多糖纯化的方法
多糖纯化的方法
多糖纯化：
a、分部沉淀法：根据各种多糖在不同浓度的低级醇或丙酮中具有不同溶解度的性质，逐次按比例由小到大加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同浓度下析出的沉淀，经反复溶解与沉淀后，直到测得的物理常数恒定（最常用的是比旋光度测定或电泳检查）。
这种方法适合于分离各种溶解度相差较大的多糖。
为了多糖的稳定，常在pH7进行，唯酸性多糖在pH7时－COOH是以－COO` 离子形式存在的，需在pH2－4进行分离，为了防止苷键水解，操作宜迅速。
此外也可将多糖制成各种衍生物如甲醚化物、乙酰化物等，然后将多糖衍生物溶于醇中，最后加入乙醚等极性更小的溶剂进行分级沉淀分离。
b、盐析法：在天然产物的水提液中，加入无机盐，使其达到一定浓度或饱和，促使有效成分在水中溶解度降低沉淀析出，与其它水溶性较大的杂质分离。
常做盐析的无机盐的有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。
c、季铵盐沉淀法：季铵盐及其氢氧化物是一类乳化剂，可与酸性糖形成不溶性沉淀，常用于酸性多糖的分离。
通常季胺盐及其氢氧化物并不与中性多糖产生沉淀，但当溶液的PH增高或加入硼砂缓冲液使糖的酸度增高时，也会与中性多糖形成沉淀。
常用的季铵盐有十六烷基三甲胺的溴化物（CTAB）及其氢氧化物（cetyl trimethyl ammonium hydroxide，CTA－OH）和十六烷基吡啶（cetylpyridinm hydroride，CP－OH）。
CTAB或CP－OH的浓度一般为1％－10％（W/V）的
多糖溶液中，酸性多糖可从中性多糖中沉淀出来，所以控制季铵盐的浓度也能分离各种不同的酸性多糖。
值得注意的是酸性多糖混合物溶液的PH要小于9，而且不能有硼砂存在，否则中性多糖将会被沉淀出来
d、柱层析：
纤维素柱层析：纤维素柱层析对多糖的分离既有吸附色谱的性质，又具有分配色谱的性质，所用的洗脱剂是水和不同浓度乙醇的水溶液，流出柱的先后顺序通常是水溶性大的先出柱，水溶性差的最后出柱，与分级沉淀法正好相反。
纤维素阴离子交换柱层析：最常见的交换剂为DEAE－纤维素（硼酸型或碱型），洗脱剂可用不同浓度的碱溶液、硼砂溶液、盐溶液等。
此方法目前最为常用。
它一方面可纯化多糖，另一方面还适于分离各种酸性多糖、中性多糖和粘多糖。
凝胶柱层析：凝胶柱层析可将多糖按分子大小和形状不同分离开来，常用的凝胶有葡聚糖凝胶（sephadex G）、琼脂糖凝胶（sepharose bio－gel A）、聚丙烯酰胺凝胶（bio－gel P）等，常用的洗脱剂是各种浓度的盐溶液及缓冲液，但它们的离子强度最好不低于0.02。
出柱的顺序是大分子的先出柱，小分子的后出柱。
由于糖分子与凝胶间的相互作用，洗脱液的体积与蛋白质的分离有很大的差别。
在多糖分离时，通常是用孔隙小的凝胶如sephadex G－25、G－50等先脱去多糖中的无机盐及小分子化合物，然后再用孔隙大的凝胶
sephadex G－200等进行分离。
凝胶柱层析法不适合于粘多糖的分离。
deae纤维素柱层析多糖原理
DEAE纤维素柱层析是一种常用的离子交换色谱技术，用于多糖的分离和纯化。
其原理基于离子交换体对溶液中带电离子的吸附和解吸作用。
具体原理如下：
1. DEAE纤维素柱：DEAE纤维素是一种带有正电荷的离子交换介质，具有许多二级胺基团。
这种柱材与带负电荷的多糖分子发生静电相互作用。
2. 样品加载：将混合溶液中含有多糖的样品加载到DEAE纤维素柱上。
多糖与柱子表面的二级胺基团之间发生静电作用，带负电荷的多糖被柱子捕获。
3. 洗脱梯度：通过改变洗脱缓冲液的离子强度或pH值，使得多糖以不同的速率从柱子上洗脱。
一般采用梯度洗脱，即逐渐增加洗脱缓冲液中的盐浓度或调节pH值，以逐步将多糖从柱子上解吸下来。
4. 分离和纯化：根据多糖在DEAE纤维素柱上的亲和性差异，它们在洗脱梯度中以不同的速率逐渐分离。
带有较低亲和性的多糖会被较早洗脱，而带有较高亲和性的多糖则会在较高盐浓度或pH值条件下才从柱子上洗脱。
通过DEAE纤维素柱层析，可以实现多糖的粗分离和初步纯化。
这种方法可用于生物医药、食品工业等领域中对多糖的分离、纯化和研究。
植物多糖的功能..提取及纯化
植物多糖的功能多糖与蛋白质一样，具有生物大分子的复杂结构，具有一定的生理和生物学活性，概括起来多糖的生物活性包括：免疫调节性、抗肿瘤活性、降血糖活性、降血脂活性、抗病毒活性、抗衰老活性(抗氧化活性)、抗疲劳、抗突变活性，除此之外，还具有其他生物活性，包括抗凝血、抗炎、抗菌、抗惊厥、镇静、止喘及降血压等作用。
植物多糖的提取一、植物多糖的提取1 溶剂提取法1．1 水提法水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。
一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。
