肉牛溶血性大肠埃希菌分离鉴定和毒力与耐药基因检测及药敏试验

作者简介：朱利霞（１９９１－ ），女，河南周口 人，硕 士 研 究 生，主 要 从 事 中 西 药 物 防 治 动 物 疾 病 研 究。 王 洪 彬 （１９９２－ ）， 男 ，河 南 周 口 人 ，硕 士 研 究 生 ，主 要 从 事 动 物 病 原 微 生 物 与 免 疫 学 研 究 。 △ 同 等 贡 献 作 者 。 通 讯 作 者
收 稿 日 期 ：２０１８０７２４ 基金项目：河北省教育厅项目（ＳＬＲＣ２０１７０３７）；河北省高层次人才 资 助 项 目 （Ａ２０１６００５０４６）；河 北 省 第 三 批 巨 人 计 划中
草 药 防 治 畜 禽 水 产 养 殖 动 物 传 染 病 科 研 创 新 团 队 项 目 ；石 家 庄 市 科 技 局 项 目 （１７１５００９５３Ａ）
大肠埃希 菌 广 泛 存 在 于 自 然 环 境 中，是 重 要 的 人兽共患条件性致病菌［１］。在 某 些 条 件 下 该 菌 可 诱 发肠道外感染，一 些 致 病 力 强 的 溶 血 性 大 肠 埃 希 菌 还可引起 败 血 症，严 重 威 胁 着 人 类 和 动 物 的 健 康。 对于养牛业来说，大肠埃希菌威胁着各 年龄段 的牛， 以犊牛发 病 率 和 病 死 率 最 高 。 ［２３］ 大 肠 埃 希 菌 的 毒 力基因主要包 括 黏 附 素 和 肠 毒 素 两 大 类，高 致 病 性 毒力 岛 （ｈｉｇｈｌｙｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｓｌａｎｄ，ＨＰＩ）是 大 肠 埃 希 菌的重 要 毒 力 因 子，ｉｒｐ２ 和 ｆｙｕＡ 是 构 成 ＨＰＩ的 ２ 个重 要 毒 力 基 因，也 是 检 测 ＨＰＩ 的 标 志 基 因 。 ［４５］ 随着抗菌药物 在 肉 牛 养 殖 中 的 滥 用 和 泛 用，大 肠 埃 希菌耐药谱也在增大，多重耐药菌株 的增加，导 致耐 药现象更加普 遍；菌 株 自 身 携 带 的 毒 力 基 因 和 耐 药 基因与病原菌的致病性和 耐 药 性 有 直 接 的 关 系 。 ［６７］ 因此，对这两类基因进行筛查，可以很好 地评估大肠 埃希菌的致病 能 力。 基 于 此，本 研 究 从 采 集 自 河 北 省围场县某５个肉牛养殖场的 １１６ 份健 康肉牛的鼻 腔拭子进行了 溶 血 性 大 肠 埃 希 菌 的 分 离，并 对 分 离
动 物 医 学 进 展 ，２０１９，４０（７）：１２８１３３ ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
檲檲檲檲殘 兽医临床
檲殘
檲檲檲檲殘
檲殘
肉牛溶血性大肠埃希菌分离鉴定和毒力与耐药基因检测及药敏试验
朱利霞△ ，王洪彬△ ，赵希艳，高光平 ，史秋梅
（河北科技师范学院／河北省预防兽医学重点实验室，河北秦皇岛 ０６６６０４）
性大肠埃希菌对肉牛养殖存在潜在威胁。
关 键 词 ：肉 牛 ；溶 血 性 大 肠 埃 希 菌 ；毒 力 基 因 ；耐 药 基 因 ；药 物 敏 感 性 分 析
中 图 分 类 号 ：Ｓ８５２．６１２；Ｓ８５２８．２３
文 献 标 识 码 ：Ｂ
文 章 编 号 ：１００７５０３８（２０１９）０７０１２８０６
菌株进行了毒力基因和耐药基因的检测以及药物敏 感性分析，旨在 了 解 河 北 围 场 县 肉 牛 溶 血 性 大 肠 埃 希 菌 的 流 行 情 况 ，为 其 引 发 的 疾 病 防 控 提 供 参 考 。
１ 材 料 与 方 法
１．１ 材 料 １．１．１ 菌株 来 源 菌 株 分 离 自 河 北 省 围 场 县 某 ５ 个 肉 牛 养 殖 场 的 牛 鼻 腔 拭 子 样 品 １１６ 份 。 １．１．２ 主 要 试 剂 营 养 琼 脂 （ＮＡ）、营 养 肉 汤 （ＮＢ），购自 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司；麦 康 凯 琼 脂、伊红美蓝琼 脂，购 自 天 津 市 珠 江 卫 生 材 料 厂；药 敏纸片，购自杭州天和微生物试 剂有 限公 司；细菌 基 因组提取试剂 盒，购 自 天 根 生 化 科 技 （北 京）有 限 公 司；ＤＬ２０００ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ、２×犜犪狇 Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ，购 自 宝 生 物 工 程 （大 连 ）有 限 公 司 。 １．１．３ 主要仪器 立式自动压 力 蒸汽 灭菌 器，购 自 致微（厦门）仪器有限公司；无菌 工 作 台，购自 北京 亚 泰科隆仪器技术有限公司；隔水 式 恒 温培 养 箱，购 自 上海一恒科学仪器有限 ：为 了 解 肉 牛 溶 血 性 大 肠 埃 希 菌 毒 力 基 因 和 耐 药 基 因 分 布 情 况 及 药 物 敏 感 性 ，从 河 北 省 围 场 县 采 集的健康 肉牛鼻 腔棉拭 子 中分离鉴 定溶血性大 肠埃 希菌，采用 ＰＣＲ 检 测大 肠埃 希菌 的 ４ 个毒 力 基因 和 １２ 个耐药基因，并采用 ＫＢ 法进行药敏试验。结果表明，从１１６份健康的 肉牛 鼻腔 中 分离 鉴 定 出２３株 溶血 性 大肠埃希菌，分离率为１９．８％；毒力基因检测结 果 显 示，６ 株 菌 同 时 携 带 ＬＥＥ（Ｌｅｒ、ｅａｅＡ）毒 力 基 因，携 带 率 ２６．１％，１８株同时携带 高致病性毒力基因 ＨＰＩｉｒｐ２、ｆｙｕＡ，携带率 ７８．３％，６ 株 同 时携 带 ＬＥＥ 和 ＨＰＩ毒 力 基因，携带率为２６．１％；耐药基因检测结果显示，ｂｌａＴＥＭ、ａａｄＡ１ 耐 药 基 因 的 携 带 率 最 高，为 １００％；药 敏 试 验结果显示，２３株溶血性大肠埃希菌对 头 孢 氨 苄、复 方 新 诺 明、磺 胺 间 甲 氧 嘧 啶 耐 药。 结 果 表 明，溶 血 性 大 肠埃希菌普遍存在于健康肉牛鼻腔中，ＨＰＩ毒力基因和 β内酰胺类和耐链霉素类耐药基因携带率高。对河 北 省 围 场 县 肉 牛 溶 血 性 大 肠 埃 希 菌 毒 力 基 因 和 耐 药 基 因 进 行 了 研 究 ，并 进 行 药 物 敏 感 性 分 析 ，结 果 提 示 溶 血