能的失调相关。深入研究成体神经干细胞最终将有助于确立干细胞治疗的方案。我们组的研究兴趣在于探索影响成体神经干细胞分化或自我更新的分子，尤其是希望能找出一条起较为关键作用的调控通路。为此，我们选用繁殖周期短，基因组序列已知，干细胞研究相对清楚的果蝇作为实验动物，通过大规模人工诱变，筛选出与成体神经干细胞分化调控相关的候选基因，最终通过酵母双杂交，基因沉默（或过量表达）观察相关蛋白表达量变化等方法推测出并验证其中起主导性作用的信号通路。 小组活动 7月17日 选择成体神经干细胞作为研究对象，确定小组成员。组员初步讨论了各自对成体神经干细胞的研究兴趣，交流了对其相关背景的了解。讨论后发现虽然大家都对成体神经干细胞有感性的认识，但这方面的背景知识都比较欠缺，不清楚目前围绕这一课题的研究方向以及研究进展，不能具化出一个研究课题，决定先阅读相关文献以尽快弥补对成体神经干细胞研究领域及现状的认识不足。 7月19日PM9：00
组员交流了各自查阅文献后新增加的认识以及心得，经过讨论，初步将研究课题定为成体神经干细胞的自我更新，并设立公共邮箱，将文献发到公邮中，以方便组员阅读。 7月27日PM9:00 最终确定小组的课题为成体神经干细胞分化及自我更新的调控机制。讨论过程中提出了两种实验方向：一是以一种或几种参与调控的特异性蛋白为导向，研究其对成体神经干细胞的影响，二是以调控通路为导向，即通过追踪成体神经干细胞不同时期蛋白表达的动态变化，找到可能参与调控的候选基因，通过基因沉默或过量表达等方法，设法找到它们之间的相互关系，推测并最终验证出一条信号通路。经过讨论决定采用第二种方案，因为相对于前者，后者更加系统全面（当然工作量也更大）。 7月28日PM:3:00 邀请指导老师---袭荣文老师与小组成员座谈。袭老师启发式的提问以及耐心的讲解帮助大家建立起了一个更加清晰明确的实验思路，同时也使大家注意到了一些实际操作中的关键问题，比如如何建立一个实验系统，选择哪种实验动物，怎样鉴定并监测成体神经干细胞的动态变化等等，而这些具体问题是大家之前都没有细致考虑过的。与老师座谈结束后，小组成员又就老师提出的有关实验操作的问题进行了讨论，最后由欧阳川负责整理实验的整体流程。 实验思路 1.通过对不同时期神经干细胞的蛋白质组分析，找到特异性最高，表达最稳定的蛋白作为标记靶分子，与GFP融合，建立分子标记。 2利用GFP，通过FACS筛选出可用于实验的细胞，分离，鉴定，体外培养。 3.选择果蝇作为实验动物，进行大规模人工诱变，筛选出具有与中枢神经修复，维持有关的突变表型的个体，通过染色体核型分析和基因测序找出突变基因，建立一个参与调控神经干细胞活动的候选基因库。 4通过查阅相关文献报道，推测可能存在于同一条调控通路中的基因，并对其相互作用做出猜想和假设 5.通过局部两两检测，检验推测，具体方法包括： a.免疫共沉淀试验 b.酵母双杂交 c.基因沉默或转染瞬时高表达后对相关基因进行实时定量PCR，对相关蛋白进行western blotting 检测其表达变化. 6.得出一个信号通路的草图，从全局层面进行进一步的实验验证。 有待解决的问题： 1.界定神经干细胞的存在 成体神经干细胞的干细胞特性---自我更新以及具有分化成多种神经细胞的潜能---在体外是通过神经球和贴壁单层细胞培养实验证明的，但是目前还没有实验能够清楚地证明在体内进行的自我更新和分化。因此需要设计出直接的工具来更有力地界定神经干细胞的存在。 2.找到神经干细胞特异性的分子标记 目前用于追踪细胞世系的标记包括Nestin,GFAP,Sox2等，但这些分子标记都表达在异质的细胞群中，而且并不清楚表达这些分子标记的细胞是否就是神经干细胞。
干细胞和肿瘤干细胞
干细胞和肿瘤干细胞： 干细胞和肿瘤干细胞的相同点： 肿瘤干细胞和干细胞在生物学特性和生长调控机制等诸多方面有着极其相似的生物学行为，主要相似之处有：①二者具有相似的调节生长的机制。有证据表明许多与肿瘤有关的调节途径也调节正常干细胞的发展，例如：凋亡抑制基因bcl-2可在体外增加HSC的数量。其他与癌变有关的信号途径如Wnt，Notch，Shh，Bmi-1等在调节干细胞自我更新的同时也在肿瘤中起作用[10-11]。②干细胞具有迁移的特性，而癌细胞有转移的能力。Tu等[12]认为干细胞的迁移和癌细胞的转移，皆受特异化学因子及其受体的调节。干细胞迁移到特定的组织和器官，而这可以解释肿瘤转移也有一定器官和组织特异性。