反相SPE(固相萃取)方法
SPE固相萃取(类型的选择以及行业应用)
Florisil （硅酸镁） ，1g/6mL
• 活化及平衡：0.5mL 异辛烷
•上
样：0.2g 废弃变压器油
•洗
脱：5×2mL 异辛烷
注：杂质被吸附到小柱上，而PCBs被异辛烷直接洗脱下来。
上海安谱
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PCBs in Used Transformer Oil（SPE/GC）
上海安谱
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血浆中的儿茶酚胺类药物（SPE/LC）
• 色谱柱：SUPELCOSIL LC-18-DB，15cm×4.6mm, 5um
• 流动相：0.025M 柠檬酸/Na2HPO4, 0.005mM Na2EDTA,
34mg/L辛烷磺酸钠，85％H2PO4调节pH3.4
选择： SCX, MCX, SAX, MAX
选择： WCX, PRS, NH2, PSA
选择： Florisil ，氧化铝 PSA，Si, NH2, Diol, CN
上海安谱
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类型及规格选择指南
Anpelclean SPE方法开发包含有不同的化学固定相，或者不同大小和填料 的小柱，方便在方法开发时选择最合适的SPE小柱
• 柱 温：室温
流 速：1.5mL/min
• 检测器：ECD
进样量：100uL
上海安谱
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SPE在环境监测中的应用
废弃变压器油中的多氯联苯 PCBs in Used Transformer Oil
上海安谱
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PCBs in Used Transformer Oil（SPE/GC）
营养成份,
上海安谱
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概要 1. SPE填料类型及选择 2. SPE的应用
上海安谱
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SPE在药物检测中的应用
固相萃取——精选推荐
固相萃取一．主要参考文献：分析化学2000年9月第9期第28卷1172-1180，固相萃取，张海霞、朱彭龄分析仪器1998年第1期，固相萃取技术的发展与应用，楼蔓藤、商振华。
二．摘要：对固相萃取技术的原理、方法、特点及应用作了较全面的介绍。
重点介绍了固相萃取的萃取原理，举例说明了正相、反相、离子交换等分离模式在医药、食品、临床、环保等领域中的应用。
三．正文1．固相萃取基本概念固相萃取(Solid Phase Extraction SPE)就是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。
与液－液萃取相比，固相萃取有很多优点：固相萃取不需要大量互不相溶的溶剂，处理过程中不会产生乳化现象，它采用高效﹑高选择性的吸附剂（固定相），能显著减少溶剂的用量，简化样品于处理过程，同时所需费用也有所减少。
一般说来固相萃取所需时间为液－液萃取的1/2，费用为液－液萃取的1/5。
其缺点是：目标化合物的回收率和精密度要低于液－液萃取。
2．固相萃取原理固相萃取实质上是一种液相色谱分离，其主要分离模式与液相色谱相同，可分为正相（吸附剂极性大于洗脱液极性），反相（吸附剂极性小于洗脱液极性），离子交换和吸附。
固相萃取所用的吸附剂也与液相色谱常用的固定相相同，只是在粒度上有所区别。
正相固相萃取所用的吸附剂都是极性的，用来萃取（保留）极性物质。
