葡萄球菌属检验
球菌的培养与鉴定(实验)
链球菌属
（一）菌落特征（血琼脂平板） • 肺炎链球菌
– 灰色，较小， α溶血，“脐窝”状凹陷，有荚膜菌株可 成粘液样
• 化脓性链球菌（A群）
– 灰白色，较小，半透明，无/有光泽，周围有较大的β 溶血环
• 无乳链球菌（B群）
– 灰白色，较A群大，平坦，有光泽，不透明，周围有狭 窄的β溶血环
蕈糖 乳糖 麦芽糖 蔗糖 甘露糖
四、操作步骤
（2）肺炎链球菌
Optochin敏感试验 胆汁溶菌试验（有对照）
（3）化脓性链球菌与无乳链球菌
杆菌肽敏感试验 CAMP试验
四、操作步骤
（4）粪肠球菌
触酶试验 65g/LNaCl 胆汁-七叶苷试验 精氨酸双水解酶试验（有对照管） 甘露醇 山梨醇 阿拉伯糖 棉子糖
球菌的培养与鉴定
苏州大学附属第二医院 刘婷婷
1
实验目的
2
实验内容
3
实验材料
4
操作步骤
5
实验结果
一、实验目的
• 掌握葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属的 菌落特点、染色形态及鉴别实验；
• 了解其它球菌的菌落特点、染色形态及鉴 别。
二、实验内容
葡萄球菌属
金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌
链球菌属
肺炎链球菌 化脓性链球菌 无乳链球菌
3 结果
在两种细菌划线交界处出现箭头状透明溶血环区 为阳性，否则为阴性。
CAMP试验
链球菌属
2、肺炎链球菌
Optochin敏感试验：＋ 胆汁溶菌试验：＋ 荚膜肿胀试验：＋ 分解菊糖
Optochin敏感试验
1 原理
Optochin能干扰肺炎链球菌叶酸合成，抑制 细菌生长，故肺炎链球菌对其敏感。
金黄色葡萄球菌的致病性及检测技术
谢谢观看！
此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
检测与诊断
标本采集
采自不同感染部位的各种标本，包括血液、脑脊液、穿刺液；痰液、脓液、创伤分 泌物、尿液、粪便和呕吐物等。
直接涂片镜检
直接涂片检查在正常情况下呈无菌状态的体液标本如血液、脑脊液、穿刺液等，若有 检出革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列、无芽胞、荚膜，直径0.5-1μm的球菌。即具有 重要的临床价值。
显色培养基A计数法：稀释好的菌液0.2 mL涂布接种培养基平板上，36℃±1℃培养24 h， 按说明书判读，可疑菌落做补充实验（血浆凝固酶试验，目标菌落血浆凝固酶试验为阳 性）。 显色培养基B计数法：稀释好的菌液0.2 mL涂布接种培养基平板上，36℃±1℃培养24 h， 按说明书判读，可疑菌落做补充实验（滴加1 mol/L盐酸，目标菌落有透明圈）。
鉴别实验
一、血浆凝固酶试验
血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的，与其致病力有关的一种侵袭性酶，其作用 是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬。 血浆凝固酶分为结合型和游离型。前者结合在细菌的细胞壁上，能直接作用于血浆中的 纤维蛋白原，使之转化为纤维蛋白，环绕菌体而形成凝块。而游离型血浆凝固酶则在产 生后被分泌到菌体外，不能直接作用于纤维蛋白原，但可以激活血浆凝血酶原，使之转 化成凝血酶，后者再作用于纤维蛋白原使其转化为纤维蛋白。 具体的测量方法也因此分为玻片法和试管法两种。
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺 血和坏死 b.杀死白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞
c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌 体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关
实验 葡萄球菌属和链球
（一）菌落特点、菌体形态及染色性
1.葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
2.链球菌
肺炎链球菌
3.肠球菌
三步骤和方法
革兰氏阳 性球菌鉴 定流程
1 触酶 2 O/F 3胆盐溶菌
4凝固酶
5新生霉素
6杆菌肽
7CAMP 四
（二）鉴定相关试验
1.触酶试验
2.凝固酶试验
3.甘露醇发酵试验
原理：致病性葡萄球菌多能发酵甘露醇产酸， 使培养基由紫色变为黄色。
4.新生霉素敏感性
