人体口腔中变形链球菌诱发龋齿的讨论

人体口腔中变形链球菌诱发龋齿的讨论摘要：近年口腔问题也成为人们越发关注的方面，龋病是危害人类口腔健康最普遍的疾病，已把龋病列为癌症和心血管疾病之后的第三大重点防治疾病[1]。国内龋病的发生率呈上升趋势，而发病的年龄在逐渐降低，发病类型多为窝沟龋[1]。研究表明，变形链球菌群（mutans streptococci，MS）是人和动物主要致龋菌，但从人类口腔内主要检测出的MS主要是变形链球菌（streptococcus mutans，简称变链菌）[2]。该文的目的，在于综述口腔中变链菌的分离和鉴定方法。从标本的取样、收集、分离、鉴定的步骤入手进行试验，并对实验结果展开讨论分析，进一步分析现状和提出自己的看法。

关键词：龋齿、变形链球菌、分离、鉴定、综述

1、简介

据报道人体的口腔内含有700多种细菌[3]，人类口腔中始终存在唾液,牙齿萌出或清洁后不久,唾液中的大量蛋白类物质可以选择性吸附于牙釉质表面[4]，唾液是一种天然的“万能培养基”，含有各种无机物，可影响离子强度、渗透压等，提供微生物生长的环境或刺激其生长。口腔内有需氧，兼性厌氧和专性厌氧（严格、温和、微厌氧、嗜二氧化碳菌，不同的人群不同的病变类型存在的细菌也不同[7]。细菌易停留在口腔内不易清洁的区域附着并生长，不同的细菌对口腔内各表面的粘附能力不同，故生长的区域也会不同。通常口腔内的微生物处于平衡状态，细菌之间相互制约、相互依存，这种关系的平衡使得人体口腔维持正常的生理状态，列如，变形链球菌（S.mtanus）能产生乳酸而韦荣氏菌（veillonella）及真杆菌又能能利用乳酸作为部分能量来源；口腔微生物之间还存在着拮抗作用，能大量分离出放线共生嗜血杆菌的龈下菌斑中，很少甚至于不能分离出菌斑固有的菌丛----血链球菌和乳房链球菌，相反，能够分离出血链球菌和乳房链球菌的部位，几乎不能分离出H.a菌。总之，在一个群体中，这些细菌独立存在，但相互之间密切相关。

口腔内的细菌平衡状态被破坏就会引发一些疾病，例如龋齿，也就是我们常说的虫牙，早期无自觉症状，逐步加深，会有冷热水敏感饮食疼痛等，龋坏达牙神经时，会有自发性疼痛产生。龋齿的发病率很高，致病的四联因素：细菌、食物、宿主、时间[7]，通俗的说就是口腔内的清洁不彻底，后牙槽较难清洁容易造成残留食物残渣的堆积，长此以往在细菌的作用下就会形成小黑点也就是虫牙。

本文根据该菌的生态学、生理生化的特点及一系列实验，分析了与变链菌耐酸、附着部位、致病性等。初步探讨了变链菌引发龋齿的原因及引起人们对龋病预防的重视[5]。

2、研究现状

研究表明，变形链球菌群（mutans streptococci，MS）是人和动物主要致龋菌，但从人类口腔内主要检测出的MS主要是变形链球菌（streptococcus mutans，简称变链菌）[6]。致病能力在于能利用蔗糖合成细胞外多糖，粘附于牙齿表面，参与菌斑的形成，同时产酸使牙齿表面脱矿而引起龋病[2]。当此菌超过一定数量即有致龋的可能，所以，临床上常以其为指

示菌预防检查龋的活动性[2]。变形链球菌的分离可从龋病患者的口腔中获取，根据变形链球菌的形态特点进行外观上的判断，再根据其生理生化性质等特点进行生化鉴定，分析实验结果就可以对变链菌进行判断。

2.1变形链球菌的获取

口腔细菌对口腔内不同部位具有选择性粘附的能力，研究表示唾液中常见革兰氏阴性球菌，由于唾液的特殊性在统计学上有显著差异，牙齿上已革兰氏阳性菌为主，舌背部革兰氏阴性、阳性球菌均有单位出现杆菌。革兰氏阳性菌牙表面分布居多，其次为舌背部和唾液中，革兰氏阴性菌反之[7]。变链菌对牙面羟磷灰石有很高的亲和力，因此牙面是变链菌在口腔内的主要定居部位，牙菌斑上通常是杆菌的定居部位。因此在细菌的获得上选择患者患有龋齿的牙面部位小心涂抹。

