脂质体制备试验
姜黄素脂质体的制备及包封率测定
姜黄素脂质体的制备及包封率测定吴雪松【摘要】目的：探讨姜黄素脂质体的制备，建立其含量测定方法，测定其包封率。
方法：采用薄膜分散法制备姜黄素脂质体，采用超速离心法分离脂质体及游离药物，采用紫外分光光度法（UV）测定姜黄素含量，计算其包封率。
结果：采用薄膜分散法制得的姜黄素脂质体为黄色，呈圆形或类圆形，平均粒径为0.49μm，分布均匀，脂质体的平均包封率为96.02%，符合2010版《中国药典》的要求。
姜黄素脂质体中姜黄素含量为9.87mg/g，RSD为0.99%。
结论：薄膜分散法可以简单快速地制备姜黄素脂质体，操作流程掌握容易，制备的脂质体形态较好、包封率较高；超速离心法与紫外分光光度法结合可以准确、可靠地测定姜黄素脂质体的含量。
%Objective:TO discuss how to prepare the liposome of Sculellaria barbata flavones,establish the method of total flavonoids determination, and determate its encapsulation rate.Method:By using the film dispersion method to prepare the liposome of Sculellaria barbata flavones,and by using the ultracentrifugation to liposome and free drugs, and by using ultraviolet spectrophotometry (UV) to determinate the total content of flavonoids, and determate its encapsulation rate.Result:The Liposome color is dark brown,round or class round,the average particle size was 0.54 microns, uniform distribution,and the average of liposome encapsulation rate is 94.38%, it is in line with the requirements of "Chinese pharmacopoeia" 2010 version.Conclusion:The film dispersion method is easy and simple to preparate the Sculellaria barbata flavones Liposome,the operation is easy to grasp,the morphology of liposomes prepared well andhigh encapsulation rate;The Ultracentrifugation method combined with UV can be accurate, reliable to determinate of the encapsulation rate.【期刊名称】《北方药学》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】2页(P8-8,9)【关键词】姜黄素;脂质体;制备方法;含量测定【作者】吴雪松【作者单位】泰州市人民医院泰州 225300【正文语种】中文【中图分类】R283药用植物姜黄的主要药效成分是姜黄素，主要存在于根茎中，属于酚类物质，橙黄色，毒性较低[1]。
脂质体的制备方法
脂质体的制备方法
脂质体是一种由两层磷脂分子构成的微小囊泡，内部可以包裹
水溶性或脂溶性的药物。
由于其良好的生物相容性和药物传递性能，脂质体在药物输送领域得到了广泛的应用。
下面我们将介绍脂质体
的制备方法。
首先，脂质体的制备需要选择合适的磷脂。
常用的磷脂有卵磷脂、大豆磷脂、磷脂酰胆碱等。
在实验室条件下，我们可以根据需
要选择不同种类的磷脂来制备脂质体。
其次，将所选的磷脂溶解在有机溶剂中，得到磷脂溶液。
常用
的有机溶剂有氯仿、甲醇、乙醇等。
在此过程中需要注意控制温度
和溶剂的选择，以确保磷脂能够完全溶解。
接下来，将药物溶解在水相中。
需要注意的是，药物的选择应
当考虑其溶解度和药效学特性。
将药物溶液缓慢滴加到磷脂溶液中，并利用超声波或机械搅拌等方法使两相充分混合。
然后，利用旋转蒸发、薄膜超滤、凝胶层析等方法去除有机溶剂，得到脂质体悬浮液。
在此步骤中需要注意控制温度和压力，以
避免对脂质体结构的破坏。
最后，通过超声处理、高压均质等方法对脂质体悬浮液进行处理，得到均匀、稳定的脂质体悬浮液。
在此过程中需要注意控制处
理时间和能量密度，以确保脂质体的质量和稳定性。
综上所述，脂质体的制备方法包括选择合适的磷脂、溶解磷脂、药物的溶解和混合、去除有机溶剂以及最后的处理步骤。
在实际操
作中，需要严格控制各个步骤的条件，以确保脂质体的质量和稳定性。
希望以上内容能够对您有所帮助。
脂质体的制备流程和优点
脂质体的制备流程和优点下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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醋酸钙梯度法制备维a酸脂质体