5. Optochin敏感试验
原理： Optochin可抑制肺炎链球菌的生长。 结果判定：抑菌圈直径≥14mm为阳性。反 之阴性。
6. 胆汁七叶苷实验
方法：待测菌接种胆汁-七叶苷琼脂培养基， 35度孵育18-24h。 结果：细菌生长，培养基变黑色为阳性，不变 色为阴性。
实验 葡萄球菌属、链球菌属 和肠球菌属的培养和鉴定
临床病原生物学教研室
一目的要求
1. 熟悉葡萄球菌、链球菌和肠球菌的菌落 特点、菌体形态及染色性。 2. 掌握葡萄球菌、链球菌和肠球菌的分离 培养、鉴定方法和常用鉴定实验。
二器材和试剂
1.菌种 金葡、表葡、腐生，甲、乙、丙链 、肺链和肠球菌等。 2.培养基 普通培养基、血平板等。 3.试剂 3%过氧化氢、去氧胆酸钠、新鲜血 浆和细菌微量生化培养管等。 4.其他 新生霉素、杆菌肽 、Optochin纸片、 生理盐水、载玻片等。
7. 65g/LNaCL生长试验
方法：将肠球菌接种于高盐肉汤培养基中， 孵育18-24h。 结果：有细菌生长为阳性，不生长为阴性。
四注意事项
1.触酶试验不宜用血平板上的菌落，会出现 假阳性，陈旧培养物会丢失触酶活性而又出 现假阴性。因此每次试验应做阴(链球菌)阳 (金葡)对照。 2.凝固酶试验玻片法应注意控制好时间， 10S内观察结果，且必须制备浓厚的菌悬液。
细菌鉴定册
真菌酵母样真菌生化编码TH-15C·鉴定系统细菌名称Candida albicansl.白色念珠菌1·Cr.1aurentii 罗伦隐球菌ea.albieans2 白色念珠菌2 Cr.neofomans 新型隐球菌Ca..boidinii .鲍狄尼念珠菌Cr.terreUs 地生隐球菌&.cife.rrii 西弗念珠菌Cr.uniguttulatus 指甲隐球菌Ca.colliculosa 软念珠菌Geot6chum capitatum 头状地霉Ca.dubliniensis 督贝里念珠菌Ge.penicillamm 帚状地霉Ca.famata 法码念珠菌Hansenula polymorpha 多形汉逊酵母Ca.glabrata 光滑念珠菌,Kloeckera spp .克勒克氏酵母种类Ca.guilliermondii 季也蒙念珠菌(高里氏)Pichia ohmeri 噢么毕赤酵母Ca.kefyr 高加索乳念珠菌Prototheca wickerhamii 威克原壁酵母Ca.krusei/inconspicua克柔氏/平常念珠菌Rhglutinis 粘红红色酵母Ca.1usitaniae 葡萄牙念珠菌Rh.mucilaginosal 胶粘红酵母1Ca.ma_g oliae 木篮念珠菌Rh.mucilaginosa2 胶粘红酵母2Ca.norvegensis 挪威念珠菌Rh.minuta 小红酵母.Ca.parapsilosis 近平滑念珠菌(副秃发) Saccharomyces cerevisiael酿酒酵母1Ca.pellicuk~a 产膜念珠菌- Sa.cerevisiae2 酿酒酵母2Ca.rugosa 皱落念珠菌(皱褶) Sporobolomyces salmonicolor赭色掷孢酵母Ca.sphaeficai 球形念珠菌1 Trichospron.asahii 阿萨丝孢酵母Ca.sphaerica2 球形念珠菌2 Tr.inkin 因凯丝孢酵母Ca.tropi~alis 热带念珠菌Tr.mucoides 似粘丝孢酵母Ca.utilis (效用念珠菌)Ca.zeylanoides 桶形念珠菌(廷沫) .Cr.albidus 白色隐球菌Cr.humicolus 土生隐球菌酵母样真菌生化编码鉴定系列TH-15C使用说明一、检验程序:(一)形态致病性酵母样真菌系一群呈酵母样菌落的单细胞芽生真菌。
金黄色葡萄球菌MPN计数法结果不确定度评定
金黄色葡萄球菌MPN计数法结果不确定度评定1 金黄色葡萄球菌（Staphylococus aureus)是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococ-cus），革兰阳性菌，有“嗜肉菌”的别称，是人类化脓感染中最重要的致原菌”，也是评价食品卫生安全的重要指标之一。
“测量不确定度”术语，在20世纪70年代初开始逐渐在测量领域广泛应用），目前CNAS、APLAC、EURACHEM/EA都有微生物领域的有关测量不确定度政策。
CNAS-CL07：20l1《测量不确定度的要求》8.2中规定，检测实验室应有能力对每一项有数值要求的测量结果进行测量不确定度评估。
