外泌体在肺结核中的研究进展
结核分枝杆菌特异性细胞因子(IFN-γ、IL-2)联合检测在肺外结核诊断中的临床价值
结核分枝杆菌特异性细胞因子 (IFN-γ、IL-2)联合检测在肺外结核诊断中的临床价值【摘要】目的：分析结核分枝杆菌特异性细胞因子(IFN-γ、IL-2)联合检测（双因子检测）在肺外结核诊断中的临床应用价值。
方法：对本院2020年11月-2021年9月入院的63例临床诊断为肺外结核的患者以及52例非结核患者进行双因子联合检测、 -干扰素释放试验（T-spot检测）以及PPD检测，对结果进行分析。
结果：对入组的115例患者行双因子联合检测、T-spot检测及PPD检测，对检测结果进行分析得，双因子并联检测、串联检测、T-spot检测和PPD检测灵敏度分别为95.2%、84.1%、93.7%和95.2%；双因子并联检测、串联检测、T-spot检测和PPD检测特异性分别为94.2%、100.0%、98.1%和40.4%。
双因子并联检测灵敏度高于T-spot检测，串联检测特异性高于T-spot检测和PPD检测。
结论：在肺外结核的诊断中，双因子并联检测的灵敏度高于T-spot检测，使用双阳性为阳性指标的串联检测的特异性高于T=spot和PPD检测。
双因子检测在传统 -干扰素释放试验基础上增加了对IL-2的检测，实现了对肺外结核感染的特异性检出，在肺外结核的诊断上有非常重要的临床价值。
【关键词】肺外结核，IFN-γ，IL-2，双因子结核病是全世界十大死亡原因之一，根据2020年WHO发布的全球结核病报告显示，中国作为全球的30个结核病高负担国家之一，2019年结核病发病率为58/10万人，且新发患者数达到83.3万1,2, 其中很大一部分是肺外结核的患者，相比于肺内结核这一部分患者极易被忽略，是不可忽视的结核病传染源。
目前临床上有关肺外结核的诊断方式大多具有一定的局限性。
主要诊断方式包括患者患处组织以及穿刺物的抗酸染色以及结核分枝杆菌培养，结核菌素试验，针对结核分枝杆菌的抗体检测法，荧光定量PCR法，和γ干扰素释放试验等3-7。
耐药结核病的治疗及其进展(2022)
耐药结核病的治疗及其进展耐药结核病指病原体对抗结核药物产生耐受性的疾病状态，已成为当前全球重要公共卫生问题。
根据当前流行性病学分析，全球结核病总耐药率高达20%，耐多药率达到5%。
2018-2019年全国对治疗结核病药物产生耐药性的调查结果表明，我国肺结核患者对多种药物产生耐药性的概率已经＞8%。
故研究耐药结核病的治疗具有非常重要的意义。
耐药结核病治疗新药速递1.PretomanidPretomanid 是一种口服硝基咪唑类药物，具有体外和体内抗结核分枝杆菌（MTB）活性。
它通过抑制分枝菌酸生物合成杀死活性MTB，阻断细胞壁的产生。
近期，《临床微生物学与感染》发表的一篇纳入8项有关pretomanid治疗利福平耐药结核病的Meta分析研究数据表明，Pretomanid在0-14天、0-2天、0-7天均有良好的早期杀菌活性（表1）。
表1含Pretomanid方案对结核分枝杆菌的早期杀菌活性2.DelpazolidDelpazolid是一种新型恶唑烷酮类药物，已在疗效和毒性的方面进行了非临床研究以及1期临床研究。
Delpazolid对革兰氏阳性菌（包括结核分枝杆菌）具有体外活性。
近期，《抗菌物和化学疗法》发表的一篇研究评估了Delpazolid在结核病患者中的杀菌活性、安全性和药代动力学。
79名年龄在19~79间的受试者被随机分配至各治疗组，应用delpazolid 800 mg QD，400 mg BID，800 mg BID，1200 mg QD和异烟肼，利福平，吡嗪酰胺和乙胺丁醇（HRZE）方案以及利奈唑胺600mg BID进行活性对照。
结果表明应用delpazolid 800mg QD, 400mg BID, 800mg BID，和1,200mg QD 后菌落形成单位（log-CFU）平均每天下降值分别为0.044±0.016，0.053±0.017，0.043±0.016和0.019±0.017：而应用HRZE和利奈唑胺（600mg BID）后1og-CFU平均每天下降值分别为0.192±0.028和0.154±0.023（表2）。
外泌体研究概述Exosome
案例2
Exosome-Mediated miR-155 Transfer from Smooth Muscle Cells to Endothelial Cells Induces Endothelial Injuryr Therapy (2017)
1. 外泌体概述
2. 外泌体分离方法
（1）超速离心：
2000 g for 20 min to eliminate dead cells; 10,000 g for 30 min to remove debris; filtrated though 0.22 μm filter; 100,000 g for 70 min.