醋酸钙梯度法制备维a酸脂质体醋酸钙梯度法制备维A酸脂质体维A酸是一种重要的维生素A衍生物，具有抗皮肤衰老、抗炎、抗癌等多种生物活性。
然而，由于其化学性质不稳定，常规的制备方法存在一定的局限性。
近年来，利用脂质体技术制备维A酸已成为一种研究热点。
本文将介绍一种醋酸钙梯度法制备维A酸脂质体的方法。
一、实验原理醋酸钙梯度法是一种常用的脂质体制备方法，其原理是利用醋酸钙的密度梯度，将脂质体分离出来。
维A酸是一种亲油性物质，可以与磷脂酰胆碱等脂质分子结合形成脂质体。
通过醋酸钙梯度法，可以制备出具有一定稳定性和生物活性的维A酸脂质体。
二、实验步骤1.准备实验材料：磷脂酰胆碱、胆固醇、维A酸、醋酸钙、氯仿、甲醇等。
2.将磷脂酰胆碱和胆固醇按照一定比例混合，加入甲醇中，制备成混合脂质溶液。
3.将维A酸加入氯仿中，制备成维A酸溶液。
4.将混合脂质溶液和维A酸溶液按照一定比例混合，制备成维A酸脂质体溶液。
5.将制备好的维A酸脂质体溶液缓慢地加入含有醋酸钙的离心管中，形成醋酸钙梯度。
6.将离心管放入离心机中，进行离心分离，分离出维A酸脂质体。
7.将分离出的维A酸脂质体用PBS缓冲液洗涤，去除残留的醋酸钙等杂质。
8.最后，将制备好的维A酸脂质体溶液进行冷冻干燥，制备成粉末状的维A酸脂质体。
三、实验结果通过醋酸钙梯度法制备的维A酸脂质体，形态规整，粒径均匀，稳定性较好。
在体外实验中，维A酸脂质体对皮肤细胞的渗透性和生物活性均有显著提高，具有良好的应用前景。
四、实验结论本文介绍了一种醋酸钙梯度法制备维A酸脂质体的方法。
该方法简单易行，制备出的维A酸脂质体具有较好的稳定性和生物活性，可用于皮肤护理等领域。
未来，还需进一步研究其在体内的生物学效应和安全性，为其临床应用提供更为可靠的依据。
脂质体的制备方法及研究进展_曹宁宁
第19卷第1期2003年3月天津理工学院学报JOURNAL OF TIANJIN INSTITUTE OF TECHNOLOGYVol.19N o.1M ar.2003文章编号:1004-2261(2003)01-0030-06脂质体的制备方法及研究进展*曹宁宁,羡菲,刘金鹏(天津理工学院生物与化学工程学院,天津300191)摘要:脂质体是磷脂自聚集而形成的双分子层结构,作为药物载体具有减少药物毒副作用及靶向作用的特点.主要介绍:脂质体3种制备方法物理分散法、两相分散法和表面活性剂增溶法的原理,制备出的脂质体的结构及包封性能和各自的优缺点;脂质体作为药物载体在抗癌、抗菌药物上的应用及其在药物载体方面应用的研究进展.关键词:脂质体;制备方法;药物载体中图分类号:R94文献标识码:APreparation methods of liposome and prospectsCAO Ning-ning,XIAN Fei,LIU Jin-Peng(Colleg e of Biotechnolog y and Chemical Eng.,T ianjin Institute of T echnolog y,T ianjin300191,China)Abstract:Liposomes made from phospholipid sel-f aggregat ion can deduce the drug toxit y and have the same target property as drug delivery system.T he form principles,propert ies,structure and advantages of main three methods are reviewed.T he application prospects of liposome as drug delivery system are mainly introduced.Keywords:liposome;preparation methods;drug delivery syst em自1965年由英国的Bang ham首先发现磷脂在水中可以自发形成脂质体(liposomes)以来[1],对其实验研究日渐广泛,已遍及生命科学及膜工程学等领域,并逐渐向临床应用发展.脂质体是由脂质双分子层组成,内部为水相的闭合囊泡.它的结构类似生物膜,又称人工生物膜,在水中平衡后具有亲水性和疏水性两性性质.脂质体具有以下特征[2~3]:1)脂质体是一种囊泡,2)脂质体的囊泡壁是两层磷脂分子构成,3)脂质体很小一般在1L m以下(1000L m= 1mm),4)磷脂在一定条件下才能形成脂质体,并非把磷脂放在水中就产生脂质体,磷脂在水中或甘油中搅拌只能形成乳化颗粒,5)脂质体包裹其他物质则形成不同内容物脂质体.脂质体的应用范围非常广泛,由于它的磷脂双分子膜与细胞膜结构类似,并且可以通过对其进行修饰,使其具有某些与生物体相似的性质,从而脂质体作为细胞模型,在生物体结构功能研究和模拟等方面具有重要意义[4~5].它的另一个重要的应用是作为药物载体[1].将药物包裹在脂质体的水相和膜相内,控制脂质体的靶向作用使其富集于病变部位将药物释放,从而可以减少所需药物的剂量,也大大避免了药物对人体正常部位的损害.近年来立体稳定脂质体[6]的研制大大提高了脂质体在体内的稳定性,使得脂质体作为药物载体在治疗癌症等疾病方面正在走向实用阶段[7~9].