本文依据JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》和GB 4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》，对1份样品的15次重复测量结果作不确定度评定。
2数学模型和不确定度来源2.1不确定度评定原理测量不确定度：根据所用到的信息，表征赋予被测量值分散性的非负参数。
由多个分量组成，其中一些分量由可用测量列结果的统计分布估算，并用实验标准差表征。
另一些分量则可用基于经验或其他信息的假定概率分布估算，也可用标准差表征。
2.2数学模型A=T/m式中，A——样品中金黄色葡萄球菌MPN数；T——某一稀释度被确认的金黄色葡萄球菌阳性管数；m——被确认阳性管对应的样品重量，g。
因为典型菌落确认（血浆凝固酶试验）为定性试验，所以在数学模型中不予考虑。
2.3不确定度分量的来源测量中可能导致不确定度的来源一般有：取样、样品量、样品种类，目标微生物在样品中分布、样品中含有的微生物数量水平、样品稳定性、信比稀释、读数等”。
和一般测量相比较，样品中微生物测量的结果特点是发散性极大，因此本文对金黄色葡萄球菌MPN计数法结果不确定度评定中，着重从检测仪器设备和检测结果重复性两方面考虑。
3不确定度评定3.1样品称量过程中产生的不确定度（B类不确定度）u rel（m）本实验按照GB4789.1-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验总则》要求，无菌条件操作。
金黄色葡萄球菌
禁忌：尚不明确
请检单
品名 开塞露 批号 141003
规格/包装规 格 批准文号
检查单位 请检目的 备注
10ml/瓶
国药准字 H44023815
数量
请检日期
资料来源：2010年版《中国药典》第二部附录 XI J 微生物限度检查法P107
局部给药制剂的途径和剂型
★不经胃肠道给药的剂型
（1）注射给药 如静脉注射、肌内注射、皮下注射和皮内注 射等。
（2）呼吸道给药 如吸入剂、喷雾剂、气雾剂等。
（3）皮肤给药 如外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、糊剂、 贴剂等。 （4）粘膜给药 如滴眼剂、滴鼻剂、含漱剂、舌下片剂、栓 剂、膜剂等。一般把直肠给药也归于粘膜给药一类，如灌肠 剂、栓剂、直肠用胶囊栓等。
甘露醇高盐琼脂平板
纯培养
营养琼脂斜面
培养温度： 36±1℃ 培养时间：24~72h
革兰氏染色镜检
血浆凝固酶试验
报告
供 试 液 的 制 备
用量筒量取无菌水 90ml于空瓶中
取样品10ml加入
供 试 液Байду номын сангаас
用玻璃棒搅拌，使 混合均匀
增菌
供试液 缓冲液 培养温度：36±1℃ 培养时间：18~24h 必要时可延至48h 阴性对照应无菌生长 营养 肉汤 营养 肉汤 营养 肉汤
英文名称：Glyceine
汉语拼音：Kaisailu
Enema
成份：本品每支含主要成份甘油52.8-58.3%。
辅料为：纯化水 性状：本品为无色、澄清的粘稠液体 作用类别：本品为缓解泻药类非处方药药品 适应症：用于便秘
bp培养基鉴别金色葡萄球菌的原理
bp培养基鉴别金色葡萄球菌的原理以bp培养基鉴别金色葡萄球菌的原理为标题金色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的致病菌，可以引起多种感染，包括皮肤感染、呼吸道感染和血液感染等。
因此，准确鉴定金色葡萄球菌对于临床医学和公共卫生具有重要意义。
BP培养基（Baird-Parker agar）是一种常用的选择性培养基，用于鉴别金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和其他葡萄球菌属菌株。
下面将介绍BP培养基鉴别金色葡萄球菌的原理。
BP培养基的组成中含有选择性物质和指示剂，能够抑制大多数细菌的生长，同时使金色葡萄球菌菌落呈现特殊的形态和颜色。
BP培养基中的选择性物质是亚硒酸钠（sodium selenite）和苯甲酸（phenylalanine），它们能够抑制大多数菌落的生长，但对金色葡萄球菌菌落的生长没有明显抑制作用。
BP培养基中的指示剂是酚红（phenol red），它能够在菌落中显示出特殊的颜色变化。
在BP培养基上，金色葡萄球菌形成的菌落呈现为典型的黑色或暗褐色，而其他葡萄球菌属菌株通常形成的菌落颜色较浅，无明显的黑色或暗褐色。
这是因为金色葡萄球菌能够产生酚酞酶（phenol-soluble modulins，PSMs），该酶能够将BP培养基中的苯甲酸氧化为苯酚，进而与酚红反应产生黑色或暗褐色的化合物。
而其他葡萄球菌属菌株没有或只产生少量酚酞酶，所以无法将苯甲酸氧化为苯酚，菌落颜色较浅。