密度梯度超速离心：
蔗糖、碘克沙醇 1.15-1.19 g / mL
案例1
Adipose Tissue Macrophage-Derived Exosomal miRNAs Can Modulate In Vivo and In Vitro Insulin Sensitivity, Cell (2017)
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EXOCARTA
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VESICLEPEDIA
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EVPEDIA
HTTP://STUDENT4.POSTECH.AC.KR/EVPEDIA2_XE/XE/
外泌体研究概述
exosome
| 1. 外泌体概述 | 2. 外泌体分离方法 | 3. 外泌体检测方法 | 4. 外泌体常用数据库
外泌体是细胞向胞外分泌的囊泡类小体，具有脂质双层膜结构， 可存在于细胞培养上清液、血浆、血清、唾液、尿液、羊水和恶 性腹水以及其它生物体液中。
外泌体携带特异性的蛋白质、脂质以及功能性的 mRNA、 ncRNA等生物活性物质，在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促 血管新生和抗肿瘤免疫等生理过程，与多种疾病的发生和进程密 切相关。由于外泌体的特殊结构和功能， 使得它具有潜在的应用 价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可 以作为治疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。
结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因及其突变的研究进展
结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因及其突变的研究进展摘要】本文就报道的结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因katG、inhA、ahpC、kasA、ndh、OxyR-ahpC、mabA-inhA、furA-katG、fabG-inhA、efpA、ini (A,B,C)及其突变位点进行综述。
【关键词】结核分枝杆菌异烟肼耐药基因突变结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)引起的慢性传染病。
随着耐药结核病，尤其是耐多药和广泛耐药结核病的出现，给结核病的防控工作带来了严峻挑战。
异烟肼是治疗结核病主要药物之一，但MTB耐异烟肼率已达17.6%，其耐药机制尚不明确，大多认为与MTB相关基因突变有关[1]。
本文综述目前国内外报道的MTB耐异烟肼相关基因及其常见突变位点，以进一步了解MTB耐异烟肼的发生机制。
1 katG基因异烟肼经MTB katG基因编码的过氧化氢-过氧化物酶活化后产生杀菌作用，katG突变使过氧化氢-过氧化物酶失活，导致MTB对异烟肼耐药。
KatG最常见突变位点是Ser315Thr。
Khadka JB等研究尼泊尔地区107例耐异烟肼菌株中，Ser315Thr及Ser315Ile突变率分别为77.6%及17.1%。
陈玲等研究显示Ser315Thr突变频率为66.7%[2]。
315位点还有Ser→Asn、Ser→Thr、Ser→Arg和Ser→Gly突变形式。
此外，还存在Val230Met、Pro232Gln、Gly237Glu、Gly309Cys、Asp304Glu、Asp357His、Asp357Asn、Arg463Leu、His276Met、Gln295His、Glu454Arg等突变[2-5]。