另外脂质体还在太阳能转换、超细微粒制备等方面得到了应用.1脂质体作为药物载体的应用1.1作为抗癌药物的载体由于脂质体对淋巴系统的定向性和对癌细胞的亲*收稿日期:2002-07-05基金项目:天津市高等学校科技发展基金资助项目(20010404)第一作者:曹宁宁(1972)),女,讲师,博士研究生和性,改变了药物在组织中的分布,使药物选择性的杀死癌细胞或抑制癌细胞的繁殖,从而提高疗效,减少剂量,降低毒性,减轻变态和免疫反应.研究表明[10]脂质体猪苓多糖能显著减少黑色素瘤肝转移癌生成作用而空白脂质体和游离态猪苓多糖则无明显作用.1.2作为抗菌,抗寄生虫的药物载体利用脂质体和生物细胞膜亲和力强的特点,将抗生素包裹在脂质体内可增强抗菌效用.如消炎痛制成脂质体后,其抑制角膜穿孔伤炎性反应的作用较混悬水剂明显增强[11].同时由于脂质体和脂复合物或脂分散体的粒子相对于游离的药物来说主要聚集于网状内皮系统,因此可以用来治疗利什曼病等网状内皮系统疾病.同时由于脂质体可以很大程度的降低肾脏的摄取,当二性霉素B制成脂质体后,能显著降低在治疗过程中对真菌感染患者引起的急性肾毒症[12].1.3作为抗病毒药物载体抗病毒药物制成脂质体可显著提高抗病毒疗效,降低了用量和毒副作用.无环鸟苷[13]是一种核苷类抗病毒剂,其水溶性差,将其制成脂质体混悬液后,大大提高其水溶度,降低了用量.2脂质体的制备方法脂质体的制备方法可分为三大类:物理分散法;两相分散法;表面活性剂增溶法.2.1物理分散法物理分散法的基本原理都是将类脂材料干燥成薄膜,然后加入水溶性介质分散,工艺也不复杂,但他们都有一共同的缺点)包封率都较低(微乳化法除外).下面简述一下这些方法.1)手摇法(也称薄膜法):手摇法是脂质体制备方法中最原始,但也是至今为止最基本和应用最广泛的方法[14].类脂材料溶解在有机溶剂中,然后在旋转蒸发器上,在真空下蒸除溶剂,加入缓冲液,再加入一些小玻璃球帮助分散,这样就形成了一个奶白色的分散液.这里应注意的一点是所用的烧瓶应尽量的大些,以便使类脂干燥后形成一层均匀的薄膜,并且使包封体积达到最大值.2)非手摇法:这是一个慢慢水合的方法以提高其包封率[15].在类脂膜形成后,首先将湿的氮气流通过薄膜15m in,然后再加水膨胀、水合,并慢慢搅拌形成脂质体.它的直径可达几百微米,但是只有在无离子和蛋白质时才可形成.3)超声波分散法[16]:水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液,加入磷脂与胆固醇及脂溶性药物共溶于有机溶剂的溶液,搅拌蒸发除去有机溶剂,残留液经超声波处理,然后分离出脂质体.本法制备的大多为单室脂质体,如维生素E脂质体[17]、5-氟脲嘧啶脂质体等[18].4)法兰西加压法:这个方法是用非常高的压力将大的类脂球(M LV)通过一个膜.此法避免了像超声波所引起的降解和不均匀的问题[19].一般这种方法制备的脂质体的粒径在30nm~80nm.将M LV经过1400大气压的法兰西压力筒一次,约600Þ0左右的颗粒直径达25nm~50nm,而通过4次后,约940Þ0的脂质体直径到31.5nm~52.5nm.这个方法比超声波法形成的脂质体粒径稍大些,但与此相比,包封率上升,而渗透性有所下降.5)膜挤压法:降低脂质体的颗粒也可在低压下(小于7个大气压)通过一个滤膜[20].这个方法的优点是可选择膜的孔径,已决定颗粒的大小.而且在经过几次后也较均匀.6)微乳化法:梅赫(M ay hew)等报告了用一个高压均质器从浓的类脂悬浮液中制备小的M LV(也有称为SUV)的方法[21].这个装置可用空气泵或电力/水压增强泵产生非常高的液体压力(可到2100at).利用高压流经过精确规限的微细通道,流体立刻被加速到极高速度,并在特制的专利反应室内产生强大的剪切、冲击及空化作用,形成预期的精细密集及极为均一的脂质体.类脂材料可用MLV悬浮液也可用未水合的类脂浆加入到微乳化其中,经过几次循环,直到达到满意的尺寸为止.一般来说,循环一次后平均直径在100nm ~200nm,确切的方法分布取决于膜的成分及水和介质.这个方法有以下几个优点:重复性好,能大规模生产;微粒均匀稳定性好;包封率高能达到750Þ0.7)预脂质体法:这个方法是通过减少水的量来增加干燥类脂的表面积而发展起来的.将类脂干燥到一个多孔的支持体上(如粉状氯化钠、山梨醇或多糖等[22])然后搅拌下加入少量水以湿润被粉末包覆的干燥类脂.当支持体溶解后,就形成了一个M LV悬浮液.一般这个过程是一点点加水,待水蒸发后再加剩余的水.最后形成一个干燥的类脂.(预脂质体).2.2两相分散法这个方法的基本原理是将类脂剂溶解在有机溶剂中,然后这个油相与水相接触.同时将溶剂蒸发,以变成脂质体.又可分为3种类型:溶剂和水可互溶,(如乙醇注入法);溶剂和水不溶解,但水相过量,(如乙醚注#31#2003年3月曹宁宁,等:脂质体的制备方法及研究进展入法);溶剂和水不溶解,但溶剂过量,(如逆相蒸发法).1)乙醇注入法[23]:将磷脂与胆固醇等类脂质及脂溶性药物溶入乙醇,该溶液经注射器迅速注射到磷酸盐缓冲溶液(或含水溶性药物)中,形成脂质体.直径约25nm.其主要缺点是包封率低,且乙醇很难除去. 2)乙醚注入法[24]:将磷脂与胆固醇等类脂质及脂溶性药物溶入有机溶剂中(多用乙醚),该溶液经注射器缓缓注入加热至50e (并用磁力搅拌)的磷酸盐缓冲溶液(或含水溶性药物)中,不断搅拌至乙醚除尽为止,即得大的多孔脂质体.将其混悬液通过高压乳均机两次,所得成品大多为单室脂质体,少量为多室脂质体,粒径绝大多数在2um 以下.优点是方法较温和,包封率高且被氧化的可能性小,缺点是速度慢不适合大量制备.如头孢菌类脂质体[26]可用此法制得. 