但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。
此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出，有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。
1．2酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。
而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
采用的稀碱多位为0．1mol／L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。
同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1．4 生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
天然药物多糖的主要生物活性及分离纯化方法
天然药物多糖的主要生物活性及分离纯化方法一、本文概述天然药物多糖是一类具有广泛生物活性的天然高分子化合物，其独特的结构和功能使得它们在医药、食品、化妆品等多个领域具有广阔的应用前景。
本文旨在全面概述天然药物多糖的主要生物活性以及分离纯化方法，以期为相关领域的研究和应用提供有价值的参考。
我们将深入探讨天然药物多糖的主要生物活性，包括其免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖等多方面的药理作用。
这些生物活性使得天然药物多糖在预防和治疗多种疾病方面具有独特的优势。
我们将详细介绍天然药物多糖的分离纯化方法。
由于天然药物多糖的来源广泛，结构复杂，因此其分离纯化过程往往具有一定的挑战性。
我们将从样品的采集、预处理、提取、分离、纯化以及结构鉴定等方面，系统地介绍天然药物多糖的分离纯化流程，以期为相关实验提供技术指导和参考。
通过本文的阐述，我们期望能够为读者提供全面而深入的天然药物多糖知识，进一步推动其在医药、食品、化妆品等领域的应用和发展。
二、天然药物多糖的主要生物活性天然药物多糖作为一大类生物活性物质，具有多种独特的生物活性，这些活性使其在医药、保健品、食品等领域具有广泛的应用前景。
以下将详细介绍天然药物多糖的几种主要生物活性。
免疫调节作用：许多天然药物多糖具有显著的免疫调节作用，能够激活并增强机体的免疫功能。
它们可以促进免疫细胞的增殖与分化，提高免疫细胞的活性，从而增强机体的免疫力，对预防和治疗免疫相关疾病具有重要意义。
抗肿瘤作用：许多研究表明，天然药物多糖具有抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、增强抗肿瘤药物疗效等作用。
这些作用使得天然药物多糖成为肿瘤治疗中的重要辅助药物，具有广阔的应用前景。
抗氧化作用：天然药物多糖中的许多成分具有显著的抗氧化活性，可以清除体内的自由基，减轻氧化应激损伤，保护细胞和组织免受氧化损伤。
这对于预防和治疗氧化应激相关疾病具有重要意义。
降血糖作用：部分天然药物多糖具有降低血糖的作用，可以通过提高胰岛素敏感性、促进胰岛素分泌、抑制肝糖原分解等途径来调节血糖水平。
多糖的分离纯化
1.2.2 离子交换层析鹿茸多糖初级分离纯化采用DEAE－52 离子交换柱。
称取鹿茸多糖80mg，溶于10mL 蒸馏水中，4000r /min 离心10min，取上清液样，依次用蒸馏水，0.3、0.5、0.7、1mol /L NaCl 溶液梯度洗脱，流速控制为0.5mL /min，分管收集，每管5mL，苯酚硫酸法跟踪检测多糖含量，绘制洗脱曲线，合并同一吸收峰的洗脱液，蒸馏水透析24h，减压浓缩，冷冻干燥，即得DEAE－52 纯化多糖。
1.2.3 凝胶排阻层析鹿茸多糖进一步分离纯化采用Sepharose CL－6B 凝胶排阻层析柱。
将经DEAE－52 分离后的多糖溶于蒸馏水，浓度为10mg /mL，以2mL /次上样，蒸馏水洗脱，流速控制为30mL /h，每管5mL，苯酚硫酸法跟踪检测，绘制洗脱曲线，收集、合并相同洗脱组分，透析，冷冻干燥即得SepharoseCL－6B纯化多糖。
1.2.4 鹿茸多糖紫外扫描将Sepharose CL－6B 纯化后精制多糖配成一定浓度溶液，190～400nm 下进行紫外光谱扫描，以蒸馏水作空白。
2.2.4粗多糖的分离纯化2.2.4.1粗多糖的离子柱层析取水提粗多糖样品和碱提水溶性多糖样品溶于蒸馏水中,配制成20mg/mL的溶液,4000印m离心10min,取上清液用DEAE一SepharoseFastFlow离子柱层析(2.6-40cm)进行初步分离,上样量为25mL"首先以蒸馏水洗脱,再用0.1,0.2,0.4,0.6,2mol几的NaCI进行梯度洗脱,自动部分收集仪分步收集流分,洗脱液每10mL收集一管,苯酚硫酸法检测,根据糖显色反应结果合并相同流分"2.2.4.2多糖的凝胶柱层析采用AK认explorer层析系统,Sephaeryl S100一1000凝胶柱层析对样品进行纯化"洗脱条件:凝胶柱Sephacryl S100-1000(2.6X100cm);洗脱液:蒸馏水;流速:1mL/min;样品浓度:10m留mL,上样体积5mL;洗脱液以5mL/管收集,示差折光检测器和苯酚硫酸法检测,以吸光度对洗脱体积作图。