2 inhA基因inhA基因编码NADH依赖的enoyl-Acp还原酶，该酶催化α-不饱和脂肪酸转化为饱和脂肪酸，产生的长链脂肪酸是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分。
异烟肼与分枝菌酸合成途径中的NADH依赖的enoyl-Acp复合体结合，阻断90%以上长链脂肪酸合成，从而抑制MTB生长。
外泌体在病毒感染中的研究进展
外泌体在病毒感染中的研究进展•综述•杜凯丽孙晓东徐红霞付攀桑明湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院中心实验室，441000通信作者：桑明，Email:smxd2000@，电话【摘要】外泌体（e x o s o m e s)是由细胞释放至胞外的膜性囊泡，直径40~100n m。
外泌体可介导细胞间信息传递和物质交换，在疾病的发生发展中发挥着重要作用。
在病毒感染过程中，外泌体既可传递病毒核酸、R N A和蛋白质，又可传递抗病毒分子引起免疫应答。
通过对外泌体的深人研究，可在病毒感染临床治疗中提供新前景。
【关键词】外泌体；病毒；感染D O I：10.3760/c m a.j.i s s n.1673-4092.2021.01.0201987年，外泌体（ex〇s〇mes)在绵羊网织红细胞中被 发现，并被认为是细胞的垃圾箱。
外泌体直径为40~100n m,密度为1.13~1.19g/m L,外层包裹着含有脂蛋白的脂 质双分子层。
外泌体中含有多种蛋白质、核酸和脂质等。
电镜下外泌体大小均一，呈杯状或一侧凹陷的圆形或椭圆 形结构。
外泌体天然存在于各种体液中，包括血液、唾液、尿液、淋巴液、乳汁、精液等，并来源于多种细胞，如淋 巴细胞、树突状细胞（d e n d r i t i c c e l l，D C>等，不同细胞来 源的外泌体功能亦不同l u。
外泌体介导细胞间信息传递和 物质交换，在疾病的发生发展中发挥着重要作用。
外泌体 通过传递具有生物学活性的蛋白质、脂类和R N A,通过激 活靶细胞产生生物学效应，并涉及多种生理及病理活动，如免疫应答、神经功能调节、癌症进展和病毒感染等。
病 毒感染可以诱导外泌体组份的变化，并且外泌体已涉及病 毒的发病机理和传播。
本文综述了外泌体在病毒感染中发 挥的双重作用，可在病毒感染临床治疗中提供运用前景。
1外泌体的特性及作用机制细胞经内吞作用形成早期核内体，待管腔内囊泡(i n t r a l u m i n a l v e s i c l e s,I L V s )生成后形成晚期核内体,即多囊泡体（m u l t i v e s i c u l a r b o d i e s,M V B s)，而外泌体起源于晚期内体膜的向内出芽，产生的小I L V s。
外泌体在骨科疾病治疗中的作用
・综述・外泌体在骨科疾病治疗中的作用王鑫付海亮摘要外泌体是一种由各种类型细胞分泌的囊泡.它经由脂质膜包裹着各种核酸、蛋白质、脂质等生物活性物质。
基仙研究显示.各种来源的外泌体治疗骨关节炎、骨质疏松、糖皮质激素性股骨头坏死、骨缺损、骨折等骨科疾病取得良好效果。
其作用机制涉及各种基因表达调控及各种信号转导通路激活.从而调控软骨细胞、成骨细胞、破骨细胞、血管内皮细胞等生理活动。
该文就外泌体在骨科疾病治疗中的作用作一综述。
关键词外泌体；骨关节炎；骨质疏松；股骨头坏死；骨折；骨缺损1X）1:10.3969/j.issn.1673-7083.2021.02.009运用各种间充质干细胞、生长因子、支架的干细胞疗法是较有前景的组织再生策略之一。
越来越多的研究表明，间充质干细胞的生物学效应来源于其分泌的外泌体。
外泌体能展现出与其来源细胞相似的生物学特性，且直接应用外泌体治疗无明显不良反应，还能显著降低免疫原性、致瘤性、血管堵塞等风险曲。