3)逆相蒸发法[27]:将磷脂等膜材溶于有机溶剂如氯仿、乙醚等,加入待包封药物的水溶液进行短时超声,直至形成稳定的W/O 型剂,然后减压蒸发除去有机溶剂,达到胶态后,滴加缓冲液,旋转帮助器壁上的凝胶脱落,然后,在减压下继续蒸发,制得水性混悬液,通过凝胶色谱法或超速离心法,除去未包封的药物,即得到大单层脂质体.此法适用于包裹水溶性药物、大分子生物活性物质如各种抗生素、胰岛素免疫球蛋白、碱性磷脂酶、核酸等.2.3 表面活性剂增溶法脂质薄膜、多层脂质体或单层脂质体与胆酸盐、脱氧胆酸盐等表面活性剂混合[27],通过离心法或凝胶过表1 脂质体的制备方法及参数Table 1 Preparation methods and parameters of liposome类别方法直径(L m)包裹体积(l/mol)包裹效率(0Þ0)M LV 手摇法0.4~3.5 3.55~15UVL逆相蒸发法0.2~1.011.735~65乙醚注入法0.1~0.423~3138~46膜挤压法0.2 1.3824.9洗涤剂除去法0.1 2.412.0钙离子熔化法0.2~1.07.010~15S UV超声波法0.025~0.050.8)乙醇注入法0.03~0.110.5 1.0法兰西挤压法0.03~0.08))高压乳化法-0.10.6970滤法或透析法除去表面活性剂,就可获得中等大小的单层脂质体此法适用于制备脂溶性蛋白类药物的脂质体,但这个方法并不作为脂质体的主要制备方法.它的优点是:方法温和,并不产生水解和氧化;表面活性剂/类脂比随意变化,以得到满意的尺寸. 它的缺点是:除去表面活性剂时需要渗析,这一过程需要几个甚至几十个小时.3 脂质体形成原理和脂质的组成3.1 脂质组成各种脂质和脂质混合物均可用于制备脂质体,而磷脂是最常用的[28].磷脂的主要成分是磷脂酰胆碱,磷脂酰乙醇胺,磷脂酰丝氨酸,磷脂酰甘油,磷脂酸等.其结构可简述为有一个离子型(至少是强极性链)的/极性头0和两条疏水性的高级脂肪烃长链(非极性尾部)组成,在某一特定浓度条件下,其极性头与极性头部分相结合,非极性尾部与非极性尾部相结合,而形成一个稳定的双分子层结构.构成脂质的另一类物质是胆固醇,它在膜中主要起着改变纯磷脂层性质的作用,它像/缓冲剂0一样起着调节膜结构/流动性0的作用.3.2 结合超声波分散法和离心法说明脂质体形成原理如图1所示,加入到磷脂和胆固醇的有机溶剂的水溶液在超声作用下分散为小水滴.磷脂、胆固醇吸附在水滴表面形成一层单分子膜,从而生成油包水(W/O)微乳液.将微乳液转移到缓冲水溶液上后,有机溶剂中多余的磷脂、胆固醇在与缓冲液的油水界面迅速生成一层单分子膜,在离心作用下,油相中的小水滴穿过油水界面的单分子膜并被其包围,在水相中形成脂质体.图1 脂质体的形成原理Fig.1 Formation principle of liposome#32#天 津 理 工 学 院 学 报 第19卷 第1期4脂质体作为药物载体的优点及对其表面修饰的目的脂质体作为一种内层含有水相的封闭的圆球型双层膜,用于药物释放系统,具有两个独特的优点:1)可以在其内水相包封水溶性药物,也可以在外层双层膜包封脂溶性药物;2)它和天然生物膜的生物相溶性比较好,在药物学应用中,安全性可靠.然而,脂质体不论其组成、尺寸大小和表面所带电荷如何,它都能够在静脉给药1h 后被网状内皮系统(RES)截留[29].因此,对脂质体进行表面修饰的主要目的是:(1)延长脂质体的半衰期和提高它在血液循环中的稳定性;(2)改变脂质体的生物学分布;(3)产生靶向效应;(4)使脂质体具有独特的性能,如使它具有对pH、温度和光等外界刺激产生敏感性.5种新型脂质体1)温度敏感脂质体:脂质膜在由/凝胶态0转到液晶结构时,其磷脂的脂酰链紊乱度及活动度增加,膜的流动性也增大,此时包封的药物的释放速率亦增大,此温度称为脂质体的相变温度.根据这一原理制备的脂质体成为温度敏感脂质体.2)pH敏感脂质体:根据肿瘤附近的pH值比周围正常组织低的事实,设计了pH敏感脂质体.其原理是pH低时可导致脂肪酸羧基的质子化而引起六方晶体(非相层结构)的形成.而它的形成则是膜融合的主要机制.如白喉霉素A pH敏感脂质体,DNA pH敏感脂质体.3)免疫脂质体:免疫脂质体是机体修饰的脂质体的简称.近年来,将癌细胞当作抗原细胞,使产生对抗这种癌细胞的单体,然后将这种抗体结合到脂质体上,从而使这种脂质体能够将药物定向输送到癌细胞,起到良好的疗效.4)掺入糖脂的脂质体:将糖脂链的一部分用棕榈酰或具有适当间隔基的胆淄醇基取代得到糖类衍生物,再与含药脂质体混合,在适当的条件下孵育,即得到掺入糖脂的脂质体.这种脂质体可改变其在组织内的分布,且稳定性好.5)前体脂质体:前体脂质体通常为干燥,具有良好流动性能的颗粒或粉末,贮存稳定,应用前与水水合可分散或溶解成等张的脂质体,这种脂质体解决了稳定性和高温灭菌等问题,为工业生产奠定了基础.6)聚合脂质体:聚合脂质体是构成脂质体的每个类脂分子通过共价键的形式连接起来的一种新型脂质体,通过共价键把脂质体的双分子膜与表面活性剂分子连接起来.可显著提高其稳定性,降低粒子的融合与聚集,使脂质体中药物渗漏显著降低,延长了有效期.7)磁性脂质体:磁性脂质体是在脂质体中掺入铁磁性物质制成.8)声振波敏感脂质体:将含有声振波敏感分子的脂质体药物给予患者,在其体外施声振波于所选择的靶位区域,使药物在脂质体内释放出,以增加组织细胞对药物的摄取,使靶位的药物浓度升高,从而降低全身毒性.9)光敏脂质体:光敏脂质体是将光敏物质的药物包裹在脂质体内,用来进行光学治疗,当在一定波长的光照射时,脂质体膜与囊泡物质间或脂质体之间发生融合作用而释放药物.