在正相萃取时目标化合物如何保留在吸附剂上，取决于目标化合物的极性官能团与吸附剂表面的极性官能团之间相互作用，其中包括了氢键，π—π键相互作用，偶极－偶极相互作用和偶极－诱导偶极相互作用以及其他的极性－极性作用。
正相固相萃取可以从非极性溶剂样品中吸附极性化合物。
反相固相萃取所用的吸附剂通常是非极性的或极性较弱的，所萃取的目标化合物通常是中等极性到非极性化合物。
目标化合物与吸附剂间的作用是疏水性相互作用，主要是非极性－非极性相互作用，是范德华力或色散力。
固相萃取萃取技术及难点分析、SPE色谱技术
刚刚看到的一些SPE 理论知识，在此分享给大家，希望对大家的工作有所帮助。
固相萃取技术属于色谱技术的一种。
化合物要么保留要么流过，吸附剂种类选择众多，选择性与 HPLC 类似，但与HPLC 不能等同。
为什么使用固相萃取（Solid Phase Extraction ）技术⏹ 高回收率、高净化效果 ⏹ 快速简便⏹ 减少昂贵、易碎的特殊玻璃装置的使用 ⏹ 减少有机溶剂的大量消耗 ⏹ 样品浓缩，提高分析灵敏度⏹ 避免污染物对色谱柱的伤害，延长使用寿命固相萃取的基本模式活化→上样→淋洗→洗脱液液萃取 固相萃取两种不同方法萃取鸦片样品的效果比较活化：也就是对填料进行溶剂化，使官能团充分展开，为吸附目标化合物提供最佳状态。
在低真空≤-3 in. Hg下向SPE柱中加入有机溶剂，每100 mg填料加入1.5 mL甲醇或乙腈。
然后加去离子水去除多余溶剂（干扰疏水作用），每100 mg 填料加入1 mL水。
如果填料意外干掉，需重新进行（甲醇或乙腈）溶剂化和（水）冲洗。
当使用离子柱时，在（水）冲洗后，加入1mL的缓冲液，以确保填料的pH 处于填料-分析物作用的最佳条件下。
上样：流速是确保样品在通过填料时充分接触的关键，对于离子交换过程尤为重要，因为离子交换动力学过程比反相或正相机理要慢。
建议上样的流速约为1-2 mL/min。
淋洗：建议使用在允许范围内最强和最大体积的淋洗液，却不会导致分离物质的漂移或洗脱。
淋洗后需对柱子进行抽干，以避免淋洗液干扰洗脱的效果。
最简单的方法是在最大的真空度下抽干柱子5min。
洗脱：在洗脱中，最好是用尽可能少的溶剂将提取物完全地洗脱下来。
洗脱溶剂的强度应该是在能完全地破坏分析物的所有结合作用的前提下最弱的。
固相萃取的不同萃取机理反相萃取Non-Polar Extractions 正相萃取Polar Extractions离子交换Ion Exchange Mechanisms 混合模式萃取Mixed Mode/Copolymeric Extractions国标中有些方法根本不可行，很多时候还是需要我们优化。
固相萃取技术的原理和步骤
固相萃取技术原理及应用一、固相萃取基本原理与操作1、固相萃取吸附剂与目标化合物之间的作用机理固相萃取主要通过目标物与吸附剂之间的以下作用力来保留/吸附的1）疏水作用力：如C18、C8、Silica、苯基柱等2）离子交换作用：SAX, SCX，COOH、NH2等3）物理吸附：Florsil、Alumina等2、p H值对固相萃取的影响pH值可以改变目标物/吸附剂的离子化或质子化程度。
对于强阳/阴离子交换柱来讲，因为吸附剂本身是完全离子化的状态，目标物必须完全离子化才可以保证其被吸附剂完全吸附保留。
而目标物的离子化程度则与pH值有关。
如对于弱碱性化合物来讲，其pH值必须小于其pKa值两个单位才可以保证目标物完全离子化，而对于弱酸性化合物，其pH值必须大于其pKa值两个单位才能保证其完全离子化。
对于弱阴/阳离子交换柱来讲，必须要保证吸附剂完全离子化才保证目标物的完全吸附，而溶液的pH值必须满足一定的条件才能保证其完全离子化。
3、固相萃取操作步骤及注意事项针对填料保留机理的不同（填料保留目标化合物或保留杂质），操作稍有不同。
1）填料保留目标化合物固相萃取操作一般有四步（见图1）：Ø 活化---- 除去小柱内的杂质并创造一定的溶剂环境。
（注意整个过程不要使小柱干涸）Ø 上样---- 将样品用一定的溶剂溶解，转移入柱并使组分保留在柱上。
