配制培养基的方法
培养基配方
一、LB培养基：Yeast extract 5 g/LTryptone 10 g/LNacl 10 g/LPH为7.0 若配制固体培养基加入1.5%的琼脂。
二、YEB培养基:Yeast extract 1 g/LPeptone(或Tryptone) 5 g/LBeef extract 5 g/LSucrose 5 g/LMgSO4 2 mmol/LPH为7.0 若配制固体培养基加入1.5%的琼脂。
三、N6D2培养基(2,4D浓度2mg/L)：① N6大量母液1：20×大量元素(1L) 50mlKNO356.6g(NH4)2SO49.26gKH2PO48g② N6大量母液2：40×大量元素(500ml) 25mlCaCl2·2H2O 3.32g③ N6大量母液3：40×大量元素(500ml) 25mlMgSO4∙7H2O 3.7g④ B5微量元素I：100×微量元素（1L） 10ml溶液A：MnSO4∙H2O 781mgZnSO4∙7H2O 200mg溶于400ml无菌水溶液B：H 3BO3300mgKI 75mg溶于400ml无菌水然后缓慢将溶液A和溶液B混合，定容至1L⑤ B5微量元素II：1000×微量元素（500ml） 1mlNa2MoO4·2H2O 125mgCuSO4·5H2O 12.5mgCoCl2·6H2O 12.5mg⑥ B5维生素I：100×维生素（500ml） 10ml盐酸硫胺素 500mg盐酸吡哆醇 50mg烟酸 50mg⑦ B5维生素II：100×维生素（500ml） 10ml甘氨酸 100mg⑧200×铁盐(500ml) 5mlNa2-EDTA 3730mgFeSO4·7H2O 2780mg⑨ 2,4 D：100×2,4 D 10ml200mg 2,4 D，先溶于1ml 无水乙醇中，再定容到1L。
培养基及配制
A 无机大量母液(扩大10倍配1L )
成分
硝酸钾 硝酸铵 硫酸镁 磷酸二氢钾 氯化钙
称量工具
托盘天平 百分电子天平
注意：无机大量母液中的各种物质在混合过程中 有些离子易产生沉淀，应使每种物质先充分溶解 ，再进行混合，而且钙盐最后缓慢加入进去。
B 无机微量母液（扩大100倍配1000ml）
成分
硼酸，硫酸铜， 硫酸锰，硫酸锌， 氯化钴，钼酸钠， 碘化钾
大规模生产时可用自来水。
但研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不 良效果。
药品： 应选取等级较高的化学纯（CP）或分析纯(AR)； 药品的称量一定要准确、正确，防止药勺之间的交叉
污染。
2 培养基母液的配制和保存
2.1 母液（贮备液，stock solution)配制的目的
1）方便配置其他培养基； 2）保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取 3）便于低温保藏。
称量工具
万分电子天平
C 铁盐（扩大100倍1000ml）
铁盐
硫酸亚铁， Na2-EDTA
注意：铁盐选用硫酸亚铁而不用硫酸铁，是因为它 溶解后易产生红色的氢氧化铁沉淀。
在装有800ml 蒸馏水的烧杯中加入2粒氢氧化钠。溶解后加入3.73g EDTA-Na2 ，加热使其全部溶解，然后边搅拌边慢慢加入2.78g FeSO4.7H2O直至全部溶解， 冷却后定容至1000ml，置于冰箱中备用。
。 较生长素和细胞分裂素少用，可溶于水。
ABA →因物种不同，能促进或抑制愈伤组织生长；
5 琼脂/培养体支持材料
5.1.琼脂 (1)用量 6－10g/L (2)种类 琼脂粉 琼脂条 (3)作用 固化作用 注意：琼脂使用有优缺点；新买应试凝固力。
植物组织培养基的配制—培养基制作方法
• 6-BA:7.5ml
• NAA:5ml
• 大量Ⅰ母液吸取量（20倍）：6.25ml
• 大量Ⅱ母液吸取量（20倍）：6.25ml
• 微量母液吸取量(200倍)：1.25ml
• 铁盐母液吸取量（100倍）：2.5ml
• 有机物母液吸取量：甘氨酸（200倍）：1.25ml
•
盐酸硫胺素+盐酸吡哆醇+烟酸：1.25ml
• 2、取少量蒸馏水或去离子水（培养基总量的1/2-2/3的蒸馏水）加入烧杯中。
• 3、按需称取琼脂后加入（2）水中加热搅拌均匀。加入称好的糖。
如何配置1mol/LNaOH100ml?