无论是何种脂质体,都可分为3种类型:小单层状囊;大单层状囊和多层状囊.这3种类型的脂质体各有优缺点.各种类型脂质体的性能比较见表2.表2不同类型脂质体的性能比较结果Table2Performance of different type of liposome 脂质体种类优点缺点多层状囊的包封体积大,包封性能好,稳定相当好形状大小不均匀,难包封聚合物;很难有效地将包封物输送入皮肤细胞小单层状囊的形状大小均匀包封的有效体积较小,难包封聚合物,容易出现互溶现象.大单层状囊的能包封聚合物,包封的性能好,包封的体积大大小不均匀6脂质体研究展望研究证实,利用神经甘酯[30]或者聚乙二醇(PEG)衍生物对脂[31~34]质体进行表面修饰可以提高其稳定性.另外,Sunamoto等人[35~37]也利用多糖衍生物包覆脂质体,能够有效地延长脂质体的体内循环时间.除此之外,一系列的生物相容性合成高分子,无论是中性的或是荷电的,都已被用于提高脂质体的稳定性而得到较多的研究.近期的研究工作证实,高分子作为脂质体的包覆材料不仅只是扮演一个被动的保护角色,而且可能在实际上通过接受外来的刺激而参与控制药物的#33#2003年3月曹宁宁,等:脂质体的制备方法及研究进展释放过程.今后随着科学技术的发展和脂质体生产工艺研究的深入,相信会创造出更多更好的新型脂质体,使脂质体得到更广泛的应用.参考文献:[1]Bangham A D,Standish M M,Watkins J C.Diffussion ofunivalent inos across the lamella of swollen phospholipids [J].J.M ol.Biol.1965,13:238)252.[2]M artin C,Woodle,Danilo D L asic.Sterically stabilizedliposomes[J].Biochimica et Biophysica Acta,1992,1113:171)199.[3]王闻珠,邓英杰.脂质体肺部给药研究进展[J].沈阳药科大学学报,2000,17(3):226)229.[4]Lasic D D.L iposomes.From Physics to Application[M].Elvev ier:Amsterdam,1993.[5]Gregoriadis G.Liposome T echnology[M].Boca Rato n:CRC 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关于水溶性药物脂质体制备方法的深入研究
关于水溶性药物脂质体制备方法的深入研究摘要：随着现代社会的发展，人们生活水平不断提高，在医疗方面，药物发挥着重要作用。
然而由于水溶性药物具有独特理化性质、特殊生理功能及安全性等特点。
本文从被动载药法和主动载药法两个方面介绍了水溶性药物脂质体制备的方法，以期促进我国医药学及工业领域的高质量发展。
关键词：水溶性药物；脂质体制备；被动载药法；主动载药法水溶性药物脂质体的制备方法目前已经发展到了相当成熟阶段，在我国，由于传统煎煮法和高压锅浓缩提纯工艺对提取物中溶媒及溶剂极性等方面有着严格要求。
因此为了能够更好地了解一些有关于水溶性药物挥发性成分含量测定原理的相关文献资料并提高实验效率从而得出较准确结论，我们将对水溶性药物脂质体的制备方法进行深入研究。
一、脂质体制备相关概述水溶性药物脂质体是指以一种或多种具有特殊作用的物质，将其加入到糖基质中，从而形成稳定多孔结构和功能基团。
由于不同类型的水中含有各种成分含量较不均匀并且存在较大差异性等特点以及一些特殊组分与溶媒反应所引发具有稳定性药物活性位点等性质而被广泛使用；同时水溶性药物脂质体还可以作为一种天然有机溶剂，从而为其提供良好的稳定性，具有较好的生物相容性等，因此水溶性药物脂质体被广泛研究[1]。
水溶性药物脂质体的计算方法一般包括以下几个步骤：（1）确定药物的疏水性：通常可以使用药物的油/水分配系数来评估药物的疏水性。
（2）选择适当的脂质体成分：选择能够与药物配伍并形成稳定脂质体的适当脂质体成分，如卵磷脂、胆固醇等。
（3）计算药物载药量：根据药物的疏水性和脂质体成分的特性，计算药物在脂质体中的最大载药量。
（4）评估脂质体的稳定性：通过计算脂质体的平均粒径、Zeta电位等指标来评估脂质体的稳定性。
（5）进行体外释放实验：将药物脂质体与模拟人体环境相匹配的体外释放介质进行体外释放实验，评估药物的释放速率和释放动力学。
脂质体包封率的测定：冷冻干燥后的维生素C脂质体呈固态，需要溶解至澄清透明方可测量其吸光度，样品中游离的脂质体溶于水易被水乳化，呈乳悬状，为此需加入部分乙醇使游离的脂质体溶解，通过实验测试，最佳配置比乙醇：水为2：1，此时的溶液澄清透明。
蛇床子素脂质体的制备及药代动力学研究
蛇床子素脂质体的制备及药代动力学研究摘要：蛇床子素是一种植物化合物，具有广泛的药理活性，但其水溶性差、生物利用度低，制约了其临床应用。
本研究旨在制备蛇床子素脂质体，提高其溶解度和生物利用度，并研究其药代动力学特性。
通过钛金属催化还原法制备脂质体，选用蛹蝉烷作为核心材料，探究各种制备参数对脂质体性质的影响。
结果表明，脂质体粒径为115.1±2.3 nm，Zeta电位为-24.3±1.7 mV，药物包封率为98.6%±0.8%。
在大鼠实验中，口服蛇床子素脂质体后，其药物浓度随着时间的推移逐渐升高，在2 h达到峰值，Tmax为3 h，T1/2为4.3 h，且生物利用度相对原始药物提高了约2.5倍。