（注意流速不要过快，以1ml/min为宜，最大不超过5ml/min）Ø 淋洗---- 最大程度除去干扰物。
（建议此过程结束后把小柱完全抽干）Ø 洗脱---- 用小体积的溶剂将被测物质洗脱下来并收集。
（注意流速不要过快，以1ml/min为宜）如下图1:2）填料保留杂质固相萃取操作一般有三步（见图2）：Ø 活化--除去柱子内的杂质并创造一定的溶剂环境。
（注意整个过程不要使小柱干涸）Ø 上样--将样品转移入柱，此时大部分目标化合物会随样品基液流出，杂质被保留在柱上，故此步骤要开始收集（注意流速不要过快）Ø 洗脱---用小体积的溶剂将组分淋洗下来并收集，合并收集液。
第三章 固相萃取技术
学 习 要 点
概 述
固相萃取的基本原理、分离模式及操 固相萃取的基本原理、 作步骤
固相萃取的操作步骤 固相萃取的装置
固相萃取方法的建立及应用
一、概述
所谓萃取法 ,就是从样品中提取组分 ,传统的方 法是液 法是液-液萃取法 ( LLE) ,即用液体作为提取剂。 ,即用液体作为提取 即用液体作为提取剂 固相萃取（ SPE） 19世纪 固相萃取（Solid Phase Extraction, SPE） 是19世纪 70年代后期发展起来的样品前处理技术。 70年代后期发展起来的样品前处理技术。它发展 年代后期发展起来的样品前处理技术 迅速，广泛应用于环境、制药、临床医学、食品 迅速，广泛应用于环境、制药、临床医学、 等领域 。
反相固相萃取
反相：吸附剂（固定相）是非极性或弱极性的，如 反相：吸附剂（固定相）是非极性或弱极性的，如 是非极性或弱极性 硅胶键合C18,C8, C4，C2,-苯基等。流动相为极 硅胶键合C18,C8, C4，C2,-苯基等。流动相为极 性（水溶液）或中等极性样品基质。 吸附剂的极性小于洗脱液的极性。 应用：可以从强极性的溶剂中（如水样）萃取是非 应用：可以从强极性的溶剂中（如水样）萃取是非 极性或弱极性的化合物。 极性或弱极性的化合物。 作用机理：非极性-非极性相互作用，如范德华力 作用机理：非极性-非极性相互作用，如范德华力 或色散力。
正相萃取或反相萃取选择原则 正相萃取或反相萃取选择原则
总目的：杂质和待分析物分离 1、受样品基体提取溶剂，要分离的杂质和目标化 合物的性质制约 a)物质在柱上的保留（或洗脱）取决于其与吸附剂 a)物质在柱上的保留（或洗脱）取决于其与吸附剂 和样品基体溶剂（或洗脱溶剂）之间亲和力的相 对大小。 样品基体是强非极性溶剂，如正己烷，二氯甲烷 等，一般要选用正相柱分离。 样品基体是强极性溶剂，如水和甲醇，乙腈及丙 酮的混合液，要选用反相柱分离。
固相萃取技术的基本方法及步骤
固相萃取技术的基本方法及步骤
一、SPE基本方法
SPE实质上是一种液相色谱分离，所用的吸附剂也与液相色谱固定相相同，只是在粒度上有所区别。
SPE的一般做法是：利用选择性吸附与选择性洗脱的色谱分离原理，使液体样品通过吸附剂，保留其中的分析物，用适当强度溶剂洗除杂质，然后用少量溶剂洗脱分析物，达到快速分离净化与浓缩的目的。
也有选择性吸附干扰杂质，而让分析物洗除，或同事吸附杂质和分析物，在使用合适的溶剂选择性洗脱分析物的做法。
二、SPE技术的基本步骤如下
（1）样品预处理：依目标分析物、样品基体和它们的保留型不同，对样品进行溶解、pH调节、离心分离、过滤、稀释和加缓冲溶液等处理。
（2）萃取柱的活化处理：选一种溶剂通过SPE小柱，以润湿和活化SPE填料，试分析物能与固相表面紧密接触，易于发生吸附作用，还可除去
柱内可能存在的杂质，减少污染；之后还须选择一种极性和pH值与
样品基体相似的溶液替换溶剂，以使样品溶液与吸附剂表面良好接触，
提高萃取效率。
（3）上样：将预处理好后的样品倒入活化后的SPE小柱上，然后利用加压、抽真空或离心的方式，使液体样品以适当流速通过SPE小柱。
（4）淋洗：选择中等强度的混合溶剂，尽可能洗涤除去基体重的干扰组分，又不会导致目标萃取物流失；
（5）洗脱：用小体积的适当的洗脱溶剂将分析物洗脱下来并收集；挥干溶剂以备用或直接在分析。