③干细胞与癌细胞在一定的条件下是可以转化的，如生殖嵴或胚胎植入体内可以诱导成畸胎瘤，而畸胎瘤细胞注入鼠囊胚内细胞团可以形成正常胚胎。④肿瘤干细胞与HSC一样，可以分为肿瘤干细胞、短期增生细胞、分化细胞。⑤肿瘤起源于干细胞。有人认为单一细胞获得4~7次突变将发生恶性转化[13]。组织更新快的上皮组织、造血系统是肿瘤高发部位，组织自我更新越快，复制、转录过程中基因发生突变的概率越高。尽管大多数肿瘤转化突变的靶细胞并不清楚，但是已有相当多的证据表明某些结肠癌和白血病产生于积累多次突变的干细胞。⑥干细胞与肿瘤干细胞都具有端粒酶活性以及扩增的端粒重复序列，而人类终末分化体细胞不具有端粒酶活性。⑦二者均具有自我更新和无限增殖能力。⑧自我更新能力。⑨组织特异分化能力，肿瘤干细胞能够产生不同表型的肿瘤细胞，并在体内形成新的肿瘤。⑩不对称分裂能力。 干细胞和肿瘤干细胞的不同点：但肿瘤干细胞也具有不同于干细胞的特点：①自我更新信号传导途径的负反馈调节机制被破坏，肿瘤干细胞具有无限增殖和无自稳定性，而正常干细胞的增殖具有自稳性，其数目保持恒定。②缺乏分纯成熟能力，晚期肿瘤细胞没有分化为成熟细胞的能力，说明其分化程序异常，这与有着正常分化程序的干细胞不同。③肿瘤细胞倾向于积累复制错误，而正常干细胞的
中国关于干细胞的管理条例
解读干细胞临床应用标准与规则 研究者应遵守哪些规则 干细胞有关的标准和规则大部分仍在讨论和制定过程中，基本上可以归为几大类。一类是干细胞科学研究的标准。其目的是为了使不同实验室研究胚胎干细胞采用的方法和标准能够一致。另一类是关于干细胞产品临床试验的标准以及临床技术应用的标准。实验室研究出的干细胞产品在正式应用于临床之前，需要经过严格的临床前及临床试验，以保证安全性、疗效以及一些技术指标。这一类称做“临床应用转化”，指从实验室向临床应用的必要转化过程。第三类是临床准入标准，包括实施干细胞治疗的医院的资质、医生的资质、医院干细胞设施的标准等。另外，干细胞产品的生产工艺与过程，也需要相应的标准与规则。而干细胞产品还有可能作为商品跨国交易，因此也需要相应的国际规则来管理。更主要的是由什么机构来制定标准，由哪些机构来制定与监督执行管理规则。 从应用的角度而言，上述各种标准与规则中，关于临床应用转化的标准处于核心的地位。这也是国际干细胞研究协会出台“干细胞临床转化指导规则”的现实意义。该指导规则首先表明了国际干细胞研究协会坚决反对任何以牟利为目的的、未经证实的干细胞治疗。强调干细胞研究者、研究机构以及管理机构有责任阻止这类损害患者经济与健康利益，并有可能对干细胞研究带来极大负面影响的行为。该指导规则随后提出了干细胞研究者应当遵守的相应的职业道德和操守，着重强调严格的、独立的同行科学评审与监管机制的执行。而与临床应用直接相关的内容包括三部分，即用于移植的细胞的制备与生产所应该遵守的标准与规则、动物的前临床实验规则、人体的临床试验的规则。这些规则对于研究人员、临床医生和制定规则的政府部门具有指导性的意义（感兴趣的读者请参阅将正式发表的完整文件）。 必须承认的是，某些特殊情况下，新技术的临床应用可能先于上述严格的程序，这叫做“医疗创新”或“创新式医疗应用”，医学史上有不少这样的例子。但同样必须强调的是，这种医疗创新绝不等于毫无准备与规则的滥用，而是建立在必要的科学预测与基本数据之上的谨慎尝试，而且这种尝试同样要受到严格的规则限制。比如，并非任何人都有资格进行这样的尝试，也不可以根据随意想象来尝试。再者，“创新医疗方法”应有助于严格的临床研究，而不是单纯出于某种侥幸心理。在尚不存在严格成形的科学标准和管理规则之前，这一点是非常重要的。 患者如何辨析治疗是否规范 那么，对于公众而言，对于潜在的消费者而言，在干细胞科学研究尚在进行、临床应用条件尚未成熟以及管理规则还有待制定的情况下，如何采取必要的措施保护自身的健康与经济利益，如何配合科学界与管理机构监督干细胞治疗的规范性，避免被不正当的商业手段所蒙骗，是一个值得认真考虑的问题。这方面，干细胞科学家与临床工作者有责任提供必要的信息，教育公众。因此，国际干细胞研究协会的“干细胞临床转化指导规则”出台的同时，专门发表了一部“告患者书”，配合指导标准，就公众和潜在消费者如何寻求干细胞治疗的专门信息提供了一套完整的方案。下面概括为几个方面。 第一，消费者必须明确的是，目前比较成熟的干细胞治疗主要还是骨髓干细胞治疗血液系统疾病，例如白血病和一些免疫疾病。某些皮肤疾病也可以由特定的干细胞治疗获得疗效。其他所有的干细胞治疗，都仍处在实验阶段，还没有达到成熟临床技术的程度。例如，如何生产足够的干细胞用于治疗仍是一个重大技术问题；哪些细胞用于哪种疾病，如何把这些细胞送达疾病部位等仍在探索中；而且，干细胞移植体内后会长期存在，是否会由此引发各种副作用，仍有待观察研究。这是消费者对目前的干细胞治疗必须有的基本认识。