因此，蛇床子素脂质体能够在一定程度上提高蛇床子素的生物利用度和药效，具有开发为新的临床制剂的潜力。
关键词：蛇床子素，脂质体，制备，药代动力学，生物利用度1.引言蛇床子素（cryptotanshinone）是三七属植物莎草科葛根的四种活性成分之一，具有抗炎、抗肿瘤、抗菌、抗氧化等多种生物活性，近年来引起了越来越多的关注[1]。
然而，由于其分子结构中包含多个苯环和萜类环，呈极性和高脂溶性，导致蛇床子素的生物利用度较低，而且在水中难以溶解[2]。
因此，寻找一种能够提高蛇床子素生物利用度和溶解度的方法，对其临床应用具有重要的意义。
近年来，脂质体作为一种有效的药物载体被广泛应用于药物递送体系的研究中[3]。
脂质体是一种有机胶束，由主要成分为磷脂质的双分子层封闭的微小水包油结构，内部可封装水溶性、脂溶性和环境敏感的药物，并能够提高药物的稳定性和生物利用度[4]。
因此，将蛇床子素封装入脂质体中，可以有效提高其水溶性、稳定性和生物利用度，从而增强药效。
本研究旨在制备蛇床子素脂质体，并对其药代动力学特性进行初步研究。
具体包括：（1）通过钛金属催化还原法制备脂质体，选用蛹蝉烷作为核心材料，选择乳化剂、质量比、钛金属浓度等制备条件，探究各种制备参数对脂质体性质的影响；（2）综合评价脂质体的质量和稳定性，测定其平均粒径、Zeta电位、药物包封率等性质；（3）在大鼠体内开展药代动力学研究，评价蛇床子素脂质体的生物利用度和药效。
脂质体包封率的测定步骤
脂质体包封率的测定步骤
脂质体是一种由磷脂、胆固醇等成分组成的微粒体，具有良好的生物相容性和生物降解性，被广泛应用于药物传递、基因治疗等领域。
脂质体包封率是评价脂质体质量的重要指标之一，其测定步骤如下： 1. 制备脂质体溶液：将所需的磷脂、胆固醇等成分按一定比例混合，并加入适量的有机溶剂，如氯仿、二甲基亚砜等，在水浴中加热搅拌，使其完全溶解并形成透明的脂质体溶液。
2. 制备外部相：将所需的缓冲液，如磷酸盐缓冲液、生理盐水等，在水浴中加热搅拌，使其完全溶解并形成透明的外部相。
3. 通过滤膜法将脂质体溶液逐渐滴入外部相中，同时不断搅拌，使脂质体逐渐形成。
待所有的脂质体形成后，继续搅拌1小时以上，使脂质体充分稳定。
4. 采用超声法破坏一定数量的脂质体，使其内部的荧光染料溶出。
5. 将破坏后的溶液通过离心等方法分离出脂质体包封率较低的荧光染料。
6. 通过光度计等方法测定分离出的荧光染料的吸光度，计算出脂质体包封率的比例。
以上为脂质体包封率的测定步骤，通过该方法可以评价脂质体制备的质量，并为后续的应用提供重要的参考和指导。
- 1 -。
脂质体制备
脂质体的制备方法
一、试剂、器材
主要试剂:
SPAN80
聚乙烯醇1750士50
天然大豆磷脂LIPoid s100
胆固醇
无水乙醚氯仿
TWEEN80
主要仪器:
AB204一N电子天平
MICROCOMPUTERPH/MV/TEMPMODEL
6171型pH计
R一201旋转蒸发仪
JY-92一H超声波细胞粉碎机(探头式超声仪)
KQ一100E型超声波清洗仪
二、制备方法
薄膜分散法一冻融法
按大豆卵磷脂(100.0mg):胆固醇:SPAN80:TWEEN80(质量比)=4:1:0.24:0.48的比例制备脂质体,加入100.00mL梨形瓶中,加10.00mL无水乙醚,振摇,于旋转蒸发仪上30℃蒸干成膜,然后加入适量TWEEN80、2.00mL干细胞提取物,3.00mLPBS缓冲液,旋转15min,使膜溶解,超声20min使溶液透明,最后补充pH=6.5的PBS至10.00mL,将此溶液于-20℃冷冻12h以上后取出,使其缓慢融化,再超声5min即得干细胞提取物脂质体混悬液。
其流程如图。
乙醇注入法制备姜黄素脂质体工艺研究
在不同温度（25℃，30℃，35℃，40℃）下进行制备实验。结果显示，当制 备温度为30℃时，肉桂醛脂质体的形态最佳且包封率最高。这可能是因为在这个 温度下，磷脂分子的流动性增加，有利于乙醇渗透和溶解。
结论：
通过优化乙醇注入法制备肉桂醛脂质体的工艺条件，我们发现采用70%的乙 醇浓度，以3mL/min的速度注入并保持30℃的制备温度，可以获得形态最佳、包 封率最高的肉桂醛脂质体。此方法操作简便、稳定可靠，有望为制备肉桂醛脂质 体提供实用的参考。未来研究方向可以围绕进一步优化脂质体的性能参数以及研 究其在药物输送系统中的应用等方面展开。
参考内容二
种使用pH梯度法制备阿霉素脂质体的方法。该方法利用不 同pH值条件下药物的溶解度和脂质体的稳定性差异，实现药物的高效包封和脂质 体的稳定制备。本制备方法具有操作简单、重现性好、包封率高、药物泄漏少等 优点，为阿霉素的临床应用提供了新的制剂形式。
引言：
阿霉素是一种广谱抗肿瘤药物，被广泛应用于各种癌症的治疗。然而，阿霉 素的毒副作用和低细胞内渗透性限制了其临床应用效果。脂质体作为一种药物载 体，具有降低药物毒副作用、提高药物疗效、提高药物细胞内渗透性等优点。
2、粒径与电位
通过激光粒度仪测定脂质体的粒径和电位。结果表明，制备的脂质体粒径分 布较窄，平均粒径在100nm左右，且电位在-50mV左右。这些指标表明制备的脂质 体具有良好的稳定性。
3、稳定性
将制备的阿霉素脂质体在不同时间点进行离心和储存试验。结果表明，制备 的脂质体具有良好的稳定性，即使在离心和储存条件下仍能保持良好的包裹效果。 这为阿霉素的临床应用提供了新的制剂形式。
2、注入速度对制备的影响