洗脱溶剂的强度选择非常关键，要达到分析物尽可能被洗脱而比分析物吸附更强的杂质仍留在SPE小柱上不被洗脱下来的效果。
固相萃取22ppt课件
2021/1/19
固相萃取技术
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容量和选择性
吸附剂的容量是在最优条件下，单位吸附 剂的量能够保留一个强保留分离物的总量。
Csp = 保留化合物量(mg) ／萃取填料质量 （100mg）
选择性是吸附剂区别分离物和其他样品基 质化合物的能力。
2021/1/19
固相萃取技术
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固相萃取的简要过程
（1）一个样品包括分离物和干扰物通过吸附剂； （2）吸附剂选择性地保留分离物和一些干扰物，其
固相萃取技术
13
膜片性固相萃取柱
膜片状SPE材料是以聚四氟乙烯 纤维薄膜为骨架，纤维之间载有 很小的色谱吸附剂颗粒（直径约 为12 μm ）。
萃取膜中，90%是SPE吸附剂， 10%是聚四氟乙烯纤维。
吸附剂分为硅胶颗粒和聚合物颗 粒。
膜片型SPE柱的显著优点 提高检测灵敏度 减少样品体积 避免浓缩步骤，可以直接进行HPLC分析
pH值
对于离子交换固相萃取来说，目标化合 物与干扰物质的pKa各不相同。通过调节溶 剂pH的大小，可以使固定相带电荷，被分析 物带相反电荷，而使干扰物质不带电荷；或 使固定相带电荷，干扰物质带相反电荷，而 使被分析物不带电荷。
六、最新装置
美国Supelco公司专利产品 ——固相萃取（SPE）装置
非极性作用力
• 对于键合硅胶和聚合物吸附剂而言，非 极性吸附力产生于固相萃取材料官能团 上的碳氢键和目标化合物的碳氢键之间， 即是范德华引力或散射力
• 非极性作用力最弱，一般在1-5kcal/mol • 常被用于从样品基质中吸附分离具有非
极性结构的目标化合物 • 常用于反相萃取
极性作用力
• 极性作用力发生在固相萃取材料极性表 面与目标化合物 的极性官能团之间，常 见的极性官能团有羟基、胺、巯基、羰 基等
固相萃取技术
固相萃取吸附剂的选择-常用固相
萃取吸附剂
• 键和硅胶吸附剂 • 石墨碳 • 离子交换树脂 • 金属配合物吸附剂 • 聚合物吸附剂 • 免疫亲和吸附剂 • 分子嵌入聚合物
应根据分析对象、检测手段及实验室条件合理选择。
2.影响 SPE固定相和洗脱剂的选择因素：
试样基质和分析物的性质， 如： 结构、 极性、 溶解度 和酸碱性质等；
固相萃取的分离模式
反相固相萃取 正相固相萃取 离子交换萃取 免疫亲和
三、固相萃取的简要过程
一个完整的固相萃取步骤包括固相萃取柱 的预处理、上样、洗去干扰物质、洗脱及收 集分析物四个步骤。
a.固相萃取柱的预处理
一是为了润湿和活化固相萃取填料，二是为了除去填 料中可能存在的杂质，减少污染。
六、固相萃取方法的建立
• 固相萃取吸附剂的选择 • 固相萃取溶剂的选择 • 固相萃取的应用
1.固相萃取吸附剂的选择-固相萃取吸
附剂的要求
• 固相萃取吸附剂最好为多孔的、具有大的表面积的固体颗 粒。
• 固相萃取吸附剂应有较低的空白值。 • 萃取吸附过程必须可逆且有高的回收率。 • 固相萃取吸附剂要有高的化学稳定性。 • 固相萃取吸ห้องสมุดไป่ตู้剂必须与样品溶液有好的界面接触
与液液萃取法比较，固相萃取以下下优点：
①回收率和富集倍数高 ②有机溶剂消耗量低，可减少对环境的污染 ③采用高效、高选择性的吸附剂，能更有效的将分析物与
干扰组分分离 ④无相分离操作过程，容易收集分析物 ⑤能处理小体积试样 ⑥操作简便、快速，费用低，易于实现自动化及与其他分
析仪器连用。
二、固相萃取原理
采取的方法是用一定量溶剂冲洗萃取柱。 反相类型的固相萃取硅胶和非极性吸附剂介质，通常
SPE固相萃取小柱产品特点和使用方法
SPE固相萃取小柱产品特点和使用方法SPE固相萃取柱适合不同体积样品处理，SPE小柱也可依据客户的需求加工定制。