植物多糖提取、分离纯化及鉴定方法的研究进展
然而，本研究仍存在一定的不足之处，例如实验范围较窄，未能全面考虑各 种因素对多糖提取、分离纯化及分析鉴定的影响。未来可以进一步拓展研究范围， 探讨更加高效、环保的多糖提取方法和纯化技术，同时深入研究多糖的结构与功 能关系，为多糖的应用提供更多理论依据和技术支持。
一、植物多糖概述
植物多糖是由植物细胞壁和细胞间层组成的复杂碳水化合物，具有调节植物 生理功能、增强免疫力等多种生物活性。近年来，随着生物技术的不断发展，植 物多糖在医药、保健、农业等领域的应用价值逐渐被挖掘出来，引起了广泛。
在分析鉴定方面，采用光谱分析法可以获得多糖的结构信息，而电化学分析 法则可以快速、准确地测定多糖的含量。
结论
本次演示对多糖的提取、分离纯化及分析鉴定方法进行了详细的研究，得出 了各种方法的相关优缺点。实验结果表明，乙醇提取法是一种高效、环保的多糖 提取方法；沉淀法和吸附法相结合可以获得高纯度的多糖；光谱分析法可以提供 多糖的结构信息，而电化学分析法则可以快速、准确地测定多糖的含量。
在分离纯化方面，除了传统的沉淀法、色谱法和膜分离等方法外，一些新的 分离技术如分子印迹技术、电泳技术等也被应用于多糖的分离纯化。此外，一些 新型材料如聚合物材料、无机材料等也被用于制备分离纯化多糖的新型膜和填料， 取得了很好的效果。
在鉴定方面，除了传统的化学法和光谱法外，一些新的鉴定技术如质谱技术、 基因工程技术等也被应用于多糖的鉴定。此外，一些新的生物活性方法也被用于 测定多糖的生物活性，如细胞试验、动物试验等。
四、研究进展概述
随着植物多糖在各个领域的应用价值逐渐被挖掘出来，植物多糖提取分离纯 化的研究也取得了长足的进展。从早期的水提取法、酸碱提取法等传统方法，到 后来的离子交换法、色谱法等较为先进的方法，植物多糖的提取分离纯化技术不 断发展。同时，各种新技术的应用也使得植物多糖的得率、纯度和结构分析更加 准确可靠。
分离纯化多糖实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习多糖的提取、分离和纯化方法。
2. 掌握多糖的鉴定技术。
3. 了解多糖的化学性质和生物活性。
二、实验原理多糖是一类由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的生物大分子，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。
本实验以某植物为原料，通过水提醇沉法提取多糖，采用离子交换层析和凝胶色谱法对多糖进行分离纯化，并对其结构进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：某植物、无水乙醇、蒸馏水、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钠、硫酸铜、苯酚、硫酸、考马斯亮蓝G-250、氯化钡、明胶等。
2. 仪器：分析天平、电热恒温水浴锅、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪、凝胶色谱仪、紫外-可见分光光度计、磁力搅拌器、离心机、层析柱等。
四、实验方法1. 多糖提取（1）将某植物样品干燥、粉碎，过60目筛。
（2）称取2g样品，加入50mL蒸馏水，在80℃水浴中提取2h。
（3）将提取液过滤，滤液浓缩至一定体积。
（4）加入无水乙醇，使溶液中多糖沉淀。
（5）离心分离，收集多糖沉淀。
2. 多糖分离纯化（1）将多糖沉淀溶解于蒸馏水中，加入一定量的氯化钠溶液，调节pH值至7.0。
（2）将溶液通过DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液。
（3）将洗脱液浓缩，加入一定量的无水乙醇，使多糖沉淀。
（4）离心分离，收集多糖沉淀。
（5）将多糖沉淀溶解于蒸馏水中，通过Sephadex G-100凝胶色谱柱，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液。
（6）将洗脱液浓缩，加入一定量的无水乙醇，使多糖沉淀。
（7）离心分离，收集多糖沉淀。
3. 多糖鉴定（1）采用苯酚-硫酸法测定多糖的糖含量。
（2）采用考马斯亮蓝G-250法测定多糖的蛋白质含量。
（3）采用硫酸-咔唑法和氯化钡-明胶法测定多糖中的糖醛酸和硫酸基含量。
（4）采用高效液相色谱法测定多糖的分子量。
五、实验结果与分析1. 多糖提取提取得到的粗多糖得率为5%。