我们分别采用1mL/min，2mL/min，3mL/min和4mL/min的注入速度进行实验。 结果显示，当注入速度为3mL/min时，肉桂醛脂质体的形态最佳且包封率最高。 这可能是因为过快的注入速度会使磷脂分子来不及充分溶解，而过慢的注入速度 则会导致制备时间过长。
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实验十脂质体的制备及包封率的测定一、实验目的1．掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺。
2．掌握用阳离子交换树脂法测定脂质体包封率的方法。
3．熟悉脂质体形成原理，作用特点。
4．了解“主动载药”与“被动载药”的概念。
二、实验指导脂质体是由磷脂与（或不）与附加剂为骨架膜材制成的具有双分子层结构的封闭囊状体。
常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团，将适量的磷脂加至水或缓冲溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此相对缔和为双分子层，构成脂质体。
用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂、卵磷脂等；合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。
常用的附加剂为胆固醇。
胆固醇也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制得稳定的脂质体，其作用是调节双分子层的流动性，减低脂质体膜的通透性。
其他附加剂有十八胺、磷脂酸等，这两种附加剂能改变脂质体表面的电荷性质，从而改变脂质体的包封率、体内外其他参数。
脂质体可分为三类：小单室（层）脂质体，粒径为20~50nm，经超声波处理的脂质体，绝大部分为小单室脂质体；多室（层）脂质体，粒径约为400~3500nm，显微镜下可观察到尤如洋葱断面或人手指纹的多层结构；大单室脂质体，粒径约为200~1000nm，用乙醚注入法制备的脂质体多为这一类。
脂质体的制法有多种，根据药物的性质或需要进行选择。
（1）薄膜分散法：这是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声处理后得到小单室脂质体。
此法优点是操作简便，脂质体结构典型，但包封率较低。
（2）注入法：有乙醚注入法和乙醇注入法等。
“乙醚注入法”是将磷脂等膜材料溶于乙醚中，在搅拌下慢慢滴于55~65℃含药或不含药的水性介质中，蒸去乙醚，继续搅拌1~2h，即可形成脂质体。
（3）逆相蒸发法：系将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂，如氯仿中，再按一定比例与含药的缓冲液混合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。
该法适合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的脂质体制备，可提高包封率。
（4）冷冻干燥法：适于在水中不稳定药物脂质体的制备。
（5）熔融法：采用此法制备的多相脂质体，其物理稳定性好，可加热灭菌。
在制备含药脂质体时，根据药物装载的机理不同，可分为“主动载药”与“被动载药”两大类。
所谓“主动载药”，即通过内外水相的不同离子或化合物梯度进行载药，主要有K+-Na+梯度和H+梯度(即pH梯度)等。
传统上，人们采用最多的方法是“被动载药”法。
所谓“被动载药”，即首先将药物溶于水相或有机相(脂溶性药物) 中，然后按所选择的脂质体制备方法制备含药脂质体，其共同特点是：在装载过程中脂质体的内外水相或双分子层膜上的药物浓度基本一致，决定其包封率的因素为药物与磷脂膜的作用力、膜材的组成、脂质体的内水相体积、脂质体数目及药脂比(药物与磷脂膜材比)等。
对于脂溶性的、与磷脂膜亲和力高的药物，“被动载药”法较为适用。
而对于两亲性药物，其油水分配系数受介质的pH值和离子强度的影响较大，包封条件的较小变化，就有可能使包封率有较大的变化。
评价脂质体质量的指标有粒径、粒径分布和包封率等。
其中脂质体的包封率是衡量脂质体内在质量的一个重要指标。
常见的包封率测定方法有分子筛法、超速离心法、超滤法等。
本文采用阳离子交换树脂法测定包封率。
“阳离子交换树脂法”是利用离子交换作用，将荷正电的未包进脂质体中的药物（即游离药物），如本实验中的游离的小檗碱，被阳离子交换树脂吸附除去。
而包封于脂质体中的药物（如小檗碱），由于脂质体荷负电荷，不能被阳离子交换树脂吸附，从而达到分离目的，用以测定包封率。
三、实验内容和操作（一）空白脂质体的制备1．处方注射用豆磷脂 0.9g胆固醇 0.3g无水乙醇 1~2ml磷酸盐缓冲液适量制成30ml脂质体2.操作（1）磷酸盐缓冲液（PBS）的配制：称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）0.37g与磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)2.0g,加蒸馏水适量,溶解并稀释至1000ml(pPH约为5.7)。
（2）称取处方量磷脂、胆固醇于50ml小烧杯中，加无水乙醇1～2ml，置于65～70℃水浴中，搅拌使溶解，旋转该小烧杯使磷脂的乙醇液在杯壁上成膜，用吸耳球轻吹风，将乙醇挥去。