体内间充质干细胞自我更新、分化及其调控相关组织干细胞的机制研究
项目名称： 体内间充质干细胞自我更新、分化及其 调控相关组织干细胞的机制研究 首席科学家：李保界上海交通大学 起止年限：2012.1 至2016.8 依托部 门： 上海市科委
一、关键科学问题及研究内容 拟解决的关键科学问题 基于MSC广谱的疾病治疗应用前景，针对目前对MSC的微环境、自我更新、 分化机理等缺乏系统研究的现状, 本课题拟解决以下关键科学问题: 1. 通过建立脂肪细胞、成骨细胞、骨髓HSC 缺乏及血管再生受阻的动物模型，探讨这 几种细胞是否作为骨髓MSC 的微环境调节MSC 的干性维持、自我更新与分化，寻找这些细胞旁分泌的活性分子在其中的作用，并探讨这些活性分子在抵抗组织衰老、促进组织再生与损伤修复中的作用。 2. 通过在体研究PTHrP-Bmi1 BMP-MAPK p16和p53通路等在调控MSC自我更新 与分化中的作用机制，阐释MSC 自我更新与分化的关键信号分子在抵抗组织衰老，促进组织再生及损伤修复中的作用，并与微环境中的信号分子建立联系。 3. 通过系统地分析MSC 自我更新、分化过程中表观遗传学的改变，寻找受DNA 甲基 化、组蛋白修饰、non-coding RNA调控的目标基因。结合基因表达图谱，阐释在MSC 的维持、自我更新及分化中的新表观遗传学基础。利用基因敲除小鼠，研究若干关键表观遗传调控基因在MSC 自我更新与分化中的作用及机制，并研究其与信号通路的关系。 4. 通过对骨折愈合、HSC 造血和神经损伤修复的在体研究，阐释MSC 及其分化细胞 在这些过程中的作用和机制，以期为MSC 的临床应用提供理论依据和指导。探讨两种活性分子通过促进MSC 增殖及向成骨细胞分化，加速骨形成和骨折愈合以及促进HSC 造血和神经再生与修复的应用前景。
干细胞管理办法JD
《干细胞临床研究管理办法（试行）》解读 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会2015-03-27 一、为什么要制定干细胞临床研究管理办法？ 干细胞是一种有多向分化潜能的细胞，具有再生各种组织器官的潜在功能。干细胞研究是近年来医学前沿重点发展领域，给某些疑难疾病的治疗提供了希望，受到广泛关注。目前在心肌梗塞、脊髓损伤、肝硬化、糖尿病等多领域的干细胞研究方兴未艾，展现出了良好的发展前景。我国在“十二五”科技规划中对干细胞研究给予了重点支持,并取得可喜进展。但在干细胞研究和转化的快速发展同时出现了一些不规范的现象，且作为一种正在研究探索中的新治疗方法，干细胞治疗对于人体的安全性、有效性尚待进一步验证，因此，制定《干细胞临床研究管理办法（试行）》（以下简称《办法（试行）》）及相关技术指南，规范干细胞临床研究，充分保护受试者权益势在必行。 《办法（试行）》在对国内外相关制度、规范进行深入调研分析的基础上，组织专家委员会起草，经过反复讨论，修改完善，已形成征求意见稿，现广泛征求意见。 二、《办法（试行）》的适用范围是什么？ 《办法（试行）》适用于在医疗机构开展的干细胞临床研究。 《办法（试行）》不适用于已有成熟技术规范的造血干细胞移植，以及按药品申报的干细胞临床试验。《办法（试
行）》提出：医疗机构按照《办法（试行）》要求完成干细胞临床研究后，不得直接进入临床应用；如申请药品注册临床试验，可将已获得的临床研究结果作为技术性申报资料提交并用于药品评价。 《办法（试行）》提出自文件发布之日起，干细胞治疗相关技术不再按照第三类医疗技术管理。 三、干细胞临床研究应当遵循的原则是什么？ 开展干细胞临床研究须遵循科学、规范、公开，医疗机构必须认真履行干细胞临床研究机构和项目备案、信息公开程序接受国家相关部门监管。 干细胞临床研究必须要符合伦理准则，符合《涉及人的生物医学研究伦理审查办法（试行）》和《人胚胎干细胞研究伦理指导原则》的要求，保证受试者的权益得到充分尊重和保护。 四、干细胞临床研究是否允许收费？ 开展干细胞临床研究的机构不得向受试者收取干细胞临床研究相关费用，不得发布或变相发布干细胞临床研究广告。 五、干细胞临床研究项目的总体要求是什么？ 干细胞临床研究是指应用人自体或异体来源的干细胞经体外操作后输入（或植入）人体，用于疾病预防或治疗的临床研究。《办法（试行）》提出，研究必须具备充分的科