BP培养基还能够利用金色葡萄球菌的凝集素（clumping factor）来鉴别。
金色葡萄球菌的凝集素能够与培养基中的凝集素抑制剂反应，使得金色葡萄球菌菌落周围形成边缘模糊的透明带，而其他葡萄球菌属菌株则不会产生这种现象。
通过上述原理，BP培养基能够有效鉴别金色葡萄球菌和其他葡萄球菌属菌株。
在实验室中，可以将待检菌种接种于BP培养基上进行培养，经过一定时间后观察菌落的颜色和形态，以及边缘透明带的形成情况，就可以初步判断菌株是否为金色葡萄球菌。
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定病原菌的鉴定是将一个未知菌株按其生物学特征，经过与所有已知菌种进行比较后到一个已知菌种的分析过程。
根据感染特性选择合适的培养基，首先要明确被鉴定菌种已获得纯培养。
然后确定革兰氏染色性、形态，再按科、属、种逐步鉴定下来。
应该利用已具备的条件，尽可能地缩小鉴定范围，这是在作实验设计时必须想到的，要用最小数量的试验方法作出鉴定。
基于鉴定菌的特点，选用合适的鉴定体系，力求方法学简单，反应判断明确，价廉的方法。
血清学鉴定由于操作简便、快速、特异性高，给细菌学鉴定提供了快速诊断方法。
对培养困难的病原菌，可考虑应用基因水平的鉴定技术。
最后还要提示，对检测人员应把知识和经验运用到每一鉴定步骤。
【球菌】球菌主要引起化脓性炎症，故又称化脓性球菌。
包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌及淋病奈瑟菌等，根据革兰氏染色可将其分为两类，均无鞭毛和芽孢，少数可形成荚膜。
本实验要求了解化脓性球菌的形态特征及染色性、链球菌溶血素“O”试验；葡萄球菌、链球菌及奈瑟球菌的检验程序和主要的鉴定方法；肺炎链球菌Op—tochin敏感试验。
一、葡萄球菌属葡萄球菌属(Staphylococcus)的细菌常堆聚成葡萄串状。
能引起皮肤粘膜、多种组织器官的化脓性炎症，是最常见的化脓性球菌。
有的菌株还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征等，又是医院内交叉感染的重要传染源。
近年来，耐药性菌株逐年增多。
临床上首先要与其他革兰氏阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定及致病性的检测。
[材料]1．菌种：葡萄球菌培养物。
2．培养基：血琼脂平板，普通琼脂平板，甘露醇发酵管，氧化、发酵(OF)管，甲苯胺蓝核酸琼脂。
3．试剂：兔血浆、3％H2O2、致敏胶乳／红细胞制剂。
4．其他：革兰氏染液、玻片、一次性卡片。
[方法]1．形态学观察：取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许，涂片，革兰氏染色，镜检。
可见到葡萄状排列的革兰氏阳性球菌。
实验七--食品中金黄色葡萄球菌的检验
实验七食品中金黄色葡萄球菌的检验一、实验目的要求1、了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。
2、掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。
3、掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。
4、掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。
二、原理葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。
金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。
可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。
如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。
金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。
这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。