• 4、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。（一般最后加激素母液）
• 5、定容。
• 6、调PH值。用0.1mol/L、0.5mol/L、1mol/LNaOH和HCl调至所需数值。
分化：1/2MS+2.5mg/L6BA+0.2mg/LNAA+20g/L白糖+4g/L琼脂
• 大量Ⅰ母液吸取量：
• 大量Ⅱ母液吸取量：
• 微量母液吸取量(200倍)：
• 铁盐母液吸取量（100倍）：
• 有机物母液吸取量：甘氨酸（200倍）：
•
盐酸硫胺素+盐酸吡哆醇+烟酸：
• 肌醇母液吸取量（50倍）：
• 2、取少量蒸馏水或去离子水（培养基总量的1/2-2/3的蒸馏水）加入烧杯中。 • 3、按需称取琼脂、糖。 • 4、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。
（一般最后加激素母液） • 5、定容。 • 6、调PH值。用0.1mol/L、0.5mol/L、1mol/LNaOH和HCl调至所需数值。 • 7、分装。 • 8、封口。 • 9、灭菌 • 10、冷却备用。书写标签（培养基类型代码、配制日期、配制人）
DMEM培养基配制方法
DMEM培养基配制方法DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种常用的细胞培养基，广泛应用于细胞培养、病毒繁殖和实验室研究中。
DMEM培养基含有多种必需和非必需氨基酸、糖类、维生素和盐类成分，提供了生长细胞所需的营养和环境。
以下是DMEM培养基的配制方法。
配制DMEM培养基的主要成分包括基础培养基、补充物和pH调节剂。
基础培养基：1.准备适量的无菌去离子水，用于稀释和配制DMEM培养基。
补充物：1.氨基酸：将提供的无菌氨基酸液中的每种氨基酸均匀混合，制得氨基酸混合液。
如有需要，可以根据实验需求添加特定的氨基酸。
2.糖类：将葡萄糖溶液与无菌去离子水混合，配制成葡萄糖溶液。
3.维生素：将提供的无菌维生素溶液与去离子水混合，制得维生素溶液。
4.盐类：将提供的无菌盐溶液与去离子水混合，制得盐溶液。
pH调节剂：1. 英文名Tris（Tris(hydroxymethyl)aminomethane）：是一种常用的pH缓冲剂。
取适量的Tris溶液。
2. 英文名Sodium bicarbonate：是一种重要的pH调节剂，可提供细胞培养中所需的碱性环境。
取适量的Sodium bicarbonate溶液。
先准备好所需的试剂和仪器，并保证它们是无菌的。
配制过程如下：1.取适量的基础培养基（DMEM），移至无菌培养瓶中。
2.依次向DMEM基础培养基中加入补充物。
首先加入氨基酸混合液，根据提供的比例将其加入培养基中，充分混合。
然后加入葡萄糖溶液、维生素溶液和盐溶液，依次混合均匀。
3. 加入适量的Tris溶液，用于调节pH值。
根据实验需求和DMEM配方，逐渐加入Tris溶液，同时用pH计测量pH值，直到达到所需的pH范围（通常为7.2-7.4）。
4. 加入适量的无菌Sodium bicarbonate溶液，用于调节和维持培养基的碱性环境。
根据实验需求和DMEM配方，逐渐加入Sodium bicarbonate溶液，充分混合。
液体培养基配制方法
液体培养基配制方法方法/步骤1、配制溶液向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。
对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。
配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。
并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。
2、调节pH值用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。
3、过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。
用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。
4、分装已过滤的培养基应进行分装。