2.2细菌标本的培养

将不同浓度的菌液分别接种于MSBA培养平板上。在MSBA培养基中，含抗菌肽它能特异地抑制细胞壁合成的脱磷酸化过程，影响磷脂载体的转运及向细胞壁支架输送粘肽，还可与敏感菌的细胞膜结合，损伤细胞膜，导致离子外流[2]。因此对葡萄球菌，化脓性链球菌等革兰氏阳性菌有较强的杀菌作用，加上高浓℃的蔗糖抑制了口腔链球菌群的大多数的生长，如唾液链球菌，血链球菌等[8]。将接种好的平板放入厌氧培养箱培养48-72小时后，对菌落从大小、形状、厚度、边缘、颜色、表面、透明度、粘度这几个形态方面观察培养基上细菌生长情况。

仔细观察初代培养平板上的菌落，挑选变形链球菌典型菌落：深蓝色嵌顿，粗糙，质硬，边缘不齐，突起状。取少量涂片进行革兰氏染色，在油镜下镜检为紫色，长链或短链小球状。将此类典型细菌分离出来接种于MSA培养基上，在设置相同的厌氧培养箱中进行次代纯培养，此时获得的纯种变链菌再次镜检并进行生化鉴定。

2.3变形链球菌的鉴定及结论

2.3.1糖发酵实验

变形链球菌族能发酵葡萄糖、乳糖、菊糖等糖类，使其产生有机酸，指示剂呈酸性反应，发酵管发生颜色变化。在糖发酵实验中，若细菌能分解糖产酸，则培养基中的指示剂呈酸性反应（溴甲酚紫呈黄色），实验结果为阳性，反之指示剂颜色未发生变化则表示为阴性。2.3.2甘露醇、山梨醇发酵实验

变形链球菌族能发酵甘露醇和山梨醇产酸，使培养基颜色发生改变，而其它口腔链球菌则不能。该实验利用口腔中只有变形链球菌能发酵甘露醇和山梨醇使其产酸这一特性，使微量发酵管中培养基的颜色发生改变（紫色变为黄色），实验结果为阳性，反之指示剂颜色未发生变化则表示为阴性。

2.3.3耐酸性实验

口腔变形链球菌能在酸性极低的环境下继续发酵底物并产酸，通过改变发酵管的酸性梯

度，培育后再次用精密pH仪测试发酵管中pH变化，了解并验证最低耐酸℃仍可产酸的范畴[25]。细菌发酵底物产酸会使原有的pH降低，若相同的发酵管中，两次对应所测的pH值发生减小，则该发酵管中变链菌发酵了乳糖底物并产酸，说明该pH下变链菌仍能在当前环境存活并进行生命活动。

2.3.4合成细胞外多糖实验

利用变链菌可将蔗糖合成不溶性多糖这一特性，将细菌接种于含1%蔗糖的BHI培养基中，培养离心后制得不水溶性胞外多糖。硫酸---蒽酮法[17]测定胞外多糖，由标准葡聚糖所绘制的标准曲线为参考，根据标准曲线及样本、稀释倍数和吸光度值来测定样品中是否合成葡聚糖。

3、引发龋齿的因素及其防治

通过以上的鉴定实验可以得知，变形链球菌对牙齿这种坚硬表面有很高的附着力，并能发酵糖产生酸来腐蚀牙齿，产生水不溶性糖，对酸有极高的耐受力在很低的pH条件下任然存活，酸使钙溶解长时间的侵蚀形成龋洞。

从经验和实践都可以看出，龋齿是一种与饮食有关的疾病，是牙齿在机体内外环境因素的影响下，逐渐发生应组织软化和有机溶解，使牙齿组织遭到破坏缺损[9]。随着生活越来越好，龋齿低龄化的现象也越来越显著，食物残渣遗留在口腔内牙齿的缝隙处，这种滞留的残渣给细菌创造了发酵条件，特别是糖、蛋糕、饮料等精制食物很容易粘滞在牙表面和牙缝里，经细菌作用发酵，侵蚀牙齿而脱钙，形成龋齿。糖类是细菌进行代谢的基础物质，所以可使牙菌斑增加，加速变形链球菌的繁殖，加速龋齿的产生。

预防龋齿可以从生活中每一个细节做起。注意个人口腔卫生，口腔内多种疾病都可以从注重个人口腔卫生来进行预防。口腔中的食物残渣的遗留是引发龋齿、牙周炎、口臭等疾病的重要致病因素[21]。还要注意平时的日常饮食均衡，合理的摄入含磷、钙、维生素等食物，以提高牙齿的防卫能力，还要少食甜食，特别是在睡前尽量不吃甜食，摄入甜食后要漱口并且认真刷牙。发现出现有龋齿出现要及时治疗，防止牙齿内部更深的腐蚀。针对公认的龋齿主要致病菌．变形链球菌的免疫生物防治已被认为是控制龋齿的公认的有效手段。只有改变目前传统生物免疫制剂的研发思维模式和方式及深入透彻了解龋齿致病菌．变形链球菌的自身特点，综合利用各种生物免疫制剂的优势，根据龋齿的发病流行病学和疾病发生、发展规律．研发出新的变形链球菌的龋齿免疫生物防治产品[24]。

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