1外泌体构成及特点外泌体是由细胞分泌的细胞外囊泡，直径为40〜100nm。
外泌体膜表面具有标志性膜蛋白如CI）9、CD63、CD81等，膜内包裹着蛋白、核酸、脂质等活性物质。
外泌体的脂膜能很好地保护其含有的生物活性物质使其不被降解.并将蛋白质、DNA、RNA等物质从母细胞转移到靶细胞中。
外泌体作为重要的旁分泌效应因子在细胞信息交流中发挥着重要的作用⑷。
外泌体特性随着细胞来源不同而不同，且同一细胞不同时间段、不同生理病理状态下产生的外泌体也具有不同的特点。
2外泌体治疗骨科疾病2.1骨关节炎骨关节炎（OA）是常见关节炎之一，其病理特征包括软骨退化、软骨下骨硬化、形成骨赘、发生滑膜炎症和韧带钙化等。
目前临床上（）A主要治疗方式仍是口服非當体类抗炎药，然而其治标不治本.所以学者们仍在寻找新的治疗策略。
过往研究集中在干细胞治疗，如关节内间充质干细胞可以阻止软骨退化.延缓骨关节炎进程。
后续研究表明，干细胞治疗作者单位:150001.哈尔滨医科大学附届第二庆院骨外科通信作者：付海亮E-mail：****************功能来自于其旁分泌作用.包括其分泌的外泌体和微粒等。
潜伏性结核感染进展为活动性结核病的机制研究
• 276 •结核与肺部疾病杂志2020年〗2月第1卷第3期J Tubeir Limg DLs，December 2020. Vol. 1, No. 3综述潜伏性结核感染进展为活动性结核病的机制研究马慧敏张丽帆刘晓清【摘要】世界卫生组织将潜伏性结核感染（latent tuberculosis infection.LTB D定义为人体受到结核分枝杆菌抗原刺激后出现持续免疫反应，而没有表现出活动性结核病临床证据的…种状态。
全球约1/4的人感染了结核分枝杆菌.其中约5%〜10%的感染者最终会进展为活动性结核病。
因此.研究L T B I进展为活动性结核病的机制对结核病防控意义重大。
作者从结核分枝杆菌感染进程、I/TB丨进展为活动性结核病的免疫学改变，以及诱发LTBI 再活动的危险因素等方面对这一热点问题进行综述。
【关键词】潜伏性结核感染；活动性结核病；研究；综述Research progress on the mechanism of latent tuIxTculosis infection progressing to active tu!x*rcul(>sis M A H u i-m n i.Z H A N G L IU X ia o-q in g. Dix'isioti of Infectious Diseases, Peking Union Medical College Hospital *Chinese Academy of Medical Sciences, Peking Utiioti Medical College, Beijitig 100730, ChinaCorresponding a u th o r：L IU X iao-qi)ig, E m a il：liuxq@【Abstract】Latent tuberculosis infection (LTBI) is defined as a state of persistent immune response to stimulation by Mycobacterium tuberculosis antigens with no evidence of clinically manifest active tuberculosivS. Up to one third of the world^s population is estimated to be infected with Myrobacteriuni tuberculosis,and 5% —10% of those infected people will develop active tuberculosis