新生小鼠精原干细胞诱导分化精子样细胞
新生小鼠精原干细胞诱导分化精子样细 胞 （作者： _________ 单位：___________ 邮编： ___________ ） 作者：毕聪明，王珅，王军，费东亮，肖银霞 【摘要】目的探讨小鼠精原干细胞体外诱导分化精子样细胞的 可行性。方法以7~8日龄小鼠睾丸为材料，采用小鼠睾丸支持细胞作为饲养层，应用维甲酸诱导、成年小鼠睾丸组织液诱导以及低温诱导精原干细胞分化，应用流式细胞仪分析诱导精子样细胞的染色体倍性。采用显微注射法将精子样细胞注射到卵母细胞和去核卵母细胞，观察受精卵的发育状况。结果三种方法诱导精子样细胞比例分别为 5.9% 1.6%、0.35%;流式细胞仪分析维甲酸诱导单倍体比率为19.3%; 诱导精子样细胞能激活卵母细胞，囊胚发育率20.36%。结论新生小 鼠精原干细胞体外可以诱导分化为精子样细胞，并具有激活卵母细胞的能力。 【关键词】精原干细胞分化单倍体小鼠 Abstract: Objective To discuss the possibility of SSCs of Newly-born mice in due ing the differe ntiat ing Sperm-like cells. Methods Taking the testis of male mice of 7~8 days for material and
adopti ng the testis of mice , SSCs differe ntiat ing were induced by using retinoic acid, tissue fluid of adult mice and low temperature. Flow cytometry was used to analyse the ploidy of chromosome inducing sperm-like cells. Microinjection was used to inject the sperm-like cells into oocytes and enucleate oocytes to observe the development situation of zygotes. Results The proportions of sperm-like cells induced by the three methods were 5.9%,1.6%,0.35% respectively. The rate of Flow cytometry to an alyse reti noic acid haploid is 19.3% .The sperm-like cells achieved could activate bovine oocytes by sperm injecti on (ICSI), and the developme nt rate of blastosphere was 20.36%. Con clusi ons SSCs of n ewly -born mice can be induced and differentiated into sperm-like cells and are also capable of activati ng oocytes. Key words:SSCs; differe ntiat ing; haploid; mice 在生精过程中，原始生殖细胞在胚胎期迁移到生殖嵴，经有丝分 裂，迅速增殖形成精原干细胞(spermatogoial stem cells ，SSCs)，然后进一步形成精原细胞。吴应积等］1］利用曲细精管体外共培养法长期培养精原干细胞自分化为精子样细胞，另外应用外源基因修饰的雄性生殖细胞系或青春期的精原干细胞也可分化出精子样细胞］2 -5］，通过体内移植使无内源性精子的动物产生精子。但在体外研究SSCs诱导精子的很少，某些雄性性原细胞可以直接分化成精原细胞
_精原干细胞的研究进展_精原干细胞的研究进展