三、试剂和仪器（一）最先准备的器材规格名称数量用途1、500ml广口瓶1个稀释样品2、500ml三角瓶1个制生理盐水3、250ml三角瓶3个制培养基等4、10×100mm试管6支血浆凝固酶试验5、1ml移液管2支6、10ml移液管 2 支7、直径为90 mm平皿12套制血平板B-P平板8、250ml量筒1支（二）应灭菌的其它器材剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量（三）应制备的培养基培养基总量所用容器1.无菌水50ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用）2.0.85%生理盐水70ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用）3.0.85%生理盐225ml/瓶1瓶500ml三角瓶4.7.5%NaCl肉汤50ml/瓶1瓶250ml三角瓶5.普通营养琼脂100ml/瓶1瓶250ml三角瓶6.B—P培养基95ml/瓶1瓶250ml三角瓶7.兔血液5ml四、实验内容（一）、增菌培养法样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→血浆凝固酶试验鉴别→→结果报告第一天样品处理和增菌培养（一）、样品处理固体或半固体食品：以无菌操作称取25g样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均质杯内，于8000r/min均质1～2min，制成1:10样品匀液。
球菌鉴定思路
常见革兰阳性球菌鉴别
葡萄球菌属
鉴定及鉴别要点
1、葡萄球菌属与微球菌属的鉴别：
葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小；而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，并且菌体较大。
2、葡萄球菌属与链球菌属的鉴别：葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，触酶试验阳性；链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。
表葡萄球菌属与微球菌科其他菌属的鉴别
注：各表中的d 为反应不定。
表常见葡萄球菌的鉴别
链球菌属
触酶试验阴性，分解葡萄糖产酸不产气，除肺炎链球菌外，链球菌不分解菊糖。
鉴定
杆菌肽敏感试验：95%以上的化脓性链球菌对杆菌肽（每纸片含0.04单位）敏感，抑菌环≥10毫米为敏感。
CAMP试验：无乳链球菌CAMP试验为阳性，其它链球菌为阴性。
Optochin敏感试验：几乎所有的肺炎链球菌都对Optochin敏感。
抑菌环≥18毫米为敏感。
β-溶血性链球菌的主要生物学特性见表
表β-溶血性链球菌的主要生物学特性
注：PYR：L-吡咯烷酮-萘酰胺水解。
d：为反应不定。
非β-溶血性链球菌的主要生物学特性见表
肠球菌属：肠球菌属细菌γ或α溶血，触酶试验一般为阴性，有些菌株可产生假阳性。
本属细菌的主要生化特征及鉴别见表表肠球菌属常见菌种的生化特征。
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1．概述
葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35 个种，17 个亚种。
金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。
2. 标本类型
血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3. 鉴定
3.1 形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。
3.2 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。
在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。
表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。
3.3 生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。
3.4 鉴别要点
3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。
金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。
3.4.2 与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F 试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。