disease sometime during their lives. Therefore, it is of great significance for tuberculosis prevention and control to study the mechanism of LTBI progressing to active tuberculosis. We reviewed this hot issue from the aspects of Myrobacterium tuberculosis infection process, immunological changes during LTBI progressing to active tuberculosis and the risk factors that induce LTBI reactivation, etc.【Key words】Latent tuberculosis infection; Active tuberculosis；Research；Review据世界卫生组织估计.2019年全球新发结核病患者近1000万例，死亡患者约141万例;估算我国新发结核病患者83. 3万例.占结核病患者总数的8. 4%.仅次于印度（26%)和印度尼西亚(8. 5%),居世界第三位。
ENO1抑制剂AP-Ⅲ-a4抑制糖酵解对结核抗原刺激致T细胞耗竭的干预作用研究
ENO1抑制剂AP-Ⅲ-a4抑制糖酵解对结核抗原刺激致T细胞耗竭的干预作用研究ENO1抑制剂AP-Ⅲ-a4抑制糖酵解对结核抗原刺激致T细胞耗竭的干预作用研究摘要：结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，严重威胁人类健康。
本研究旨在探究ENO1抑制剂AP-Ⅲ-a4对结核抗原刺激致T细胞耗竭的干预作用。
采用体外培养的人外周血单个核细胞（PBMCs），通过实时荧光定量PCR和流式细胞术分析了糖酵解途径相关基因(TPI1、PKM2、GAPDH、LDHA和ENO1)的表达和葡萄糖、乳酸含量的检测。
结果显示，结核抗原刺激后T细胞的糖酵解途径基因表达上调，糖酵解产物乳酸积累明显增加。
但在AP-Ⅲ-a4处理下，T细胞的糖酵解途径基因表达下调，乳酸含量显著降低。
此外，AP-Ⅲ-a4处理也抑制了结核抗原刺激下T细胞的细胞凋亡，增加了细胞增殖能力。
综合上述结果，我们推测AP-Ⅲ-a4通过抑制糖酵解途径，减少乳酸的积累，从而干预了结核抗原刺激下T细胞的耗竭现象。
关键词：结核病，T细胞，糖酵解，乳酸，ENO1抑制剂AP-Ⅲ-a4，耗竭引言：结核病是一种严重威胁人类健康的慢性传染病，由结核分枝杆菌引起。
结核分枝杆菌侵入机体后，致病菌与宿主免疫系统之间的相互作用引起了结核病的发展过程。
T细胞在抵抗结核感染中起着重要作用，然而，长期的结核抗原刺激会导致T细胞的功能耗竭，抑制免疫反应。
糖酵解作为T细胞能量代谢的重要途径，在T细胞功能中扮演着重要角色。
本研究旨在探究ENO1抑制剂AP-Ⅲ-a4是否能够通过调控糖酵解途径来干预结核抗原刺激下T细胞的耗竭现象。
材料与方法：采用体外培养的人外周血单个核细胞（PBMCs）作为实验材料，将PBMCs分成不同处理组：对照组、结核抗原刺激组和AP-Ⅲ-a4处理组。
使用实时荧光定量PCR和流式细胞术分析了糖酵解途径相关基因（TPI1、PKM2、GAPDH、LDHA和ENO1）的表达水平，以及糖酵解产物葡萄糖和乳酸的含量。
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志,２０１１,８(２):１４７Ｇ１４９．[２３]俞小飞,徐燕,张梦．妊娠高血压患者与DＧ二聚体、维生素B１２、血清同型半胱氨酸的关系[J]．医学检验与临床,２０１５,２６(４):６１Ｇ６２,２４．[２４]郭跃丽,奚经巧,孔万仲,等．妊娠期Hcy和凝血相关指标与胎儿生长发育的临床研究[J]．中国妇幼健康研究,２０１６,２７(２):２１０Ｇ２１３．[２５]黄华,梁红梅,罗奇智,等