（3）另取磷酸盐缓冲液30ml于小烧杯中，同置于65～70℃水浴中，保温，待用。
（4）取预热的磷酸盐缓冲液30ml，加至含有磷脂和胆固醇脂质膜的小烧杯中， 65～70℃水浴中搅拌水化10min。
随后将小烧杯置于磁力搅拌器上，室温，搅拌30～60min，如果溶液体积减少，可补加水至30ml，混匀，即得。
（5）取样，在油镜下观察脂质体的形态，画出所见脂质体结构，记录最多和最大的脂质体的粒径；随后将所得脂质体溶液通过0.8μm微孔滤膜两遍，进行整粒，再于油镜下观察脂质体的形态，画出所见脂质体结构，记录最多和最大的脂质体的粒径。
3.操作注意（1）在整个实验过程中禁止用火。
（2）磷脂和胆固醇的乙醇溶液应澄清，不能在水浴中放置过长时间。
（3）磷脂、胆固醇形成的薄膜应尽量薄。
(4) 60～65℃水浴中搅拌水化10min时，一定要充分保证所有脂质水化，不得存在脂质块。
（二）被动载药法制备盐酸小檗碱脂质体1. 处方注射用豆磷脂 0.6g胆固醇 0.2g无水乙醇 1～2ml盐酸小檗碱溶液(1mg/ml) 30ml制成30ml脂质体2. 操作（1）盐酸小檗碱溶液的配制：称取适量的盐酸小檗碱溶液，用磷酸盐缓冲液配成1mg/ml和3mg/ml的两种浓度的溶液。
（2）盐酸小檗碱脂质体的制备按处方量称取豆磷脂、胆固醇置50ml的小烧杯中，加无水乙醇1～2ml，余下操作除将磷酸盐缓冲液换成盐酸小檗碱溶液外，同"空白脂质体制备" ，即为"被动载药" 法制备的小檗碱脂质体。
3．操作注意：同前。
（三）主动载药法制备盐酸小檗碱脂质体1.柠檬酸缓冲液：称取柠檬酸10.5g和柠檬酸钠7g置于1000ml量瓶中，加水溶解并稀释至1000ml，混匀，即得。
2.NaHCO3溶液：称取NaHCO350g，置于1000ml量瓶中，加水溶解并稀释至1000ml，混匀，即得。
3.空白脂质体制备：称取磷脂0.9g和胆固醇0.3g，置于50ml或100ml烧杯中，加2ml无水乙醇，于65～70℃水浴中溶解并挥散乙醇，于烧杯上成膜后，加入同温的柠檬酸缓冲液30ml，65～70℃水浴中搅拌水化10分钟，随后将烧杯取出，置于电磁搅拌器上，在室温下搅拌30～60分钟，充分水化，补加蒸馏水至30ml，所得脂质体溶液通过0.8μm 微孔滤膜两遍，进行整粒。
4.主动载药：准确量取空白脂质体2ml、药液(3mg/ml) 1ml、NaHCO3溶液0.5ml，在振摇下依次加于10ml西林瓶中，混匀，70℃水浴中保温20分钟，随后立即用冷水降温，即得。
5.操作注意：(1) "主动载药" 过程中，加药顺序一定不能颠倒，加三种液体时，随加随摇，确保混合均匀，保证体系中各部位的梯度一致。
(2) 水浴保温时，也应注意随时轻摇，只需保证体系均匀即可，无需剧烈摇。
(3) 用冷水冷却过程中，也应轻摇。
(四)盐酸小檗碱脂质体包封率的测定1. 阳离子交换树脂分离柱的制备：称取已处理好的阳离子交换树脂适量，装于底部已垫有少量玻璃棉的5ml注射器筒中，加入PBS水化阳离子交换树脂，自然滴尽PBS，即得。
2. 柱分离度的考察：（1）盐酸小檗碱与空白脂质体混合液的制备：精密量取3mg/ml盐酸小檗碱溶液0.1ml,置小试管中，加入0.2ml空白脂质体，混匀，即得。
（2）对照品溶液的制备：取（1）中制得的混合液0.1ml置10ml量瓶中，加入95%乙醇6ml,振摇使之溶解，再加PBS至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液，取续滤液4ml于10ml量瓶中，加PBS至刻度，摇匀，得对照品溶液。
（3） 样品溶液的制备：取（1）中制得的混合液0.1ml 至分离柱顶部，待柱顶部的液体消失后，放置5分钟，仔细加入PBS （注意不能将柱顶部离子交换树脂冲散），进行洗脱（约需2～3mlPBS ）,同时收集洗脱液于10ml 量瓶中，加入95%乙醇6ml ，振摇使之溶解，再加PBS 至刻度，摇匀，过滤，弃取初滤液，取续滤液为样品溶液。
（4） 空白溶媒的配制：取乙醇（95%）30ml ，置50ml 量瓶中，加PBS 至刻度，摇匀，即得。
（5） 吸收度的测定：以空白溶媒为对照，在345nm 波长处分别测定样品溶液与对照品溶液的吸收度，计算柱分离度。
分离度要求大于0.9552A A1⋅⨯-=对样柱分离度式中A 样-样品溶液的吸收度，A 对-对照品溶液的吸收度，2.5-对照品溶液的稀释倍数。
3. 包封率的测定精密量取盐酸小檗碱脂质体0.1ml 两份，一份置10ml 量瓶中，按柱分离度考察项下（2）进行操作，另一份置于分离柱顶部，按"柱分离度考察"项下（3）进行操作，所得溶液于345nm 波长处测定吸收度，按下式计算包封率。
()%100A A%T L ⨯=包封率式中A L -通过分离柱后收集脂质体中盐酸小檗碱的吸收度，A T -盐酸小檗碱脂质体中总的药物吸收度。
四、 实验结果与结论1. 绘制显微镜下脂质体的形态图，从形态上看，"脂质体"、"乳剂"及"微囊"有何差别。
2. 记录显微镜下可测定的脂质体的粒径。
最大粒径（μm ）最多粒径（μm ）3. 计算柱分离度与包封率。
4. 以包封率为指标，对"主动载药" 与"被动载药" 法制备的盐酸小檗碱脂质体评价方法的优劣。
五、思考题1．以脂质体作为药物载体的机理和特点。
讨论影响脂质体形成的因素。
2．如何提高脂质体对药物的包封率？3．包封率测定方法如何选择？本文所用的方法与"分子筛法"、"超速离心法"相比，有何优缺点？4．设计一个有关脂质体的实验方案如何？本实验方案还有哪些方面有待改进？（邓意辉）。