小鼠经口的急性毒性评价
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小鼠经口的急性毒性评价
食品质量与安全:张志颖
指导教师:丁志刚
摘要:通过霍恩法对啮齿类动物小白鼠做急性毒性实验,以氯化镁溶液为外源化学物,了解氯化镁溶液对机体是否产生毒效应。确定外源化学物的致死剂量及其他急性毒性参数,通过观察动物中毒表现、毒作用强度和死亡情况,初步评定外源化学物的毒效应特征、靶器官、剂量—反应关系和对人体产生损害的危险性。
关键词:小白鼠氯化镁溶液霍恩法急性毒性评价
1前言
氯化镁常温下为白色结晶,易吸湿,100℃时失去2分子结晶水,在110℃开始失去部分盐酸而分解,强热转为氧氯化物,其PH约为<7,有刺激性,氯化镁是有毒的,其次氯化镁是低毒的。氯化镁本身的毒性来自其本身凝血的作用,例如卤水点豆腐,就是使蛋白质凝固。假如一定剂量的氯化镁进入血液,血液凝固,人必死无疑。所以说氯化镁对于温血动物来说还是有一定的杀伤力。制作豆腐时,氯化镁可以作为很好的混凝剂。它常与硫酸镁一起凝固豆奶,由于其营养价值,氯化镁还是婴儿配方奶粉的组成部分。
2材料与方法
2.1 材料试验动物:健康成年小鼠16只,雌雄各半,体重在18~25g之间。
2.2仪器与试剂试验器材:注射器、刻度吸管、容量瓶、小烧杯、滴管、灌胃针、电子天平、镊子、动物体重秤、手套。
试验试剂:受试物(氯化镁)、3%~5%的苦味酸溶液、0.5%的品红溶液。
2.3实验方法
2.3.1健康动物选择
2.3.2性别辨认
2.3.3小鼠称重、编号和随机分组根据霍恩法将小鼠分为4个小组,每组4只。
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 随机数18 43 38 62 82 16 48 35 67 05 72 12 25 83 43 41
除4余数 2 3 2 2 2 0 0 3 3 1 0 0 1 3 1 1
所在组别二三二二二四四三三一四四一三一一
2.3.4剂量设置(1000mg/kg、2150mg/kg、4640mg/kg、10000mg/kg)
组号一二三四
染毒剂量1000mg/kg 2150mg/kg 4640mg/kg 10000mg/kg
27.75mg 57.587mg 122.96mg 280mg
每组小鼠染毒
毫克数
2.3.5氯化镁溶液的配制
(1)氯化镁的量取(称量法)
准确称取12.6575g的氯化镁固体,加蒸馏水溶解后,倒入25ml容量瓶,混匀,再加蒸馏水定容至刻度。备用浓度为506.3mg/ml。
(2)氯化镁溶液的稀释
等容量稀释法:根据试验确定的四个剂量组剂量(1000mg/kg、2150mg/kg、4640mg/kg、10000mg/kg)将氯化镁稀释分别配制成不同浓度溶液,各个剂量组的动物按20ml/kgBW的容量灌胃,则应配制成四个不同浓度,依次为:50.65mg/ml(11.6ml)、109.1mg/ml(11.6ml)、235mg/ml(11.6ml)、506.3mg/ml。
2.3.6灌胃
对四个剂量组的小鼠采用经口灌胃法一次性给予氯化镁溶液,各剂量组的灌胃体积相同,小鼠常用容量为20ml/kgBW。若一次给予量太大,也可在24h内分2~3次给予,每次间隔4~6h,但合并作为一次剂量计算。
试验动物在试验前一般禁食16h左右,不限制饮水。染毒后继续禁食3~4h。若采用分多次染毒,根据染毒时间长短,必要时可给动物一定量的的食物。
2.4检测指标急性毒性实验除了要获得主要参数LD50外,还要全面观察动物的各种反应和变化,仔细分析实验动物在染毒后出现的中毒表现、剂量—效应、时间分布等,这对于了解外源化学物的毒性作用特征,获取尽可能多的毒性信息非常重要,可以补充LD50表示急性毒性的不足。
2.4.1小鼠中毒症状和死亡情况观察
染毒后要注意观察小鼠中毒表现和死亡情况。观察指标通常包括小鼠外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况(死亡时间、濒死亡前的反应)、体重变化(给药前、试验结束处死动物前各称重一次,观察期间可每3天称重一次)等,观察时间为7天,对死亡小鼠和观察期满存活小鼠处死进行大体解剖,认真做好试验记录。试验结束后,要按照试验结果,填写急性毒性试验记录表。
组别动物
编号体重染毒总
剂量
mg/kg
灌胃容
量ml
中毒症状中
毒
时
间
死亡时间体重
变化
记录
第一组10 27g
1000 0.4ml 染毒后活动减少,精
神萎靡,抱团睡觉,
一天之后回归正常。
之后几天小鼠存活,
无异常。
染
毒
后
0g
13 27g 0.4ml -1g
15 28g 0.4ml 0g
16 29g 0.4ml 0g
第二组 1 28g
2150 0.4ml 染毒后活动减少,精
神萎靡,四肢抽搐,
一天之后回归正常。
之后几天小鼠存活,
无异常。
染
毒
后
+2g
3 27g 0.4ml +2g
4 28g 0.4ml +6g
5 26g 0.4ml +3g
第三组 2 26g
4640 0.4ml 染毒后颤抖、抽经,
四肢抽搐,9号小鼠
在夜间死亡。之后几
天小鼠存活,无异常。
染
毒
后
9号小鼠夜间
死亡具体时间
不明
+1g
8 29g 0.4ml +7g
9 26g 0.4ml -1g 14 25g 0.4ml 0g
第四组 6 27g
10000 0.4ml 染毒后反应剧烈,痛
苦的挣扎,呼吸困难,
6、7、11号小鼠很快
死亡,12号小鼠精神
萎靡,在一天之后活
动正常。之后几天小
鼠存活,无异常。
染
毒
后
6、7、11号小
鼠染毒后两分
钟
0g
7 28g 0.4ml 0g
11 28g 0.4ml 0g
12 29g 0.4ml -7g
2.4.2体重
实验动物体重的变化,可以反映动物中毒后的整体变化,是一个比较简便的量化指标。体重降低或增长缓慢的原因是多方面的,如果毒物影响了食欲或消化系统的功能受累而厌食或拒食,可以是体重改变。如果是因毒物影响食物的吸收和利用,也能导致体重变化。