第9卷第4期中华男科学Vol.9No.4 2003年7月N ational Journal of Andrology Jul.2003 #综述# 精原干细胞的研究进展 曾辛综述;徐斯凡审校 (江西医学院生理学教研室,江西南昌330006) 摘要:精原干细胞是具有自我更新和多向分化潜能等特性的多能干细胞,可在自身基因和/或外来信号调节下最终分化为精子,对其研究近年来倍受关注。本文介绍了精原干细胞的富集、初次分选技术,增殖调控因子以及移植技术的研究进展。 关键词:精原干细胞;富集;增殖;移植 中图分类号:R321.1;Q813文献标识码:A文章编号:1009-3591(2003)04-0288-051 Advances in the Research of Spermatogonial Stem Cell Xin ZENG,S-i Fan XU (Dep ar tment o f Phy siology,Jiangx i Medical College,Nanchang,Jiangx i330006,China) Abstract:In r ecent years,people have paid more attention to the spermatogonial stem cells that have the capacity for self renewal and multilineage differentiation and produce daug hter cells that can ex pand and differentiate into spermatozoa under the adjustment of self g enes and ex ter nal signal.T his ar ticle reviews recent advances in studies o f enrichment and original selection of the spermato gonial stem cells.T his review also summarizes some control factors in proliferation and transplantation techniques.Natl J Androl,2003,9 (4):288-291,295 Key words:Spermatogonial stem cells;Enr ichment;Proliferation;T r ansplantation. 在哺乳动物成体中存在几套自我更新系统,包括造血系统、精子发生系统、肠上皮和皮肤等,就物种延续而言最重要的莫过于精子发生(spermatog en-esis)。因为它承担着雄性配子的产生和进化所必需的基因传递。青春期启动后,精子发生的过程持续于整个雄性生命,其通过有序而又严格调控的细胞增殖和分化步骤而产生大量的精子,这一系统的基础便是精原干细胞(spermatog onial stem cell)。成体中特定组织干细胞应具备的特点:长期增殖、自我更新和多分化潜能,并对于损伤仍能维持更新的潜能和重新增殖的能力[1]。同样,精原干细胞有着上述的生物学特性。本文就精原干细胞的富集、增殖和移植技术研究概况作简要概述。1精原干细胞的富集 精子发生是起源于精原干细胞而最终导致成熟精子形成的复杂而具生产性的过程。这些干细胞终身具有自我更新的能力,但由于它们在睾丸中的数量极少(2~3/104)和由于它们只有通过功能来鉴定,使得生物学特性的研究变得非常困难。尽管精原干细胞移植技术的发展提供了一个干细胞分析系统,但有效的干细胞富集方法并未获得。Shinohara 等[2]运用多参数选择策略(multiparameter selection strateg y)结合体内患隐睾病的动物睾丸模型和体外荧光激活细胞分选技术(fluorescence-activated cell sorting analysis)进行精原干细胞的富集。将表达 # 288 # 1收稿日期:2002-05-24;修回日期:2002-09-03 作者简介:曾辛(1975-),男,江西武宁县人,检验师,硕士研究生,从事生殖生理学专业。E-mail:xzdive@https://www.360docs.net/doc/c1403129.html,