．
孕妇血清同型半胱氨酸、叶酸、
维生素B１２水平与妊娠高血压综合征关系探讨[J]．国际检验医学杂志,２０１４,３５(２１):２８６９Ｇ２８７１．
(收稿日期:２０１７Ｇ１０Ｇ２４ 修回日期:２０１８Ｇ０１Ｇ０５)综
述
外泌体在肺结核中的研究进展∗
李志强１综述,张俊爱２△审校(１．广东医科大学医学检验学院,东莞５２３８０８;２．广东医科大学广东省分子诊断重点实验室,东莞５２３８０８)
摘 要:目的 外泌体可由几乎所有类型细胞产生并释放,其被发现存在于多种体液中,包括血液、尿液、
唾液、胸腔积液和支气管肺泡灌洗液(BALF)等.外泌体含有的组分在不同生理病理条件下不同,外泌体在调
节细胞功能及疾病发生中扮演重要角色.外泌体在细菌组分传播中起重要作用.本文阐述了外泌体的研究背景、外泌体的形成和分泌、外泌体与结核分枝杆菌(MTB)的相互作用.旨在为结核疫苗和诊断靶标的研究提供
新的思路.关键词:外泌体; 结核分枝杆菌; 巨噬细胞; 疫苗; 诊断
DOI:１０．３９６９/j．issn．１６７３Ｇ４１３０．２０１８．０９．０２５中图法分类号:R５２９．３
文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０１８)０９Ｇ１１０７Ｇ０６文献标识码:A
外泌体是释放到细胞外的直径为４０~１００nm膜性胞外囊泡(EVs),可运载多种蛋白质、脂质及核酸,是一种重要的细胞间信息传递载体[１].结核分枝杆菌(MTB)是肺结核的主要病原菌,作为一种兼性胞内寄生菌,通过感染巨噬细胞为自身创造适宜繁殖环境.MTB在感染后期能诱导宿主细胞死亡以促进胞内MBT外排,也可通过坏死的感染细胞碎片或凋亡小体的释放将致病成分散布到胞外环境.这些外泌体不仅携带各种病原体相关分子模式(PAMPs),还包含T、B细胞抗原蛋白,核酸和病原体相关毒素.根据产生机制不同[２],胞外囊泡分为３类:外泌体、微囊泡和凋亡小体.根据国际外泌体协会建议,文献中所认为的外泌体往往是各种囊泡的混合物,以往多数研究中囊泡纯度并无严格明确,囊泡群中可能包含外泌体,微囊泡甚至细菌胞外囊泡,因此,本文采用“外泌体”一词包括其他类型来源胞外囊泡.本文阐述了MTB感染细胞来源外泌体的免疫调节作用,及其作为结核疫苗和诊断靶标的新思路.１ 外泌体的研究背景 “外泌体”一词最初由JOHNSTONE等[３]在研究网织红细胞成熟过程中囊泡形成时提出.RAPOSO等[４]发现EB病毒转化人B淋巴细胞源囊泡表面表达主要相容性复合体,具有激活免疫系统作用,与红细胞外泌体形成和释放途径相似,这极大激起研究者对
外泌体免疫调节作用的研究热情.定义外泌体在免疫应答中的作用的相关研究大多数在自身免疫和癌症生物学背景下进行,而阐述外泌体对感染性疾病如肺结核感染的免疫作用的研究少之又少.在对鸟分枝杆菌的研究中,BEATTY等[５]观察到鸟分枝杆菌感染过程中相关PAMPs如脂阿拉伯甘露糖(LAM)
和磷脂酰肌醇甘露糖苷(PIM)从吞噬小体被转运至
多囊体并释放到胞外,可在相邻未感染细胞检测到这些PAMPs.观察到鸟分枝杆菌、卡介苗或MTB感染巨噬细胞释放的囊泡含有LAM、糖肽脂和相对分子
质量为１９×１０３的脂蛋白等MTB组分,流式细胞术检测发现囊泡释放量与多种内体标志物(包括LAMP１、LAMP２、MHCⅠ、Ⅱ和４次跨膜蛋白CD８１)
的数量呈正相关[６Ｇ７].这些具有晚期内体标志物的囊
泡通过钙依赖性胞吐释放到胞外,暗示这些囊泡属于外泌体[８].PRADOSＧROSALES等[９]发现MTB可释放带有菌体成分的胞外囊泡,可引起Toll样受体(TLR)依赖性免疫应答.研究发现,感染细胞分泌的