如果要制作斜面培养基，需将培养基分装于试管中。
如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则需将培养基分装于锥形瓶内。
分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。
分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。
一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。
每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。
5、加棉塞分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。
堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。
棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。
棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。
马丁氏培养基的配制方法
马丁氏培养基的配制方法马丁氏培养基是一种常用的微生物培养基，在微生物学研究中有广泛的应用。
它以其简单的配制方法和适用范围广的特点受到了许多科研工作者的青睐。
一、马丁氏培养基的组成马丁氏培养基的主要组成成分包括胰蛋白胨、酵母浸出物、葡萄糖、甘氨酸、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸铁、硫酸锌等。
二、马丁氏培养基的配制步骤1. 首先，将适量的胰蛋白胨和酵母浸出物加入适量蒸馏水中，充分溶解。
2. 然后，加入适量的葡萄糖和甘氨酸，再次充分溶解。
3. 接下来，加入适量的磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸铁和硫酸锌，搅拌均匀。
4. 最后，加入足够的蒸馏水，将总体积调整至所需的最终体积。
三、马丁氏培养基的pH调节马丁氏培养基的pH值通常在7.2-7.4之间，可以通过加入适量的氢氧化钠或盐酸来调节。
在调节pH值时，应使用pH计进行准确测量，并逐滴加入调节剂，搅拌均匀后再次测量pH值，直至达到所需范围。
四、马丁氏培养基的灭菌配制好的马丁氏培养基应进行灭菌处理，以防止其受到外界微生物的污染。
常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌和滤过灭菌。
对于高压蒸汽灭菌，将培养基装入适量的培养皿或试管中，放入高压蒸汽灭菌器中进行灭菌处理。
对于滤过灭菌，可使用0.22μm的微孔滤膜将培养基过滤，以除去其中的微生物。
五、马丁氏培养基的保存和使用配制好的马丁氏培养基应保存在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射。
使用时，应注意避免污染，使用无菌技术操作。
将所需的培养基倒入无菌培养皿或试管中，进行所需的微生物培养。
六、马丁氏培养基的应用马丁氏培养基是一种通用的培养基，适用于多种微生物的培养，包括细菌、真菌和酵母等。
它可以用于微生物的分离、培养、鉴定和保存等方面的研究。
在临床医学中，马丁氏培养基也常被用于细菌感染的诊断。
总结：马丁氏培养基是一种常用的微生物培养基，其配制方法相对简单，成分丰富，适用范围广。
在使用时，需要注意配制过程的无菌操作和灭菌处理，以保证培养基的质量。
马丁氏培养基在微生物学研究中起着重要的作用，对于微生物的培养和研究具有重要的意义。
完全培养基配制操作方法
完全培养基配制操作方法完全培养基（Complete medium）是一种为细胞培养提供所有必需营养物质的培养基。
完全培养基包括有机和无机物质、糖、氨基酸、维生素和激素等物质，可以满足细胞的生长和增殖的需求。
下面是一种常见的制备完全培养基的方法。
1. 准备实验室所需设备和试剂，包括称量器具、移液器、试剂瓶等。
2. 按照预先计算好的配方准备所需的试剂。
完全培养基的配方可以根据具体实验需要调整。