3.4.3 与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡
萄糖O/F 试验为氧化型，触酶试验阴性。
3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。
表1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验
菌名凝固
溶血
硝酸
盐
海藻
糖
半乳糖
苷酶酶
触酶
金黄色葡萄球菌金黄色亚
种
+++++-
金黄色葡萄球菌厌氧亚种+-+---
施氏葡萄球菌聚集亚种++++-ND
中间葡萄球菌
++d+++
海豚葡萄球菌++++ND
S.lutrae++++++
猪葡萄球菌d+-++-
注：“+”为90%以上菌株为阳性，“- ”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND” 为无资料。
3.5 操作步骤
3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。
3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。
3.5.3 凝固酶试验参见《凝固酶试验标准操作规程》。
3.5.4 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4. 药敏
参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20 最新版本文件。
5. 质量控制
参见《质量管理程序》。
6. 检验结果解释与分析
6.1 由于葡萄球菌分布广泛，从临床标本中分离到金黄色葡萄球菌时，将其定为致病菌时应慎重。
应根据凝固酶试验进一步确认。
对可疑菌株的鉴定，最好利用商品化的鉴定系统根据生化图谱进行确定。
表皮葡萄球菌分离自导管相关血流感染时，通常视为致病菌。
溶血性葡萄球菌从泌尿感染病人分离得到时，尤其是细菌量较大或作为优势菌时，通常被视为致病菌。
6.2 甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRS）A 对多种广谱强效抗菌药物呈多重耐药性。
如果检测出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株则报告耐所有青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类和?- 内酰胺药/?- 内酰胺酶抑制剂类抗生素，对氨基糖苷类和大环内酯类抗生素常协同耐药。
若葡萄球菌属对四环素敏感，则对多西环素和米诺环素敏感。
某些菌对四环素中介或耐药，而对多西环素和米诺环素敏感。
临床感染葡萄球菌的病人用喹诺酮类治疗3-4 日后，原来敏感的葡萄球菌易产生耐药。
所以对这类葡萄球菌需多次反复进行药敏试验。
大环内酯类
耐药葡萄球菌包括固有耐药和诱导耐药。
所以临床试验室须进行“
D ”试验以检测克林霉素
诱导性耐药，根据“ D ”试验结果来报告克林霉素的耐药性。
7. 临床意义
葡萄球菌属在自然界分布很广。
存在于空气、水、尘埃及皮肤上的葡萄球菌大多数无致 病性。
金黄色葡萄球菌主要引起局部组织的化脓性感染（疖、痈和创伤感染） 、菌血症、心 内膜炎等全身感染等，也可引起骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎和深部脓肿等。
腐生葡萄球 菌引起尿道感染、前列腺炎、外伤和菌血症等。
溶血葡萄球菌引起心内膜炎、菌血症、腹 膜炎、尿道感染、外伤、骨折和关节炎等。
MRSA 的治疗：轻度感染可选用 SMZ-TMP 和喹诺酮类，严重全身感染选用万古霉素或其 他糖肽类药物。
8. 鉴定流程
菌落观察：金黄色、黄色或白色，溶
[1] 中国合格评定国家认可委触员酶会试验.C 阳NAS-GL23:2008 医学实验室质量和能力认可准则在临
2006 [4] Murray PR. Manual of Cinical Microbilogy. 9th ed.Washington:ASM Press,2007
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施氏葡萄球菌聚集亚
[3] 叶应妩，王毓三，申子瑜主
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[5] ISO 15189。