胞外囊泡中含有脂聚糖与脂蛋白标记的MTB胞外囊泡和CD９、CD６３标记的宿主源性外泌体,但有部分细菌组分掺入宿主外泌体,提示外泌体可作为MTB胞外囊泡运输的次要途径[１０].MTB感染细胞释放的胞
７０１１国际检验医学杂志２０１８年５月第３９卷第９期 IntJLabMed,May２０１８,Vol．３９,No．９
∗基金项目:广东省医学科学基金项目(A２０１６６０６３、A２０１８４３４７);广东医学院面上培育项目(M２０１５０２１);广东医学院大学生创新实验项目(２０１６ZZDC００３、２０１６ZYDG００２);国家大学生创新创业训练项目(２０１６１０５７１０１９).△ 通信作者,EＧmail:zhangjunai＠gdmu．edu．cn. 本文引用格式:李志强,张俊爱．外泌体在肺结核中的研究进展[J]．国际检验医学杂志,２０１８,３９(９):１１０７Ｇ１１１２．外囊泡来源不同,导致其活性和成分也有差异,不同种类胞外囊泡对受体细胞可有协同或相反作用,这增加了对外泌体功能定义的复杂性和挑战性.２ 外泌体的形成和分泌 不同于细胞出芽脱落的微泡,外泌体是由内体途径生成.晚期内体向内出芽形成管腔状囊泡,经积累转变为多囊体,这些多囊体与溶酶体融合后发生降解,或与质膜融合,将管腔状囊泡释放至胞外空间,即外泌体[１１].作为一种胞内寄生菌,已被证明通过影响宿主细胞生理活动调节免疫应答,MTB控制宿主外泌体合成可作为胞内生存机制的一部分.研究发现,MTB可干扰胞内分选转运复合体合成而影响外泌体产生[１２].内吞或吞噬作用后MTB的一部分作为游离蛋白投放至外泌体[１３],提示某种信号机制对游离蛋白有引导分类作用.有研究者发现,在溶酶体和内体中MTB抗原蛋白运输到多囊体形成外泌体,分泌至胞外的机制,这一过程需要依赖E３连接酶介导的泛素化[１４].研究发现MTB感染Rab２７a缺陷小鼠骨髓来源巨噬细胞的外泌体分泌量较野生型小鼠显著减少,且利用表达重组蛋白Ag８５AＧDsRed的牛分枝杆菌卡介苗分别感染两种小鼠,在Rab２７a缺陷组分离的外泌体中,Ag８５AＧDsRed丰度较野生型低５倍[１５],以往Rab２７a已被鉴定为多囊体与质膜融合的关键调节因子,在外泌体生成分泌中发挥重要作用.感染细胞释放的外泌体还可携带MTB相关RNA[１６],但其纳入外泌体的机制目前尚不清楚,有研究发现分枝杆菌可能通过ESXＧ１分泌系统介导的吞噬体膜穿孔,使分枝杆菌DNA进入细胞质并与胞内受体结合[１７].也有研究显示李斯特菌可通过SecA２介导细菌核酸的分泌,使感染细胞通过胞浆免疫感受器对胞内细菌进行监测[１８].此外,有研究者对多囊体检测发现miRNA主要伴随诱导沉默复合体２种主要成分GWl８２和AG０２同时检出[１９],进一步发现对外泌体对AGO２分选可控制外泌体中miRNA表达水平[２０],研究还发现miRNA的沉默诱导和沉默复合物蛋白进入多囊体的能力依赖ESCRT复合体[２１].研究显示,RNA结合蛋白YＧboxproteinI(YBX１)可结合miRＧ２２３,YBX１在HEK２９３T细胞把miRNAs纳入外泌体过程中起重要作用[２２].３ 外泌体与MTB的相互作用３．１ 外泌体在肺结核病中的免疫调节作用 BHATＧNAGAR[６]和WANG[２３]等发现感染巨噬细胞释放的外泌体携带糖肽脂等菌体成分,通过TLK介导激活未感染巨噬细胞.MTB或卡介苗感染巨噬细胞释放的外泌体可通过引起肿瘤坏死因子α(TNFＧα)激活,调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)等因子分泌,进一步激活巨噬细胞抗结核免疫应答[７].GIRI等[２４]发现结核菌感染巨噬细胞释放的外泌体及其MTB培养滤液蛋白都可激活抗原特异性CD４＋和CD８＋T细胞表达γ干扰素(IFNＧγ)和ILＧ２,
促进骨髓来源树突状细胞(BMDCs)活化和成熟,而且
外泌体处理共培养的DC细胞和T细胞后,IFNＧγ和CD６９表达水平显著升高,引起更强烈的T细胞活化.