粗多糖提取及纯化方法
粗多糖水提醇沉提取方法第一种方法：（1）玉米须原料用80%乙醇在78℃提取三次，去除色素、单糖和脂溶成分。
过滤，合并滤渣，使乙醇挥发干净，粉碎滤渣。
用100℃热水浸提干燥玉米须一小时，料液比1：15，提取三次。
合并提取液、过滤和浓缩，利用三倍体积80%乙醇醇沉。
（2）离心收集醇沉物(3000 ×g，10min)，然后用水溶解，并利用Sevag 方法去除游离蛋白质。
（3）脱去蛋白质的溶液再次用80%乙醇醇沉。
收集沉淀，先后用无水乙醇和丙酮溶液冲洗三次。
最后冷冻干燥，获得玉米须粗多糖。
Hot water extraction of crude polysaccharidesAll the corn silk raw materials were immersed in 80% (v/v) ethanol at 78℃ for three times to remove colored materials, monosaccharide and liposoluble constituents. The organic solvent was volatilized and the pretreated corn silk was obtained to crush. Dried ground corn silk (100 g) was extracted with water at 100℃(1:15 (w/v), 1 h, 3 times). The ext raction solutions were combined, filtered and concentrated, precipitate d by the addition of anhydrous ethanol to a final concentration of 80% (v/v). Precipitates were collected by centrifugation (3000 × g, 10 min), then dissolved with water, and subjected to the Savage method (chlorofor m: butyl alcohol, 4:1) to remove free proteins. The deproteinized solutio n was re-precipitated in 80% (v/v) ethanol. The precipitates were collect ed and successively washed with anhydrous ethanol and acetone. After freezing dried, the hot water extraction corn silk polysaccharides (PS) we re obtained.第二种方法Preparation of ILPSThe preparation of crude ILPS was carried out according to thereported method with some modifications (Xu e t al., 2012). Briefly,the powder of I. latifolia Thunb was pre-extract ed two times with85% aqueous ethanol solution (v/v) in a ratio of 1:15 (materialto ethanol solution, g/mL) at 80◦C for 1 h each, and the super-natant (containing colored materials, oligosaccharides and s mallmolecule compounds) was removed. The resulting residues were extracted three times with distilled water in a ratio of materialto wa ter 1:20 (g/mL) at 90◦C for 3 h each, and the extracts werecentrifu ged at 5000 rpm for 15 min. The supernatants were com-bined and concentrated by a rotary evaporator to a proper volume.The resulti ng concentrate was mixed with three times volume ofabsolute ethan ol, stirred vigorously and kept overnight at 4◦C. Theprecipitates wer e then collected by centrifugation at 5000 rpm for15 min, dissolved in distilled water, dialyzed 透析against distilled waterand lyophiliz ed, affording the crude ILPS.