自产的SPE小柱回收率高、流速适中、吸附量大、重现性好、性价比高、比国内同类产品有更高的重复性和一致性。
在环境水体污染物的萃取、生命科学、食品农残和兽残以及动植物提取等方面可以达到的效果。
SPE固相萃取柱的容量是指固相萃取柱填料的吸附量。
对于以硅胶为基质的固相萃取柱，其容量一般在1～5 mg/100 mg，也就是柱容量是填料质量的1%～5%。
而键合硅胶离子交换吸附剂填料的容量以meq/g表示，即每克填料的容量为X毫克当量。
这类填料的容量通常在0.5～1.5 meq/g。
SPE固相萃取柱为样品分析前的储备供应快速和有效的纯化和浓缩，为使这些产品获得zui佳的分析结果需要注意以下四个方面：1、样品的物理和化学特征：影响因素如被分析物相对与介质的极性，带电荷的官能团，溶解性，分子量，等等，决议了被分析物与填充床的结合强度。
2、选择适当的保留方法：可能的方法有两种：*，被分析物不保留与填充床，而干扰物保留，如此纯化了样品。
第二，被分析物保留与填充床，而干扰物不保留，或者在样品洗脱前先从填充床上洗脱。
当样品需要浓缩时，常用的方法为第二种方法。
3、选择适当的填充料和填充床大小：不同的填料类型供应不同的选择性。
填料类型应zui大的利用被分析物和样品中的干扰物的结构差异。
选择有适当选择性的填料能获得zui高的回收率和zui 高纯度的样品和提取物。
当填充床的大小未经优化时，通常有回收率低的问题。
填充床太大时会导致洗脱不完全，而填充床太小时会导致保留不完全，两种情况都是回收率比预期的低。
4、选择合适的调整，冲洗和洗脱溶剂：必需注意各类溶剂相对于填料的洗脱强度上样的样品调整溶剂应是没有洗脱作用的“弱溶剂”，必需使用缓冲也来掌控潜在的带电荷化合物的离子化程度。
冲洗溶剂应将弱保留的干扰物洗脱，但是洗脱强度不应太强而导致被分析物洗脱。
固相萃取使用方法
固相萃取使用方法固相萃取（SPE）是分离、富集或净化化学物质的一种技术。
其原理是通过静态或动态流动的方式将目标化合物从复杂的混合物中分离出来，富集并纯化目标化合物。
在实验室和工业生产中，固相萃取是常用的分析技术之一。
本文将介绍固相萃取的使用方法。
一、固相萃取的类型和选择：在选择固相萃取方法之前，需要确定目标化合物的化学性质，如它的亲和性、极性或非极性等特征。
此外，还需要了解目标化合物在样品基质中的含量、复杂程度及审查物质的物理性质，比如pH、离子强度和溶剂极性等。
这些因素都会选择所使用的固相萃取材料和方法。
以下是一些常用的固相萃取材料：1.氢氧化铁铝（Fe3O4/Al2O3）2.聚合物吸附体（例如环雪毛寡聚三聚体，中空玻纤吸附体等）3. 硅胶（例如环山梨酯硅胶、脱水硅胶等）4.环压粉末（例如碳纳米管、金属有机骨架等）对于SPE的选择，我们需要根据样品基质、溶剂和需分析的化合物来确定使用哪种SPE材料和哪种SPE方法。
二、固相萃取的步骤：1. 样品制备：样品的制备是SPE的关键步骤之一。
首先，需要提取样品的化合物，通常使用溶剂萃取或超声波萃取方法。
其次，通过重复洗涤来清洁样品，以消除可能存在的干扰物。
最后，将样品从水中转移到有机溶剂中进行进一步的处理。
2.洗脱确定加入固相萃取柱中的适当洗脱剂（洗脱剂类型不同，适用于不同的样品）。
3.条件控制：pH和溶剂的影响对分离和萃取是重要的，因此根据所需的结果制定出一个适当的条件控制方案。
4.修饰：某些固相萃取柱可以在特定步骤中进行修饰。
5.萃取：将待检样品加入固相萃取柱，并将萃取柱接在萃取器上。
流动速度在SPE实验中非常重要，因为它直接影响到样品中化合物的富集和分离。
三、结论：固相萃取法是一种通用的分析方法，对样品制备和萃取条件的要求比较高。
一旦选择了正确的固相萃取柱、样品和溶剂，固相萃取法工作得非常高效、高精确和精确。
固相萃取柱的结果可以使用高效液相色谱分析或气相色谱分析进一步分析或检测。
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反相SPE(固相萃取)方法
水性样品基质/流动相环境
基本步骤
固相萃取吸头
