溶剂残留方法学验证

溶剂残留方法学验证

溶剂残留检查多采用气象色谱法。一般认为残留溶剂测定属限度检查,按相关指导原则只需提供专属性、检测限、定量限及进样精密度等方法学研究资料，故未进行线性、准确度和耐用性方面研究。残留量检查究竟是属于定量还是限度检查的范畴，《化学药物残留溶剂研究的技术指导原则》中未明确规定。考虑到药物合成情况比较复杂，根据所使用的有机溶剂种类、数量等的不同，残留溶剂研究需要进行的程度、目标也可能不同，对方法学的要求也可能随之不同。当检测结果明显低于规定限度时, 通常按限度检查要求，无需得出准确含量；当检测结果明显高于规定限度（尤其当检测结果为限度边缘时），或需残留溶剂量进行含量纯度折算时，需按定量检查要求进行方法学研究。

一、系统适用性试验

取对照品溶液，进样，记录色谱图。

柱效：以被测物的色谱峰计，填充柱法的理论板数应大于1000，毛细管色

谱柱的理论板数应大于5000。

分离度：色谱图中被测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

重复性：以内标法测定时，对照品溶液连续进样5次，所得被测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差(RSD)应不大于5%；以外标法测定时，所得被测物峰面积的相对标准偏差(RSD)应不大于10%。

二、专属性

1、对各种残留溶剂定位和进行混合溶剂的分离度试验，并附代表性图谱。

取各种残留溶剂对照品溶液，分别单独进样，记录色谱图。

取混合溶液，进样，记录色谱图。

2、排除供试品中的未知杂质或其挥发性热降解产物对残留溶剂的测定产生的干扰。

①如果未知杂质或其挥发性热降解产物与被测物的保留值相同（共出峰），通常采用在另一种极性相反的色谱柱系统中对相同样品进行测定，比较不同色谱系统的测定结果的方法。如二者结果一致，则可以排除测定中有共出峰的干扰；如二者结果不一致，则表明测定中有共出峰的干扰。

②热降解产物与被测物的结构相同（如甲氧基热裂解产生甲醇），通常要通过测定已知不含该溶剂的对照样品来加以判断。

三、检测限和定量限

检测限为信噪比3:1时相应浓度或注入仪器的量。定量测定时需验证定量限，其限度为信噪比10:1时相应浓度或注入仪器的量。同时说明测试的过程和结果，并附图谱。

四、线性

制备6个浓度，R=0.9990。附回归方程、相关系数和线性图。

线性溶液浓度应从定量限浓度开始，至对照溶液浓度的120%以上。

五、精密度：

1、重复性

①在规定范围内，至少9个测定结果。设计三个不同的浓度进行测定。一般保留时间的RSD〈1%，峰面积的RSD〈5%。

②以内标法测定时，对照品溶液连续进样6次，所得被测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差(RSD)应不大于5%；以外标法测定时，所得被测物峰面积的相对

标准偏差(RSD)应不大于10%。保留时间的RSD〈1%。

2、重现性

指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度。

当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。

六、准确度

在规定的范围内，至少9个测定结果。设计三个不同的浓度进行测定，计算回收率和相对标准偏差，含量测定的回收率应大于98%。

进行回收率试验时，由于采用顶空进样系统，供试品与对照品处于不完全相同的基质中，此时应考虑气-液平衡过程中的基质效应。标准加入法可以消除供试品液基质与对照品溶液基质不同所致的基质效应的影响，故通常采用标准加入法验证定量方法的准确性。当标准加入法与其它定量方法的结果不一致时，应以标准加入法的结果为准。

标准加入法为精密称（量）取被测定的残留溶剂对照品适量，配制成适当浓度的对照品溶液，取一定量精密加入到供试品溶液中，根据外标法或内标法测定残留留剂的含量，再扣除加入的对照品溶液的含量，即得供试液溶液中残留溶剂的含量；或按下式计算残留溶剂的量。Cx=ΔCx/[（Ais/Ax）-1]，式中Cx为供试品中组分X的浓度；Ax为供试品中组分X的色谱峰面积；ΔCx为所加入的已知浓度的被测组分对照品；Ais为加入对照品后组分X的色谱峰面积。

标准加入法测回收率

步骤1

精密称量适量的药粉，定容置100 ml 容量瓶中，精密量取 5 ml 分别置5 个10 ml 容量瓶中，各瓶中分别加入梯度的标样，定容，分别测量各个瓶中的样品，可以得到x1。

请计算好样品量和标样的浓度！可以根据以前的数据算好！

步骤2

原理同步骤1。精密称量适量的药粉，量相当于步骤1 的一半，定量加入标样C，量和该步骤中称取的药粉中含被测物的量相当，再定容置100ml 容量瓶中，以下步骤同步骤1。。。。。。得到x2

回收率的计算要复杂一些，根据第一步是可以得到粉中被分析物的含量的。

第二步骤中药粉中被测物的含量要利用第一步中的含量和取样量来计算！

C 是理论加入的量，根据x1 和x2 可以算出测量的加入量c‘回收率＝c’/C *100%

以上方法要求药粉的溶解度非常好！可能更可行的方法如下：

精密称取药粉适量，定容置25 ml 量瓶中，精密量取溶液2ml ，分别加入5 个顶空瓶中，在该顶空瓶中加入0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml 的标样，再补足溶剂，使各瓶的体积相等。

用校正过的加样枪完成以上步骤！

七、耐用性

气相色谱法中耐用性包括：载气及流速，不同厂牌或批号的色谱柱、固定相、担体，柱温、进样口和检测器温度改变，分流比调整等。资料中需说明小的变动能否符合系统适用性试验要求，以确保方法有效。