纯化：The crude ILPS was purified by chromatography of DEAEcellu lose-52 according to the reported method (Qiao et al., 2009a;Ye, W ang, Zhou, Liu, & Zeng, 2008). Briefly, 150 mg of crude ILPS wa s dissolved in 7.5 mL deionized water, and the solution was filtere d through a 0.45 _m membrane filter. The resulting ILPS solution wasthen loaded onto a column (2.6 cm ×30 cm) of DEAE cellu lose-52,and the column was stepwise eluted with deionized water, 0. 1,0.3 and 0.5 M sodium chloride (NaCl) solution at a flow rate of1.0 mL/min. The eluate was collected automatically (10 mL/tube)and the carbohydrate in each tube was determined by the phenol-sulfuric acid method (Dubois, Gilles, Hamilton, Rebers, & Smith,1956). The resulting fractions were pooled, concentrated, dialyzed 透析against deionized water and lyophilized, respectively, affording four fracti ons, named ILPS-1, ILPS-2, ILPS-3 and ILPS-4.2.3。
多糖分离纯化及含量测定
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸 提固液比、提取时间以及提取次数等。
• 该种方法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低， 安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
• 但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的 成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后 续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也 不高。
溶剂法：酸提法
• 为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展 了酸提取法。
• 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下 难以溶解；
• 含有胺基的多糖可使用乙酸或盐酸调节提取液成酸性 进行提取，然后再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入 铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、pH值、提取温 度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
• 微 波 是 指 波 长 在 1mm 到 1m 范 围 （ 相 对 频 率 为 300~ 300000MHz）的电磁波，介于红外与无线电波之间。
• 微波协助萃取植物药材时，一方面是利用微波透过萃 取剂到达物料内部，由于物料腺细胞系统含水量高， 水分子吸收微波能，产生大量的热量，所以能快速被 加热，使胞内温度迅速升高，液态水汽化产生的压力 将细胞膜和细胞壁冲破，形成微小的孔洞。
2. 酶解法：单一酶解法
• 单一酶解法是指使用一种酶来提取多糖，从而提高提 取率的生物技术。其中经常使用的酶有蛋白酶、纤维 素酶等。
• 蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用，使 其结构变得松散；蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中 游离的蛋白质水解，降低它们对原料的结合力，有利 于多糖的浸出。