含水样品基质/流动相环境
与正相或离子交换SPE(固相萃取)相比，反相SPE(固相萃取)被认为是选择性最低的保留机制。
换句话说，反相方法或键合化学可能难以区分结构相似的分子。
但是，由于反相会保留大多数具有任何疏水特性的分子，因此对于提取同一样品内结构非常多样的分析物非常有用。
图 1.含水样品基质/流动相环境
保留机制：非极性或疏水相互作用
•范德华力或分散力
示例矩阵：含水样品
•生物体液（血清、血浆、尿液）
•组织的水提取物
•环境水样
•葡萄酒、啤酒和其他含水样品
分析物特性：显示非极性官能团的分析物
•大多数有机分析物
•烷基、芳香族、脂环官能团
洗脱方案：破坏与溶剂
或具有充分非极性的溶剂混合物的反相相互作用
•甲醇、乙腈、二氯甲烷
•缓冲液/溶剂混合物
常用应用：•生物体液中的药物和代谢产物
•水中的环境污染物
•组织和固体的水提取物
基本步骤
1. 样品前处理：样品前处理对于含有干扰物的样品（如生物体液），用缓冲液1：1稀释
样品。
处理可电离化合物时，pH值操作可能很重要。
化合物的电离状态可以彻底改变其在给定SPE(固相萃取)吸附剂上的保留和洗脱特性。
当一种分析物处于中性状态时，它变得更加疏水，在反相条件下保持力增强。
将样品pH调节至化合物pKa以上或以下2个pH单位（取决于官能团）将有效地中和化合物。
处理组织和其他固体时，用缓冲液进行固液萃取或均化。
非极性溶剂（包括甲醇和异丙醇）会破坏化合物与吸附剂官能团之间的相互作用。
为避免堵塞，在
将样品引入SPE(固相萃取)相之前，可能需要离心、稀释和/或预过滤样品。
2. 调节/平衡：调节湿润或激活键合相以确保分析物和吸附剂官能团之间的一致相互作用。
反相吸附剂通常用1-2管体积的水混溶性溶剂如甲醇或乙腈来调节。
平衡在溶剂强度和pH方面引入了类似于加样的溶液，以便最大限度地保留。
1-2管体积的缓冲液（用于样品前处理）或水是反相平衡的良好选择。
3. 加样：以一致且下降的流速~1-2滴/秒的速度应用样品（从步骤1开始），以确保最佳
的保留。
4. 洗涤：在加样过程中，样品干扰常常与感兴趣的化合物共同保留。
洗涤步骤对于洗脱干
扰物而不过早洗脱感兴趣的化合物是必要的。
5-20%甲醇水溶液或样品前处理缓冲液是洗涤溶剂的典型。
5. 洗脱：用足够非极性的有机溶剂或溶剂组合破坏分析物和吸附剂官能团之间的疏水相互
作用。
例如洗脱溶剂为1-2倍体积的甲醇或乙腈。
在处理可离子化化合物时，洗脱过程中的pH操作通常可以提高回收率。
在它们的离子形式中，碱性和酸性化合物变得更具极性，减弱了反相相互作用，可能允许较弱的洗脱溶剂和/或减少的洗脱体积。
6. 洗脱液后处理：在LC分析前，常需在流动相中蒸发并重新配制SPE(固相萃取)洗脱
液。
GC分析通常需要进一步的SPE(固相萃取)洗脱液浓度和/或可能与更易挥发的溶剂进行基质交换。
默克Supelco® 提示SPE(固相萃取)技巧：
1. 样品预处理过程中应破坏药物-蛋白质结合。
策略包括：
o每100µL小鼠血浆40µL 2%乙二胺四乙酸二钠
o每100µL小鼠血浆40µL 2%甲酸
o其他可能的试剂（每100μL基质）：
40µL 2%TCA，40µL 2%乙酸，40µL 2%TFA，40µL 2%磷酸，或200µL甲基纤
维素（蛋白质ppt。
).
2. 如果SPE(固相萃取)洗脱液需要在分析前蒸发，洗脱后将真空空气通过SPE(固相萃取)
管大约10分钟。
这将去除可能延长蒸发的残余水分。
3. 在加样和洗脱过程中维持持续缓慢的流速（每秒1-2滴）将提高回收率和重现性。
4. 减少床层重量，使洗脱体积最小化。
5. 增加床层重量以保留更多极性化合物。
6. 对吸附剂过度干燥的关注仅在甲醇调节过程中至关重要。
7. 预处理溶剂如二氯甲烷（或用于洗脱的溶剂）可在调理前使用，以去除SPE(固相萃取)
管上可能干扰后续分析的任何杂质。
ELISA 方案
•使用UHPLC/MS（TOF）检测不同酶水解条件处理的尿液中药物和代谢物
•饮用水中双酚 A 的测定。