以下为一种常用的完全培养基配方：- DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）培养基- FBS（Fetal Bovine Serum）胎牛血清- L-谷氨酰胺粉末（或谷氨酸盐酸盐）- 青霉素和链霉素（或青霉素和链霉素抗生素混合物）3. 使用称量器具称量所需的DMEM粉末，并将其溶解于无菌蒸馏水中。
根据DMEM培养基的配方指导书，溶解适量的DMEM粉末可以得到一定浓度的DMEM培养基溶液。
4. 将配制好的DMEM培养基溶液过滤器通过0.22微米的滤膜过滤器以去除悬浮物和细菌，得到无菌的DMEM培养基液。
5. 加入适量的FBS胎牛血清到DMEM培养基中。
一般情况下，FBS浓度为10%。
加入FBS胎牛血清的目的是提供细胞生长所需的营养物质和生长因子。
6. 加入适量的L-谷氨酰胺粉末（或谷氨酸盐酸盐）到DMEM培养基中，以提供氨基酸供细胞使用。
L-谷氨酰胺是蛋白质合成的重要组成部分。
7. 加入适量的青霉素和链霉素（或青霉素和链霉素抗生素混合物）到DMEM培养基中，以预防细菌污染。
青霉素和链霉素是在无菌环境中操作时添加的，以防止培养物中细菌的生长。
8. 将配制好的完全培养基溶液分装到无菌的试剂瓶中，并进行无菌操作，以避免污染。
常用的分装方式是使用无菌移液器将培养基吸取到试剂瓶中。
9. 将完全培养基储存在低温干燥的地方，以延长其保存时间。
10. 在使用前，将完全培养基溶液加热到37摄氏度，使其达到体内温度。
培养基配制的基本过程
培养基配制的基本过程培养基配制是微生物学实验中非常重要的一步，它为微生物的生长和研究提供了必要的环境。
培养基配制的基本过程包括选择适当的培养基类型、称取原料、溶解和调整pH值、灭菌、分装和保存等步骤。
下面将具体介绍培养基配制的基本过程。
首先，在培养基配制中，选择适当的培养基类型非常重要。
根据不同的微生物的生长需求和实验目的，常用的培养基包括营养琼脂培养基、固体培养基、液体培养基、选择性培养基等。
每种培养基都有其特定的成分组成，用以满足不同微生物的生长要求和研究需要。
接下来，称取原料是培养基配制过程中的关键步骤之一、根据所选用的培养基配方，按照所需成分比例准确地称取各种原料。
常见的原料包括不同类型的碳源、氮源、矿物盐、维生素和生长因子等。
称取原料时需要特别注意精确称量，并注意保持实验室操作的无菌环境，以避免任何外界污染。
溶解和调整pH值是培养基配制过程中的下一步。
根据所需配方，将称取好的各种原料加入适量的蒸馏水中，并用磁力搅拌器混合均匀。
溶解过程中需要加热，以帮助原料溶解和配制溶液均匀混合。
此外，根据所选用的培养基配方，需要调整溶液的pH值。
这是因为不同微生物对于酸碱度的要求不同。
通常使用盐酸（HCl）或氢氧化钠（NaOH）这样的酸碱溶液进行调整，并借助酸碱度测试纸（pH试纸）来验证溶液的pH值是否达到所需的范围。
接下来是灭菌步骤，确保培养基无菌。
灭菌常常采用高温高压的方法，即压力高于大气压力的蒸汽灭菌。
将已调整好pH值的培养基装入试管或培养皿中，并将其密封，以防止外界的微生物再次污染。
然后将试管或培养皿放入灭菌锅中，进行高温高压灭菌处理。
灭菌时间通常为15-20分钟，温度和压力要按照所需的灭菌条件进行调整。
最后，分装和保存是培养基配制过程中的最后一步。
将灭菌好的培养基分装到试管、培养瓶或琼脂平板中，制成特定的培养基形式，以便于后续的微生物培养和研究。
分装时同样需要保持无菌操作的条件，避免任何外界的微生物污染。
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配制培养基的方法
配制培养基的方法可以分为以下几个步骤：
1. 准备所需材料：培养基成分包括水、碳源、氮源、矿质元素、生长因子等。
根据不同的微生物需要，选择合适的成分。
2. 称量和溶解：根据配方将各成分称量出来，然后用适量的去离子水溶解。
3. 调整pH值：使用pH计将培养基的pH值调整到合适的范围内，通常为7.0左右。
4. 加热和消毒：将溶解后的培养基加热至沸腾，保持沸腾1-2分钟以杀灭可能存在的微生物。
然后，使用高压灭菌器或高温灭菌法将培养基灭菌。
5. 倾倒和分装：将已灭菌的培养基倒入无菌培养瓶或培养皿中，然后密封好。
6. 检查和保存：检查培养基是否有异常，如变色或发霉等。
将已制备好的培养基保存在合适的温度和条件下，以防止污染。
以上是一般的培养基制备方法，具体的步骤和条件可以根据不同的微生物和实验需要进行调整。