• 纤维素酶则能特异性地降解纤维素，使植物细胞的细 胞壁破裂，有利于多糖易从胞内释放。
多糖的分离纯化及性质表征
一、多糖的提取方法
生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖和动物多糖3大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在 提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮 乙醚乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖；植 物多糖提取时需注意一些含脂较高的根茎叶花果及种子类， 在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理 目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化 提取法等
（2）超声波辅助提取法
超声波提取是利用超声波的机械效应、空化效应及热效应。 机械效应可增大介质的运动速度及穿透力，能有效的破碎生 物细胞和组织，从而使提取的有效成分溶解于溶剂之中； 空化效应使整个生物体破裂，整个破裂过程在瞬间完成，有 利于有效成分的溶出； 热效应增大了有效成分的溶解速度，这种热效应是瞬间的， 可使被提取成分的生物活性尽量保持不变。
（2） 酸提法
为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提 取法。 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH值下 难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多 糖沉淀析出。 由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到 的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中 糖苷键的断裂，因此，只在一些特定的多糖提取中占有优势 。且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
二、多糖的分离纯化
粗多糖中往往混杂着蛋白质、色素、低聚糖等杂质，必须分别 除去。多糖的分离纯化主要包括脱蛋白、脱色、脱盐和除去小
分子杂质。
1.脱蛋白
常用方法：Sevage法、三氟三氯乙烷法 、三氯乙酸法和酶解法 Sevage法：根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点，用 Sevage 试剂（氯仿∶正丁醇=4∶1的混合液），与多糖提取液5 ：1的比例，置于分液漏斗中剧烈振摇20～30min ，静置。蛋白 质变性生成凝胶，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。 此种只能除去少量蛋白质，效率不高，须反复多次，多糖有损 失 。但此方法比较温和，在避免多糖降解上效果较好，如配合 加入一些蛋白质水解酶，用Sevage法效果更佳。
多糖分离纯化方法具体解析
多糖分离纯化方法具体解析
多糖分离纯化方法有溶剂提取法、酸提法、碱提法、酶解法、超滤法、超声法、微波法、超临界流体萃取法。
多糖除了有增强免疫功能、抗肿瘤作用、抗氧化、抗衰老、消化系统保护作用的生物学效应外，还有抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗辐射、抗凝血等作用。
在提取分离多糖的传统工艺，如水提醇析、薄膜浓缩法、冻干法等，均以子实体作为生产原料，但是工艺复杂、生产周期长、从而增大了生产成本，使工业化生产和大规模临床应用受到限制。
给客户带来诸多麻烦。
多糖分离纯化是研究多糖的基础。
近年来，分离纯化方法在传统的水提醇沉法的基础上经过改进，加上新的多糖分离分离方法如超临界流体萃取、超滤膜技术和离子交换色谱，新的分析方法如核磁共振及质谱等，使得对多糖的深人研究成为可能，也不断有新的多糖被发现。
多糖分离纯化过程通常不能完全除去杂质，故纯度不高。
采用超滤膜技术脱盐、分级和浓缩，收率高、多搪的生物活性破坏少，还无传统有机溶剂法的试剂残留问题，已普遍成为活性多糖研究的重要手段。
现代膜分离技术没有相变和常温操作，特别适用于生物活性物质的分离、浓缩与纯化。
超滤膜技术应用的缺点是必须知道目的多糖的相对分子质量才能选取有效超滤膜，否则须预选确定选膜，单采用一种膜分离效果有限。
超滤与微滤、纳滤、反渗透及电渗析等多种性能的膜技术进一步联用，取代能耗大、费用高、周期长且处理不彻底的传统工艺操作，将是多糖分离纯化工艺发展的新趋势。