ANAND等[２５]发现这些外泌体表面表达更多热休克
蛋白７０(HSP７０),可激活核因子κB(NFＧκB)途径诱
导巨噬细胞释放肿瘤坏死因子而引起促炎反应.GIＧRI等[１３]通过蛋白质组学分析鉴定出一系列众所周知
的抗原蛋白如ESATＧ６(Rv３８７５)、Ag８５复合物(Rv３８０４c、Rv１８８６c、Rv０１２９c)、MPT６４(１９８０c)和
MPT６３(１９２６c),且发现MTB培养滤液蛋白处理细
胞后释放的外泌体,可促进巨噬细胞和DC细胞活化,体内试验也观察到幼稚T细胞的活化.研究发现,MTB感染Rab２７a缺陷小鼠巨噬细胞的外泌体分泌
量较野生型小鼠显著减少,与细菌负荷增加和活化T
细胞减少相关[１５].与Rab２７a缺陷小鼠分离的外泌体相比,野生型组外泌体诱导表达更高水平的CCL１、
IFNＧγ、RANTES、MIPＧ２、IL１aR和TNFＧα,进一步利
用表达K８５RHspX的H３７Rv与表达野生型HspX的H３７Rv分别感染处理,已知由H３７Rv表达的K８５RHspX并不靶向外泌体,结果前者检测出活化
T细胞数目显著减少,证明外泌体在体内感染期间介
导免疫系统激活,在MTB感染期间外泌体可增强T
细胞活化.引起免疫应答的胞外囊泡类型不仅限于外泌体,RAMACHANDRA等[２６]发现MTB感染巨噬细胞后协同ATP,使含有组织相容性复合体的微泡
和外泌体释放量增加,２种胞外囊泡都可刺激抗原特异性T细胞免疫应答.提示MTB感染过程中这种抗原交叉提呈可能是引起获得性免疫反应的重要机制,但与其他抗原提呈途径相比,外泌体所介导的抗原提呈的重要性还需进一步研究,并可根据感染宿主细胞内抗原分布和变化来评估感染的途径和阶段.另外感染巨噬细胞释放的外泌体所制作的疫苗,鼻内注射可引起TNFＧα和ILＧ１２表达,并观察到中性粒细胞和巨噬细胞募集到肺的现象,且发现感染小鼠分离的BALF中含有MTB成分的外泌体具有促炎作用[７],这些外泌体是由肉芽肿中感染巨噬细胞释放
的[２７],类似的是,研究者观察到结节病样肉芽肿患者
的BALF存在更多外泌体有更强促炎作用[２８].SINGH等[２９]发现MTB或卡介苗感染巨噬细胞释放
的外泌体可引起各种趋化因子分泌,诱导巨噬细胞和T细胞迁移,促进免疫细胞募集和肉芽肉形成,表明
外泌体在MTB感染有促进固有免疫应答的作用.值得一提的是,SRINIVASAN等[３０]发现外泌体淋巴运输可快速将感染信息传递到各个淋巴结,他们观察到外泌体在数分钟内到达淋巴结并被CD１１b＋巨噬细胞吸收,对比上皮抗原呈递细胞,从外周迁移到淋巴结途径需花费数小时,这是一种更高效率的抗原运输和